PC-12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞

一、PC12细胞的折光性本来就比较好，刚传代以及新分裂的细胞都是亮的，至于你说的贴壁的细胞，不知道是否是圆的，在牛血清的刺激下，特别是国产的，会使pc12细胞发生定向的分化，长突起，贴壁就比较牢。

PC12分为未分化的和分化的.前者是球状,成团生长;后者形成很多丝状体;而丁香园里有人说楼主的这种细胞严格来讲已经不能算是PC12了.前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰,查了一些资料,现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助!培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中,置于ＣＯ2培养箱(37℃,95%空气5%ＣＯ2),培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ,高糖),加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。

分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形,直径15～20μｍ,也有椭圆或多角形的,扁平的细胞少见,倾向于聚集成小团簇状(A图)。

分化后:加入ＮＧＦ后的24ｈ内细胞停止分裂,长出似交感神经元样的突起;第4～14ｄ,细胞体积增大,突起增多并增长,形成网络,数周后,突起可长达500～1000μｍ(B图)。

NGF可促进PC12细胞向类似交感神经元样的形态分化,最终导致PC12细胞在生理、生化方面都具有神经元样的功能[12]。

分化后的PC12细胞对ACh的敏感性增大5~7倍有的战友提到分化的PC12药敏性更好是不是因为分化后的PC12细胞对ACh的敏感性增大5~7倍二、我养这个细胞一年多了，有点经验和大家交流一下。

1.我用的是15％的马血清和%的胎牛，胎牛要用进口的，国产的容易分化。

2.关于表面处理的问题，值得注意的是胶原和多聚赖氨酸使细胞贴壁的原理不太一样。

多聚就是纯粹的物理黏附作用，而胶原则是刺激的细胞，使细胞的表达一些能有助于贴壁的蛋白，这种刺激作用还涉及到MAPK途径，所以如果做细胞信号转导的战友要注意到这点。

相关的文献可以自己到pubmed上查找。

3.完全分化的细胞不能传代，因为贴壁已经很牢固，强迫其脱离可能造成，尤其是细胞的突起断裂，细胞存活率很低。

肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤后NF －κB P65表达的影响董晓丽明海霞金戈（甘肃中医学院生理学教研室，兰州甘肃730000）〔摘要〕目的探讨L-肌肽对H 2O 2诱导PC12细胞（大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）凋亡的保护机制。

方法在H 2O 2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上，加入肌肽作用于细胞，采用MTT 比色法检测肌肽对PC12细胞的增殖抑制作用；RT-PCR 法检测凋亡相关基因NF-κB P65mRNA 的表达变化；免疫组化SABC 法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和NF-κB P65的表达，流式细胞仪（FCM ）检测细胞凋亡。

结果不同浓度的肌肽对H 2O 2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用，20mmol /L 浓度时达最大值（P ＜0.05）。

20mmol /L 的肌肽作用于PC12细胞可降低NF-κB P65的mR-NA 表达，降低NF-κB P65蛋白的表达，流式细胞仪检测显示肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡率。

结论肌肽对H 2O 2损伤的PC12细胞有保护作用，机制可能是通过抑制NF-κB P65的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的。

〔关键词〕肌肽；H 2O 2；PC12细胞；NF-κB P65；凋亡〔中图分类号〕R383〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）11-2332-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.11.055第一作者：董晓丽（1975-），女，硕士，讲师，主要从事神经系统疾病中西医结合治疗的研究。

肌肽是继超氧化物歧化酶（SOD ）和维生素E 后又一被发现的天然非酶促自由基清除剂和抗氧化剂〔1〕。

本研究用H 2O 2处理PC12细胞，制备氧化应激损伤致凋亡的模型，采用MTT 法检测肌肽对PC12细胞增殖的影响，观察肌肽是否具有抗氧化应激的神经保护作用；检测肌肽对凋亡相关基因NF-κB P65mRNA 和蛋白表达的影响。

栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞兴奋性毒性损伤的影响目的观察栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）兴奋性毒性损伤的影响，并初步探讨其作用机制。

方法采用谷氨酸诱导PC12兴奋性毒性损伤造模。

将细胞随机分为正常组、谷氨酸组和栝楼桂枝颗粒低（200 μg/mL）、中（400 μg/mL）、高（800 μg/mL）剂量组，MTT法和LDH法检测PC12活力；Caspase-3活性检测法、Annexine V/PI双染色法检测细胞凋亡，Western blot 和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达。

结果与谷氨酸组比较，MTT法栝楼桂枝颗粒各剂量组PC12活力升高，LDH法栝楼桂枝颗粒各剂量组细胞活力降低；Annexine V/PI双染色法栝楼桂枝颗粒各剂量组PC12凋亡率降低；Caspase-3活性检测法栝楼桂枝颗粒各剂量组Caspase-3活性降低；RT-PCR及Western blot检测栝楼桂枝颗粒各剂量组Bax表达降低、Bcl-2表达升高。

结论栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导PC12兴奋性毒性损伤有一定的保护作用，其保护作用与其抗细胞凋亡作用有关。

Abstract：Objective To investigate the effects of Gualou Guizhi Granules on excitatory toxic damage of PC12 induced by glutamate；To primarily explore the involved protective mechanism of Gualou Guizhi Granules. Methods Excitatory toxic damage of PC12 induced by glutamate was used to establish models. Cells were divided into normal group，glutamate group，and Gualou Guizhi Granules low- （200 μg/mL），medium- （400 μg/mL）and high-dose （800 μg/mL）groups. MTT and LDH assay methods were used to detect PC12 activity；Caspase-3 activity detection method and Annexine V/PI double staining method were used to detect cell apoptosis；Western blot and RT-PCR were used to detect Bcl-2，Bax protein and mRNA expression. Results Compared with glutamate group，MTT showed that all Gualou Guizhi Granules groups could improve PC12 activity，and LDH showed that cell activity in all Gualou Guizhi Granules groups decreased；Annexine V/PI double staining method showed that all Gualou Guizhi Granules groups could decrease the PC12 apoptosis；Caspase-3 activity detection method showed that all Gualou Guizhi Granules groups could decrease the activity of Caspase-3；Western blot and RT-PCR showed that all Gualou Guizhi Granules groups could reduce Bax expression and increase Bcl-2 expression. Conclusion Gualou Guizhi Granules have certain protective effects on excitatory toxic damage of PC12 induced by glutamate，which may be related to its anti-apoptotic activity.Key words：Gualou Guizhi Granules；glutamate；PC12；cell apoptosis隨着世界老龄化的加剧，脑卒中成为发展中国家高致残率、高死亡率、高发病率的一种疾病，给人类健康造成了巨大的威胁。

PC12脑神经细胞行为表现PC12脑神经细胞是一种常用于神经生物学研究的细胞系，具有许多重要的特性和行为表现。

本文将就PC12脑神经细胞的特性、生命周期、分化过程以及其与神经元的相关性进行详细探讨。

PC12细胞是一种来自大鼠嗜铬细胞瘤的细胞系，最早由E. Greene博士于1970年首次建立。

这些细胞具有许多神经元的特性，包括能够释放神经递质、生成神经突起以及对外界刺激做出反应等。

因此，PC12细胞成为了研究神经生物学和细胞行为的重要模型。

PC12脑神经细胞具有较为明确的生命周期。

在培养基中，PC12细胞通常呈现为一种悬浮生长方式。

细胞会迅速分裂扩增并形成一个细胞集落。

经过一段时间的培养后，PC12细胞开始出现转变，进入分化阶段。

分化的PC12细胞会产生许多细长的突起，类似于神经元的轴突。

同时，细胞还会表达一系列与神经元相关的蛋白质，如神经元特异性烯醇化酶（tyrosine hydroxylase, TH）和神经元特异性磷蛋白（neurofilament protein, NF）。

这表示着PC12细胞进入到了一个成熟的神经样状态。

PC12细胞的分化过程与神经细胞的分化过程有许多相似之处，这使得这个细胞系统成为神经发育和神经退行性疾病研究的有力工具。

当受到刺激时，PC12细胞会释放大量的肾上腺素和去甲肾上腺素，这与真实的神经元对刺激的反应非常类似。

此外，细胞的形态学变化和突起的生成也与神经元的分化过程密切相关。

PC12细胞的分化过程受到多种信号分子的调控。

神经生长因子（nerve growth factor, NGF）是最重要的一种信号分子，其通过与PC12细胞表面的TrkA受体结合来激活下游信号通路。

NGF的作用导致PC12细胞开始分化，并形成突起。

此过程中，细胞会逐渐增加TH和NF等蛋白的表达量，加强细胞的神经细胞特性。

在细胞行为方面，PC12细胞的活动表现出了优良的可塑性。

这些细胞能够形成突起，通过突起与周围细胞进行连接，并实现信息传递。

注射用脑蛋白水解物相关论文注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖与氧化损伤的影响[摘要] 目的：探讨注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的增殖与过氧化氢氧化损伤的影响。

方法：采用MTT法，观察不同浓度的注射用脑蛋白水解物对体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12）生长及过氧化氢损伤保护的作用。

结果：注射用脑蛋白水解物对PC12细胞的增殖及氧化损伤的保护作用存在量效关系。

结论：注射用脑蛋白水解物可促进PC12细胞生长，并可保护细胞减轻过氧化氢的损伤。

[关键词] 注射用脑蛋白水解物；大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞；MTTEffects of cerebroprotein hydrolysate for injection on PC12 pheochromocytoma cells proliferation and oxidative damage JIANG Yuhui, LIANG WeiyangGuangdong Institute for Drug Control, Guangzhou 510180, China[Abstract] Objective: To explore the biological effects of cerebroprotein hydrolysate for injection on the proliferation and oxidative damaged rat pheochromocytoma cells (PC12). Methods: Thiazoly blue (MTT) colorimetric assay was used to determine the proliferation and oxidative damaged protection of PC12 cells after different doses ofcerebroprotein hydrolysate for injection were added into the culture medium. Results: The proliferation and protection effects on PC12 cells of cerebroprotein hydrolysate for injection were depended on its doses. Conclusion: Cerebroprotein hydrolysate for injection may promote the proliferation and protect the PC12 cells injured from oxidation.[Key words] Cerebroprotein hydrolysate for injection; Rat pheochromocytoma cells; MTT注射用脑蛋白水解物为健康乳猪脑经酶水解制成的无菌冻干制剂，含75%~80%游离氨基酸和20%~25%小分子肽。

PC12细胞培养PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。

1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。

其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。

分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。

这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。

2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞，在传代次数较多后，它的形状和性状会发生改变。

这些改变尤见于未分化型PC12细胞。

主要是细胞形状变得更加不规则，对药物的敏感性愈加下降。

因此，建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。

3.在复苏细胞时动作一定要迅速，放入温水中1～2min后要马上加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，这样不仅可以把DMSO吸掉，而且可以将死亡的细胞也吸掉。

细胞一天一看即可，经常动会有影响。

注意过滤后血清的PH值，因为培养液过滤后PH值会有所改变。

复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞，去除了冻存液中的DMSO，如果没有去除DMSO，细胞培养过夜后就要彻底换液；如果复苏时洗涤离心过，可以待传代时再换液也可。

（据我个人经验，还是复苏时去除DMSO，细胞的生长状态好一些）4. 状态良好的细胞复苏后 4 h即可贴壁，开始增殖，大约2 d即可传代，接种48h应该到了对数增长期。

5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响，不过每次观察的时间不易过长。

6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶，因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。

我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁，形态也好，但就是增殖缓慢，所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打，传代后细胞增殖迅速，2 d就长满了（因为长的太快，我只好降低血清浓度，用5%FBS）7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛，占瓶底70%－80%时最好，如果细胞长的太满，细胞的状态会越来越差，最后大片死亡；这种细胞传代后生长也不好；而且长的太满后，细胞贴壁牢，难于吹起来，相反，70%－80%时细胞很容易吹起来。

doidoi:10.3969/j.issn.1002-2481.2022.03.05山西农业科学2022，50（3）：314-318Journal of Shanxi Agricultural Sciences Mimics转染PC12细胞条件的优化任静，郝琴琴，成俊丽，李鹏飞（山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801）摘要：PC12作为模式细胞已被广泛应用于多种疾病研究。

为探究高效、低毒的PC12的细胞转染方法，试验采用化学转染法，以带有5′-羧基荧光素（FAM）标记的NC mimics作为外源基因，分别用RFect、D-Portal、Tran‑sIntro TM EL、Lipofectamine3000和Lipofectamine2000等5种转染试剂转染PC12细胞以筛选最佳转染试剂；然后设置NC-FAM mimics浓度为50、60、70、80、90、100nmol/L，通过倒置荧光显微镜观察PC12细胞在最佳转染试剂下的荧光信号对转染效果进行评定。

结果表明，在相同的培养条件下，不同转染试剂对PC12细胞的转染效果之间存在较大差异，其中，TransIntro TM EL转染后荧光强度最高，D-Portal、Lipofectamine3000和Lipofectamine2000转染后荧光信号次之，RFect转染后荧光信号最弱；且不同处理对细胞损害无显著差异。

以TransIntro TM EL作为最佳转染试剂进一步优化NC-FAM mimics转染浓度发现，荧光强度随NC-FAM mimics浓度的增加呈现先增强后降低的趋势，且在NC-FAM mimics浓度为70nmol/L时荧光信号最强；此外不同浓度下的细胞数量无显著差异。

综上可见，以TransIntro TM EL作为转染试剂、NC-FAM mimics浓度为70nmol/L时，转染后PC12细胞荧光强度最高，转染效果最好。

关键词：PC12；化学转染法；TransIntro TM EL；NC-FAM mimics；荧光信号中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1002-2481（2022）03-0314-05Optimization of Mimics Transfection Conditions in PC12CellsREN Jing，HAO Qinqin，CHENG Junli，LI Pengfei（College of Life Science，Shanxi Agricultural University，Taigu030801，China）Abstract：PC12cells has been widely used as a model for researches on many diseases.To explore transfection methods of PC12cells with high efficiency and low toxicity,in this study,using chemical transfection and taking5'-carboxyfluorescein (FAM)-labeled NC mimics as the foreign gene,five different chemical transfection reagents（RFect,D-Portal,TransIntro TM EL,Lipofectamine3000and Lipofectamine2000）were applied to transfect PC12cells for screening the optimal transfection reagent.Then,concentrations of NC-FAM mimics were set to50、60、70、80、90、100nmol/L,and transfection effects were evaluated by observing fluorescence signal of PC12cells with the optimal transfection reagent under an inverted fluorescence microscope.The results showed that transfection effects between different transfection reagents were significantly different on PC12cells under the same culture condition.The TransIntro TM EL had the highest fluorescence intensity,the group of D-Portal、Lipofectamine3000and Lipofectamine2000took the second place and the RFect had the lowest.In addition,there was no significant difference on injury of cells by different treatments.The further results showed that the trend of fluorescence intensity was first increased and then decreased with increase of the NC-FAM mimics concentration when TransIntro TM EL was taken as the optimal transfection reagent to optimize the NC-FAM mimics transfection concentration.And fluorescence signal was the strongest when the concentration of NC-FAM mimics was70nmol/L.There was also no significant difference on amounts of cells by different concentration.In summary,the PC12cells transfected with the concentraion of70nmol/L of NC-FAM mimics by Transintro TM EL as the optimal transfection reagent in this study had the highest-intensity fluorescence and the best transfection effect.Key words：PC12;chemical transfection;TransIntro TM EL;NC-FAM mimics;fluorescence signal将外源基因导入真核细胞内并使其表达的技术称为细胞转染技术，该技术是研究基因表达调控的重要手段。

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)简单描述：细胞名称：大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)形态特性：多角形生长特性：贴壁生长特征特性：该细胞系来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。

这些细胞表达神经生长因子(NGF)受体。

NGF 可诱导产生神经表型。

这些细胞不合成肾上腺素。

培养条件：1640+10%马血清+5%胎牛血清传代方法：消化3-5分钟。

1:2。

3天内可长满。

冻存条件：完全培养基+40%FBS+10%DMSO支原体检测：阴性使用权限：A类细胞的保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。

如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。

本库的细胞系（株）仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的。

T25瓶细胞处理方法收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。

如有破损漏液等问题，请即时联系我们。

1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（40×,100×,200×各一张）。

3. 将细胞放入37度培养箱中预温1-2小时后再做处理，以稳定细胞状态。

4. 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

5.若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。

每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。

放到37度培养箱培养。

待细胞密度达到80%以上，进行传代。

6. 若细胞密度较大，达到80%以上，将细胞传到10cm培养皿培养。

7. 传代时，T25瓶里保留部分细胞，同步培养，直到能确保10cm培养皿中的细胞状态良好。

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)其它相关优质产品：HL3268 小鼠X小鼠 PK136 DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3269 杂交瘤细胞CD25 PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3] DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3270 中国仓鼠X小鼠B淋巴细胞杂交瘤 MR1 [derivative of HB-11048] RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS HL3271 杂交瘤细胞抗AChE AE-1 DMEM+10% HLlone 灭活血清HL3273 杂交瘤细胞抗CD2 OKT 11 IMDM培养基(GIBCO)+20%FBSHL3274 杂交瘤(抗CD3) OKT 3 IMDM培养基(GIBCO)+20%FBSHL3280 大鼠成纤维细胞 208F MEM+10% FBSHL3283 小鼠黑色素瘤细胞 B16-F0 DMEM+10% FBSHL3287 小鼠肝癌细胞 Hepa1-6 DMEM+10% FBSHL3289 猪肾近曲小管上皮细胞 LLC-PK1 M199+3% FBS/DMEM+F12+12%FBSHL3292 小鼠成纤维细胞 NIH-3T3 DMEM+10% FBSHL3300 小鼠单核细胞白血病细胞 Raw-Blue DMEM+10% FBS,不能加双抗+200μg/ml ZeocinHL3313 大鼠乳腺癌细胞 MADB-106 1640+10% FBSHL3314 猪肾上皮细胞 PK（15） MEM+10% FBSHL3315 狗肾上皮细胞 MDCK[NBL-2] MEM+10% FBSHL3316 猪肺泡巨噬细胞 3D4/21 1640+10% FBS+0.1mM NEAA+1mM 丙酮酸钠HL3317 猴胚胎肾上皮细胞 marc-145 DMEM+10% FBSHL3329 大鼠脑胶质瘤细胞 F98 DMEM+10%FBSHL3330 小鼠骨髓基质细胞 P9 1640+10%FBSHL3333 小鼠B淋巴细胞 WEHI-231 DMEM+10% FBS+0.05mM β-MercaptoethanolHL3071 小鼠前列腺癌细胞 RM-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3072 小鼠睾丸间质细胞瘤细胞 MLTC-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3073 小鼠睾丸间质细胞 TM3 D-MEM/F-12培养基(GIBCO)+5%马血清+2.5%FBSHL3074 小鼠畸胎瘤细胞 F9 DMEM培养基+10%FBSHL3076 小鼠乳腺癌细胞 4T1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3077 小鼠乳腺肿瘤细胞 C127 DMEM培养基+10%FBSHL3079 小鼠腹水瘤细胞 S-180 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3080 小鼠脑神经瘤细胞 Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] MEM培养基(GIBCO)+10%FBS HL3081 小鼠垂体瘤细胞 AtT-20 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3082 小鼠骨髓瘤细胞 FO DMEM培养基+10%FBSHL3087 小鼠淋巴样瘤细胞 P388D1 RPMI-1640(GIBCO）+90%马血清+10%FBSHL3088 小鼠淋巴瘤细胞 EL4 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3091 小鼠巨噬细胞 Ana-1 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3092 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 RAW 264.7 DMEM+10% FBSHL3093 小鼠白血病细胞 L1210 DMEM培养基+10%FBSHL3094 小鼠白血病克隆细胞系 L6565 RPMI-1640(GIBCO）+10%FBSHL3095 小鼠胚胎成纤维细胞 3T3-L1 DMEM+10%FBS。