马铃薯茎尖脱毒培养技术研究21页PPT

发现污染后最好请微生物研究人员作鉴定后对症下药为避免抗药性产生最好轮流使用抗生素如对杆菌而言青霉素庆大霉素头孢唑啉钠都有效在用抗生素处理后试管苗长足后尽快接种以防抗生素失效后细菌重新发作故用抗生素处理应每批接种使用抗同一种细菌的不同抗生素处理连续处理次后方可不经处理接入新培养基尤其是单独使用抑菌抗生素即只能杀死活跃分裂期细菌而对静止期细菌无效
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内 蒙 古农 业科 技
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霉素类植物生长物质， 多数研究者采用 !"# ， 且浓 度 在 $% $& ’ $% ($)* + , 的 居 多 ， 少 数 人 采 用 $% &)* + , 或 -% $)* + ,. 笔者以 /0 1 2""$% -)* + , 1 3 4 5"$% -)* + , 1 !"# $% -)* + , 诱导 6 个生产 用种， 均获成功。 先将茎 -77& 年肖玉兰采用分阶段培养方案： 尖接种在分化培养基 8 /0 1 泛酸钙 ()* + , 1 肌醇 &$)* + , 1 !"$% 6)* + , 1 蔗 糖 (&* + , 1 琼 脂 3* + ,9， #$: 后转入茎尖生长培养基 8 /0 1 5"$% &)* + , 1 !"$% 6)* + , 1 2""$% $$()* + , 1 蔗 糖 (&* + , 1 琼脂 3* + , 9 ； 李静华等则采取先以 - + (/0 1 ;< "" -)* + , 1 (= 6 4 > 丁酯 $% &)* + , 1 ?@ -)* + , 培养， 泛绿后转入 - + (/0 1 A@ -)* + , 1 (= 6 4 > 丁酯 $% &)* + , 。茎尖成活率一般在 (6B ，成活 株中脱毒苗占 &$B 。 -% -% # 培养条件 液体培养的以 (- ’ (&C ，光 照 #$$$ ’ 6$$$DE 进行培养；固体培养的多采用 (&C 或上下浮动不超过 (C ，稍宽一点的范围是 -F ’ (&C 或 ($ ’ (&C 。 光照强度多为 ($$$DE 或以 ($$$DE 为中心上下浮动不超过 -$$$DE，也有严格 限定在 (&$$ ’ #$$$DE 的。光周期则多采用 -3G + :， 也有用 -(G + :， 少有用 -$G + : 的。 若以滤纸桥法 液体培养， 在光照强度 -$$$ ’ #$$$DE 、 光照 -3G + : 的条件下， 经 -($: 的培养， 茎尖即可长成小苗。 -77F 年李天然认为：马铃薯茎尖在 -$$DE 下培养 (F:，然后扩大为 ($$DE ，而在芽长到 -H) 左右时 必须扩大光量达 6$$$DE ， 否则生长不好。 -% -% 6 病毒种类 依司怀军所述，马铃薯茎尖 培养 脱毒按 从易到 难的顺 序为： I,JK、 IK"、 IKL、 I"/ K、 IK/、 IKM、 IK0， 另有类病毒 I0@K: 较 IK0 更难脱去， 而很多实验证明有些病毒也可 （烟草花叶病毒） 侵入分生组织， 如 IKM、 均 @/K 可侵入茎尖， 所以顶端分生组织可以汰除病毒， 但 并不是所有的均可汰除，因而必须采用与热处理 结合的顶端分生组织培养方法， 先热处理母株， 然 后切取顶芽进行培养。二法相结合处理可除去部 分单用茎尖培养难以汰除的病毒。 /N,,NO 和 0PQHN ’ 0)RPG 以 ## ’ #SC 热处理 长根的茎 6( ’ &3: 后剥取 $% - ’ $% #)) 茎尖培养 去除了 F&B IKM 和 3(B IK0= 这一方法适用于以 未能完全脱除病毒的试管苗的再脱毒处理。其他 以块茎为处理对象的研究，恒温处理温度中间值 分别为 ##% &C = #S% &C = #FC ， 在此范围内， 选择

本文结合在凌志马铃薯科技股份有限公司的实践情况，简要 介绍马铃薯脱除病毒的热处理、茎尖培养的方法及脱毒苗快繁技 术。 “茎尖脱毒”技术，它已成为防治马铃薯病毒,提高马铃薯 产量最好的方法。马铃薯脱毒快繁技术就是利用茎尖部分没有病 毒的特性、通过连续切取马铃薯幼芽茎尖0.2-0.3毫米，在无菌 环境条件下，利用人工配置的培养基，进行组织培养，培育出无 毒试管苗，然后将经鉴定无毒的马铃薯脱毒苗，进行继代增殖培 养。
1.2.1 脱毒试管苗的制取
（1）脱毒材料的选择及催芽 （2）茎尖剥离、消毒及接种 （3）茎尖培养
在用作脱病毒原种苗之前，必须进行病毒检测证明 无病毒后才能推广。一般用ELISA（酶联免疫吸附试验）、 血清学方法和指示植物鉴定法。从中筛选出脱毒试管苗 用于继续繁殖。马铃薯X病毒和S病毒离生长点很近，茎 尖剥取长度须在0.2mm以下，Y病毒等离生长点较远， 茎尖切取0.3~0.5mm就可以去掉，X病毒脱去与否是植 株有无病毒的重要标志，因此应特别注意对X病毒的检测。
170
440 22.30 8.6
1700
4400 2230 860
微 量 元 素
Na2MoO4·2H2O
CoCl2·6H2O H₃BO₃ KI GuSO4·5H2O
0.25
0.025 6.2 0.83 0.025 37.25 27.85
25
2.5 620 83 2.5 3725 2785 1000 100 10 1000 100 10
1.1 热处理法
热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异，使植物的 生长速度超过病毒的扩散速度，得到一小部分不含病毒的植物分生组织， 然后进行无毒个体培育。选择适当的温度和处理时间，植物组织中的很 多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动，但很少伤害甚至不伤 害寄主组织，从而让植物细胞加快生长，使生长点附近不带病毒，从而 达到脱毒的目的。主要缺点是脱毒时间长，脱毒不完全，例如TMV这类 杆状病毒就不能用这种方法脱除，因而该方法有一定的局限性。

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马铃薯的脱毒试管苗
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再将其转入生长箱中，每天光照16 h， 光照强度3000-4000 lx。2 周后去掉顶芽， 以促进腋芽的生长。当腋芽长到1-2 cm时， 折下腋生枝，用于消毒、接种。
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（2）消毒： 水洗干净，无菌条件下先用70%的酒精
浸组织15-20 s，再用2%次氯酸钠溶液浸泡 4-5 min，然后用无菌水冲洗3 次。
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（3）接种： 把芽置于解剖镜下，左手用一把镊子将
芽按住，右手用解剖针将叶片和叶原基剥 掉，当形似一个闪亮半圆球的顶端分生组 织充分暴露出来后，用锋利的长颈刀片将 分生组织切下来，上面可带/也可不带叶原 基，再用刀片将其接种到培养基上。
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（4）培养基： MS 培 养 基 （ 提 高 NH4+ 、 K+ 浓 度 ， 利 于
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4、微型种薯的扩大繁殖 采用试管、温室、底畦生产的微型薯原原 种，可进一步通过塑料大棚或大田在春秋 两季扩大繁殖，以提供足够大田使用的优 良种薯。
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思考题：
１、对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个 阶段？各阶段是怎样操作的？ ２、马铃薯的生物学习性有哪些？
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（二）微型薯生产技术 1、试管生产 （1）单茎节扩大繁殖：由无性繁殖的
试管苗中获得茎切段（每个茎段带1-2个 叶 片 或 腋 芽 ） ， 每 个 三 角 瓶 里 接 4-5 个 茎 段，进行培养。
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（1）单茎节扩大繁殖： 培养条件：22 ℃，16 h补充光照1000 lx

用 量 非 常 少 ， 不 易 溶 于水 ， 以采 用 特殊 的 配 置 方 法 ， 且 所
配 置 成 ５ ０ ｇ Ｌ的 溶 液 待 用 。 当两 个 品 种 的种 薯 芽 长 ０ ／ ｍ
到 ２ ３ｃ ～ ｍ时 ． 选 生 长 健 壮 的 芽 ， 清 水 冲 洗 芽 部 表 挑 用
面 污 物 ．在 无 菌 操 作 室 采用 ｌ 种 不 同 的方 法 进 行 表 面 ２ 消 毒 ， 最 近 制 作 的蒸 馏 水 冲洗 四 五 次 ， 表 面 消 毒 剂 用 将 彻 底 清 除 ， 同表 面消 毒 剂 处 理 时 间 见 表 １ 不 。
２１ ０２年第 １ ６期
马铃 薯茎 尖脱毒及组培快 繁技术研究
田 成 津
（ 海 大 通 县 农 业 生 态 环境 与 可再 生 能 源 工作 站 ， 海 大通 青 青 ８ ００ ） １ １０
摘 要 ： 以下寨 ６ ５和青薯 １８为实验 对 象， 用不同培养基 ， ６ 采 对马铃薯 两个 品种进 行脱毒及组培 ， 对培养 基及 关键技 术措 施进行 了分析 ， 结果表 明 ： 与青 薯 １ ８ 不 同培 养 中生长表现不 同， ６在 下寨 ６ ５茎尖组织在 Ｍ Ｓ中加入 Ｂ ２ Ａ ｍ／ ｇ Ｌ的培养基 中生长表现 突出， 而青薯 １８茎尖组织在 Ｍ ６ ｓ中加入 Ｂ ２ｍ ／ Ａ ｇ Ｌ的培养基 中成苗率较 高。 同等条件下 ， 在 加入 ＩＡ ．０ ｇＬ的培养基宜用于下寨 ６ 脱毒苗 的组织快繁 ，加入 ＩＡ０ ３ ｍ ／ Ａ ５ ｍ ／ ０ ５ Ａ ． ０ ｇ Ｌ的培 养基宜用于青薯 １８脱毒 ６
厂化生产提供帮助 。
１ 材 料 和 方 法
１ １ 供 试 材 料 ．
１２ １ 催 芽 于 １ 月 中 旬 左 右 ， 拣 表 皮 光 滑 、 常 ． ． １ 挑 正 薯 形 、 小 均 匀 、 病 害 和 无 损 伤 薯 块 ， 置 在有 供 暖 的 大 无 放 房 间 ， 内温 度 ２ 室 ４℃ 左 右进 行 催 芽 。 催 芽 前 薯 块 正 处 在 于 休 眠期 ， 用 ０ ０ ～ ０ １ ｇ Ｌ的 Ｇ ３ 处 理 薯 块 ， 采 ．５ ．０ ／ ｍ Ａ来 浸 没 于 Ｇ ３溶 液 中 １￣ ２ ｉ ， Ａ ０ ０ ｎ 以打 破 休 眠 ［。 ｍ ４ ］ １２ ２ 种 薯 处 理 ．． 采 用 Ｍ 培 养 基 ， 入不 同 配 比的 激 Ｓ 加 素 ， 备 Ｂ 、Ａ 、Ａ 、Ｂ 准 ＡＮ Ａ Ｇ 。ＩＡ和 ＩＡ 由 于 激 素 在 培 养 基 中 Ａ，

在 ４０Ｘ解剖镜下剥离茎尖 ，一手用镊子将芽按住 ，一手用无 菌 解 剖针 将 叶 片逐 层 剥掉 ，直至 露 出 圆滑 的生 长 点 ，用 解 剖针 切 取带 １～２个叶原基的 ０．３ｍｍ 茎尖 ，接 种到培养瓶内 ，保证切面 接触培养基 ；同时在剥离过程中，操作要敏捷准确 ，防止茎尖在空 气 中暴 露 时 间 长 ，水分 蒸 发 使茎 尖 变干 ；将 接 种 的培 养 瓶置 于 培 养箱进行培养 ，定期观察其生长状态和污染情况。 ３茎 尖脱 毒的 影 响 因素
马 铃薯 茎 尖脱毒 就 是利用 该原 理 ，把茎 尖 剥离 接 种到 培 养基 上 ，进而培养马铃薯种薯或微型薯 。 ２ 操 作 方 法
剪取促芽后的马铃薯块茎上合适大小的芽若干个 ，冲洗干净 后放于烧杯内用纱布封 口，置于 自来水下反复冲洗 ４０分钟，吸干 表面水分放进超净工作台进行深层消毒；先用 ７５％酒精浸泡 ２０～ ４５ｓ，无菌水冲洗 ３次 ；再用 ｏ．１％的升汞浸泡 ８￣１０ｍｉｎ，无菌水冲洗 ５次 ，冲洗时轻轻晃动烧杯时消毒剂彻底被漂洗掉 ，之后置于无 菌 滤纸 待用 。
毒 效果 的 因素进 行 了详 细分析 ，进 一步 阐述 了对病毒 检 测的 常 用方 法。
关 键词 ：马铃 薯 ；茎 尖脱毒 ；病毒 检 测
中图分 类号 ：￥５３２
文 献标 识码 ：Ａ
文章编 号 ： １６７４—０４３２（２０１３）一１０—２３—２
马铃薯是我国重要的粮食作物 ，近年来 ，政府加大力度发展 现代 马 铃 薯 产业 ，促 进 了马 铃 薯 产业 的 快速 发 展 ，种植 面 积 和 鲜 薯产量均居世界首位 ，产业链条逐步拓展 ，经济效益稳步提升。但 是 ，马铃薯是通过块茎进行的无性繁殖 ，在连年种植过程 中土壤 和种薯本身携带的病害逐年严重 ，导致品种退化 ，严重降低了马 铃薯的产量和品质。１９５５年法国 Ｍｏｎｅｌ通过剥离马铃薯茎尖获 得 了不 带病 毒 的 马铃 薯 脱 毒苗 ，引起 了 科学 界 的广 泛 关 注 ，世 界 各地纷纷采用马铃薯茎尖脱毒快繁应用于大田生产 ，提高马铃薯 产量 ，改善其品质。 １马 铃薯 茎 尖脱 毒原 理

水， 注意控制好 浇水量 ， 不宜过大 。在浇水时 可随水 冲入化肥 水， 但化肥的种类要求很严 ， 要求挥发量小或不挥发 ， 在低温 且
灵、 绿亨一号等杀菌剂及时 涂抹防治 ， 阻止病菌 浸入危害 。将 去掉的老叶清出棚外深埋 ， 防止病菌的传染 。 ２ 采 用吊秧栽培 管理 吊秧是调节长势 、增加 生长空间 、 ． ３ 合理利用光能 、 增产增效 的一 种新 的栽培措施 。在吊秧栽培中 应注意 以下 几点 ： 吊绳 要选择抗老化 的聚乙烯高 密度塑料线 ； 铁丝架设高 度控 制在距离棚膜 ３ｃ ０ｍ左右 ， 如果架设过矮会 影 响棚室空 间利用率 ；吊绳 的方法是下端用 一活扣固定在植株 上或用死扣 系在 叶柄上 ，上端 用活扣 系在 铁丝上并应 多余一 部分 ， 以便后期落秧时随 秧一起下落 ； 吊绳调节瓜秧 的长 利用 势 。如果瓜秧长势过 旺或出现徒长 ， 要将 生长 点向下弯 曲 ， 如 果 瓜秧 长势较弱 ， 要把生长点夹在吊绳缝中让 其直立 生长 。通 过 吊秧 ，还可以控制 瓜秧的生长 点由南到北成为一 稍微倾斜 的斜线 ， 达到北高南低 ， 以使受光均匀 ， 产量一致 。
技 术版 块
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园艺
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技 术ｌ
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１法 国 冬 玉 西 葫 芦 的 经 济效 益 ．
不暴露 在空气中 ， 待温 室内干燥 后 自然变黄枯 萎 ； 次去叶数 每
冬玉西葫芦 是从法国 引进 的极 耐寒越冬 １光 温室栽培 的 ９ 优 良品 种 ，并在 公主 岭 大 岭 乡温 室 试 种成 功 。每 栋 温 室 （０ ｍ２平均产西葫芦 ２ ０ｋ ， ６０ ） ５ ０ ｇ 在市 场上平均批 发价是 ０ ． ９元 ／ｇ每栋温室收入 ９０ 元 。 ｋ， ００ 每栋温室年产值 ６ 万元 ， 扣除每栋 费用 １ ． ５万元 ， 每栋年纯收入 ４５ ．万元 。

• 还可以借助化学药剂处理来提高脱毒效果。
• 三、脱毒苗的保存方法
• 无毒苗要很好的保存，可以在生产上经济有效地发挥作 用。常用的瓶苗继代保存需要在培养基中加入一些生长 延缓剂。
• 但无病毒植株并没有获得额外的抗病性，它还可能被同 一病毒或不同病毒感染。
• 低温保存是在苗长到2cm左右时，放在4℃冰箱内的暗处 保存，可保存一年。而在液氮低温-196℃中保存，细胞 的代谢完全停顿，可以长期保存。
• 一、马铃薯脱毒苗ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ段组培技术
• 目前多应用茎段组织培养技术来快速繁殖脱毒苗，茎段组 织培养是指带有腋芽或叶柄、长数厘米的茎节段进行离体 培养。
• （一）茎段培养的培养基
• 在实践中，一般茎段培养用的培养基仍然是MS培养基， 但不像茎尖培养严格，为了降低成本，有时有机成分和微 量元素可酌减，只用大量元素和少数微量元素，并用白糖 代替蔗糖，琼脂改用0.5%等。
• 马铃薯茎尖培养一般常采用半固体（琼脂培养基）培养， 但去掉琼脂的液体培养基培养效果更好。
马铃薯茎尖培养培养基的成分表（mg/l)
成分 硫酸镁 磷酸二氢钾 硝酸钙 硫酸铵 硝酸钾 氯化钾 盐酸吡哆醇 马铃薯
蔗糖 琼脂
含量 125 200 100 100 1000 35
1 10% 90000 0.6%
• 已知感染马铃薯的病毒有18种，类病毒有1种。
• 在我国已发现7种专门寄生于马铃薯的病毒，即马铃薯X病 毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯 S病毒(PVS)、马铃薯 M病毒(PVM)、马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯奥古巴花叶病毒 （又叫黄斑花叶病毒，简称PAMV）和马铃薯卷叶病毒 (PLRV)。
• 马铃薯由于具有高产、生育期短、适应性广、抗灾害能力 强、营养丰富、用途广泛等优势，在世界范围内广泛种植， 已成为世界第四大粮食作物。

05
茎尖培养脱毒技术的发展前景
技术创新与改进
自动化与智能化
通过引入机器人和人工智能技术 ，实现茎尖培养脱毒技术的自动 化和智能化，提高工作效率和准 确性。
高效快速繁殖
研究更高效的繁殖方法，缩短培 养周期，提高脱毒苗的繁殖速度 ，以满足大规模生产的需求。
基因编辑技术
利用基因编辑技术对植物进行精 确的基因改造，提高茎尖培养脱 毒技术的成功率和应用范围。
《茎尖培养脱毒技术》PPT 课件
目录
• 茎尖培养脱毒技术简介 • 茎尖培养脱毒技术的操作流程 • 茎尖培养脱毒技术的优缺点 • 茎尖培养脱毒技术的应用实例 • 茎尖培养脱毒技术的发展前景
01
茎尖培养脱毒技术简介
茎尖培养脱毒技术的定义
茎尖培养脱毒技术是一种利用植物组织培养技术，对植物的茎尖 进行离体培养，诱导产生无病毒的植株，进而实现脱除病毒的目 的。
降低技术难度
简化操作步骤，降低对操作人员的技 术要求。
增强遗传稳定性
研究如何减少茎尖培养脱毒技术获得 的植株在遗传上的变异，提高其后代 的稳定性。
扩大适用范围
进一步探索该技术在更多种类的植物 上的应用，以扩大其适用范围。
04
茎尖培养脱毒技术的应用实例
在马铃薯脱毒中的应用
总结词
茎尖培养脱毒技术在马铃薯脱毒中应用广泛，有效解决了马铃薯病毒病问题，提高了马铃薯产量和品 质。
详细描述
除了马铃薯和草莓，茎尖培养脱毒技术还可应用于其他作物的脱毒处理，如甘蔗、葡萄 、花卉等。该技术的应用能够提高这些作物的抗病性和产量，改善品质，为农业生产和 园艺产业的发展提供有力支持。随着科学技术的不断进步和应用领域的拓展，茎尖培养
脱毒技术将继续发挥重要作用，为农业和园艺产业的可持续发展做出贡献。

生 组织 旺 盛 的新 陈 代谢 活 动 。病 毒 的 复制 须利 用 寄 理后 再 进 行茎 尖 剥 离 ，发 现 可 以完 全脱 除 马 铃薯 卷 主 的 代谢 过 程 ，无 法 与分 生 组织 旺盛 的代 谢 活 动竞 叶病 毒 （ Ｌ Ｖ） Ｐ Ｒ ，用 变 温 培 养 处 理 ，Ｖ 脱 毒 率 为 ＰＸ 争 ； ２ 分生 组 织 缺乏 真 正 的维 管组 织 。大 多 数 病 毒 ９ 。 ， （） ６２ 比恒 温热 处 理 Ｐ Ｘ 的脱 毒 率高 。王 秀英 ｌ研 ％ Ｖ １ ｌ 】 在 植 株 内通 过 韧 皮部 进行 迁 移 ，或 在 细胞 间通 过胞 究 表 明 ： 高温 预 处 理对 提 高茎 尖 脱 毒率 效 果 明显 ， 可 问连 丝传 输 ， 为细 胞 与细 胞 间 的移 动速 度 较慢 ， 因 在 以把 不易脱 去 的 Ｐ Ｘ、Ｖ 、Ａ ｖ Ｐ Ｓ Ｐ ＭＶ脱 去 。 Ｓ Ｖ Ｐ Ｔ ｄ是 最 快 速 分 裂 的组 织 中病 毒浓 度 高 峰被 推 迟 ；３ 高 浓 度 难 以除去 的 ， 一 般 的方 法很 难 获得 无 病 毒植 株 ， （） 用 但 的生 长素 。分 生组 织 的生长 素 浓度通 常 很高 ， 可能 影 经过 热处 理则 可 以除去 。 罗玉等 ＿采 取选 健康 整薯 室 ｌ ７ Ｊ
因素 做 出综 述 ．以期 为 马铃 薯茎 尖 脱 毒技 术 的 深入 而 很少 伤 害 寄 主组 织 ， 而抑 制病 毒 的增殖 、 缓病 从 减 研 究 提供参 考 。
毒 在植 株体 内的扩增 速度㈣。 因此 热处 理 可 以提 高 培 养 中去 除病 毒 的能 力 ，但 不 同病 毒 对 高温 预 处 理 的
病 毒是 来 自其 它寄 主植 物 的病毒 。
由于 不 同病 毒在 茎尖分 布 不 同 ， 脱毒 的效 果也 与