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病理学中的组织切片技术病理学是医学领域中非常重要的一个学科，研究人体各个器官和组织的疾病变化及其发生、发展机制。
而组织切片技术是病理学中的基础操作，是为了观察和诊断疾病而必要的步骤之一。
本文将详细介绍组织切片技术的相关知识和方法。
一、组织切片技术的概述组织切片技术是指将人体组织切割成薄片并染色，以便于病理学家观察。
这项技术已经存在了很长时间，并且随着技术的发展和改进，已经成为了诊断和治疗疾病的重要手段之一。
组织切片技术可以被广泛应用于疾病的研究、诊断和治疗中。
二、组织切片技术的步骤组织切片技术的主要步骤包括取样、固定、脱水、包埋、切片和染色。
下面将对这些步骤进行详细的介绍：1. 取样组织切片的第一步是取样，即从人体组织中取出一小块，以便于后续的操作。
取样的方法根据不同的情况会有所不同，比如在手术中取样，就需要根据病变的部位和特点来选择取样点，而在活检中取样，就需要根据患者的症状和体征来确定取样点。
2. 固定取样后，需要用一种方法把组织中的细胞和结构固定住，以便于后续处理。
目前常用的固定剂是福尔马林，它可以迅速把组织中的蛋白质交联，使其不易变性，从而保持组织形态的完整。
3. 脱水在固定后，需要将组织逐渐从水中转移到酒精、乙醇等脱水剂中，以便于把组织中的水去除，使其硬化。
这是组织切片的关键步骤之一，如果脱水不彻底，切出的组织切片会变形或破损。
4. 包埋将脱水的组织置于熔蜡中，使其被包覆在蜡中。
这么做可以保持组织的形态，并使其更易于切割。
5. 切片蜡包埋后，组织需要被切成薄片。
切片可以使用手工或自动切片机完成，手工切片需要技巧和经验，而自动切片机可以更好地保证切片的厚度和质量。
6. 染色切片完成后，需要对组织进行染色，以便于病理学家对其进行观察。
目前常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂以及免疫组化染色剂等。
三、组织切片技术的应用组织切片技术在病理学中有广泛的应用，其中包括：1. 诊断和治疗疾病组织切片技术是病理学家进行诊断和治疗疾病的重要手段之一。
组织切片的制作第一篇：组织切片的制作组织切片的制作1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
组织切片引言在软件开发过程中，我们经常需要处理大量的数据，并对其进行分类和组织。
组织切片是一种常见的数据处理技术，它允许将数据分割成多个片段，并按需组合这些片段以满足特定的需求。
这种技术在许多领域中都有广泛的应用，如数据可视化、图形处理和机器学习等。
本文将介绍组织切片的概念、应用和实现方法。
组织切片的概念组织切片是一种将数据按照特定规则进行分类和分组的技术。
它将数据分割成多个片段，每个片段都包含了一部分数据。
每个片段可以有自己的属性和功能，以便满足特定的需求。
例如，在数据可视化中，我们可以将数据按照不同的颜色进行分类并显示在不同的图层中。
在图形处理中，我们可以将图像分割成多个区域，并对每个区域进行不同的处理。
在机器学习中，我们可以将数据集分成训练集和测试集，以便进行模型训练和评估。
组织切片的核心思想是将复杂的数据集分割成更小、更简单的片段，以方便处理和管理。
通过将数据组织成切片，我们可以更好地控制数据的访问和操作，并且可以灵活地进行组合和重组。
这使得我们可以根据实际需求，快速地对数据进行分析、处理和展示。
组织切片的应用组织切片在许多领域中都有广泛的应用。
以下是一些常见的应用场景：数据可视化在数据可视化中，我们常常需要将数据按照不同的维度进行分类和展示。
例如，我们可以将销售数据按照不同的产品类型和地区进行切片，以便更好地理解销售情况。
通过组织切片，我们可以将数据按照不同的维度分组，并将每组数据显示在不同的图层中，以便用户可以根据需要选择和查看。
图形处理在图形处理中，我们常常需要对图像进行分割和处理。
例如，我们可以将图像分割成多个区域，并对每个区域进行不同的滤镜处理。
通过组织切片，我们可以将图像分割成多个切片，并将每个切片分配给不同的处理器进行并行处理，以加快图像处理的速度。
机器学习在机器学习中，我们常常需要将数据集划分成训练集和测试集，以便进行模型训练和评估。
通过组织切片，我们可以将数据集分割成多个切片，并按照一定的比例划分为训练集和测试集。
生物组织切片技术的步骤与显微镜观察注意事项生物组织切片技术是生物学实验中常用的一种技术，它可以使我们更加清晰地观察和研究生物组织的微观结构。
然而，要获得高质量的组织切片和准确地观察细胞结构，需要掌握一些关键步骤和注意事项。
1. 细胞固定和处理：首先，选择适当的生物组织进行研究，并将其固定。
常用的固定剂包括福尔马林、缩醛等。
固定过程中，应注意固定液的浓度、温度和固定时间，以获得最佳的切片结果。
2. 组织切片：固定后的组织需要进行切片以获得薄片。
切片可以使用手动或自动切片机进行。
切片时，要注意刀片的锋利度和切片的厚度，过厚或过薄的切片都会影响观察结果。
此外，在切片过程中需使用切片液体，保持组织的湿润性。
3. 脱水和清洁：切片完成后，需要对切片进行脱水和清洁。
脱水可以使用不同浓度的酒精进行，逐渐将水分从切片中去除。
脱水过程要缓慢进行，以免引起组织变性。
清洁时，可以使用温水和清洗剂将切片浸泡，去除脱水剂和其他残留物质。
4. 上染料及固定：完成脱水和清洁后，可以对切片进行染色。
染色可以增加组织结构的对比度，并使细胞和组织成分更加明确可见。
常用的染料有伊红、吉姆萨和涅瓦脱尔等。
染色后，需要将切片进行固定，以防止染色物质在观察过程中脱落。
5. 显微镜观察：对于观察切片，最关键的工具就是显微镜。
首先，将切片放置在显微镜载物台上，并选择适当的镜头放大倍数。
然后，调节聚焦和光源，确保观察到的细胞结构清晰可见。
同时，调整光源的强度，避免过强的光线造成过度曝光。
在观察细胞结构时，还需注意以下事项：a. 观察角度：切片必须放置在正确的平面上，以便观察到所需的细胞结构。
切片的厚度和切面的角度会对观察结果产生影响，因此要确保选择正确的切面进行观察。
b. 观察时间和条件：观察时应适度控制观察时间，避免过度放大或观察时间过长引起疲劳。
此外，观察时要注意环境条件，避免把显微镜放置在强光下或者有振动的地方，以免干扰观察。
c. 记录和分析：在观察过程中，要及时记录所观察到的细胞结构，并进行分析。
组织切片技术注意事项程序步骤1、取材2、固定（固定24h—1W）3、包埋石蜡切片：流水冲洗组织块>>75%酒精1h>>85%酒精1h>>95%酒精1h>>100%酒精（1）1h>>100酒精（2）1h>>二甲苯8-20min>>石蜡2h>>包埋冰冻切片：固定后的组织>>OCT包埋>>切片或-20度保存；液氮中的组织>>转入-20度>>OCT包埋>>切片或保存4、切片切片>>展片（40~50度）>>贴片>>干燥（37度过夜或者50~60度2h）5、HE染色干燥后的切片>>二甲苯（1）10min>>二甲苯（2）10min>>100%酒精(1)1min>>100%酒精(2)1min>>95%酒精1min>>85%酒精1min>>75%酒精1min>>蒸馏水3min>>苏木精染色30s—5min>>自来水涮洗>>蒸馏水>>75%酒精1min>>85%酒精1min>>伊红染色>>85%酒精涮洗>>95%酒精1min>>100%酒精(1)1min>>100%酒精（2）1min>>二甲苯（1）10min>>二甲苯（2）10min>>中性树胶封片6、免疫组化（ABC法）（1）干燥后的石蜡或冰冻切片（冰冻切片需要缓慢复温）脱蜡至水；（2）双氧水（1%浓度左右）封闭内源性过氧化物酶；（3）PBS洗涤3×5min；（4） 5%BSA封闭非特异性结合位点，不洗；（5）滴加适当稀释度的一抗；4度孵育过夜或37度2h；（6）同上洗涤；滴加二抗，37度1h；（7）同上洗涤；滴加ABC复合物，37度1h；（8）洗涤5遍，每次5min；（9）配制显色液（DAB显色试剂盒），显微镜下观察显色；（10）切片浸泡于蒸馏水中终止显色；（11）苏木精复染，脱水，封片。
1.组织的取材
取材时要注意及时快速固定，避免剪刀镊子损伤组织，组织要取全。
全盘考虑进行病理切片的组织类型，病变可能累及的部位，组织包埋需要的剖面。
2. 组织的固定
在组织病理学中，不管是组织切片乃至电镜还是大体标本的保存，都必须进行及时的适当的和有效的固定。
组织只有经过固定，才能完成随后的一系列的制作，直至切片的最后完成。
固定的作用：从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。
固定的目的
①能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。
细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。
固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。
另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细菌参与外，其本身也是很重要的。
因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。
②保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖元等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。
细胞的固有物质，即细胞核、内质网、线粒体、高尔基器、溶酶体、过氧体，细胞骨架，组织液，抗原、糖元等。
这些物质，如果不将其及时固定，是很容易丧失的，尤其是溶酶体，很容易受到破坏，因此应特别小心。
③使组织硬化，便于切块。
刚离体的组织，除了胃组织以外，都是柔软的组织，尤其是胃肠道的组织，如果在没有固定时就取材，效果就很差，不是取材不规整，就是厚薄不均，粘膜和肌层很容易分开，因此，要取得规整标致的材料，就必须将组织彻底固定，再行取材。
④对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。
病理标本、种类繁多，成份复杂，各种病例都有，具有传染性的病种也不少，如结核、肝炎、麻风、性病等等。
对于此类标本，应进行彻底的固定后，再行取材，如结核球，固定时间应在3-5天。
⑤可增强染色的作用。
组织经过及时的固定，最终可见到切片有鲜艳的染色，而些时如果有一批未经及时固定的组织，将看到最终的结果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得结论，固定可以增强染色的作用。
固定的注意事项：
①组织固定越新鲜越好。
组织一经离体，就能及时地固定，这是最好的。
根据实验，如果要获得某些酶的染色，固定最好在组织离体后30秒至1分钟。
对于其它达不到些要求是越快越好。
原则上动物死亡后半个小时内取完并及时固定组织。
②组织固定，组织块不宜过大。
凡是需要固定的组织，都不应该太大太厚，这是因为所有的固定液穿透力不够强，浸透度不够快的缘故。
如果较大厚的组织，不经处理就进行固定，那么待固定液进入至中间对可能这些组织早就发生自溶了。
因此，对于较大的组织，必须先进行处理，切成制片材料再行固定，这是最佳的处理方法，如遇到胃肠的器官，则应将其剪开，放平后，再行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因这类组织、粘膜和肌层容易分开，没固定时，难以取得最佳制片材料，对于产酶类的器官如肝、肾、脾等，更要处理好，否则更容易出现自溶现象。
③对不同类型的组织应适当合理地选择固定液。
固定剂的种类繁多，成份复杂，对组织的作用不尽相同。
在我们的日常工作科研中，对于组织的固定，应有针对性的选择，方能获得满意的效果。
对于肾，睾丸等泌尿系统和新生仔鼠应选择Bouin氏固定液。
免疫组化可以选择多聚甲醛和中性缓冲甲醛；我病理室一般选择中性缓冲甲醛，它可以兼顾常规染色和免疫组织化学。
④组织固定，时间不宜太短，也不宜太长。
固定时间应根据取材大小、性质以及类型有关，视具体情况而定；时间太短，就不能很多的固定组织，因为不管组织大小，固定液浸入组织之中，都需要有一定的时间，时间太短，就会影响组织固定的效果，对以后一系列关系的处理都有影响，切片质量难以保证，固定时间太长，也不好。
组织长时间的固定，福尔马林会产生一种酸，影响核的染色。
对于固定很长时间的陈列性标本制片后切片染色不鲜艳，显得非常陈旧。
另外，长时间的固定往往会出现福尔马林色素，尤其是造血器官的标本，更应注意。
固定时间过长，可降低抗原的活性。
一般小鼠组织固定24h即可。
⑤固定液的量要充分。
固定液量的足够与否决定着组织固定的成败。
一般固定液和组织体积比为10：1~20：1之间。
⑥特殊病例或特殊物质应选择特殊的固定液。
一般的病例标本，如没特殊的要求，都可以应用甲醛配成的各种固定液来固定。
但是，如果要显示狂犬病毒的包含体时，应用上述的的固定液就不行了，必须采用丙酮来固定，显示糖元，可选择无水酒精或丙酮来固定组织。
3. 常规石蜡切片制片过程
组织经系列酒精的脱水，经透明剂的作用，经熔化的石蜡的浸渍，包埋后所切成的切片称为石蜡切片。
制片过程的每一步每一环节处理不好都会影响切片质量。
组织脱水：
把含于组织内或细胞内的水份用脱水剂把其置换出来的过程称组织脱水。
不管是正常的组织，还是有病变的组织，都含有不同程度量的水分。
据测定，人体的物质组成约含水55~67%，蛋白质15~18%，脂类10~15%，无机盐3~4%及糖类1~2%[14]。
如果不把这些水分脱去，石蜡切片将无法进行，因为石蜡和水不能混合在一起，所以除去组织中的水分成为制片中的关键，至今为止，国内常用的都是酒精。
因它不管在什么样比例的情况下都能和水混合，所以它可以慢慢地将水从组织中置换出来。
酒精脱水力强，对组织又有硬化和易脆的不良影响。
在使用时，通常是从低浓度至高浓度，浓度系列通常
是70%、80%、90%、95%和100%，组织经过这一系列处理后，基本可达到脱水的目的。
每一步的组织脱水都需要控制好脱水时间，一般根据组织块大小和组织类型而定。
短了脱水不干净，长了会使组织切片时易脆。
组织的透明：
组织脱水后，要经过一个浸蜡前的中间溶剂透明过程；才能进行浸蜡。
透明的目的：组织经脱水后、浸蜡前必须经过某些既能与脱水剂相混合又能溶解石蜡的中间溶剂处理。
组织在中间溶剂时，组织间隙内存留的脱水剂完全为中间溶剂所取代时，组织就呈现透明状态，此时即可进行浸蜡。
透明液多采用二甲苯，组织经无水乙醇脱水后转入二甲苯透明，组织的大小、厚薄不同，透明时间也不同。
透明时间短了，透明不完全，导致切不了片，透明时间长了，透明过度，导致切片易粉易碎。
组织浸蜡：
用于浸蜡的石蜡最好是熔点稍低（56～58℃），低温浸蜡对保存组织细胞内的抗原免疫活性，避免组织收缩和变硬变脆有帮助，以尽量清除二甲苯蜡渗透到组织中起支撑作用，切片时才能把完整的组织和蜡一起完整切下来。
不同大小和厚薄的组织浸蜡时间有所不同，一般为1～3小时。
浸蜡温度过高，浸蜡时间过长或不够均可导致组织收缩，变硬变脆，难以切出理想切片。
组织包埋：
组织经浸蜡后即可进行包埋。
包埋时，包埋石蜡的温度要比组织高（约3~5℃），否则包埋冷凝后组织与包埋石蜡分离，特别是在冷天包埋时，动作更要迅速，否则容易导致组织与石蜡融合不好，影响切片。
包埋时把组织最大最平切面或所需的病灶切面向下，对皮肤、肠管和囊壁等层次清楚的组织其切面应包含有各层组织。
组织包埋要选择所需要的组织切面。
组织切片：
组织切片厚薄要适宜，薄的切片细胞不会重叠，易于观察。
切片的厚度应为3～4μ，组织蜡块过硬，切片刀或蜡块没固定好，会出现跳刀、切片成一截厚一截薄的现象。
优质的组织切片要求切片较薄，平整，无刀痕，皱褶。
切片太厚或呈波浪状厚薄不匀。
贴片烤片：
烤片时间短，会造成染色时切片从载玻片上脱落或脱蜡不净，染的切片会着色浅、不上色或灰染；烤片时间长，会造成对组织的损伤。
染色：
染色染色的程度包括脱蜡、浸水、染色、分化、促蓝、脱水、透明等过程。
切片经过脱蜡至水，HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。
如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。
要求组织结构清晰，色彩鲜艳，细胞核/细胞质对比分明。
组织病理切片质量的影响因素
2009-08-19 编辑：【打印】【关闭】。
