实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)

1. 学习并掌握鞭毛染色法。

2. 观察鞭毛的形态和分布。

3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。

二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器，由鞭毛蛋白组成，具有运动功能。

鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，通过染色剂将鞭毛染色，使其在显微镜下清晰可见。

本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布，并探讨其与细菌运动的关系。

三、实验材料1. 细菌培养物：大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。

2. 染色剂：鞭毛染色液（如革兰氏染液、卡红染液等）。

3. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。

四、实验步骤1. 取适量细菌培养物，用无菌生理盐水制成菌悬液。

2. 将菌悬液滴于载玻片上，用无菌镊子轻轻涂布均匀。

3. 待菌膜干燥后，用酒精灯轻微加热固定。

4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中，染色时间为10-15分钟。

5. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染色液。

6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中，脱色时间为1-2分钟。

7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的脱色液。

8. 将载玻片浸入复染液（如复红染液）中，复染时间为1-2分钟。

9. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的复染液。

10. 将载玻片用吸水纸吸干，盖上盖玻片。

11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。

1. 大肠杆菌：观察到细菌具有明显的鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体一端。

2. 枯草杆菌：观察到细菌具有鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体两端。

3. 葡萄球菌：观察到细菌无鞭毛。

六、实验分析1. 通过实验观察，大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛，且鞭毛形态和分布不同。

这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。

2. 葡萄球菌无鞭毛，这可能是其运动能力较弱的原因之一。

3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，能够清晰观察到鞭毛的形态和分布，为研究细菌的运动和分类提供重要依据。

七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布，了解了鞭毛在细菌运动中的作用。

实验过程中，我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤，提高了实验技能。

细菌鞭毛染色及活细菌运动性观察摘要本实验采用硝酸银染色法对苏云金芽孢杆菌与铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在油镜下观察其菌体形态和鞭毛的形态、数量、着生位置。

并采用压滴法，用美蓝染色后观察细菌的运动性。

关键词鞭毛、硝酸银染色法、压滴法、运动性前言鞭毛是某些细菌表面细长弯曲的丝状物，是细菌的运动器官和特殊构造。

细菌鞭毛的长短、数量和生长位置是鉴别菌种的一个重要的形态学指标，也是细菌重要的抗原物质与致病因素。

根据鞭毛的特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。

细菌的鞭毛非常纤细，直径一般在20nm左右，采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。

鞭毛染色法的基本原理是在染色前先经媒染剂处理，媒染剂吸附在鞭毛上，使鞭毛加粗，然后再进行染色，便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内。

常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。

鞭毛染色一直被提倡作为革兰阴性非发菌的鉴别手段之一，先后出现了Leifsen法、镀银法、Ryu氏法等多种鞭毛染色的方法。

鞭毛细长透明，其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外，所以不易观察。

如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用压滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛，同时可以观察细菌的运动性特征。

1 材料与方法1.1材料1.1.1菌种苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）铜绿假单细胞菌（P.Aeruginosa）1.1.2染色液和试剂香柏油，二甲苯，硝酸银鞭毛染液，0.01%美蓝水溶液等。

1.1.3仪器及其他普通光学显微镜，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管，镊子，滴管，盖玻片，吸水纸等。

1.2方法及步骤1.2.1硝酸银染色法1.2.1.1清洗玻片选择光滑无裂痕的玻片，置洗含衣粉过的水中煮沸20min。

取出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在火焰上烧去酒精。

细菌鞭毛染色及运动性鉴定摘要：用稀释美蓝对菌体进行染色后在油镜下对菌体的运动性进行观察、鉴定和描述。

鞭毛是细菌的运动器官，用硝酸银染液A液B液对菌体的鞭毛进行染色，并在光学显微镜下对菌体鞭毛的形态特征和着生部位进行观察。

关键词硝酸银染色法压滴法微生物制片镜检前言鞭毛是细菌的运动器官，具有鞭毛的不同的细菌其鞭毛的粗细、长短、着生部位不同，是微生物的一项重要形态特征。

除了少数细菌的鞭毛能够较轻易的观察出来外，一般其他的细菌由于鞭毛微小且透明，一般不能在光学显微镜直接观察到。

故要用光学显微镜对细菌的鞭毛进行观察时，要对细菌的鞭毛进行染色处理使鞭毛直径加粗并与背景色形成对比。

通过硝酸银法对细菌鞭毛进行染色观察，能区分细菌的类型，对细菌的结构进行初步了解，在细菌的分类及鉴定上具有一定的重要意义。

材料与方法1.1 材料1.1.1标准菌株枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1．2溶液和试剂蒸馏水 95%乙醇香柏油 0.01%美蓝硝酸银染液A液B液1.1.3仪器及其他用品载玻片盖玻片镊子光学显微镜胶头滴管酒精灯接种环1.2方法1.2.1压滴法观察细菌的运动性1）涂片1．将载玻片用自然水洗干净后，用纸吸除多余水分。

2．在载玻片滴取半滴蒸馏水到载玻片上。

3．在酒精灯形成的无菌区域内用接种环在铜绿假单胞菌的琼脂斜面上小心地（防止因动作过大而使鞭毛从菌体上脱落）挑取适量的菌苔。

4．将沾有菌苔的接种环置于载玻片中的滴有蒸馏水的区域进行涂抹，使菌悬浮在蒸馏水中。

2）染色在涂有菌体的部分滴加一滴稀释美蓝使其覆盖整个悬浮液。

3）盖盖玻片1．用镊子取出一片盖玻片并将盖玻片放在菌体悬浮液的左侧使盖玻片恰好与悬浮液相接触。

2．将盖玻片用镊子轻轻向左侧移动同时慢慢地盖上盖玻片（注意不要让空气进入片中）。

4）快速镜检在观察时应先用高倍镜观察，看不清楚时再用低倍镜观察。

在观察时应采用暗视野，并要以较快的速度对菌体进行观察以免菌体过早死亡。

主要介绍油镜的使用方法：1．将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上，将对准载物台油镜，调节粗调将载物台合适的高度。

细菌的运动性观察（一）实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。

采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。

如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或水封片法（即压滴法）直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。

此法较快速、简便。

悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。

水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。

大多数球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛，弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。

有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力，衰老的细胞鞭毛易脱落，故观察时宜选用幼龄菌体。

1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。

2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。

3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。

4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。

若制水封片，在载玻片上滴加一滴菌液，盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。

5.镜检先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。

由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。

镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。

细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。

结果：有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动，而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。

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姓名：朴薇学号：200900140091 年级班级：09生科三班组别：周三2组同组者：李雪彤、刘雯雯、潘红芳、娄峰时间：2010年10月20日实验题目细菌鞭毛染色及运动性观察实验目的用鞭毛染色法对苏云金芽孢杆菌和铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，观察鞭毛的着生位置、数量、形态特征，并用压滴法观察活菌的运动情况。

同时巩固显微镜操作技术和无菌操作技术。

实验原理一些引起人类严重疾病的细菌具有鞭毛。

鞭毛的数量和着生方式，形态特征是细菌分类鉴定地重要依据。

因此，细菌鞭毛的染色观察在临床医学上是鉴定致病菌的重要手段之一。

因此学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征是微生物学者必须经受的训练。

鞭毛是细菌的纤细丝状运动器官，鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才能直接观察到，若要用普通光学显微镜，必须使用鞭毛染色法。

细菌中的螺旋菌、部分杆菌及少数球菌具有鞭毛，有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动能力。

衰老细胞的鞭毛容易脱落，故观察运动性或做鞭毛染色时宜选用幼龄菌。

首先用媒染剂（如单宁酸或明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。

实验材料菌种枯草芽孢杆菌1~2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌牛肉膏蛋白胨培养物。

溶液和试剂0.01%美兰水溶液，蒸馏水，硝酸银鞭毛染液，95%乙醇仪器和其它用品酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，镊子，滴管，无菌水等。

方法及步骤细菌运动的观察a．载玻片准备将载玻片用去污粉洗净（注意：切勿用试管刷刷洗，以免划损玻片），然后用清水充分洗净，再置于95%乙醇中浸泡（至少5min），使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。

b．涂片取一载玻片，平放于实验台上，在中央区域滴一滴无菌水；无菌操作用接种环由铜绿假单胞杆菌及枯草芽孢杆菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基上挑取菌体，在无菌水中轻轻涂1~2下，至水滴混浊。

半固体培养基穿刺接种原理半固体培养基穿刺接种是一种常用的微生物培养技术，它的基本原理是将微生物样品通过穿刺的方式接种到含有半固体培养基的培养皿中，通过适当的条件，使微生物在半固体培养基上生长和繁殖。

1. 半固体培养基概述半固体培养基是一种介于液体和固体之间的特殊培养基。

它由液态成分和凝胶剂两部分组成。

液态成分提供了微生物所需的营养物质，而凝胶剂则使液态成分凝结为半固体状态，提供了微生物附着和生长的支持。

常用的凝胶剂有琼脂、琼脂糖、明胶等。

这些凝胶剂在高温下可溶解，在适宜温度下则能够形成凝胶。

半固体培养基具有较好的稳定性和可操作性，适合于观察微生物菌落形态、进行纯化和鉴定等实验。

2. 穿刺接种的原理穿刺接种是一种将微生物样品通过穿刺的方式接触到培养基上的技术。

在半固体培养基中进行穿刺接种，可以使微生物在凝胶上形成菌落，并进行生长和繁殖。

穿刺接种的原理主要涉及以下几个方面：2.1 微生物传播微生物在自然环境中通过空气、水、土壤等途径传播。

在实验室中，我们可以通过悬浮液、涂布法或穿刺法将微生物样品传播到培养基上。

其中，穿刺法是一种常用且有效的方法。

2.2 微生物附着微生物在半固体培养基上进行附着。

半固体培养基提供了一个支持微生物附着和生长的结构。

凝胶剂能够形成一定的网状结构，使微生物有机会附着并扎根于其中。

2.3 营养摄取微生物在半固体培养基上通过吸收周围环境中的营养物质来满足生长和繁殖的需要。

半固体培养基中的液态成分提供了微生物所需的营养物质，包括碳源、氮源、矿物质等。

2.4 菌落形成微生物在半固体培养基上生长和繁殖，逐渐形成可见的菌落。

菌落是由单个或多个细胞聚集而成，具有一定的形态特征。

通过观察菌落的形态、大小、颜色等特征，可以初步判断微生物的种类和性质。

3. 半固体培养基穿刺接种步骤半固体培养基穿刺接种一般包括以下几个步骤：3.1 准备培养皿和半固体培养基首先准备好无菌的培养皿和制备好的半固体培养基。

1. 掌握鞭毛染色的原理和方法。

2. 观察细菌鞭毛的形态、数量和分布位置。

3. 了解鞭毛在细菌分类和鉴定中的意义。

二、实验原理鞭毛是细菌的运动器官，对细菌的分类和鉴定具有重要意义。

鞭毛染色是一种特殊染色方法，通过媒染剂和染色剂的作用，使鞭毛变粗，便于在显微镜下观察。

常用的媒染剂有单宁酸、明矾钾等，染色剂有碱性复红、硝酸银、结晶紫等。

三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆菌。

2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。

3. 试剂：鞭毛染色液（A液）、0.01%美蓝水溶液（B液）、香柏油、二甲苯、无菌水、凡士林。

4. 工具：显微镜、接种环、酒精灯、凹载玻片、盖玻片、镊子、细玻棒、吸水纸。

四、实验步骤1. 活化菌种：将保存的菌种在新制备的牛肉膏蛋白胨斜面培养基上连续移种2-3次，每次于30℃培养10-15h。

活化后菌种备用。

2. 制片：在干净载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用无菌操作法，以接种环从活化菌种中取少许菌苔（注意不要带培养基），在载玻片的水滴中轻沾几下。

将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓缓流到另一端，然后平放，于空气中干燥。

3. 染色：滴加鞭毛染色液A液，染3-5min。

用蒸馏水充分洗净A液，使背景清洁。

将残水沥干或用B液冲去残水。

滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料以免干涸，染30～60s。

待冷却后，用蒸馏水轻轻冲洗干净，自然干燥或滤纸吸干。

4. 镜检：先用低倍镜和高倍镜找到典型区域，然后用油镜观察。

菌体为深褐色，鞭毛为褐色。

注意观察鞭毛着生位置（镜检时应多找几个视野，有时只在部分涂片上观察到鞭毛）。

1. 金黄色葡萄球菌：观察到典型的鞭毛，数量较多，主要分布在菌体一端。

2. 普通变形杆菌：观察到鞭毛，数量较少，主要分布在菌体两端。

3. 大肠杆菌：未观察到鞭毛。

六、实验讨论1. 鞭毛染色是细菌鉴定的重要方法之一，通过观察鞭毛的形态、数量和分布位置，可以初步判断细菌的种类。

2. 本实验中，金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌均具有鞭毛，而大肠杆菌无鞭毛。

细菌鞭毛染色及运动性观察郭森 200900140029 09级生命基地周二下午摘要：本实验以苏云金芽孢杆菌和假单胞菌为实验菌种，分别将其制备成菌液并制片。

而后，使用鞭毛染色法（用硝酸银染液A液和B液进行染色）对其染色，之后用光学显微镜的油镜观察细菌鞭毛的形态；使用压滴法并用美兰染色后，之后用光学显微镜的高倍镜观察细菌的活体运动。

实验结果我们并没有观察到鞭毛结构，但在实验中已大致掌握相关实验操作。

关键词：苏云金芽孢杆菌；假单胞菌；鞭毛染色法；压滴法前言：鞭毛是细胞的纤细丝状运动“器官”。

鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。

鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才能观察到。

若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。

因此在本实验中，要观察细菌鞭毛形态，就要使用鞭毛染色法。

本实验使用染液的是硝酸银染液A液和B 液；而观察细菌的运动性时要使用压滴法就要用美兰染色。

本实验选用的的菌种是具周生鞭毛的苏云金芽孢杆菌和具端生鞭毛的的假单胞菌，均可使用两种方法进行观察。

本实验报告先介绍了本次实验的实验材料与方法，然后是对实验的结果与分析进行描述，最后是总结性的小结部分。

1材料与方法1、1 材料1、1、1 菌种苏云金芽孢杆菌，假单胞菌。

1、1、2 溶液和试剂硝酸银鞭毛染液（A、B液），0.01%美兰水溶液。

1、1、3 仪器和其他用品普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），接种环，试管架，镊子，吸水纸，滴管等。

1、2 步骤和方法1、2、1 菌液制备无菌操作用接种环由普通变形菌14~18h牛肉膏蛋白胨半固体新鲜培养物平板上挑取数环菌落边缘菌体，悬浮于1~2ml无菌水中制成轻度浑浊的菌悬液，不能剧烈震荡。

1、2、2 鞭毛染色1、2、2、1 制片取一滴菌悬液滴到洁净载玻片一端，倾斜玻片，使菌悬液缓慢流向另一端，用吸水纸吸去多余菌悬液，自然干燥。

1、2、2、2 染色滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3~5min后用蒸馏水充分洗去A液。

鞭毛染色制片实验报告
1. 实验目的
本实验旨在通过染色制片技术观察和研究细胞鞭毛的结构和功能，从而加深对细胞鞭毛的认识。

2. 实验原理
鞭毛是一种微细、共纤毛状的细胞器，通过微管结构的动力学机制控制其运动。

为了观察鞭毛的细节结构，常常需要使用染色制片技术。

3. 实验步骤
3.1 鞭毛样本的制备
（略）
3.2 鞭毛染色
（略）
3.3 鞭毛制片
（略）
4. 实验结果与分析
通过实验观察，我们成功制备了鞭毛样本，并完成了染色制片过程。

在显微镜下观察到了染色后的鞭毛样本。

与未染色的鞭毛相比，染色后的鞭毛明显更清晰、更易于观察。

染色剂能够染亮鞭毛的结构，使其在显微镜下更加鲜明可见。

在染色制片的过程中，我们也注意到了一些问题。

首先，染色剂的选择非常重要。

染色剂要能染亮目标物质，同时要不破坏样本的细胞结构。

其次，制片过程需要细心和耐心，避免在操作过程中损坏细胞。

5. 实验总结
本实验通过鞭毛染色制片，观察和研究了鞭毛的结构和功能。

染色制片技术是一种常用的细胞学观察方法，可以使细胞和细胞器的结构更加清晰可见，有助于进一步研究细胞的功能和机理。

在进行鞭毛染色制片实验时，需要注意染色剂的选择和制片过程中的细心操作。

鞭毛染色制片可以应用于多个领域的研究，如生物医学研究、生态学研究等，对于深入了解细胞鞭毛的作用和机制具有重要意义。

总之，本实验通过鞭毛染色制片的方法，成功观察到染色后的鞭毛结构，加深了对细胞鞭毛的认识，并且对于细胞学研究提供了有效的技术手段。

细菌鞭毛染色一、实验目的学习并掌握鞭毛染色方法，并观察鞭毛的形态。

二、实验原理细菌的鞭毛极纤细，直径一般为0.1—0.2um，只有用电子显微镜才能观察到。

但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。

鞭毛染色的基本原理：即在染色前先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色（如碱性复红、硝酸银、结晶紫）。

常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。

（本次实验用硝酸银当染色剂）三、实验器材及试剂1.菌种：枯草芽孢杆菌（鞭毛周生）、铜绿假单胞菌（鞭毛端生）。

2.溶液和试剂：硝酸银鞭毛染色剂A液和B液、95%乙醇、蒸馏水。

3.仪器和其他物品：载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊子、电热炉、大烧杯、洗衣粉四、实验步骤鞭毛染色——硝酸银染色法1.载玻片准备：将载玻片用洗衣粉洗涤后，置于95%的乙醇溶液中浸泡20min，使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。

2.制片：取一块载玻片，在一端滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌（铜绿假单孢菌)斜面上挑取菌种在载玻片液滴上轻轻蘸一下，使液滴表面形成一薄层菌膜，随后倾斜玻片，使悬菌液缓慢流向另一端，用吸水纸在载玻片边缘处吸去多余菌悬液，自然干燥。

3.染色：滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液，之后用B液洗去残留水分，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。

4.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查，菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。

四、实验结果记录枯草芽孢杆菌鞭毛染色观察图铜绿假单胞菌鞭毛染色观察图五、实验结果分析1.理论结果：2.实验结果：3.铜绿假单胞菌鞭毛实验，观察结果与理论结果差异分析：油镜视野中，铜绿假单胞菌的鞭毛出现了多根，与理论结果的一根有所差异，其原因可能是染色方法不恰当或干燥时装片遭到剧烈震动，导致鞭毛脱落，脱落的鞭毛附着在了菌体表面，造成了一个菌体着生多跟鞭毛的假象。

篇一：鞭毛染色实验报告年月日山东大学实验报告2011 年10月26 日姓名：年级同组科目微生物题目观察鞭毛染色和运动201001140018一．实验目的学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征巩固显微镜操作技术及无菌操作技术学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）二．实验原理细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。

鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。

鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。

鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。

若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。

首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（gray氏染色法）、碱性复品红（leifson氏染色法）、硝酸银（west氏染色法）或结晶紫（difco 氏染色法）进行染色。

压滴法观察活菌运动的基本原理鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。

鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。

鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械—分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量atp来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。

细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。

若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。

实验六细菌特殊构造的染色法及活细菌运动性的观察一、基础知识荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。

由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而口町溶于水，易在用水冲洗时被除去。

所以通常用衬托染色法染色，使菌体和苗景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。

由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。

实验中介绍3种荚膜染色法，其屮湿墨水法较简便、并适用于各种有荚膜的细菌。

芽抱又叫内生抱了，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。

细菌能否形成芽抱以及芽抱的形状、芽砲在芽抱囊内的位置、芽砲囊是否膨人等特征是鉴定细菌的依据之一。

由于芽抱壁厚、透性低、不易着色，当用石炭酸复红、结晶紫等进行单染色时，菌体和芽他囊着色，而芽施囊內的芽他不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽他呈淡红或淡蓝紫色的圆或椭圆形的圈。

为了使芽紀着色便于观察，可用芽沦染色法。

芽沦染色法的基本原理是：用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽他内，进人菌体的染料经水洗后被脱色，而芽沦一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽他仍保留初染剂的颜色，1佃菌体和芽沦囊被染成复染剂的颜色，使芽他和菌体更易于区分。

鞭毛是细菌的运动“器官”细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。

细菌的鞭毛很纤细，其宜径通常为().()1—().021 xm,所以，除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相并显微镜肓接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，1何只能用电子显微镜观察。

要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。

鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。

鞭毛染色方法很多，本实验介绍硝酸银染色法和改良的Leifson氏染色法，前一种方法更容易掌握，但染色剂配制后保存期较短。

细菌鞭毛染色及活细菌的运动性观察摘要：生长在某些细菌表面的纤细丝状运动器官，称为鞭毛。

采用硝酸银染色法对枯草杆菌和铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在光学显微镜下观察菌体形态和菌毛的长短、数量、着生位置，得到清晰的结果。

采用压滴法观察活细菌的运动性，对其运动情况有初步了解。

关键词：鞭毛染色硝酸银染色法压滴法活细菌1前言1.1实验目的1.学习并掌握鞭毛染色法，观察鞭毛的形态特征。

2.学习用压滴法观察活细菌的运动性。

1.2实验原理鞭毛是细菌的纤细丝状运动“器官”。

鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。

鞭毛直径一般为10~30nm,只有用电镜才能直接观察到。

若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。

鞭毛染色的基本原理是在染色前先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difo氏染色法）进行染色。

本实验采用的是硝酸银染色法。

在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否有鞭毛。

细菌运动性的观察可用压滴法和悬滴法。

观察时，要适当减弱光强度以增加反差，若光线太强．细菌和周围的液体难以区分。

2材料与方法2.1实验器材2.1.1菌种枯草芽孢杆菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。

2.1.2溶液和试剂硝酸银鞭毛染液，0.01%美兰水溶液，香柏油，二甲苯，体积分数95%的乙醇。

2.1.3仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，擦镜纸，接种环，镊子，记号笔，滴管和无菌水等。

2.2实验步骤3结果与分析3.1压滴法用压滴法观察枯草杆菌的运动性，盖上盖玻片立即观察时，可以看到浅蓝色的细菌细胞。

盖玻片下里液体流动较明显，菌体随水流运动，运动方向较统一且呈直线状。

待液体稍蒸发，盖玻片下液体充分但不流动时观察，细菌的运动朝不同的方向，运动过程中可转弯；有些细菌在原地左右摆动，应为布朗运动。