黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书

黄曲霉毒素 B1酶联免疫检测试剂盒使用说明书Ⅰ．样品处理方法一、食品1、脂肪含量小的固体样品（如大米、玉米、小米等）称取5.0g样品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振摇15min，过滤，弃去1/4初滤液，收集试样滤液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

2、酱油、醋称取5.0g样品于25ml小烧杯中，用5ml蒸馏水将试样转移到125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。

放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。

挥干冷却后，准确加入25.0ml 甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。

根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

3、食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）称5.0g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚或正乙烷分次将试样转移至125ml分液漏斗中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞轻轻振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液。

根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

4、葡萄酒准备称取5.0g葡萄酒于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。

放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。

苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。

用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。

纯化后的样品可用不同的分析方法测定。

【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。

柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。

柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。

【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。

最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。

【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。

（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。

【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。

1ELISA kit for quantitative detection of aflatoxin B1一、概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。

这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。

黄曲霉毒素B1（AFB1）属于自然最强烈的致癌物质，它一般产生于花生、玉米、巴西坚果和棉花种子中。

本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物、饲料及其他食品中的AFB1含量进行快速、定量检测。

二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达0.1 µg/kg（ppb）。

样品或标准品中游离的黄曲霉毒素B1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素B1后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素B1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素B1的污染水平。

三、试剂盒构成1、反应板支架……………………………………………………………………………1块2 黄曲霉毒素B1抗体包被反应板……………………………………………………96孔3、黄曲霉毒素B1标准品溶液（0 ppb，0.1 ppb，0.25 ppb，0.5 ppb，1 ppb，2 ppb）…1套4、酶标记物…………………………………………………………………4瓶5、酶稀释液……………………………………………………………………1瓶6、样品稀释液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。

黄曲霉素B1检测卡说明书(完整版)-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN黄曲霉毒素B1 检测卡说明书【简介】黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物，最主要的4种分别为：B1、B2、G1、G2。

黄曲霉毒素具有很强的急性毒性，也有明显的慢性毒性及强致癌性。

黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品，其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品；其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻、茶叶等。

鉴于这些霉菌毒素的毒性，欧盟国家规定，黄曲霉毒素B1的残留限量值为5ppb。

【检测原理】该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。

【检测范围】花生、玉米、小麦、大米、茶叶、油脂、饲料等；【产品组成】黄曲霉毒素B1免疫胶体金快速检测卡(40份/盒)滴管（40支）干燥剂（40片）一次性手套（5只）【技术指标】检测下限：5μg／kg；【检测步骤】1．取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15ml离心管中。

2．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。

3．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液（吹风机或烘箱），然后用0.3ml体积稀释液复溶杯底固体。

此溶解液即为检测液.4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。

5．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。

【结果判断】1、阴性:测试线(T)与对照线(C)都出现，表明样品中黄曲霉毒素的浓度小于5ug／kg。

2、阳性:只有对照线(C),无测试线(T)，表明样品中黄曲霉毒素的浓度大于或等于5μg／kg。

3、无效:对照线(C)和测试线(T)都不出现，或者对照线（C）不出现。

【注意事项】1、本产品在2～30℃密封干燥保存；忌冷冻；检测卡保存期18个月；2、在环境温度15～37℃下操作；检测卡极易受潮，打开小包装后应立即使用；3、乙酸乙酯为易挥发液体，保存为12个月，不用时要盖紧瓶塞；。

MS-Clean黄曲霉毒素B1免疫亲和柱
概要：
黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的真菌毒素，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物，对动物、植物和微生物具有很强的毒性，致癌力最强，还能引起突变和导致畸形。

世界各国对食品及饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。

测定原理：
此免疫亲和柱以抗体-抗原特异性反应为基础，含有和黄曲霉毒素B1抗体结合在一起的凝胶。

上样时，经提取、过滤、稀释后的样品缓慢地通过黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱，在柱内黄曲霉毒素B1与抗体结合，其他物质不会结合而直接流出。

此后洗涤免疫亲和柱，完全除去未结合的其他物质。

最后加入甲醇，将黄曲霉毒素B1释放并洗脱，再注入到分析仪器中进行检测。

适用范围及用途：
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素B1检测的净化。

可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA等定量分析，适合谷物、食品和饲料等样品。

液相色谱测定条件：
检测器：荧光检测器
激发/发射波长：360 nm/440 nm 流动相：甲醇:水 = 45:55
流速：0.8 mL/min
进样量：20 uL
柱温：30 ℃
反应时间：10 min
用进样器吸取20 uL黄曲霉毒素标准工作溶液注入高效液相色谱
仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰高或峰面积），得到黄曲霉毒素标准溶液的高效液相色谱图。

产品参数及规格：。

RIDASCREEN® Aflatoxin Total 酶联免疫法定量检测黄曲霉毒素总量（R4701）酶标免疫分析定量检测黄曲霉毒素总量。

德国R-Biopharm公司制造（中文翻译件仅供参考，以试剂盒内附的英文原件为准）简介RIDASCREEN®Aflatoxin Total（订货号：R4701）黄曲霉毒素总量检测试剂盒，采用竞争性酶联免疫法定量测定谷物和饲料中的黄曲霉毒素的总含量。

试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂，包括标准品。

试剂盒足够进行96次检测（包括标准测定）。

定量分析需要使用微孔板酶标仪。

样品处理：谷物和饲料样品：提取、过滤和稀释检测时间：样品制备（以10个样品为例）谷物和饲料样品：.............................约30分钟检测过程（孵育时间）...........................45分钟检测限：谷物和饲料样品：....................约1.75 ppb（以标准品为基础测得）回收率：约85 %（以标准品为基础测得）变异系数的中间值为15%特异性：RIDASCREEN® Aflatoxin Total黄曲霉毒素总量检测试剂盒的特异性根据与相关霉菌毒素的交叉反应确定。

黄曲霉毒素B1....................................100 %黄曲霉毒素B2....................................约48 %黄曲霉毒素G1 ...................................约75 %黄曲霉毒素G2...................................约18 %1. 用途RIDASCREEN® Aflatoxin Total（订货号：R4701）黄曲霉毒素总量试剂盒，采用竞争性酶联免疫法定量测定谷物和饲料中的黄曲霉毒素的总量。

黄曲霉毒素B/G免疫亲和净化柱使用手册目录1、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书2、样品处理方法3、柱后衍生技术4、实验操作注意事项5、主要技术指标和参数6、黄曲霉毒素分析实验室配置7、参考文献8、欧盟相关规定中黄曲霉毒素的限量表9、附件AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书LCTech 公司的AflaCLEAN TM免疫亲和净化柱采用单克隆抗体技术，预先在净化柱壁涂布了黄曲霉毒素B和G的抗体，当提取样品液过净化柱时，黄曲霉毒素就会被吸附保留在柱子上，而其他杂质则被排除，然后再用甲醇将黄曲霉毒素从净化柱上洗脱下来进行黄曲霉毒素检测分析的前处理，适用于食品，饲料以及相关原料中黄曲霉毒素检测时，样品的净化处理，特点是适用范围广，平行性好，回收率高，重新性好，操作简单，性价比高。

一、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱产品组成1、AflaCLEAN TM净化柱25支/盒2、批次证书和使用说明书二、实验准备1、样品处理方法：详见：“样品处理方法”2、试剂配制（1）样品提取溶剂：甲醇/水（4/1，v/v）（2）5mmol磷酸盐缓冲溶液（PBS）（pH7.2）母液配制：1）称取50.14gNa2HPO4.12H2O溶解于700ml水中。

2）称取9.66gNaH2PO4.1H2O溶解于350ml水中。

3）将上述两种溶液进行混合并加入42.5gNaCl，配制成pH7.2 5mmol 磷酸盐缓冲溶液（3）1mmol磷酸盐缓冲溶液(PBS)（pH7.2）工作液配制：取200ml 的5mmol磷酸盐缓冲溶液（pH7.2）稀释于800ml水中。

（4）磷酸盐缓冲溶液（PBS）/吐温(Tween)配制：取8ml吐温-20稀释于92mlpH7.2磷酸盐缓冲溶液中（5）HPLC 流动相配制：水/甲醇/乙腈（60/30/15,v/v）三、实验步骤1、净化柱平衡：将净化柱于室温中放置15min以上，平衡至室温。

苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。

用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。

纯化后的样品可用不同的分析方法测定。

【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。

柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。

柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。

【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。

最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。

【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。

（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。

【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。

黄曲霉毒素M1免疫亲和柱工作手册一、溶剂的配置和准备：1．蒸馏水/去离子水（配合液相使用）；2．色谱级甲醇、乙腈；3．磷酸盐缓冲液1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，氯化钠(NaCl)8g，氯化钾(KCl)0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L。

4．黄曲霉毒素M1标准品（货号：TSL-143，浓度为0.5 μg/ml）5．氢氧化钠、浓盐酸（用于调节pH）二、其他耗材及设备的准备1.滤纸；2.免疫亲和柱架或固定支座；3.注射器（建议玻璃材质，易于清洗，10 ml）或5 ml或10 ml枪头；4.1升容积的搅拌器；5.离心机；6.量筒，漏斗，移液管，烧杯，带螺盖的瓶子等玻璃器具；三、标准曲线的配制：黄曲霉毒素M1总量液态标准品：500 ng/ml 100%乙腈溶液。

取100μl 500 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至500μl，得到100ng/ml 的溶液。

绘制一条3点的校准曲线：取50 μl 100 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2.5 ml（=2 ng / ml）。

取1 ml 2 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=1 ng / ml）。

取1 ml 1 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=0.5 ng / ml）。

每种取100 μl注射进HPLC系统。

四、样品回收率的测定--针对奶粉添加浓度为0.5 ppb的样品：取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到10 g阴性奶粉样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于1 ng/ml）--针对奶添加浓度为0.1ppb的样品：取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到50ml阴性奶样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于2 ng/ml）五、样品处理A）牛奶-- 加热牛奶至35 - 37 ℃，用Waterman 4号滤纸或者Waterman 113号滤纸过滤或者在4000 rpm下离心15分钟。