葡萄茎尖培养脱毒与快繁技术研究

葡萄茎尖超低温保存及超低温疗法脱毒研究葡萄(Vitis)是世界范围内最具经济价值的果树之一,城市化、工业化、土壤盐碱化和沙漠化等原因导致葡萄许多野生种与栽培种濒临灭绝。

建立高效、简易的种质资源长期保存技术能有效地保护种质资源的多样性。

超低温保存是目前植物种质资源长期保存最为理想的方法。

病毒病是制约葡萄与葡萄酒产业发展的主要因素之一。

栽培无毒苗是生产上防治病毒病害最为有效的措施。

生产无毒苗是栽培无毒苗的核心技术。

近年来建立的超低温疗法,为葡萄无毒苗生产提供了一种新技术。

本研究以葡萄(Vitis)试管苗为试材,建立了茎尖小滴-玻璃化法超低温保存体系,为葡萄种植资源超低温库的建立提供了高效、广谱的超低温保存方法。

建立了超低温疗法,有效的脱除了葡萄卷叶相关病毒-3(Grapevineleafroll-associated virus 3,GLRaV-3),为葡萄脱毒苗的生产提供了核心技术。

同时,试管指示植物法、微样直接RT-PCR、免疫组织化学定位病毒检测为脱毒和病毒检疫提供技术支撑。

本研究主要结果如下:1.通过优化影响葡萄茎尖超低温保存的关键因素,建立了简易、高效、光谱的葡萄茎尖小滴-玻璃化法超低温保存体系。

含5-6片叶原基的腋芽(尺寸约1.0 mm)取自8周苗龄欧洲葡萄‘赤霞珠’(Vitis vinifera‘Cabernet Sauvignon’)试管苗,在预培养基(0.3 M蔗糖+0.16μM还原型谷胱甘肽+0.14μM L-抗坏血酸,pH=5.7)上暗培养3 d。

加载液(2 M甘油+0.4 M蔗糖)常温处理20 min,再用1/2浓度植物玻璃化溶液(PVS2)和全浓度PVS2冰上分别处理30 min和25-50 min,然后将茎尖放置于铝箔条上的PVS2小滴(2.5μL)中,直接投入液氮中保存。

保存后的携带茎尖的铝箔条迅速转移到卸载液(1.2 M蔗糖)中常温解冻20 min,培养于含0.6 M蔗糖的恢复培养基中恢复24 h。

葡萄的组织培养技术湖北第二师范学院1.葡萄外植体的采集和消毒1.1外植体是从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。

在该组织培养中，用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。

葡萄脱毒过程中，外植体的大小与脱毒率高低成相关性。

所以选取外植体的大小适宜在葡萄脱毒过程中应要掌握好.葡萄在茎尖培养中，光的效果通常要比暗培养好。

一般多采用光培养的方式，试管苗培养适宜的温度是25+/-2度1.2防止外植体带菌1.2.1选择好外植体采集时期和采集部位1.2.1.1外植体采集以春秋为宜；1.2.1.2优先选择地上部分作为外植体；1.2.1.3阴雨天勿采，晴天下午采集；1.2.1.4采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋。

1.2.2室内或无菌条件下进行预培养。

1.2.3外植体严格灭菌灭菌效果实验多次灭菌和交替灭菌1.3培养材料的消毒1.3.1先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。

1.3.2在无菌坏境中将材料放入70％洒精中浸泡30－60秒。

1.3.3再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水消毒10分钟。

1.3.4取出后用无菌水冲洗三、四次。

1.4制备外植体将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。

“然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。

2.培养基的成分及制备2.1培养基的成分组织培养过程中，外植体生长所需的营养和生长因子，主要是由培养基供应的。

因此，培养基中应包括植物生长必需的16种营养元素和某些生理活性物质。

所有这些物质，可概括为5大类：2.1.1无机营养物培养基的各种盐类中均含有氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、锰、铜、锌、钼、氯。

无机氮可以两种形式供应，即硝态氮和铵态氮。

有些培养基以硝态氮为主，另一些以铵态氮为主，多数二者兼而有之。

《常见植物的脱毒与快速繁殖技术》一、常见植物培养方式：1、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。

2、马铃薯病毒鉴定的方法主要有指示植物法、症状鉴定法。

3、通过组织培养获得微型薯的技术关键有两个：单茎节扩大繁殖；微型薯诱导。

4、在葡萄栽培架式，棚架是应用最广泛的类型。

5、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。

6、菊花生根能力比较强，有两种方法：嫩茎试管生根；无根嫩茎的扦插。

7、菊花的继代增殖有多种技术，多数是诱导愈伤组织产生丛生芽而获得大量的试管苗。

8、百合经茎尖培养脱毒、鉴定合格后，可通过两种继代增殖方式：①经愈伤组织增殖；②诱导分化不定芽。

二、提问：对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个阶段？各阶段是怎样操作的？马铃薯茎尖培养脱毒程序：①取材；②消毒；③接种；④培养基；⑤病毒鉴定。

影响脱毒效果的因素：外植体大小；茎尖所处部位；病毒种类及复合感染。

简述苹果花粉培养的过程。

①选取适期花蕾；②花蕾预处理和消毒；③诱导胚状体形成；④诱导生根；⑤移栽。

苹果的栽培管理过程中应注意哪几个问题？①育苗技术；②土壤改良；③施肥方法；④灌溉时期；⑤整形和修剪技术。

草莓无毒苗的繁殖程序分哪几步？草莓无毒苗的繁殖程序可以发为五步，即鉴定出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖和生产用苗繁殖。

蝴蝶兰怎样用花梗组织培养方法繁殖?蝴蝶兰脱毒：花梗侧芽的消毒与培养——茎尖培养——原球茎诱导——继代培养——原球茎增殖——生根炼苗。

通过原球茎增殖的方法，可大大提高繁殖速度，实现蝴蝶兰生产的工厂化育苗。

香石竹的茎尖脱毒培养操作技术。

香石竹的茎尖脱毒培养操作技术：一般结合热处理：将带毒植株进行盆栽，放入人工控制箱内，采用38-40℃高温处理6-8周，再切1mm 大小的茎尖培养。

说明甘薯脱毒快繁技术的工艺流程。

（1）脱毒：优良品种母株选择；材料消毒；茎尖剥离；茎尖培养；茎尖苗的初级快繁；脱毒鉴定。

（2）快繁：脱毒苗的快繁；原原种的繁育；原种的繁育；种薯的繁育三、甘薯脱毒试管苗栽培管理注意哪些问题？培育壮苗；适当炼苗；精心移栽；控制湿、温、光等条件；适时定植；严防病虫害。

植物组织培养脱毒快繁技术的综述李西雁（广西职业技术学院农业技术工程系2002级应用生物技术专业）摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。

本文结合在桂林莱茵生物科技股份有限公司的实践情况，简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理、发展史和技术方法，并介绍了几种常用的病毒检测方法。

本文以马铃薯为例，重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达100%。

同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。

关键词：茎尖培养，组织培养，快繁脱毒技术，病毒检测，应用前景1 植物组织培养研究概况1.1 研究简史自从1943年怀特（White）提出植物细胞“全能性”（Totipotency）学说及诸多后学者（Steward，1958，Guha和Marteshwari，1964）相继证实后，引发植物组织和细胞培养快繁技术的勃然兴起。

我国的专家学者在20世纪70年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作，创造了很多新方法、新技术，提出不少新成果，开拓了植物组织培养快繁技术的新局面[1]。

目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株苗的技术已发展相当成熟[2]。

脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点，已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。

例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等等，已成为现代农民致富的新宠[2]。

1.2 植物组织培养和脱毒快繁的定义植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌的条件下，将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。

葡萄脱毒快繁的技术流程同学们，今天咱们一起来了解一下葡萄脱毒快繁的技术流程，这可相当有趣呢！咱们得知道为啥要给葡萄脱毒。

就像我们人生病了要治病一样，葡萄也会受到病毒的侵害，如果不把这些病毒去掉，葡萄的生长和结果都会受到很大影响。

那葡萄脱毒快繁的第一步通常是选取健康的材料。

这就好比要盖一座好房子，得先选好结实的砖头。

科研人员会从没有感染病毒的葡萄植株上，选取合适的部分，比如茎尖或者芽。

选好材料后，接下来就是进行热处理啦。

这一步就像是给葡萄“洗个热水澡”，不过这个温度和时间可得控制好，要不然葡萄就“受不了”啦。

通过热处理，可以让一些病毒变得不那么活跃。

然后呢，就是进行茎尖培养。

把之前选取的茎尖或者芽放在特殊的培养基里，让它们慢慢生长。

这个培养基就像是葡萄宝宝的“营养大餐”，能提供它们生长所需的各种养分。

举个例子啊，假如培养基里缺少了某种重要的营养成分，那葡萄的茎尖可能就长不好，脱毒快繁的效果也就大打折扣了。

再往后，就是病毒检测的环节。

这一步特别重要，就像老师检查我们的作业一样，要看看葡萄是不是真的把病毒去掉了。

如果还有病毒残留，那可不行，还得重新再来。

确定没有病毒后，就可以进行快速繁殖啦。

这时候会用到一些技术手段，比如组织培养，让一个健康的葡萄芽或者茎尖变成好多好多的小葡萄苗。

在整个过程中，环境的控制也非常关键。

温度、湿度、光照都得恰到好处。

比如说，如果温度太低，葡萄苗生长得就会很慢；如果湿度不合适，可能会导致葡萄苗生病。

操作人员还得特别细心和耐心。

就像照顾小宝宝一样，时刻关注着葡萄苗的生长情况，稍有不对劲，就得赶紧想办法解决。

当葡萄苗长得足够强壮，就可以移栽到地里啦。

这就像是孩子们长大了要离开家一样，不过在移栽后，也还得继续照顾它们，确保它们能茁壮成长。

葡萄脱毒快繁的技术流程可不简单，每一个步骤都需要精心操作和严格控制。

但是通过这样的技术，我们能够得到健康、优质的葡萄苗，为葡萄的种植和生产带来更好的保障。