马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究

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马铃薯茎尖脱毒技术体系优化研究

马铃薯茎尖脱毒技术体系优化研究马铃薯是一种粮、菜、饲、工业原料兼用型经济作物,其产量高、营养丰富、适应性强、分布广。

但是在马铃薯的连年种植过程中,产量和品质逐年下降,退化是造成这一后果的主要原因,而解决退化的有效措施就是生产脱毒种薯。

马铃薯茎尖培养脱毒苗是马铃薯脱毒种薯产业的基础,优质快速地茎尖培养为以后脱毒苗和脱毒薯的生产赢得了时间和效益,当前脱毒马铃薯茎尖培养效率低,成苗率和脱毒率达不到预期目的,因此优化马铃薯茎尖脱毒培养方法非常必要。

本试验对茎尖培养的培养基和脱毒方法对脱毒效果的影响进行了系统研究,得出了以下主要结果: 1.激素对马铃薯茎尖分化成苗的影响本试验以MS培养基为基础培养基,添加不同种类及不同浓度的植物生长调节剂,共24个处理组合,研究了不同植物生长调节剂及不同浓度配比对茎尖分化成苗的影响。

结果表明,诱导茎尖分化的成苗不仅与植物生长调节剂的绝对浓度有关,又与不同种类植物生长调节剂的配比有关。

其他条件相同的情况下,添加GA3浓度为0.1mg/L时的成苗率比浓度为0.2mg/L时的成苗率高,且差异显著,说明GA3的浓度对马铃薯的成苗具有极大影响。

试验得出,培养基中加入0.1mg/LGA3有助于马铃薯茎尖更好的生长和分化,0.2mg/L GA3对茎尖分化的成苗率有抑制效应。

同等条件下培养基中添加0.1mg/L的IAA和0.2mg/L的IAA相比较,0.2mg/L IAA的成苗率较高,达50%,0.05 mg/L的NAA和0.1mg/L的NAA相比较,0.05mg/L NAA的成苗率较高,可达56.98%,但0.05mg/L的NAA比0.2mg/LIAA成苗率更高,说明使用0.05mg/LNAA作为生长素对马铃薯茎尖的分化生长有较好的促进作用。

马铃薯茎尖脱毒技术研究

马铃薯茎尖脱毒技术研究本试验以马铃薯茎尖分生组织为实验材料,应用单一试剂和组合试剂法对马铃薯茎尖进行消毒预处理,消毒试剂包括酒精、漂白粉、氯化汞、次氯酸钠、次氯酸钙和过氧化氢六种试剂。

通过分析植株染菌和成活等生长情况来判断消毒的效果。

在消毒时长与无菌水冲洗次数上进一步优化,采取酒精处理30s、60s和120s,无菌水冲洗2、4和6次,氯化汞处理2min、3.5min和5min构成三因素三水平正交实验,依据染菌和成活情况确定最优的灭菌组合,结果表明氯化汞处理 3.5min,酒精处理120s,无菌水冲洗6次,马铃薯的脱毒苗无菌成活率可达90%以上采用黄皮薯“中薯一号”、白皮薯“早大白”、紫皮薯“紫薯”,研究不同品种的茎尖分生组织经脱毒培养后的成活情况,结果表明中薯一号的成活率可达到70%,而紫薯的成活率为0%,表明不同品种的茎尖脱毒效果和效率存在显著的差异。

研究了“中薯1号”不同类型的外植体茎尖的脱毒培养情况,包括母薯上、自然环境下植株上的侧芽和培养箱中脱毒幼苗的侧芽茎尖三种。

结果表明母薯上茎尖脱毒培养出的苗染菌率较高,生长情况比较差的,成活率只有50%；培养箱中的是经过脱毒预处理且在无菌环境下生长的侧芽,虽没有自然环境下的苗长势旺盛,但成活率能达到80%,所以采用无菌苗的侧芽尖进行脱毒培养效果最好。

进行了培养基组分的优化,设计了在MS培养基中加入不同浓度的激素PIX以及不同果汁添加物的试验,结果表明激素PIX对促进马铃薯脱毒苗缩短节间,增加茎粗,抑制徒长,促进壮苗有着显著的效果。

当PIX浓度为0.5mg/1和1.Omg/l时,马铃薯的脱毒苗长得最壮,分枝最多,叶子最多,且颜色为绿色,有的是墨绿色。

不同浓度的果汁添加物对脱毒苗均有促进或抑制作用,它们能提供脱毒苗在生长过程中所需要一些微量营养成分、生理活性物质和生长物质等,其中低浓度的水萝卜汁最有助于马铃薯脱毒苗的生长。

马铃薯茎尖脱毒培养技术研究

在４０Ｘ解剖镜下剥离茎尖，一手用镊子将芽按住，一手用无菌解剖针将叶片逐层剥掉，直至露出圆滑的生长点，用解剖针切取带１～２个叶原基的０．３ｍｍ茎尖，接种到培养瓶内，保证切面接触培养基；同时在剥离过程中，操作要敏捷准确，防止茎尖在空气中暴露时间长，水分蒸发使茎尖变干；将接种的培养瓶置于培养箱进行培养，定期观察其生长状态和污染情况。３茎尖脱毒的影响因素
马铃薯茎尖脱毒就是利用该原理，把茎尖剥离接种到培养基上，进而培养马铃薯种薯或微型薯。２操作方法
剪取促芽后的马铃薯块茎上合适大小的芽若干个，冲洗干净后放于烧杯内用纱布封口，置于自来水下反复冲洗４０分钟，吸干表面水分放进超净工作台进行深层消毒；先用７５％酒精浸泡２０～４５ｓ，无菌水冲洗３次；再用ｏ．１％的升汞浸泡８￣１０ｍｉｎ，无菌水冲洗５次，冲洗时轻轻晃动烧杯时消毒剂彻底被漂洗掉，之后置于无菌滤纸待用。
毒效果的因素进行了详细分析，进一步阐述了对病毒检测的常用方法。
关键词：马铃薯；茎尖脱毒；病毒检测
中图分类号：￥５３２
文献标识码：Ａ
文章编号：１６７４—０４３２（２０１３）一１０—２３—２
马铃薯是我国重要的粮食作物，近年来，政府加大力度发展现代马铃薯产业，促进了马铃薯产业的快速发展，种植面积和鲜薯产量均居世界首位，产业链条逐步拓展，经济效益稳步提升。但是，马铃薯是通过块茎进行的无性繁殖，在连年种植过程中土壤和种薯本身携带的病害逐年严重，导致品种退化，严重降低了马铃薯的产量和品质。１９５５年法国Ｍｏｎｅｌ通过剥离马铃薯茎尖获得了不带病毒的马铃薯脱毒苗，引起了科学界的广泛关注，世界各地纷纷采用马铃薯茎尖脱毒快繁应用于大田生产，提高马铃薯产量，改善其品质。１马铃薯茎尖脱毒原理

微型马铃薯优质种苗的茎尖脱毒培养

微型马铃薯优质种苗的茎尖脱毒培养李进进【摘要】为了保持马铃薯优良品种的遗传特性,以马铃薯茎尖为外植体,MS为基本培养基,添加不同浓度及其配比的外源激素,对马铃薯茎尖进行诱导、增殖、壮苗和微型薯生产研究.结果表明:MS+6-BA1.5mg/L(以下单位同)+NAA0.2 培养基配方适宜茎尖的诱导增殖.并且在合适的培养基配方前提下,分别在单节茎段、2节茎段、3节茎段中加入不同量的活性炭进行实验,得出加入0.2%的活性碳时,腋芽萌发率最高,平均芽长度最为理想,而且芽的长势最强.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2009(028)003【总页数】2页(P88-89)【关键词】微型马铃薯;茎尖脱毒;遗传种性;激素;活性炭【作者】李进进【作者单位】广东轻工职业技术学院,广州,510300【正文语种】中文【中图分类】S532马铃薯(Solanum tuberosum)原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。

其适应性广，营养价值高，耐贮藏运输，是重要的粮食作物之一，也是一种调节市场供应的重要蔬菜。

但是，从外地引种栽培1～2个周期后，明显发现其遗传种性降低，产量下降，品质变劣，并有卷叶和花叶等现象发生，这是由于病毒引起的遗传种性退化现象。

马铃薯易感染多种病毒，导致薯块变小、畸形、种薯退化等。

实验证明，利用茎尖组织培养结合病毒检测，进行马铃薯脱毒，进而生产脱毒种薯用于生产，可有效地防止种薯遗传种性退化，大幅度提高马铃薯产量。

因为植物病毒是通过植物的微管系统移动，茎尖部位细胞分裂速度快，暂时还没有形成微管系统;而且茎尖分生组织生长素含量很高，足以抑制病毒的增殖。

因此我们取马铃薯芽段2～3 cm，经过一系列消毒，在无菌条件下用解剖镜小心剥取约0.7 mm的茎尖进行培养，以获得无病毒苗。

1.1 材料将具有优良遗传种性的马铃薯沙藏，取其发芽后的芽段。

1.2 试验方法1.2.1 外植体消毒先将表面光滑无病虫害的马铃薯埋在湿润的沙质基质中催芽，待芽长至2～3 cm 时，切取芽段在自来水下冲洗15 min左右，于超净工作台上进行严格的消毒。

马铃薯茎尖脱毒培养关键因素研究

茎尖培养又叫分生组织培养，是包括马铃薯在３
基金项目：乌兰察布职业学院科研项目（１２ｗｚｋｙＯ１３）
作者简介：刘海英（１９７５一），女，硕士，讲师，从事马铃薯组织培养和病毒检测教学与研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｈｙ８２１＠１６３．ｃｏｎｒ
经验交流２０１３．８
．啦业蝴挝地
马铃薯茎尖脱毒培养关键因素研究
刘海英陈建保康俊段伟伟张祚恬（内蒙古乌兰察布职业学院马铃薯工程系乌兰察布０１２０００）
摘要：对马铃薯茎尖脱毒培养关键因素进行了分析，阐述了马铃薯茎尖脱毒培养的理论基础、影响马铃薯茎尖脱毒培养的因素和条件，指出了茎尖培养脱毒中尚存在的一些问题以及相应对策。
关键词：马铃薯；茎尖脱毒；组织培养
马铃薯是粮、菜、饲、加工兼用型作物，适应性内的许多植物脱除病毒的重要方法，分生组织顶端
广、营养丰富、经济效益高，已成为世界上继水稻、小培养法已发展成为适用于几乎所有无性繁殖作物脱
左右。
次。植物分生组织中生长素的含量或活性一般远远
具有抑制病毒增殖的效果嘲。马铃薯产业对我国农村经济发展、国家粮食安高于其他组织，

马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导及分化技术优化研究的开题报告

马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导及分化技术优化研究的开题报告一、研究背景和意义马铃薯是我国重要的食用和工业原料作物之一，也是世界上最重要的食用作物之一。

但是，马铃薯叶片、茎尖等组织中常常携带多种病毒，如果不进行脱毒处理，就会对马铃薯的生产和质量造成很大影响。

另外，马铃薯茎尖是愈伤组织诱导和分化的重要材料之一，开展马铃薯愈伤组织的研究对马铃薯的育种和繁殖有着重要的意义。

现有的马铃薯茎尖脱毒及愈伤组织诱导和分化技术存在着一些问题，如操作复杂、效率低下、成本高等问题。

因此，本研究旨在优化马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导及分化技术，提高脱毒效率和愈伤组织诱导率，降低成本，并进一步探讨其应用前景和发展方向。

二、研究内容和方法1. 马铃薯茎尖脱毒技术优化研究通过对传统马铃薯茎尖脱毒方法的改进和优化，探索更为高效、稳定的脱毒技术，主要包括以下方面：（1）不同消毒和灭菌方法对茎尖脱毒效果的影响研究；（2）不同处理条件对茎尖脱毒效果的影响研究；（3）茎尖脱毒后的存放条件和时间对其真实性的影响研究。

2. 马铃薯茎尖愈伤组织诱导和分化技术优化研究通过对马铃薯茎尖愈伤组织诱导和分化技术的优化，提高愈伤组织诱导率和分化效率，主要包括以下方面：（1）不同物种、不同品种马铃薯茎尖的愈伤组织诱导率研究；（2）不同植物生长调节剂浓度对愈伤组织诱导和分化的影响研究；（3）外源DNA导入对马铃薯愈伤组织形成的影响研究。

3. 研究方法本研究将采用实验室培养和相关分析方法，包括细胞培养、组织培养、酶活性测定、PCR检测等方法，对马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导和分化技术进行优化研究，同时通过对比实验和数据分析，探索更为高效、稳定的脱毒和愈伤组织诱导技术，并对其应用前景做出初步预测。

三、研究预期成果本研究预计通过优化马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导和分化技术，取得以下预期成果：（1）探索出更为高效、稳定的马铃薯茎尖脱毒技术，并提高脱毒效率和真实性；（2）提高马铃薯愈伤组织诱导率和分化效率，探索出更为稳定的愈伤组织诱导和分化技术；（3）通过实验数据分析，预测优化技术将应用到实际生产中，并对其发展前景进行初步分析和探讨。

马铃薯茎尖脱毒培养关键因子探析

ＴｈｅＫｅｙＦａｃｔｏｒｏｆＰｏｔａｔｏＳｈｏｏｔ－ｔｉｐＣห้องสมุดไป่ตู้ ｌｔｕｒｅ
（ＰｏｔａｔｏＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＷｕｌａｎｃｈａｂｕＣｏｃａｔｉｏｎｌａＣｏｌｌｅｇｅ，Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ０１２０００，Ｃｈｉｎａ）
题，提出了结合化学处理提高脱毒率的有效措施，指出茎尖脱毒培养中尚存在的一些问题以及相应对策。关键词：马铃薯；茎尖脱毒；组织培养
中图分类号：Ｓ５３２文献标识码：Ａ１０．３９６９／ｊ．ｊｓｓｎ．１００７ — ０９０７．２０１３．０４．０１９文章编号：１００７ — ０９０７｛２０１３）４－０００３６ — ０２
操作流程如下：
国第一２０１２年种植面积有所下降．但仍然保持在６６．７９万
ｈｍ０．总产可达１０００万ｔ左右
１．２．１选材
于马铃薯生长季在田间选取生长健壮、品种特性
马铃薯产业对我国农村经济发展、国家粮食安全起到了非常重要的作用由于马铃薯栽培属于无性繁殖，导致马铃薯如果自身携带有病毒的话．多代无性繁殖可以导致病毒的积累．造成产量以及品质的逐年下降，也就是品种退化。目前．病毒病是制约马铃薯产业发展的主要因素。马铃薯茎尖脱毒培养手段是解决马铃薯病毒病最常使用的方法之一。通过分离茎尖分生组织

马铃薯茎尖脱毒组织培养技术研究综述

马铃薯茎尖脱毒组织培养技术研究综述作者：杨小琴李善才李增伟胡晓燕孙利军来源：《现代农业科技》2009年第22期摘要综述了近几年来马铃薯茎尖脱毒技术的研究进展,从马铃薯生产概况及危害马铃薯的主要因素、茎尖剥离发展历史及原理、茎尖脱毒技术要点、影响马铃薯茎尖脱毒效率的因素方面作了概述并对其发展前景进行了展望,以为马铃薯茎尖脱毒技术发展奠定基础。

关键词马铃薯;茎尖;脱毒;组织培养中图分类号S532文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)22-0085-02ReasarchReviewOn Virus-freeTechnology ofPotatoStep-tip Tissue CultureYANG Xiao-qinLI Shan-caiLI Zeng-weiHU Xiao-yanSUN Li-jun(Yulin Institution of Agricultural Sciences,Yulin Shaanxi 719000)AbstractIn the paper,the recent studies on step-tip tissue culture of potato were reviewed. The respects about potato production situation,factors of potato production,historical development, theory and outline of virus-free on step-tip,and influencing factors on virus-free on step-tip tissue culture were summaried.Then the development prospect was presented so as to lay a foundation for the development of potato step-tip virus-free tissue culture.Key wordspotato;step-tip;virus-free;tissue culture马铃薯栽培分布较广,世界上共有148个国家栽培,主要分布在欧洲和亚洲。

马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点

实践技能练习马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点1.马铃薯茎尖组织培养脱毒技术1.1脱毒方法1.1.1选择优质健康的材料所选的植株必须是表现典型品种特性的植株,符合脱毒品种的特征包括株型、叶形、花色等植物学性状及成熟期等农艺性状;植株生长健壮,无明显的病毒性、真菌性、细菌性病害症状;单株产量和大薯率高;适时早收,选择符合品种特性,无病斑、虫蛀和机械创伤的大薯块。

1.1.2选择培养基MS培养基适用于大多数双子叶植物,B5和N6适合大多数单子叶植物,马铃薯茎尖培养基以MS+GA3 0.05mg/l +6-BA0.5～0.1mg/l +NAA0.1～0.2mg/l+2%蔗糖+0.9%琼脂配方效果比较好。

1.1.3剥离和接种薯块休眠后进行室内催芽,待芽长至1～2cm还未展叶时,将芽剪下,然后放入烧杯,用纱布封口,在自来水下冲洗半个小时,取出放到操作台上进行消毒。

消毒方法是将芽在75%的酒精中过一遍(约20秒),然后用次氯酸钠溶液稀释为2%～3%,浸泡2分钟,然后用无菌水清洗3～5次。

将消毒过的芽放在垫有吸水纸的培养皿上,每次消毒的芽不要太多,以防放置时间过长,茎尖褐变(消毒过程中所用器具均已事先高温灭菌)。

在操作台使用前先打开紫外线消毒30分钟,然后关闭紫外线灯,打开风机。

实验前换专用服装,双手用75%酒精擦拭消毒,取消毒处理过的芽,以无菌镊子固定,在30～40倍解剖镜下进行茎尖分生组织剥离。

用解剖针小心地除去茎尖周围的叶片组织,暴露出顶端圆滑的生长点,用解剖针切取0.1～0.3mm,带有1～2个叶原基。

茎尖剥离时为防止解剖镜近距离灯光烤伤茎尖分生组织,解剖镜光源要用冷光源照明。

切取的茎尖分生组织随即接种到培养基上,切面接触琼脂,置于培养室进行离体培养。

1.1.4培养条件将已接种外植体的试管置温度23℃～25℃,光照3000lx、在光周期13～16小时/天的培养室中培养2～4周即可成苗。

2.茎尖培养的关键技术环节2.1剥取适当大小的茎尖通常培养茎尖越小,产生幼苗的无毒率越高,但成活率越低。

榆林市马铃薯茎尖脱毒培养探究

着的培养基，短较长的根系，剪去掉太多的叶片，
然后用多菌灵溶液蘸根，刚移栽的试管苗最主刚要的就是保湿、光。一般下午４遮 —５点移栽，— ７１０ｄ可以缓苗，周后可以去掉遮阳网及塑料膜，２
植物茎尖脱毒培养的成败不仅与培养基的组
分有关，且与块茎的选择、化、芽处理、尖而钝催茎剥离、接种也有直接关系。３１培养基的配置．培养基的成份有６大类，包括无机养分（大量
２可行性
首先，榆林位于陕西省最北部，地处毛乌素沙
薯病毒病最有效的方法就是培育和推广脱毒种薯，
就是通过对马铃薯块茎进行病毒钝化、芽处理，催通过茎尖剥离、生组织培养而脱去ＰＳＰ分Ｖ、ＶＹ、
Ｐ、ＬＶ和ＰＴ等病毒、病毒后培育试管ＶＳＰＲＳＶ类
附加ＣＰ０１／）明显提高茎尖脱毒ＰＵ（． —１ｍｇ１可
（下转第１０页）０
收稿日期：０１１１ｌ２１－４
作者简介：成文（９５）男，西横山人，学本科学历，师。汪１７一，陕大讲
陕
西
农
业
科
学
榆林市马铃薯茎尖脱毒培养探究
汪成文
（林农业学校，西榆林榆陕
７９０１００）

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危害马铃薯的病毒有30种之多，如 X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A 病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁殖作物，病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯病毒可使块茎产量减少50%~80%。
一、马铃薯脱毒技术:
马铃薯在营养繁殖时易受病毒的浸染，当条件适合时，病毒就会在植株内增殖，转运和积累，随着世代传递，病毒危害逐年加重，一般可造成减产50％以上。研究发现，有30多种病毒易感染马铃薯，并引起品种退化，严重影响马铃薯的生产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、 PVG、PVM、PSW等病毒。
因此，采用组织培养技术，通过一定良种繁殖体系，生产优质种薯，是保证马铃薯高产、稳产的一项有效措施。
1．脱毒种薯生产程序
采用微茎尖组织培养的方法，诱导出苗，采用联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后，无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。
试管基础苗在无菌条件下，采用固体、液体培养基相结合的方法，进行扩繁基础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原原种（或称脱毒小薯）。用原原种在一定隔离条件下产生原种1代，以后逐级称为原种2代、良种1代、良种 2代。
培养条件：温度21~25℃、光量20003000 lx(勒克斯)、光照12h/d。 2-3周愈伤，4-5周绿点，3--6月长成2-3 厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。
（2）继代和生根
培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒）鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次）鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右发育成5~10cm高小植株，继续进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。
马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究进经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜。马铃薯原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。
但是，当发现从外地引种栽培1~2 个周期后，明显发现产量降低，植株变矮，并有卷叶的现象产生，经检测证明这是由于病毒引起的退化现象。
2．茎尖培养脱毒（1）取材和培养
一般多采用在室内发芽，芽经热处理（38℃） 2周。然后取顶芽或侧芽1厘米的茎尖，在自来水下冲洗干净，无菌条件下先用70％的酒精浸润组织15-20秒，再用2％的次氯酸钠溶液浸泡4-5min，然后用无菌水冲洗3次。
把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留1-2个叶原基，0.2—0.3毫米，随即接种于MS液体培养基上，每升加 0.1mgNAA(萘乙酸 ) 、0.2mgGA3 (赤霉素 ) 、0.5BA(细胞分裂素)，2%蔗糖，p H值5.8。
三、马铃薯无病毒株的繁殖和保存
1．无病毒株的繁殖通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而生产上需要数以万计的健康种薯。同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒再侵染是很关键的一环。目前在生产上来用的方法很多，下面介绍主要的几种。
（１）直接块茎繁殖（２）扦插繁殖（３）组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存
2、鉴定寄主的准备
马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中培养。
３.接种液制备及接种叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为接种物，在鉴定寄主植物的叶面，６００目的金刚砂混入接种物中，然后用左手心紧靠在寄主的背面，以右手实指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种物用清水冲洗干净，放置在１５～２４的防虫室中，一般５－１０天可发病。
3. 脱毒苗切繁
基础苗成活进入正常后便可切繁，但切繁量的多少和质量的高低，除与前边提到的水与温湿度条件有关外，能否掌握正确的切繁方法和适宜的切繁苗龄也是非常重要的。脱毒苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段（主茎芽尖和腋芽芽尖）直接扦插。
二、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定
在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。
培养基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10， 3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，1416小时光照，每3周继代一次，单芽茎段约1厘米，可插也可平放，原则试管苗用 2年—3年。
(3) 驯化
为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力，移植前对试管苗要进行光、温锻炼。炼苗期温室内的温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。炼苗的具体方法是：移植前7d左右，将长有 3~5片叶、高2~3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。