实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
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1. 学习并掌握鞭毛染色法。
2. 观察鞭毛的形态和分布。
3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。
二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器,由鞭毛蛋白组成,具有运动功能。
鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术,通过染色剂将鞭毛染色,使其在显微镜下清晰可见。
本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布,并探讨其与细菌运动的关系。
三、实验材料1. 细菌培养物:大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。
2. 染色剂:鞭毛染色液(如革兰氏染液、卡红染液等)。
3. 实验器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。
四、实验步骤1. 取适量细菌培养物,用无菌生理盐水制成菌悬液。
2. 将菌悬液滴于载玻片上,用无菌镊子轻轻涂布均匀。
3. 待菌膜干燥后,用酒精灯轻微加热固定。
4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中,染色时间为10-15分钟。
5. 用蒸馏水冲洗载玻片,去除多余的染色液。
6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中,脱色时间为1-2分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片,去除多余的脱色液。
8. 将载玻片浸入复染液(如复红染液)中,复染时间为1-2分钟。
9. 用蒸馏水冲洗载玻片,去除多余的复染液。
10. 将载玻片用吸水纸吸干,盖上盖玻片。
11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。
1. 大肠杆菌:观察到细菌具有明显的鞭毛,鞭毛呈细长状,着生于菌体一端。
2. 枯草杆菌:观察到细菌具有鞭毛,鞭毛呈细长状,着生于菌体两端。
3. 葡萄球菌:观察到细菌无鞭毛。
六、实验分析1. 通过实验观察,大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛,且鞭毛形态和分布不同。
这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。
2. 葡萄球菌无鞭毛,这可能是其运动能力较弱的原因之一。
3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术,能够清晰观察到鞭毛的形态和分布,为研究细菌的运动和分类提供重要依据。
七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布,了解了鞭毛在细菌运动中的作用。
实验过程中,我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤,提高了实验技能。
细菌鞭毛染色及活菌运动性观察【摘要】本实验以铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌为实验菌种,先使用压滴法制片,之后用光学显微镜的油镜观察细菌的活体运动。
然后,使用鞭毛染色法(用硝酸银染液A液和B液进行染色)对其染色,之后用光学显微镜的油镜观察细菌鞭毛的形态;虽然最后并没有在显微镜下观察到染色后的鞭毛,但在实验中已大致掌握相关实验操作。
【关键词】铜绿假单胞菌;枯草芽孢杆菌;鞭毛染色法;压滴法【前言】鞭毛是生长在某些细菌体表的长丝状,波曲型的蛋白质附属物,具有运动功能。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~20nm,只有用电子显微镜才能观察到。
但可以使用鞭毛染色法,使之能用普通光学显微镜观察到。
因此在本实验中,要观察细菌鞭毛形态,就要使用鞭毛染色法。
本实验使用染液的是硝酸银染液A液和B液。
而观察细菌的运动性时要使用压滴法。
本实验选用的的菌种是具周生鞭毛的枯草芽孢杆菌和具端生鞭毛的的铜绿假单胞菌,均可使用两种方法进行观察。
本实验报告先介绍了本次实验的实验材料与方法,然后是对实验的结果与分析进行描述,最后是总结性的小结部分。
1.实验目的1.1学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征1.2巩固显微镜操作技术及无菌操作技术1.3学习压滴法观察细菌运动性(活细胞)2实验原理2.1细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色,而某些微生物具有一些特殊结构,如鞭毛,对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm,只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察,必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂处理,使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗,然后用碱性复红(Gray氏染色法)、碱性复品红(Leifson 氏染色法)、硝酸银(West氏染色法)或结晶紫(Difco氏染色法)进行染色。
实验六细菌特殊构造的染色法及活细菌运动性的观察一、基础知识荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质,其成分为多糖、糖蛋白或多肽。
由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色;而口町溶于水,易在用水冲洗时被除去。
所以通常用衬托染色法染色,使菌体和苗景着色,而荚膜不着色,在菌体周围形成一透明圈。
由于荚膜含水量高,制片时通常不用热固定,以免变形影响观察。
实验中介绍3种荚膜染色法,其屮湿墨水法较简便、并适用于各种有荚膜的细菌。
芽抱又叫内生抱了,是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体,通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽抱以及芽抱的形状、芽砲在芽抱囊内的位置、芽砲囊是否膨人等特征是鉴定细菌的依据之一。
由于芽抱壁厚、透性低、不易着色,当用石炭酸复红、结晶紫等进行单染色时,菌体和芽他囊着色,而芽施囊內的芽他不着色或仅显很淡的颜色,游离的芽他呈淡红或淡蓝紫色的圆或椭圆形的圈。
为了使芽紀着色便于观察,可用芽沦染色法。
芽沦染色法的基本原理是:用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽他内,进人菌体的染料经水洗后被脱色,而芽沦一经着色难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽他仍保留初染剂的颜色,1佃菌体和芽沦囊被染成复染剂的颜色,使芽他和菌体更易于区分。
鞭毛是细菌的运动“器官”细菌是否具有鞭毛,以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。
细菌的鞭毛很纤细,其宜径通常为().()1—().021 xm,所以,除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相并显微镜肓接观察到鞭毛束的存在外,一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到,1何只能用电子显微镜观察。
要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛,必须用鞭毛染色法。
鞭毛染色的基本原理,是在染色前先用媒染剂处理,使它沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进行染色。
鞭毛染色方法很多,本实验介绍硝酸银染色法和改良的Leifson氏染色法,前一种方法更容易掌握,但染色剂配制后保存期较短。
细菌鞭毛染色及运动性鉴定摘要:用稀释美蓝对菌体进行染色后在油镜下对菌体的运动性进行观察、鉴定和描述。
鞭毛是细菌的运动器官,用硝酸银染液A液B液对菌体的鞭毛进行染色,并在光学显微镜下对菌体鞭毛的形态特征和着生部位进行观察。
关键词硝酸银染色法压滴法微生物制片镜检前言鞭毛是细菌的运动器官,具有鞭毛的不同的细菌其鞭毛的粗细、长短、着生部位不同,是微生物的一项重要形态特征。
除了少数细菌的鞭毛能够较轻易的观察出来外,一般其他的细菌由于鞭毛微小且透明,一般不能在光学显微镜直接观察到。
故要用光学显微镜对细菌的鞭毛进行观察时,要对细菌的鞭毛进行染色处理使鞭毛直径加粗并与背景色形成对比。
通过硝酸银法对细菌鞭毛进行染色观察,能区分细菌的类型,对细菌的结构进行初步了解,在细菌的分类及鉴定上具有一定的重要意义。
材料与方法1.1 材料1.1.1标准菌株枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1.2溶液和试剂蒸馏水 95%乙醇香柏油 0.01%美蓝硝酸银染液A液B液1.1.3仪器及其他用品载玻片盖玻片镊子光学显微镜胶头滴管酒精灯接种环1.2方法1.2.1压滴法观察细菌的运动性1)涂片1.将载玻片用自然水洗干净后,用纸吸除多余水分。
2.在载玻片滴取半滴蒸馏水到载玻片上。
3.在酒精灯形成的无菌区域内用接种环在铜绿假单胞菌的琼脂斜面上小心地(防止因动作过大而使鞭毛从菌体上脱落)挑取适量的菌苔。
4.将沾有菌苔的接种环置于载玻片中的滴有蒸馏水的区域进行涂抹,使菌悬浮在蒸馏水中。
2)染色在涂有菌体的部分滴加一滴稀释美蓝使其覆盖整个悬浮液。
3)盖盖玻片1.用镊子取出一片盖玻片并将盖玻片放在菌体悬浮液的左侧使盖玻片恰好与悬浮液相接触。
2.将盖玻片用镊子轻轻向左侧移动同时慢慢地盖上盖玻片(注意不要让空气进入片中)。
4)快速镜检在观察时应先用高倍镜观察,看不清楚时再用低倍镜观察。
在观察时应采用暗视野,并要以较快的速度对菌体进行观察以免菌体过早死亡。
主要介绍油镜的使用方法:1.将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上,将对准载物台油镜,调节粗调将载物台合适的高度。
细菌的运动性观察(一)实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目,但此法既费时又麻烦。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛,可采用悬滴法或水封片法(即压滴法)直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力,以此来判断细菌是否有鞭毛。
此法较快速、简便。
悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央,在其周边涂上凡士林,然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央,即可放置在普通光学显微镜下观察。
水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上,然后盖上盖玻片,置显微镜下观察。
大多数球菌不生鞭毛,杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛,弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力,衰老的细胞鞭毛易脱落,故观察时宜选用幼龄菌体。
1.制备菌液:在幼龄菌斜面上,滴加3-4mL无菌水,制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林:取洁净无油的盖玻片1块,在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液:加1滴菌液于盖玻片的中央,并用记号笔在菌液的边缘做一记号,以便在显微镜观察时,易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液,并轻轻地盖在盖玻片上,使两者粘在一起,然后翻转凹玻片,使菌液正好悬在凹槽的中央,再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片,使玻片四周边缘闭合,以防菌液干燥。
若制水封片,在载玻片上滴加一滴菌液,盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。
5.镜检先用低倍镜找到标记,再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘,然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。
由于菌体是透明的,镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差,便于观察。
镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动(即布朗运动),前者在视野下可见细菌自一处游动至他处,而后者仅在原处左右摆动。
细菌的运动速度依菌种不同而异,应仔细观察。
结果:有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动,而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。
文案编辑词条B 添加义项?文案,原指放书的桌子,后来指在桌子上写字的人。
细菌鞭毛染色很多细菌自细胞内长出一至很多根细丝状附属物称为鞭毛.鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动.鞭毛瘦长透亮,其宽度在一般光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观看.但是在不染色状况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在. 【试验目的】学习并把握鞭毛染色的原理和方法.【试验原理】细菌的鞭毛特别纤细,直径一般在20nm左右,用电镜才能观看.本试验采纳特别染色法,即在染色前先经媒染剂处理,媒染剂吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可达到一般光学显微镜的辨析范围以内.染色后,即可利用一般光学显微镜进行观看.【试验材料、药品及器具】1、菌种培育18-24h的菌种大肠杆菌(Escherichia coli)一般变形杆菌(Proteus Vulgaris)荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)2、染色液鞭毛染色液甲鞭毛染色液乙(试验前配好的新奇染液)3、器皿显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、洁净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支.【试验步骤】1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内,培育20-30min 使细菌自己渐渐游入水中并充分伸展其鞭毛,使水呈轻度混浊.2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上,然后轻轻抬起此端,使悬液缓慢流至玻片另一端,平放使其在空气中自然干燥固定.切忌用火焰烘干.3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min.4、用蒸馏水轻轻冲洗.5、加乙液染30~60s,可在酒精灯上稍稍加热.冲洗多余的染液.6、制片干后检查.【试验结果】1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和外形.2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图.【思索题】1、菌种的培育时间与鞭毛染色有什么关系?2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和外形?3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区分?为什么?。
1. 掌握鞭毛染色的原理和方法。
2. 观察细菌鞭毛的形态、数量和分布位置。
3. 了解鞭毛在细菌分类和鉴定中的意义。
二、实验原理鞭毛是细菌的运动器官,对细菌的分类和鉴定具有重要意义。
鞭毛染色是一种特殊染色方法,通过媒染剂和染色剂的作用,使鞭毛变粗,便于在显微镜下观察。
常用的媒染剂有单宁酸、明矾钾等,染色剂有碱性复红、硝酸银、结晶紫等。
三、实验材料1. 菌种:金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆菌。
2. 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基。
3. 试剂:鞭毛染色液(A液)、0.01%美蓝水溶液(B液)、香柏油、二甲苯、无菌水、凡士林。
4. 工具:显微镜、接种环、酒精灯、凹载玻片、盖玻片、镊子、细玻棒、吸水纸。
四、实验步骤1. 活化菌种:将保存的菌种在新制备的牛肉膏蛋白胨斜面培养基上连续移种2-3次,每次于30℃培养10-15h。
活化后菌种备用。
2. 制片:在干净载玻片的一端滴一滴蒸馏水,用无菌操作法,以接种环从活化菌种中取少许菌苔(注意不要带培养基),在载玻片的水滴中轻沾几下。
将载玻片稍倾斜,使菌液随水滴缓缓流到另一端,然后平放,于空气中干燥。
3. 染色:滴加鞭毛染色液A液,染3-5min。
用蒸馏水充分洗净A液,使背景清洁。
将残水沥干或用B液冲去残水。
滴加B液,在微火上加热使微冒蒸汽,并随时补充染料以免干涸,染30~60s。
待冷却后,用蒸馏水轻轻冲洗干净,自然干燥或滤纸吸干。
4. 镜检:先用低倍镜和高倍镜找到典型区域,然后用油镜观察。
菌体为深褐色,鞭毛为褐色。
注意观察鞭毛着生位置(镜检时应多找几个视野,有时只在部分涂片上观察到鞭毛)。
1. 金黄色葡萄球菌:观察到典型的鞭毛,数量较多,主要分布在菌体一端。
2. 普通变形杆菌:观察到鞭毛,数量较少,主要分布在菌体两端。
3. 大肠杆菌:未观察到鞭毛。
六、实验讨论1. 鞭毛染色是细菌鉴定的重要方法之一,通过观察鞭毛的形态、数量和分布位置,可以初步判断细菌的种类。
2. 本实验中,金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌均具有鞭毛,而大肠杆菌无鞭毛。
细菌鞭毛染色及活菌运动观察一、目的要求:1、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征2、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术3、学习压滴法观察细菌(活细胞)运动性二、实验器材:1.菌种来源枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,铜绿假单胞菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物2.溶液和试剂稀释美蓝溶液,质量分数为95%的乙醇水溶液,蒸馏水,硝酸银染液A液和B液3.仪器和其它用品酒精灯,载玻片,盖玻片,显微镜,双层瓶(内装香柏油和二甲苯),擦镜纸,接种环,小试管,烧杯,试管架,载玻片夹子,滴管和滤纸三、基本原理:1.压滴法观察活菌运动鞭毛是细菌的运动器官,在水中可以高速旋转推动菌体前行,细菌的游动不是单纯地一直朝前游,而是伴随着不时的随机翻滚转向,但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明,在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰,可以滴加稀释美蓝等染液进行染色,注意不要染色过重,以免影响观察,有鞭毛的细菌运动活泼,且不同时向一个方向运动,而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。
2.细菌鞭毛染色法简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色,而某些微生物具有一些特殊结构,如鞭毛、芽孢和荚膜,对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的“器官”。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10-30nm,只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察,必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理,使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗,然后用碱性复红(Gray氏染色法)、碱性复品红(Leifson氏染色法)、硝酸银(West氏染色法)或结晶紫(Difco氏染色法)进行染色。
四、实验步骤:(一)压滴法观察活细菌1.洗片用自来水和去污粉将载玻片清洗干净,然后用蒸馏水冲洗2.涂片在载玻片上滴加少量蒸馏水,采用无菌操作将所要观察的菌种接种到水滴中蒸馏水稍显浑浊即可。
病原微生物实验重点高压蒸汽灭菌(最常用,最有效的一种湿热灭菌法)的原理和作用:原理:如果蒸汽被限制在一个密闭的容器(高压蒸汽灭菌器)中,随着压力的升高,蒸汽的温度也相应升高。
在103.4KPa蒸汽压下,温度达到121.3℃,维持20-30min可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物(但不能杀灭活朊粒)作用:适用于包括液体在内的各种耐热,耐潮湿物品的灭菌血清肉汤培养基的用途:用于培养乙型溶血性链球菌等营养要求较高的细菌血琼脂培养基的用途:主要用于分离培养营养要求较高的细菌和观察某些细菌的溶血现象双糖铁培养基的原理及用途:双糖培养基乳糖:葡萄糖=10:1,若细菌能分解两种糖,因产酸量多,整个培养基将由红变黄;若只能利用葡萄糖,因产酸量少,斜面表面积大,有机酸易挥发氧化,结果培养基底部变成黄色,斜面仍保持红色。
该培养基还含有亚铁离子,可与硫化氢生成黑色沉淀,所以利用此培养基还能观察到某些细菌分级含硫氨基酸产生硫化氢的情况。
由于该培养基是半固体培养基,还可用于有无鞭毛(痢疾杆菌无鞭毛)的鉴定。
本培养基主要用于肠道致病菌的鉴定。
S-S琼脂培养基的原理及作用:①主要用于分离肠道致病性沙门菌属和志贺菌属的细菌②培养基的选择成分主要体现在煌绿对球菌生长有抑制作用,有助于肠道致病菌的生长;胆盐,枸橼酸钠,硫代硫酸钠可抑制革兰阳性细菌和大多数的大肠埃希菌属细菌的生成,枸橼酸铁能中和中性红的毒性作用,并能与硫代硫酸钠作为还原剂,避免某些细菌产生的硫化氢被氧化③培养基的鉴别作用体现在不发酵乳糖的沙门菌属和志贺菌属细菌,在平板上形成的菌落不着色,呈半透明。
大肠埃希菌能发酵乳糖,产生的酸使胆盐沉淀,胆盐与中性红结合,使菌落呈红色,在平板上可见培养基中红色成片的乳浊状沉淀。
某些变形杆菌和沙门菌还能分解含硫氨基酸产生硫化氢,使菌落中心成黑色。
此外,细菌在该平板上生长后,分解蛋白质产生氨基酸等碱性代谢物,使平板PH值升高,培养基由红变黄罗氏培养基的用途:主要用于结核分枝杆菌的培养(结核杆菌在该培养基上生长缓慢,呈菜花样)油镜的放大倍数:90或100(光学显微镜的分辨率为0.25μm)观察细菌鞭毛所用方法:压滴法,悬滴法,半固体鞭毛穿刺法细菌的革兰染色法:①原理:革兰阳性细菌的细胞壁结够比较致密,肽聚糖含量高且交联度大,脂质含量少,乙醇脱色过程中,虽然能溶解细胞壁的脂质而在壁上形成小孔,但脱水作用使细胞壁收缩构成屏障,通透性降低,阻止细胞内的结晶紫-碘复合物的溢出,细胞仍保持结晶紫初染的紫色。
细菌运动观察(二)关键词:硝酸银菌种乙醇凡士林试剂标准物质北京标准物质网一、操作步骤1.鞭毛染色1)硝酸银染色法(1)菌种的准备:要求用活跃生长期菌种进行鞭毛染色和运动性的观察。
对于冰箱保存的菌种,通常要连续移种1~2次后使用。
为节约时间,从可行性角度出发,可选用下列方法(之一)接种培养作染色用菌种:①取新配制的营养琼脂斜面(表面较湿润、基部有冷凝水)接种,28~32℃培养10~14h,取斜面和冷凝水交接处培养物作为染色观察材料;②取新制备的营养琼脂(含0.8%~1.0%的琼脂)平板,用接种环将新鲜菌种点种于平板中央。
28~32℃培养18~30h,让菌种扩散牛长,取菌落边缘的菌苔(不要取菌落中央的菌苔)作为染色观察的菌种材料。
注意:良好的培养物,是鞭毛染色成功的基本条件。
不宜用已形成孢芽或衰亡期培养物作为鞭毛染色的菌种材料,因为老龄细菌鞭毛容易脱落。
(2)载玻片的准备:将载玻片在含适量洗衣粉的水中煮沸约20min,取出用清水充分洗净,沥干水后置95%乙醇中,用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。
注意:玻片要求光滑、洁净,尤其忌用带油迹的玻片(将水滴在玻片上,无油迹玻片上的水能均匀散开)。
(3)菌液的制备:取斜而或平板菌种培养物数环于盛有1~2mL无菌水的试管中,制成轻度混浊的菌悬液用于制片。
也可用培养物直接制片,但效果往往不如先制备菌液。
挑菌时,尽可能不带出培养基。
(4)制片:取一滴菌液于载玻片的一端,然后将玻片倾斜,使菌液缓缓流向另一端,用吸水纸吸去玻片下端多余菌液,室温(或37℃温室)自然干燥。
载菌玻片千后,最好在0.5h内尽快染色,不宜长时间放置,以菌种免失活变性。
(5)染色:涂片干燥后,滴加硝酸银染色液甲液覆盖3~5min,用蒸馏水轻轻地充分洗去甲液。
用乙液冲去残水后,再加乙液覆盖涂片染色约数秒至1min,当涂面出现明显褐色时,立即用蒸馏水冲洗。
若加乙液后显色较慢.可用微火加热(加热时不能出现干燥面).直至显褐色时立即水洗,自然干燥。
细菌鞭毛染色及活细菌的运动性观察摘要:生长在某些细菌表面的纤细丝状运动器官,称为鞭毛。
采用硝酸银染色法对枯草杆菌和铜绿假单胞菌进行鞭毛染色,在光学显微镜下观察菌体形态和菌毛的长短、数量、着生位置,得到清晰的结果。
采用压滴法观察活细菌的运动性,对其运动情况有初步了解。
关键词:鞭毛染色硝酸银染色法压滴法活细菌1前言1.1实验目的1.学习并掌握鞭毛染色法,观察鞭毛的形态特征。
2.学习用压滴法观察活细菌的运动性。
1.2实验原理鞭毛是细菌的纤细丝状运动“器官”。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm,只有用电镜才能直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察,必须使用鞭毛染色法。
鞭毛染色的基本原理是在染色前先用媒染剂处理,使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗,然后用碱性复红(Gray氏染色法)、碱性复品红(Leifson氏染色法)、硝酸银(West氏染色法)或结晶紫(Difo氏染色法)进行染色。
本实验采用的是硝酸银染色法。
在显微镜下观察细菌的运动性,也可以初步判断细菌是否有鞭毛。
细菌运动性的观察可用压滴法和悬滴法。
观察时,要适当减弱光强度以增加反差,若光线太强.细菌和周围的液体难以区分。
2材料与方法2.1实验器材2.1.1菌种枯草芽孢杆菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,铜绿假单胞菌牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
2.1.2溶液和试剂硝酸银鞭毛染液,0.01%美兰水溶液,香柏油,二甲苯,体积分数95%的乙醇。
2.1.3仪器和其他用品酒精灯,载玻片,盖玻片,显微镜,擦镜纸,接种环,镊子,记号笔,滴管和无菌水等。
2.2实验步骤3结果与分析3.1压滴法用压滴法观察枯草杆菌的运动性,盖上盖玻片立即观察时,可以看到浅蓝色的细菌细胞。
盖玻片下里液体流动较明显,菌体随水流运动,运动方向较统一且呈直线状。
待液体稍蒸发,盖玻片下液体充分但不流动时观察,细菌的运动朝不同的方向,运动过程中可转弯;有些细菌在原地左右摆动,应为布朗运动。
细菌鞭毛染色一、实验目的学习并掌握鞭毛染色方法,并观察鞭毛的形态。
二、实验原理细菌的鞭毛极纤细,直径一般为0.1—0.2um,只有用电子显微镜才能观察到。
但是,如采用特殊的染色法,则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色的基本原理:即在染色前先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理,让它沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进行染色(如碱性复红、硝酸银、结晶紫)。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
(本次实验用硝酸银当染色剂)三、实验器材及试剂1.菌种:枯草芽孢杆菌(鞭毛周生)、铜绿假单胞菌(鞭毛端生)。
2.溶液和试剂:硝酸银鞭毛染色剂A液和B液、95%乙醇、蒸馏水。
3.仪器和其他物品:载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊子、电热炉、大烧杯、洗衣粉四、实验步骤鞭毛染色——硝酸银染色法1.载玻片准备:将载玻片用洗衣粉洗涤后,置于95%的乙醇溶液中浸泡20min,使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
2.制片:取一块载玻片,在一端滴一滴蒸馏水,用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌(铜绿假单孢菌)斜面上挑取菌种在载玻片液滴上轻轻蘸一下,使液滴表面形成一薄层菌膜,随后倾斜玻片,使悬菌液缓慢流向另一端,用吸水纸在载玻片边缘处吸去多余菌悬液,自然干燥。
3.染色:滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液,之后用B液洗去残留水分,再滴加B液覆盖菌面数秒至1min,其间可用微火加热,当菌面出现明显褐色时,立即用蒸馏水冲洗,自然干燥。
4.镜检:先低倍,再高倍,最后用油镜检查,菌体呈深褐色,鞭毛呈浅褐色。
四、实验结果记录枯草芽孢杆菌鞭毛染色观察图铜绿假单胞菌鞭毛染色观察图五、实验结果分析1.理论结果:2.实验结果:3.铜绿假单胞菌鞭毛实验,观察结果与理论结果差异分析:油镜视野中,铜绿假单胞菌的鞭毛出现了多根,与理论结果的一根有所差异,其原因可能是染色方法不恰当或干燥时装片遭到剧烈震动,导致鞭毛脱落,脱落的鞭毛附着在了菌体表面,造成了一个菌体着生多跟鞭毛的假象。