头孢噻呋钠检验SOP

注射用头孢噻肟钠细菌内毒素检查方法的研究摘要目的：研究注射用头孢噻肟钠的细菌内毒素检查方法。

方法：通过干扰试验证明注射用头孢噻肟钠对细菌内毒素检查有抑制作用。

结果：使用λ=0.5或0.25Eu/ml的鲎试剂将样品稀释至浓度为2.5或1.25mg/ml,可消除其对检查的干扰。

结论：注射用头孢噻肟钠可以用细菌内毒素检查法取代热原检查法。

头孢噻肟钠(Cefotaxime)是第3代头孢菌素类药物，疗效较好，其临床应用广泛，且多为静脉给药。

该注射剂中国药典95版规定的检查项是用家兔法做热原检查，文献迄今未见有用细菌内毒素检查的报道。

本文通过实验探讨以细菌内毒素检查法取代热原检查法检测注射用头孢噻肟钠的可行性。

1材料注射用头孢噻肟钠(哈尔滨制药厂,1g/瓶)；鲎试剂：0.1ml/支,λ=0.5Eu/ml,批号:980421;λ= 0.25Eu/ml,批号:980409;λ=0.125Eu/ml,批号:980123;λ=0.06Eu/ml,批号:980109;λ=0.03Eu/ml,批号:980109(湛江安度斯生物有限公司);0.1ml/支,λ=0.5Eu/ml(厦门东方鲎试剂厂,批号:980421)；细菌内毒素工作标准品(厦门东方鲎试剂厂，批号:980105,效价10Eu/支；湛江安度斯生物有限公司，批号:980227，效价12Eu/支)；细菌内毒素检查用水(中国药品生物制品检定所，批号:960125,10ml/支)。

2方法与结果2.1鲎试剂灵敏度(λb)复核按中国药典1995年版二部方法进行操作［1］，结果见表1。

2.2初筛试验2.2.1内毒素限值(L)的确定采用公式L=K/M(M值是以成人每公斤体重每小时给药的最大剂量来计算)，本品人用最大剂量为12g/日，分3次静脉滴注［2］,4g/次，滴注500ml 按2.5h计算，中国人平均体重按60kg计算，则M=4×1000/(2.5×60)=26.7mg/kg.h-1,故本品的细菌内毒素的理论限值为L=5/26.7=0.19Eu/mg。

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头孢噻呋钠工艺规程文件编号：TEC-SC -004-00批准日期：年月日执行日期：年月日潍坊康地恩生物制药有限公司目录1．产品概述2．原辅料、包装材料规格及质量标准3．化学反应过程及生产流程图4．工艺过程5．生产工艺和质量控制检查，中间体和成品质量标准6．技术安全与防火7．综合利用与三废治理8．操作工时与生产周期9．劳动组织与岗位定员10．设备一览表及主要设备生产能力11．原材料、动力消耗定额12．物料平衡13．附录14．附页潍坊康地恩生物制药有限公司GMP 管理文件一、产品概述： 名称：头孢噻呋钠 汉语拼音：Toubaosaifuna 英文名称：Ceftiofur Sodium 结构式S H OOONOCH 3NS H 2N分子式：C 19H 16N 5O 7S 3·Na 分子量：545.55化学名称：[6R-[6α，7β(Z)]]-7-[[(2-氨基-4-噻唑基)(甲氧亚氨基)乙酰基]氨基]-3-[[(2-呋喃羰基)硫代]甲基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸钠盐1．1.理化性质：白色至灰黄色粉末；无臭，有引湿性 1.2．质量标准：符合企业内控质量标准。

1.3．临床用途：是头孢菌素类兽医临床专用抗生素，为广谱抗菌药。

对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较强的抗菌作用。

头孢噻呋作用于转录肽酶而阻断粘肽的合成，使细菌细胞壁缺失而达到杀菌作用。

主要用于菌毒重症感染和禽的大肠杆菌、沙门氏菌。

1、病毒、细菌全身或局部感染所致的高温高热、 咳嗽、 喘气、 呼吸困难 、皮肤发红发紫 、耳根发紫、 口蹄溃烂、流产死胎、 转圈、 后肢麻痹、不食、卧地不起、便秘和拉稀等。

2、传染性胸膜炎、放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、易变形链球菌、仔猪黄白痢、沙门氏菌、副嗜血杆菌、萎缩性鼻炎、衣原体等。

3、家蓄产前产后高热、子宫内膜炎、乳房炎、无乳少乳综合症、蹄叶炎、腐蹄炎、牛羊巴氏杆菌、运输热、肺炎、鼻萎缩等。

头孢噻肟钠无菌原料的无菌实验方法验证1. 样品：头孢噻肟钠无菌原料，规格：0.5g/瓶；批号：40807001；生产单位：A ventis P harma Deutschland GmbH2. 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、真菌培养基、营养肉汤、普通斜面、真菌斜面(均由中国药品生物制品检定所培养基室提供)；营养琼脂、虎红琼脂(另由本室自行配制) 。

3.β-内酰胺酶：2ml大于300单位/毫升（批号：20030630）4. 验证试验用菌种：(1) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]；(2)枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501]；(3) 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44102]；(4) 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104]；（5) 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941]；(6) 白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]；(7) 黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(F)98003]。

5. 仪器和滤器：HTY-2000A集菌仪，全封闭无菌试验过滤培养器（批号20050105）北京牛牛基因有限公司。

6 方法：中国药典2005年版无菌检查的验证实验。

7. 操作方法7.1 菌液制备：取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中, 生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中, 32.5±2. 5℃培养18～24小时；取经32.5±2.5℃培养19~21h小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌肉汤培养物1ml，加9ml生理盐水，10倍稀释至约10-5~10-8之间。

一、头孢噻呋注射液质量标准、标签和说明书（一）头孢噻呋注射液质量标准头孢噻呋注射液Toubaosaifu ZhusheyeCeftiofur Injection本品为头孢噻呋、大豆油和硬脂酸铝制成的无菌混悬液，含头孢噻呋（C19H17N5O7S3)应为标示量的90.0%～110.0%。

【性状】本品为细微颗粒的混悬液，静置后细微颗粒下沉，振摇后成均匀的灰白色至灰褐色的混悬液。

【鉴别】在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

【检查】有关物质照含量测定项下的方法,取含量测定项下的下层溶液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，用0.05mol/L醋酸铵溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

取供试品溶液与对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。

供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(3%)。

供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的色谱峰可忽略不计。

粒度取本品，摇匀后，照粒度和粒度分布测定法（附录98页第一法）测定，含15µm 以下的颗粒不得少于90％，不得有50µm以上的颗粒。

沉降体积比取本品适量，用力振摇1分钟，用具塞量筒量取供试品50ml，密塞，用力振摇30秒，记下混悬物的开始高度H0，静置3小时，记下混悬物的最终高度H，沉降体积比（H/H0）应不低于0.90（附录16页）。

无菌取本品适量混匀，分别取30ml和青霉素酶溶液适量（每1mg头孢噻呋加青霉素酶不得少于2万单位）加入到含6%吐温-80的硫乙醇酸盐培养基270ml和含6%吐温-80的改良马丁培养基270ml中，摇匀，置37℃恒温水浴中1小时作为供试品溶液，依法检查（附录137页），结果应符合规定。

其它应符合注射剂项下有关的各项规定（附录6页）。

【含量测定】照高效液相色谱法（附录36页）测定。

GMP管理文件一、目的：建立头孢噻呋钠检验的标准操作规程，保证正确操作。

二、依据：兽药质量标准2006年版三、适用范围：适用于头孢噻呋钠的检验。

四、责任者：QC检验员五、正文：1．质量标准：（见头孢噻呋钠质量标准）2．试剂：2.01 盐酸 2.02 醋酸氧铀锌试液2.03 费休氏液 2.04 甲醇2.05 聚乙二醇20000 2.06 正丙醇2.07 丙酮 2.08 0.05mol/L醋酸铵溶液2.09 0.9%无菌氯化钠溶液 2.10 细菌内毒素工作标准品2.11 细菌内毒素检查用水 2.12 醋酸铵2.13 10%氢氧化四丁基铵溶液 2.14 冰醋酸2.15 四氢呋喃 2.16 鲎试剂2.17 0.05mol/L醋酸铵溶液 (以上试液、溶液均见试液、标准液、溶液配制标准操作规程)3．仪器与用具3.01表面皿 3.02 高效液相色谱仪3.03 水分测定仪 3.04 气相色谱仪3.05 电子天平 3.06 培养箱3.07 微生物自动测量分析仪 3.08 恒温水浴锅4.1 性状本品应为类白色至微黄色粉末；无臭，有引湿性。

则判定该项合格。

4.2 鉴别：4.2.1 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。

4.2.2本品显钠盐的火焰反应（详见一般鉴别试验标准操作规程）。

4.2.3结果判定：上述二项均呈正反应，则判定该项合格。

4.3 检查4.3.1酸碱度取本品，加水制成每1mlk中含50mg的溶液，依法测定（详见PH值测定法标准操作规程）PH值应为5.5～7.5。

4.3.2 溶液的澄清度与颜色取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浑浊标准液（详见溶液的澄清度检查标准操作规程）比较，不得更浓；如显色，与黄色或橙黄色9号标准比色液（详见溶液的澄清度检查标准操作规程）比较，不得更深。

则判定该项合格。

4.3.3 水分照水分测定法（详见水分测定法标准操作规程）测定。

高效液相色谱法测定注射用头孢噻吩钠含量及有关物质【摘要】本实验对注射用头孢噻吩钠含量及有关物质进行测定。

方法：采用YMCC18色谱柱（4.6*250*5），0.5%醋酸钠溶液（冰醋酸调节pH值至5.9）-甲醇一乙腈（80：5：15）为流动相，检测波长为254nm，流速为1.0ml/min。

头孢噻吩钠在20～320μg·mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.99997）。

头孢噻吩钠平均回收率分别为99.6%。

本法简便、重现性好、回收率高。

【关键词】头孢噻吩钠；含量；测定头孢噻吩钠为第一代头孢菌素，抗菌谱广，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抗菌作用，对奈瑟菌属有较好抗菌作用，但流感嗜血杆菌对本品的敏感性较差[1-4]。

头孢噻吩钠适用于耐青霉素金葡菌（甲氧西林耐药者除外）和敏感革兰阴性杆菌所致的呼吸道感染、软组织感染、尿路感染、败血症等[5-6]。

本实验对注射用头孢噻吩钠含量及有关物质进行测定。

1.仪器与试药（1）仪器。

LC-5500型高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；FE20K 梅特勒FE20K酸度计（北京联合科仪科技有限公司）；瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中国公司）；SP-2500型双光束紫外可见分光光度计（苏州市莱顿科学仪器有限公司）；AS-01无油隔膜真空泵（北京优晟联合科技有限公司）；XYF-H 帕恩特超低有机物型超纯水机（北京湘顺源科技有限公司）；SB25-12D超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；AC150-S21恒温水浴锅（赛默飞世尔科技（中国）有现公司）。

（2）色谱柱：YMCC18色谱柱（4.6*250*5）。

（3）对照品：头孢噻吩钠购自中国药品生物制品检定所。

（4）试剂：甲醇（济南新世纪石化有限公司）、醋酸钠（兴源石油化工商贸有限公司）、冰醋酸（济南新世纪石化有限公司）、乙腈（兴源石油化工商贸有限公司）。

（5）试药：头孢噻吩钠。

2.测定方法确定2.1色谱条件依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[7-11]。

头孢噻肟钠标准
头孢噻肟钠的标准如下：
1. 含量：按无水物计算，含头孢噻肟（C16H17N5O7S2）不得少于%。

2. 性状：本品为白色、类白色或微黄白色结晶；无臭或微有特殊臭。

本品在水中易溶，在乙醇中微溶，在氯仿中不溶。

3. 比旋度：取本品，精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（附录Ⅵ E），比旋度为+56°至+64°。

4. 吸收系数：取本品，精密称定，加/L盐酸溶液溶解并稀释成每1ml中含10μg的溶液，照分光光度法（附录Ⅳ A），在262nm的波长处测定吸收度，按无水物计算，吸收系数（E1% 1cm）为400～440。

5. 鉴别：
在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与头孢噻肟对照品主峰的保留时间一致。

本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集130图）一致。

本品显钠盐的火焰反应（附录Ⅲ）。

6. 检查：
酸度：取本品，加水制成每1ml中约含的溶液，依法测定（附录Ⅵ H），pH值应为～。

溶液的澄清度与颜色：取本品5份，各，分别加水5ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录Ⅸ B）比较，均不得更浓；如显色，与黄色或橙黄色8号标准比色液（附录Ⅸ A第一法）比较，均不得更深。

水分：取本品，照水分测定法（附录Ⅷ M第一法A）测定，含水分不得过%。

头孢噻肟聚合物：照柱色谱法（附录Ⅴ C）测定。

以上信息仅供参考，具体的标准可能因药品生产厂家和国家的不同而有所差异。

在使用药品前，应仔细阅读说明书，并遵循相关医疗和药品监管机构的规定。

产品检验报告原料名称头孢噻呋钠检验日期2011年11月17日规格5g/支报告日期2011年11月18日检品来源仓库待验区检验项目全检批号20111102 数量3000支检验依据《中国兽药典》2005年版一部检验项目标准规定检验结果项目结论【性状】本品应为白色、类白色或微黄白色本品为类白色的粉末粉末，无臭或微有特殊臭无臭符合规定比旋度比旋度为＋56°至＋64°＋59°符合规定吸收系数在262nm 的波长处测定吸收度，按无水物计算，吸收系数为400～440 吸收系数为422 符合规定【鉴别】（1）供试品主峰的保留时间应与对照品供试品主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致主峰的保留时间一致符合规定（2）应呈正反应呈正反应符合规定（3）本品的红外光吸收图谱应与对照本品的红外光吸收图谱与对照的图谱一致的图谱一致符合规定【检查】酸碱度PH值应为4.5-6.5 5.3 符合规定有关物质应符合规定符合规定符合规定水分含水量不得过6.0% 4.2% 符合规定聚合物应符合规定符合规定符合规定溶液澄清度与颜色应澄清无色符合规定符合规定检验结论：依据《中国兽药典》2005年版一部检验,结果符合规定。

备注：/检验人复核人负责人产品检验报告原料名称头孢噻呋钠检验日期2011年11月17日规格5g/支报告日期2011年11月18日检品来源仓库待验区检验项目全检批号20111102 数量3000支检验依据《中国药典》2005年版一部检验项目标准规定检验结果项目结论【含量测定】按无水物计算,含C16H17N5O7S2不得少于86.0% 测得的结果为98.0% 符合规定检验结论：依据《中国药典》20005年版一部检验,结果符合规定。

备注：/检验人复核人负责人。

头孢噻呋检测方法1．分析目标化合物头孢噻呋、脱呋喃甲酰基头孢噻呋2．仪器设备带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪。

3．试剂除下列试剂外，使用附录2所列试剂。

二硫赤藓醇：特级二硫赤藓醇—硼酸缓冲液：将3.7g氯化钾、4.0g二硫赤藓醇和19.0g硼酸钠溶解在1,000mL水中。

碘乙酰胺：一级碘乙酰胺—磷酸缓冲液：将7.0g碘乙酰胺溶解50mL磷酸缓冲液(pH7)中。

4．标准品头孢噻呋：含盐酸头孢噻呋99％以上。

5．标准溶液的制备a 脱呋喃甲酰基化方法标准品中加入15mL二硫赤藓醇—硼酸缓冲液，50℃水浴中振荡15分钟。

加入3mL碘乙酰胺—磷酸缓冲液，振荡混合后，室温下放置30分钟。

加入5％磷酸，调节pH2.5 ，4℃下冷却。

b 净化方法在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(1000mg)中依次注入5mL甲醇和5mL磷酸缓冲液（pH7），弃去流出液。

柱中注入a脱呋喃甲酰基化方法所得的溶液后，顺次注入5mL磷酸缓冲液（pH7）和3mL0.01mol／L氢氧化钠溶液，弃去流出液。

柱中注入3mL乙腈：水（2：8）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中。

40℃以下除去乙腈和水。

残留物中加入1.0mL乙腈：三氟乙酸：水(300：1：700)混合溶液溶解，此为标准溶液。

6．试验溶液的制备a 提取方法和脱呋喃甲酰基化方法① 肌肉、脂肪、肝脏和肾脏肌肉：尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。

脂肪；尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。

肝脏及肾脏：搅碎混合均匀后，称取其5.00g。

加入二硫赤藓醇—硼酸缓冲液，搅拌均匀后，以每分钟3000转离心分离10分钟，收集15mL水层，50℃水浴中振荡15分钟。

加入3mL碘乙酰胺—磷酸缓冲液，振摇混匀后，室温下放置30分钟。

加入5％磷酸，调整pH2.5，4℃下冷却后，按上述同样条件离心分离。

收集水层，在4℃下冷却。

② 奶称取5.00g样品，加10mL二硫赤藓醇—硼酸缓冲液，加入1mol／L 氢氧化钠溶液，调整pH9.0。