第7章 茎尖培养和脱毒、快繁技术

第七章 茎尖培养和脱 毒、快繁技术
第七章 茎尖培养和脱毒、快 茎尖培养和脱毒、 繁技术： 繁技术：
7.1 茎尖培养： 7.2 脱毒技术： 7.3 快速繁殖技术
7.1 茎尖培养
7.1 茎尖培养
1. 茎尖培养的概念 2. 茎尖培养的应用： 3. 茎尖培养的方法
7.1 茎尖培养
1. 茎尖培养的概念： 1. 茎尖培养的概念 • 茎尖分生组织培养： （ meristem ） , 不带叶 茎尖分生组织培养：（ meristem） 原基， 250um； 原基，<250um； • 茎尖培养： (shoot tip), 带 1-3 个叶原基 ， 茎尖培养：(shoot 个叶原基， 100-1000um； 100-1000um； • 芽培养：(shoot)，>1mm。 芽培养：(shoot)， mm。
Байду номын сангаас
无菌短枝型：节培法、微型扦插法。将待繁殖的材 节培法、 微型扦插法。
料剪成带一叶的单芽茎段，转入成苗培养基， 料剪成带一叶的单芽茎段，转入成苗培养基，成苗 后再剪成带一叶的单芽茎段，继代成苗。遗传稳定。 后再剪成带一叶的单芽茎段，继代成苗。遗传稳定。
•
丛生芽增殖型：茎尖或初代培养的芽，在适宜的培 茎尖或初代培养的芽，
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
4. 病毒检测 • 指示植物法 （indicator）：提取脱毒苗的汁液， 接种（汁液接种、芽嫁接等）到能产生明显的 典型症状的别种植物（指示植物）上，根据接 种后指示植物的表现确定脱毒是否彻底。 • 指示植物的选择 ：1.对特定病毒敏感，且症状 表现明显；3.本身无毒（如种子繁殖）；2.可 常年栽培； 常用：千日红、笕色藜、野生马铃 薯、曼陀罗、心叶烟等。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
4. 提高试管苗繁殖速度的措施：
① 选择合适的繁殖途径 ② 改良培养基： 激素 （腋芽 、 不定芽 、 胚状体 ） 等； 激素（ 腋芽、 不定芽、 胚状体） ③ 改良培养条件 ： 温 、光 、 湿度、 气体（有利气体、 湿度 、 气体 （ 有利气体、
4. 病毒检测： • 电镜法：用电镜直接观察病毒颗粒，通过病 毒颗粒的形态直接鉴定病毒的存在。比较快 速、可靠；但需要电镜和样本制备技术。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
5. 几种植物的脱毒技术 • 马铃薯、甘薯、甘蔗、苹果、草莓、柑桔、 马铃薯、甘薯、甘蔗、苹果、草莓、柑桔、 香蕉
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
有害气体） 有害气体）
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
5. 种苗繁殖体系： 对大规模栽培的植物， 特别是脱毒苗， 种苗繁殖体系：对大规模栽培的植物 ， 特别是脱毒苗， 需要三级繁殖体系。 花卉等规模不大的则不一定需要。 需要三级繁殖体系 。 花卉等规模不大的则不一定需要。
次，少部分长出芽；
•
结合热处理脱毒：先热处理植株，取1mm的茎尖培 ：先热处理植株， mm的茎尖培
养；试管苗热处理；
•
结合化学疗法脱毒 ：如抗病毒制剂 Virazole可以抑 ：如抗病毒制剂Virazole 可以抑
制病毒复制；
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
4. 病毒检测： 病毒检测：经过茎尖培养的植物不一定全是无 毒的，需要经过严格的鉴定才能用材料消毒： • 指示植物法（indicator）： • 抗血清鉴定法： • 酶 联 免 疫 法 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA): • 电镜法：
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• •
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
2. 常用的快繁类型及特点：
① 无菌短枝型： ② 丛生芽增殖型： ③ 器官发生型： ④ 胚状体发生型： ⑤ 原球茎型：
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
2. 常用的快繁类型及特点： •
1. 脱毒苗培育的意义： 2. 脱毒原理： 3. 茎尖培养脱毒技术和程序： 4. 病毒检测： 5. 几种植物的脱毒技术
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
1. 脱毒苗培育的意义： • 是无性繁殖作物消除病毒的有效手段：病毒 一般不能通过种子传播到下一代， 一般不能通过种子传播到下一代，所以无性 繁殖植物易受病毒的侵害， 繁殖植物易受病毒的侵害，造成产量品质的 下降；脱毒苗一般可提高产量30-70% 下降；脱毒苗一般可提高产量30-70%。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
4. 病毒检测： • 抗血清鉴定法：用纯化的病毒注射动物，在 动物的血清中产生抗体。抗原与抗体之间存 在十分特异的凝集和沉淀反应。已知病毒的 抗血清可以用来鉴定这种病毒的存在与否。 试管沉淀反应、点滴沉淀实验、凝聚试验等。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
4. 病毒检测： •
酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,
ELISA):在血清法的基础上，结合酶反应发展起来。 在抗体上带上某种酶，抗原和抗体结合成的免疫复 合物就有了酶活性，在反应体系中加入酶底物，底 物在酶的催化下，形成有色反应物。从而使检测的 灵敏度大大提高。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
养基上诱导， 不断发生腋芽， 养基上诱导， 不断发生腋芽， 而成丛芽；最后生根 成苗。遗传稳定。 成苗。遗传稳定。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
2. 常用的快繁类型及特点： • 器官发生型：从无芽组织直接诱导不定芽， 从无芽组织直接诱导不定芽， 或诱导出愈伤组织后， 或诱导出愈伤组织后，再在从愈伤组织上诱 导不定芽。易变异。 导不定芽。易变异。 • 胚状体发生型：从愈伤组织诱导胚状体，繁 从愈伤组织诱导胚状体， 殖速度快，但成功的事例不多。易变异。 殖速度快，但成功的事例不多。易变异。可 以制作人工种子。 以制作人工种子。
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 培养方法：固体培养、液体纸 桥培养（易愈伤化时）
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 对培养基和培养条件的要求： • 一般可用MS培养基，加少量的生长素（不 用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制 愈伤等有一定的效果。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
③ 试管苗的壮苗与生根：
• 一般要分成单苗 ， 转移到盐浓度较低 、 不含细 一般要分成单苗， 转移到盐浓度较低、 胞分裂素， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基， 胞分裂素 ， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基 ， 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 • 问题：不易生根 （ 延长时间、 继代 ） ；易生根： 问题：不易生根（ 延长时间 、 继代） 壮苗阶段不加生长素， 壮苗阶段不加生长素 ， 试管外生根可减少费用； • 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
2. 常用的快繁类型及特点： • 原球茎型：兰花的茎尖或腋芽在组织培养的 条件下可直接产生原球茎。 条件下可直接产生原球茎。原球茎是一种类 胚组织，可以继代增殖成新的原球茎， 胚组织，可以继代增殖成新的原球茎，控制 条件也很容易分化成植株。 条件也很容易分化成植株。
3. 茎尖培养技术： • 材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植 株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理； 在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶 片，进行常规的表面灭菌；
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌 培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或 解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的 解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下 来，直接接种到培养基上；
1. 试管苗无性繁殖的意义： 2. 常用的快繁类型及特点： 3. 快繁的一般步骤： 4. 提高试管苗繁殖速度的措施： 5. 种苗繁殖体系
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
1. 试管苗无性繁殖的意义： •
与脱毒技术结合，生产无毒苗原种；苹果、桃子、枣、大 蒜、康乃馨、唐菖蒲、 加快果树、花卉、林木、药材等繁殖系数低的植物优良品 种的繁殖速度；月季、杜鹃（扦插难生根） 是兰花唯一的大规模无性繁殖方法； 为一些不能进行常规繁殖的植物材料提供了新的繁殖方法。 如雄性不育系（如大白菜）、自交系、和杂交种（杂种优 势固定）、雄株（石刁柏，芦笋）、三倍体无籽西瓜、
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
④ 试管苗的出瓶种植与苗期管理：
（ 壮苗培养；开口锻炼；选择介质；逐步过渡） 壮苗培养；开口锻炼；选择介质；逐步过渡 ） • 水分平衡 • 介质适宜（水培、固培） 介质适宜（水培、固培） • 养分充足 • 防止菌类 • 光温合适
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
2. 脱毒原理： •
热处理：使病毒钝化，可在活体进行，如香石竹在 ：使病毒钝化， 可在活体进行，
38度处理2个月可消除茎内所有病毒； 38度处理2
•
茎尖培养：病毒在体内的分布不均匀，顶端分生组 ：病毒在体内的分布不均匀，
织一般不含病毒（ 维管系统缺乏、 细胞分裂速度快、 织一般不含病毒（ 维管系统缺乏、 细胞分裂速度快、 其他的抑制机制） 其他的抑制机制）；
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
① 无性繁殖系的建立： ② 试管苗中间繁殖体的增殖： ③ 试管苗的壮苗与生根： ④ 试管苗的出瓶种植与苗期管理：