多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理-黄曲霉毒素检测

多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理（黄曲霉毒素检测）PriboFast 系列多功能净化柱分为柱压型（带玻璃试管）和推杆型（针筒式）两种，以极性、非极性及离子交换等基团组成填充剂，可选择性吸附样液中的脂类、蛋白质类等杂质，毒素不被吸附而直接通过，其操作更为简便，不需要进行活化、淋洗和洗脱操作，只需要直接上样，30秒钟即可完成整个净化过程，效果理想，可同时净化多种毒素，降低检测成本，有效提高检测效率，稳定性强，回收率高，适用于食品、粮食饲料、饮料、中药材等多种复杂样品。

同时我们还提供多毒素符合免疫亲和柱。

PriboFast®免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理, 将抗体与凝胶共价结合，然后填充柱子。

将样品提取溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。

其提纯效率很高,适用于各类复杂样品包括食品、饲料等多种基质。

整个纯化过程30分钟左右B 添加义项 ?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。

现在指的是公司或企业中从事文字工作的职位，就是以文字来表现已经制定的创意策略。

文案它不同于设计师用画面或其他手段的表现手法，它是一个与广告创意先后相继的表现的过程、发展的过程、深化的过程，多存在于广告公司，企业宣传，新闻策划等。

基本信息中文名称文案外文名称Copy目录1发展历程2主要工作3分类构成4基本要求5工作范围6文案写法7实际应用折叠编辑本段发展历程汉字"文案"(wén àn)是指古代官衙中掌管档案、负责起草文书的幕友,亦指官署中的公文、书信等;在现代，文案的称呼主要用在商业领域，其意义与中国古代所说的文案是有区别的。

在中国古代，文案亦作" 文按 "。

公文案卷。

《北堂书钞》卷六八引《汉杂事》:"先是公府掾多不视事，但以文案为务。

"《晋书·桓温传》:"机务不可停废，常行文按宜为限日。

苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。

用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。

纯化后的样品可用不同的分析方法测定。

【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。

柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。

柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。

【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。

最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。

【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。

（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。

【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。

除快检产品外，目前针对毒素检测常用的前处理产品是免疫亲和柱，其特点是特异性强，利用抗原抗体的特异性结合达到目标物富集再洗脱的效果。

但如果我的样品比较多，希望方法上操作更简单，时间上更快且可定量计算怎么办？今天小编就给大家介绍一下专为食品和饲料中毒素检测而生的多功能净化柱，通过一步30s 完成净化，满足您的实验需要。

那对于多功能净化柱，您了解多少？跟着小编来学一学吧！01产品基本原理是什么？以极性、非极性及离子交换等基团组成的填充剂，可选择性吸附样液中的脂类、蛋白质类等杂质，毒素不被吸附而直接通过从而达到分离纯化效果。

02产品怎么选择？基于原理，我们的产品均是根据检测的目标物来进行相应的命名，所以您只需要以检测物来选择就可以。

举例您要同时检测黄曲霉毒素（B、G、M）、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮，可以选择我们对应规格的CNW 301多功能净化柱即可。

而多功能净化柱的外观形式通常有柱塞型（带试管）和推杆型（针筒式），分别是正向挤压和针筒推的方式，除了与各人使用习惯有关，当样品量比较少时可选择小体积推杆型的，结合以上2点您可完美选择所需要的产品。

03如何操作？以柱塞型226黄曲霉毒素净化柱为例：步骤1：向试管中加入5m L 样品提取液步骤2：将净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端Tip：按压过程中请留意不要过度用力，正常下压至底部即可。

若按压压力过大使得气体压力太大，导致橡胶塞回弹，液体会进入试管造成漏液现象。

步骤3：将净化柱上部净化后的样品提取液倒出至样品瓶或EP管中Tip：净化后上层液体请及时转移，不宜长时间浸泡在管子中以免使得杂质再次进入净化液造成净化不彻底。

步骤4：取2m L 净化提取液，氮吹至干，用1m L 或0.5m L 初始流动相复溶，过微孔滤膜，上机分析Tip：CNW 多功能净化柱是基于液相方法开发应用，适用于大部分客户实验室，同样液质也完全满足。

操作示意图04产品适用标准上海安谱实验科技股份有限公司，于1997年组建成立，总部位于上海，目前拥有500多位员工，2018年销售额超过5亿人民币；是中国领先的实验用品供应链管理服务商；目前公司已是集研发、生产与销售以及客户供应链管理为一体的综合性企业；主要产品包括化学试剂、标准品、气相色谱相关耗材、液相色谱相关耗材、样品前处理产品、实验室通用耗材、小型仪器等。

２０２０年第３７卷第５期［作者简介］　周颖，女，主管药师，研究方向：药品安全性和质量控制研究。

Ｅ ｍａｉｌ：ｚｙａｙｄ＠１２６ ｃｏｍ［通讯作者］　昝珂，男，副研究员，研究方向：中药质量控制研究。

Ｅ ｍａｉｌ：６２０６３１０＠ｑｑ ｃｏｍ；马临科，男，副主任中药师，研究方向：中药标准及质量控制研究。

Ｅｍａｉｌ：ｍａｒｌｉｎｋ７８＠１２６ ｃｏｍ免疫亲和柱净化 柱后光化学衍生 高效液相色谱法检测蜚蠊中的黄曲霉毒素周颖１，祝清岚１，马临科１ ，昝珂２（１ 浙江省食品药品检验研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，浙江杭州３１００５３；２ 中国食品药品检定研究院，北京１０００５０）［摘要］　目的：建立检测蜚蠊中黄曲霉毒素Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１和Ｇ２的免疫亲和柱净化 柱后光化学衍生 高效液相色谱法。

方法：样品经过７０％甲醇溶液匀浆提取，用水稀释后经免疫亲和柱富集净化，经Ｃ１８色谱柱分离，以甲醇、乙腈和水为流动相，柱后光化学衍生，荧光检测器进行检测。

结果：在优化的条件下，黄曲霉毒素Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１和Ｇ２线性关系良好，检出限分别为０ ０４，０ ０８，０ ０３和０ ０８μｇ·ｋｇ－１，平均加标回收率为８２ ０％～９０ １％。

结论：该方法快速、准确、灵敏度高，可用于蜚蠊黄曲霉毒素的检测。

［关键词］　蜚蠊；黄曲霉毒素；光化学衍生；高效液相色谱［中图分类号］　Ｒ２８２ ７４ ［文献标志码］　Ｂ ［文章编号］　２０９５－３５９３（２０２０）０５－０３５８－０４ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｆｌａｔｏｘｉｎｓｉｎＰｅｒｉｐｌａｎｅｔａａｍｅｒｉｃａｎａｂｙＩｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙＣｏｌｕｍｎａｎｄＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＣｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＰｏｓｔ ｃｏｌｕｍｎＰｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＤｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎＺＨＯＵＹｉｎｇ１，ＺＨＵＱｉｎｇ ｌａｎ１，ＭＡＬｉｎ ｋｅ１ ，ＺＡＮＫｅ２ ［１ ＺｈｅｊｉａｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，ＮＭＰＡＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＱｕａｌｉｔｙＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＨａｎｇｚｈｏｕ３１００５３，Ｃｈｉｎａ；２ ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５０，Ｃｈｉｎａ］［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１，Ｂ２，Ｇ１ａｎｄＧ２ｉｎＰｅｒｉｐｌａｎｅｔａａｍｅｒｉｃａｎａｂｙｉｍｍｕｎｏａｆ ｆｉｎｉｔｙｃｏｌｕｍｎａｎｄｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｐｏｓｔ ｃｏｌｕｍｎｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈ７０％ｍｅｔｈａｎｏｌａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙｃｏｌｕｍｎ ＴｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｌｉｑｕｉｄｗａｓｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇＣ１８ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｌｕｍｎａｎｄｑｕａｎｔｉｆｉｅｄｗｉｔｈｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｆｔｅｒｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ，ａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１，Ｂ２，Ｇ１ａｎｄＧ２ｓｈｏｗｅｄａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ Ｔｈｅｌｉｍｉｔｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗｅｒｅ０ ０４μｇ·ｋｇ－１ｆｏｒａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１，０ ０８μｇ·ｋｇ－１ｆｏｒａｆｌａｔｏｘｉｎＢ２，０ ０３μｇ·ｋｇ－１ｆｏｒａｆｌａｔｏｘｉｎＧ１，０ ０８μｇ·ｋｇ－１ｆｏｒａｆｌａｔｏｘｉｎＧ２Ｔｈｅｍｅａｎｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｓｏｆｆｏｕｒｋｉｎｄｓｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎｗｅｒｅ８２ ０％－９０ １％ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄｃａｎｓａｔｉｓｆｙｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｏｆｍｕｌｔｉ ｍｙｃｏｔｏｘｉｎａｎａｌｙｓｉｓｉｎＰｅｒｉｐｌａｎｅｔａａｍｅｒｉｃａｎａ．［ＫｅｙＷｏｒｄｓ］　Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａａｍｅｒｉｃａｎａ；Ａｆｌａｔｏｘｉｎｓ；Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ 自然界存在的真菌毒素达２００种以上，其危害性排在首位的是黄曲霉毒素（ａｆｌａｔｏｘｉｎ，ＡＦＴ）［１］。

940 引言何首乌始载于《开宝本草》，为我国较为常用的中草药材之一，在全国各地均有分布，广东、湖南、河南和广西是其栽培品的主要几大产区。

何首乌中包含有二苯乙烯类、蒽醌类、黄酮类、磷酯类、酚类及鞣质类等131种化合物[1]。

最近的研究表明，二苯乙烯类化合物可以作为抗衰老和抗动脉粥样硬化因子，减少脑病理萎缩，促进学习和记忆[2]；含蒽醌的组分对心肌提供了剂量依赖性的保护缺血-再灌注损伤，并减少脑缺血引起的梗死体积[3]。

早在2010年，何首乌及其制作方法被中国药典收录，何首乌也被广泛用作补药和泻药，以治疗失忆症、高脂血症和便秘[4]。

何首乌经炮制后，极其容易发霉而变质，不仅其药效受到影响，发霉后会产生黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，均是致癌物质，严重影响身体健康。

世界卫生组织已将黄曲霉毒素（Aflatoxin）释质谱（HPLC-IDMS）[15]、高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）[16]、高效液相色谱-高分辨质谱（HPLC-HMRS）[17]和免疫亲和柱-高效液相色谱法（HPLC-IAC）等[18]。

使用酶联免疫吸附法和免疫亲和柱-荧光分光光度法对其进行检测时，样品中的某些结构类似物也会被抗体吸附而产生荧光，造成假阳性[19]。

Arroyo-Manzanares等[20]提出了一种HPLC-MS/MS方法测定黄曲霉毒素，以水/丙酮/乙腈（30：35：35，v/v/v）为萃取溶剂，萃取后测定干血斑或干血清斑中的黄曲霉毒素，取得了很好的结果，检测限为0.05至0.1 ng/mL。

免疫亲和色谱法（Immunoaffinity Chromatography，IAC）基于抗体-抗原的特异性吸附原理进行选择性分离，方法的准确性和灵敏度都很高[22]，是检测黄曲霉毒素的最佳方法之一。

发展何首乌中的致癌物质黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的高效、准确检测方法至关重要。

由于Afla Bl和Afla Gl荧光强度相对较弱，通常需96公司、吐温-20采购自梯希爱（上海）化成工业发展有限公司（货号T0543）；超纯水（自制）。

2015年药典黄曲霉毒素测定法本法系用高效液相色谱法测定药材及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，流速0.8mL/min；采用柱后衍生法检测:光化学衍生法：光化学衍生器（254nm. PriboFast-KRC光化学柱后衍生器.Pribolab-MDU光化学柱后衍生器）；以荧光检测器检测，激发波长λex =360nm(或365nm)，发射波长λem =450nm。

两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0μg/m L、0.3μg/m L、1.0μg/m L、0.3μg/m L、）0.5mL，置10mL于量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。

精密量取储备液1mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

(Pribolab STD#1082-2 AFT混合标准品：AFT B1和AFT G1：1.0μg/mL，AFT B2和AFT G2：0.3μg/mL ）供试品溶液的制备：1. 取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入精密加入70%甲醇溶液75mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11,000r/min,®他物质萃取时间要求不一的需求，通过特殊结构设计实现在短时间内对真菌毒素等物质的高效粉碎、萃取，保证检测结果的准确性和精确度。

粉碎样品在不锈钢杯中通过电机旋转驱动刀同时进行劈裂、碾碎、掺合等过程。

使物料搅拌粉碎,转速高达22000以上,全金属机身和不锈钢杯子,抗有机溶剂的腐蚀,可以实现在2-3分钟高效实现真菌毒素的均质、萃取等关键环节。

优点：高速震荡3分钟即可完成整个真菌毒素及其他物质的萃取过程；●转速两档可调，低速12000r/min，高速22000r/min；●全金属机身，不锈钢材质，抗有机溶剂腐蚀；●可广泛应用于食品检验、科学研究、医学治疗、化工制药等行业；●本机构造方面均合于无菌操作的要求；●通过CE认证。

黄曲霉毒素M1检测方案方案一、免疫亲和层析净化高效液相色谱法（GB 5413.37-2010第二法）一、原理：亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。

用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。

用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。

二、所需仪器1、高效液相色谱仪（配荧光检测器—具有365 nm激发波长、435 nm发射波长，在适当的色谱条件下能够测定0.02 ng 的黄曲霉毒素M1(相当于5倍噪音)）2、离心机（转容50ml角转子，转速10000r/min）3、氮吹仪4、固相萃取装置（带真空系统）5、水浴锅（温控30℃±2℃，50℃±2℃；温范25℃~60℃）6、天平：感量为0.01 g7、PH计：精度0.018、旋转蒸发仪（奶油样品制备）9、紫外分光光度计（标液浓度的校正，波长范围为200nm~400nm）三、试剂及耗材1、黄曲霉毒素M1免疫亲和柱2、黄曲霉毒素M1标准品3、反相色谱柱C18 4.6*250 加有反相色谱材料的保护柱5、移液管：1ml, 2ml, 50ml6、烧杯：50ml, 250ml7、分液漏斗：250ml（干酪和奶油样品制备）8、容量瓶：100ml9、一次性注射器：10ml, 50ml10、针式过滤器（水系）0.22um，Φ1311、乙腈(CH3CN)：色谱醇12、甲醇：分析醇13、三氯甲烷：分析醇14、石油醚：分析醇15、带刻度的磨口锥形玻璃试管：5 mL、10 mL、20 mL16、离心管：50ml四、操作方法依据GB 5413.37-2010第二法方案二、酶联免疫吸附法（可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1）一、原理标准溶液和样品试液加入各自板孔，游离的黄曲霉毒素M1与微孔中包被的黄曲霉毒素M1抗体结合，没有结合的物质在洗涤中被清除。

苏微黄曲霉毒素总量（B1、B2、G1、G2）免疫亲和柱说明书1、用途：免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2, 从而对黄曲霉毒素样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素含量的检测。

亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。

2、产品性能柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。

3、测定原理：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，免疫亲和柱中抗体与毒素结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。

用乙腈洗脱黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，然后注入到分析仪器中用于检测。

4、包装组成：标准品（选配）；20支/盒，3mL柱管/支说明书1份；5、需要的材料但盒中不提供：5.1设备----HPLC----气控操作架----空气泵----天平----组织匀浆机（或摇床）----粉碎机----分样筛----100mL/10mL量筒----50mL漏斗----针筒----快速定性滤纸----微纤维滤纸（Whatman 934-AH）----样品瓶----转接头（配3ml免疫亲和柱使用）5.2 试剂----甲醇，氯化钠，乙腈，蒸馏或去离子水。

6、注意事项：----黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作。

----使用过的容器及黄曲霉毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%,V/V）浸泡过夜。

----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

----2~8℃储存，不得冻存。

----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）7、样品处理：方法：适用于玉米、花生或中药等样品----玉米花生或中药等样品粉碎，过2mm分样筛；----25g过筛粉碎的样品加入5g 氯化钠与125mL 60%甲醇-水溶液混匀；----高速匀浆1min（或用摇床剧烈振荡20min），用快速定性滤纸过滤；----用20mL蒸馏水稀释10mL滤液，再用微纤维滤纸过滤；----取15mL上样检测。