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1 / 1第8章 分子发光分析法
选择题
关于荧光效率，下面错误的叙述是（ ）。
[中国科学院研究生院2012研]
A ．具有长共轭的跃迁的物质具有较大的荧光效率
ππ*→B ．分子的刚性和共平面性越大，荧光效率越大
C ．顺式异构体的荧光效率大于反式异构体
D ．共轭体系上的取代基不同，对荧光效率的影响也不同
【答案】C
【解析】A 项，π→π*跃迁是产生荧光的最主要类型，π电子共轭程度越大，荧光效率越大；B 项，在相同的长共轭分子中，分子的刚性和共平面性越强，荧光效率越大。
例如，在相似的测定条件下，联苯和芴的荧光效率分别为0.2和1.0，二者的结构差别在于芴的分子中加入亚甲基成桥，使两个苯环不能自由旋转，成为刚性分子，共轭电子的共平面性增加，使芴的荧光效率大大增加；C 项，对于顺反异构体，顺式分子的两个基团在同一侧，由于位阻原因使分子不能共平面而没有荧光，故错误；D 项，荧光效率受取代基效应影响。
给电子基团，如—NH 2、—OH 、—OCH 3等能增加分子的电子共轭程度，使荧光效率提高，吸电子基团，如—COOH 、—NO 2等会妨碍分子的电子共轭性，使荧光效率降低甚至为零。
第八章分子发光分析法基本要求：了解荧光的产生和影响荧光强度的因素，掌握分子荧光光谱法的定量关系和应用特点，重点：荧光光谱法的定量关系、应用特点。
难点：荧光的产生和影响荧光强度的因素。
参考学时：3学时作业参考答案1.简述荧光法产生的基本原理。
具有什么样结构的物质最容易发荧光答：物质受电磁辐射激发后，被激发的分子从第一电子激发单重态的最低振动能级回到基态而发射荧光，基于测量化合物的荧光而建立起来的分析方法即为荧光分析法。
芳香族化合物、带有平面刚性结构的化合物、带稠环结构的化合物容易发荧光。
2.解释下列名词：单重态、三重态、荧光、振动弛豫、内转换、外转换、失活、系间窜跃、荧光量子产率、激发光谱、荧光光谱答：单重态：电子自旋都配对的分子的电子状态称为单重态。
三重态：有两个电子自旋不配对而同方向的状态。
荧光：受光激发的分子从第一激发单重态(S1)的最低振动能级回到基态(S0)所发出的辐射；振动弛豫：由于分子间的碰撞，振动激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级失活至较低振动能级，多余的振动能以热的形式失去的过程。
内转换：在相同激发多重态的两个电子能级间，电子由高能级以无辐射跃迁方式进到较低能级的分子内过程。
外转换：激发态分子与溶剂或其他溶质间的相互作用和能量转换而使荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程。
失活：激发态分子不稳定，他要以辐射跃迁或无辐射跃迁的方式回到基态，这就是激发态分子的失活。
系间窜跃：激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多重态发生变化的无辐射跃迁过程。
荧光量子产率：表示物质分子发射荧光的能力。
荧光量子产率＝发射荧光的分子数/激发态的分子数＝发射的光子数/吸收的光子数激发光谱：在荧光最强的波长处测量随激发光波长的改变而变化的荧光强度，将荧光强度对激发光波长作图，即得到激发光谱，实际为荧光物质的吸收光谱。
荧光光谱：如果将激发光的波长固定在最大激发波长处，测量不同荧光波长处荧光的强度，将荧光强度对荧光波长作图便得到荧光光谱（或称发射光谱）。
《仪器分析》试题答案
《分子发光分析法》
p223
1． 解释下列名词：
（1）量子效率； （2）荧光猝灭；（3）系间跨越；（4）振动弛豫
解答
2． 为什么分子荧光分析法比分子吸收光度法的灵敏度和选择性好？
解答
3． 分子荧光和化学发光分析法在基本原理和仪器结构上有什么差异
解答
4． 试比较下列两种化合物中那种荧光效率高？并说明其理由。
解答
荧光素的荧光效率比酚酞的荧光效率高，因为荧光素的刚性平面结构。
5． 苯胺是一种具有荧光性质的化合物，在pH3.0和pH10.0的介质中那一种荧光强度大？
为什么？
解答
苯胺在pH10.0的介质中比在pH3.0的介质中的荧光强度大。
在pH3.0的介质中因为氨基的质子化作用，会使其吸电子效应增强。
6. 烟酰胺腺嘌呤双核苷酸的还原型（NADH ）是一种重要的强荧光辅酶。
在340nm 波长处有
一最大吸收，在365nm 波长处有一最大发射，用NADH 的标准溶液得到如下表的度相对荧光强。
一未知样品的相对荧光强为42.3，试求样品中的NADH 的浓度为多少？
HO COOH
荧光素酚酞
C
解答
f
I
C
A=1.40671 B=117.07927 R=0.99991
I f=1.40671+117.07927c
当I f=42.3时，c=0.343 mol/L。
分子发光分析中国·武汉二O 一五 年 六 月华中农业大学本科课程考试试卷考试课程与试卷类型：分子发光分析姓名：学年学期：2014-2015-2 学号：考试时间：班级：一、选择题（选出一个正确答案，将序号填写在【】里。
每小题2分，共24分。
）1.非辐射跃迁的衰变过程中，不包括那个过程？【】A 振动松弛B内转化C 系间窜越D系间转化2．下面那个不是有效的荧光猝灭剂。
【】A 对二氰基苯B N,N-二甲基苯胺C N,N-二乙基苯胺D 苯胺3 下列那个不是市场上常见的荧光分光光度计。
【】A 美国Cary Eclipse（瓦里安）B 日本Hitachi(日立)C 岛津CF-5301PC等系列D 上海F95/96等系列4 常规的荧光分析法中，间接测量法不包括下面中的那个? 【】A 荧光衍生法B 荧光猝灭法C 荧光吸收法D 敏化荧光法5 下列哪位人物没有提出同步荧光分析法。
【】A ClackB InmanC WinefordnerD Stern6 延迟荧光的主要类型不包括下面哪种？【】A E-型迟滞荧光B 简单荧光C P-型迟滞荧光D 复合荧光7 动力学分析法不包括下面哪个类型。
【】A 酸催化法B 非催化法C 催化法D 酶催化法8 下列哪种检测方式不属于单分子荧光检测形式。
【】A 光子爆发检测B 多分子图像记录C 单分子图像记录D 单分子光谱测绘9 下列哪个不是测定铜的荧光分析方法？【】A 直接荧光法B 间接荧光法C 荧光猝灭法D 荧光滴定法10 下列哪个物质不曾用于钒的荧光测定？【】A 间苯二酚B 苯甲酸-锌汞齐C 1-氨基-4-羟基蒽醌D 桑色素11 下列哪个pH值会使铁离子与氨基酚反应的产物具有相对较强的荧光？【】A 6B 7C 8D 912 同步荧光法可以对下列除哪种物质外进行同十测定？【】A 荧光黄B 罗丹明6GC 罗丹明BD 荧光红二．判断正误题（正确打“√”，错误打“×”，将答案填写在【】内。
(完整word版)分子发光分析(习题及答案)
分子发光分析
一、选择题
1. Stokes位移是指分子的荧光发射波长总是比其相应的吸收(或激发)光谱的波长( 1 )
(1) 长(2) 短(3) 相等(4) 无法比较
2. 发射光谱的形状与激发波长（4 ）
(1) 有关(2) 无关(3) 不确定(4) 前三者都有可能
3.电子由第一激发单重态的最低振动能级返回到基态的过程是发射( 1 )
(1) 荧光(2) 磷光(3) 化学发光(4) 拉曼光
4. 电子由第一激发三重态的最低振动能级返回到基态的过程是发射( 2 )
(1) 荧光(2) 磷光(3) 化学发光(4) 拉曼光
5. 荧光是一种( 3 )现象
(1) 热致发光(2) 场致发光(3) 光致发光(4) 生物发光
6. 下列哪种分子结构不利于产生荧光？( 3 )
(1) 具有ππ*跃迁(2) 具有刚性平面结构
(3) 具有吸电子基团(4) 具有长的共轭结构
二、填空题
1. 荧光物质分子都有两个特征光谱，即____激发光谱_________和______发射光谱_______。
2. 荧光发射光谱与它的激发光谱成____镜像_________关系。
三、简答题
1. 激发态分子常见的非辐射的去活化过程有哪几种？试分别加以说明。
2. 如何区别荧光和磷光？。
一、单选题1. UV-Vis 吸收光谱是由（ ） A. 最内层原子轨道上的电子跃迁产生 B. 原子最外层电子跃迁产生 C. 分子价电子能级跃迁产生D. 分子振动和转动产生2. 下列有关有机化合物外层电子能级跃迁的哪种表述是正确的（ ） A. σ→σ*有最低的能量 B. π→π*最低的能量C. n →π*有最低的能量D. n→σ*可产生波长最大的吸收3. 某化合物在己烷和乙醇中的λmax 分别为305和307 nm ，则该化合物的跃迁是下列哪种跃迁（ ）A. π→π*B. n →π*C. n →σ*D. σ→σ*4. 下列哪种化合物中不存在π→π*跃迁（ ） A. 乙烯B. 丙酮C. 苯乙炔D. 乙醇5. 当pH 由酸性变为碱性，苯酚的最大吸波长将发生何种变化（ ） A. 红移B. 蓝移C. 不变D. 不能确定6. 分光光度计中控制波长纯度的元件是（ ） A. 棱镜B. 光栅C. 狭缝D. 光栅+狭缝7. 某浓度待测物的透射比为T ，若其它条件不变，浓度增大一倍后的透射比应为（ ） A. 2TB. 2/TC. T 2D.T8. 在符合朗伯-比尔定律的范围内，有色物质的浓度、最大吸收波长和吸光度三者的关系为（ ） A. 增大、增大、增大 B. 减小、不变、减小 C. 减小、增大、减小D. 增大、减小、不变9. 指出下列哪种因素不会产生对朗伯-比尔定律的偏差（ ）A. 溶质的离解作用B. 杂散光进入检测器C. 溶液的折射指数增加D. 改变吸收光程长度 10. 下列哪种化合物不太适合作为UV 光谱测定时的溶剂（ ）A. 环己烷B. 甲醇C. 乙腈D. 甲苯11. 质量相同的A 、B 物质（摩尔质量M A >M B ），经过显色测量后所得吸光度相等，则它们的摩尔吸光系数的关系为（ ） A. εA >εBB. εA <εBC. εA =εBD. εA <1/2εB12. 在符合朗伯-比尔定律的范围内，以下说法正确的是（ ）A. 溶液透射比T 越大，说明对光的吸收越强B. 透射比T 与浓度成正比C. 摩尔吸光系数随λ改变，但与浓度无关D. 摩尔吸光系数随λ和浓度而改变13.以下说法正确的是（）A. 透射比与浓度呈直线关系B. 助色团可使生色团的吸收波长红移C. 比色法测定FeSCN+时，应选用红色滤光片D. 玻璃棱镜适合紫外光区14.在吸收光谱曲线中，吸光度的最大值是偶数阶导数光谱曲线的（）A. 极大值B. 极小值C. 零D. 极大或极小值15. 双波长分光光度计和单波长分光光度计的主要区别在于（）A. 光源个数B. 检测器个数C. 吸收池个数D. 使用单色器个数16. 双波长分光光度计的输出信号是（）A. 试样吸收与参比吸收之差B. 试样在λ1与λ2处的吸收之差C. 试样在λ1与λ2处的吸收之和D. 试样在λ1和参比在λ2处的吸收之差17. 示差分光光度法与普通分光光度法的不同之处是（）A. 标准溶液不同 D. 所选测定波长不同B. 参比溶液不同 D. 使用的光程不同18. 用普通分光光度法测定标液c1的透射比为20%，试液透过率为12%；若以示差光度法测定，以c1为参比，则试液的透射比透光度为（）A. 40%B. 50%C. 60%D. 70%19. 某分光光度计的测量误差∆T=，在透射比T=70%时，由测量引起的浓度相对误差为（）A. 2%B. 8%C. 6%D. 4%20. 邻二氮菲法测定铁时，应在加入盐酸羟胺摇匀后应放置至少2分钟后再加显色剂邻二氮菲，若放置时间不足，则分析结果很可能会（）A. 无影响B. 不一定C. 偏低D. 偏高21. 邻二氮菲法测定水中微量铁含量的分析步骤是（）A. 还原－发色－调节pH－比色－酸化B. 酸化－还原－调节pH－发色－比色C. 发色－酸化－还原－调节pH－比色D. 调节pH－发色－还原－酸化－比色22. 在吸光光度法中，有时会出现标准曲线不通过原点的情况，下列哪种情况不会引起这一现象（）A. 吸收池位置放置不当B. 参比溶液选择不当C. 吸收池光学玻璃不洁净D. 显色反应灵敏度较低23．用紫外吸收光谱区别共轭烯烃和α,β-不饱和酮可根据下列哪种吸收带出现与否来判断（）A. K带 B. R带 C. E带 D. B带24. 下列四种化合物λmax的顺序为（）（a）CH CH CH CH2（b）CH CH2C2H5（c）CH CH CH CH2（d）CH CH2C2H5A. b>c>d>aB. a>d>c>bC. b>d>c>aD. a>c>d>b25. 下列关于荧光发射光谱的叙述中正确的是（）A. 发射与激发光谱在任何情况下都是镜像关系B. 发射光谱的形状与激发波长无关C. 发射光谱位于激发光谱的左侧D. 发射光谱就是分子的吸收光谱26. 用波长300 nm的入射光激发硫酸奎宁的稀硫酸溶液时，所产生的300 nm的发射光是（）A. 荧光B. 磷光C. Reyleigh散射D. 无法判断27.分子荧光分光光度计常用的光源是（）A. 空心阴极灯B. 氙灯C. 氘灯D. 碳硅棒28. 荧光分析法是通过测定那种类型的光而达到对物质定性或定量分析的目的（）A. 激发光B. 磷光C. 发射光D. 散射光29. 下列是化学发光仪必须的元件是（）A. 光电倍增管B. 光栅C. 氘灯D. 氙灯30. 荧光物质，随溶液的温度降低，其荧光量子率将（）A. 减小B. 增大C. 不变D. 不能确定31. 极性溶剂会使被测物质的UV-Vis吸收光谱（）A. 消失B. 精细结构更明显C. 发生位移D. 分裂32. 分子的UV-Vis吸收光谱为带状光谱，其原因是（）A. 分子中价电子运动的离域性质B. 分子中价电子能级的相互作用C. 分子振动能级的跃迁伴随着转动能级的跃迁D. 分子电极能级的跃迁伴随着振动、转动能级的跃迁33. 某化合物分子式为C5H8O，其UV光谱上有两个吸收带：λmax=204 nm（εmax=9750）；λmax=314 nm （εmax=38）。
第五章分子发光分析法习题答案第五章分子发光分析法2、简述影响荧光效率的主要因素答：荧光效率（Ψ?）＝发荧光的分子数/激发态分子总数。
荧光效率越高，辐射跃迁概率越大，物质发射的荧光也就越强，则Ψ?＝K?/( K?+∑Ki)，一般来说，K?主要取决于物质的化学结构，而∑Ki则主要取决于化学环境，同时也与化学结构有关，其影响因素有：①分子结构：发荧光的物质分子中必须含有共轭双键这样的强吸收基团，且共轭体系越大，л电子的离域性越强，越易被激发而产生荧光。
随着共轭芳环增大，荧光效率提高，荧光峰向长波方向移动。
②a其次，分子的刚性平面结构有利于荧光的产生，有些有机配位剂与金属离子形成螯合物后荧光大大增强；b给电子取代基如－OH、－NH2、－NR2和-OR等可使共轭体系增大，导致荧光增强；吸电子基如－COOH、－NO 和－NO2等使荧光减弱，c随着卤素取代基中卤素原子序数的增加，物质的荧光减弱，而磷光增强。
③环境a溶剂的极性增强，对激发态会产生更大的稳定作用，结果使物质的荧光波长红移，荧光强度增大；b对于大多数荧光物质，升高温度会使非辐射跃迁概率增大，荧光效率降低；c大多数含酸性或碱性取代基团的芳香族化合物的荧光性质受溶液PH的影响很大；d溶液中表面活性剂的存在减小非辐射跃迁的概率，提高荧光效率；e溶液中溶解氧的存在，使激发态单重态分子向三重态的体系间窜跃速率加大，会使荧光效率减低。
3、试从原理和仪器两方面比较吸光光度法和荧光分析法的异同，并说明为什么荧光法的检出能力优于吸光光度法答：原理：紫外－可见吸收光谱法是根据溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的吸收来研究物质的组成和结构的方法，而荧光分析法是由于处于第一激发单重态最低能级的分子以辐射跃迁的形成返回基态各振动能级时产生的荧光的分析方法，两者的区别在于前者研究的是吸收光谱，且电子跃迁为激发态的振动能级到基态的振动能级间的跃迁。
仪器：荧光分析仪器与分光光度计的主要差别有：a 荧光分析仪器采用垂直测量方式，即在与激发光相垂直的方向测量荧光，以消除透射光的影响；b 荧光分析器有两个单色器，分别用于获得单色器较好的激发光和用于分出某一波长的荧光，消除其它杂散光干扰。
分子发光分析法基态分子吸收了一定能量后，跃迁至激发态，当激发态分子以辐射跃迁形式将其能量释放返回基态时，便产生分子发光(Molecular Luminescence)。
依据激发的模式不同，分子发光分为光致发光、热致发光、场致发光和化学发光等。
光致发光按激发态的类型又可分为荧光和磷光两种。
本章讨论分子荧光(Molecular Fluorescence)、分子磷光(Molecular Phosphorescence)和化学发光(Chemiluminescence)分析法。
第一节荧光分析法一、概述分子荧光分析法是根据物质的分子荧光光谱进行定性，以荧光强度进行定量的一种分析方法。
早在16世纪，人们观察到当紫外和可见光照射到某些物质时。
这些物质就会发出各种颜色和不同强度的光，而当照射停止时，物质的发光也随之很快消失。
到1852年才由斯托克斯(Stokes)给予了解释，即它是物质在吸收了光能后发射出的分子荧光。
斯托克斯在对荧光强度与浓度之间的关系进行研究的基础上，于1864年提出可将荧光作为一种分析手段。
1867年Goppelsroder应用铝—桑色素络合物的荧光对铝进行了测定。
进入20世纪，随着荧光分析仪器的问世，荧光分析的方法和技术得到了极大发展，如今已成为一种重要且有效的光谱分析手段。
荧光分析法的最大优点是灵敏度高，它的检出限通常比分光光度法低2~4个数量级，选择性也较分光光度法好。
虽然能产生强荧光的化合物相对较少，荧光分析法的应用不如分光光度法广泛，但由于它的高灵敏度以及许多重要的生物物质都具有荧光性质。
使得该方法在药物、临床、环境、食品的微量、痕量分析以及生命科学研究各个领域具有重要意义。
二、基本原理(一)分子荧光的产生大多数分子含有偶数电子。
根据保里不相容原理，基态分子的每一个轨道中两个电子的自旋方向总是相反的，因而大多数基态分子处于单重态(2S+1=1)，基态单重态以S0表示。
当物质受光照射时，基态分子吸收光能就会产生电子能级跃迁而处于第一、第二电子激发单重态，以S1、S2表示。
分子发光分析中国·武汉 二O 一五 年 六 月华中农业大学本科课程考试试卷考试课程与试卷类型：分子发光分析姓名：学年学期：2014-2015-2 学号：考试时间：班级：一、选择题（选出一个正确答案，将序号填写在【】里。
每小题1分，共12分。
）1．下列哪一项不是n→π*跃迁的最低激发单重态的性质【】A．是自旋禁阻的跃迁B．摩尔吸光系数小C．激发态寿命长D．S1到T1系间窜越的几率小2．下列哪一种分子的去激发过程是磷光过程? 【】A．分子从第一激发三重态的最低振动能级返回到基态B.分子从第二激发单重态的某个低振动能级过渡到第一激发单重态C.分子从第一激发单重态非辐射跃迁至三重态D. 分子从第一激发单重态的最低振动能级返回到基态3．荧光属于下列哪一种放光形式【】A．化学发光B．光致发光C．生物发光D．场致发光4．下列关于强荧光物质应具有的特征错误的是【】A．具有大的共轭π键结构B．具有刚性的平面结构C．取代基团为吸电子基团D．具有最低的单线电子激发态S1为π，π1*型5．喹啉在下列哪种介质中荧光强度最高【】A．乙醇B．甲醇C．水D．苯6．下列化合物磷光最强的是【】A．B．C．D．7．下列关于室温磷光法的说法错误的是【】A．固体基质室温磷光法所用的载体可以将分析物束缚在表面或基质中而增加其刚性B．胶束增稳的溶液室温磷光法利用了胶束对磷光团的约束力而减少了内转化和碰撞能量损失C．室温磷光法中分析物的磷光量子产率通常比低温磷光法中的高D．敏化溶液室温磷光法的分析物质本身并不发射磷光，而是引发受体发磷光8．分子荧光分析法比紫外-可见分光光度法的灵敏度高2～4个数量级的原因【】A．荧光物质的摩尔吸光系数大；提高激发光的强度可以提高荧光的强度B．荧光信号是在暗背景下测量的；提高激发光的强度可以提高荧光的强度C．荧光发射的量子产率高；荧光物质的摩尔吸光系数大D．荧光发射的量子产率高；9．在分子荧光分析法中，下面说法正确的是【】A．荧光发射光谱不随激发波长的变化而改变B．荧光发射光谱要随激发波长的变化而改变C．荧光激发光谱与它的紫外－可见吸收光谱互为镜像对称关系D．荧光发射光谱与它的紫外－可见吸收光谱形状相似且波长位置也一样10．在分子荧光测量中，要使荧光强度正比于荧光物质的浓度，必要的条件是什么？【】A．用高灵敏度的检测器B．在稀溶液中测量C．在最大摩尔吸光系数下测量D．在最大量子产率下测量11. Which factor has no effect on the fluorescence quantum yield molecule?【】A．molecular structureB．the presence of heavy atomsC．the concentration of the solutionD．the temperature of solution12．Which of the following group can enhance fluorescence intensity ？【】A．—NH2B．—COOHC．—NO2D．—NO二、判断正误题（正确打“√”，错误打“×”，将答案填写在【】内。
每题2分，共10分。
）1．【】Stokes位移是指分子的荧光发射波长总比其相应的磷光发射波长要长2．【】提高共轭度有利于增加化合物的荧光量子产率并产生红移3．【】有激发光照射时，苯酚在pH=1时无荧光发射，在pH=13时有荧光发射4．【】发生电子转移反应的熄灭剂不限于金属离子。
5．【】对于静态猝灭，猝灭剂的存在并没有改变荧光分子激发态的寿命三、名词解释（每小题5分，共20分。
）1．：荧光探针2．荧光量子产率3．激发光谱：4．延时荧光四、简答题（简要回答下列各题，要求依据明确、条理清楚。
共4小题，共30分。
）1．为什么荧光发射光谱和它的吸收光谱呈镜像对称关系?（6分）,2. 荧光分光光度计和紫外-可见分光光度计的主要区别是什么?(答出两点即可)（6分）3.荧光强度与荧光物质浓度的关系为F=Kc。
满足F=Kc公式的条件有哪些？（8分）4.从荧光衍生法、荧光猝灭法、荧光增强法、敏化荧光法和荧光偏振免疫分析法中选择两个分别简要说明其原理。
（10分）五、英文翻译（本大题共1小题，共10分。
）Fluorescence spectral data are generally presented as emission spectra. A fluorescence emission spectrum is a plot of the fluorescence intensity versus wavelength (nanometers) or wavenumber (cm-1). Two typical fluorescence emission spectra are shown in Figure 1.3. Emission spectra vary widely and are dependent upon the chemical structure of the fluorophore and the solvent in which it is dissolved. The spectra of some compounds, such as perylene, show significant structure due to the individual vibrational energy levels of the ground and excited states. Other compounds, such as quinine, show spectra devoid of vibrational structure.六、计算题（写出主要计算步骤及结果。
本大题共1小题，共10分。
）1. 用荧光分析法测定食品中维生素B2的含量：称取2.00g食品，用10.0mL氯仿萃取（萃取率100%），取上清液2.00mL，再用氯仿稀释为10.0mL。
维生素B2氯仿标准溶液浓度为0.100µg•mL-1。
测得空白溶液、标准溶液和样品溶液的荧光强度分别为：F o=2.0，F s=62.0，F x=59.0，求该食品中维生素B2的含量（µg•g－1）。
七：改错题（8分）下面是荧光分析法定量检测维生素B2的试验步骤，其中有3处错误，请指出来并解释原因。
1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液(10.0µg/mL) 0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL分别置于25mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
得浓度依次为0.20µg/mL、0.40µg/mL、0.60µg/mL、0.80µg/mL、1.00µg/mL的一系列维生素B2标准溶液。
待测。
2、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem＝540nm为发射波长，在500~1000nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。
从得到的激发光谱中找出最大激发波长，在此激发波长下，在250-500nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。
从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长λem。
3、标准溶液及样品的荧光测定固定任意一个激发波长和荧光发射波长。
测量上述系列标准维生素B2溶液的荧光发射强度。
数据记录于表中。
以溶液的荧光发射强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，制作标准曲线。
在同样条件下测定未知溶液的荧光强度，并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度，计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。
华中农业大学本科课程考试试卷参考答案与评分标准考试课程与试卷类型：分子发光分析姓名：学年学期：2014-2015-2 学号：考试时间：班级：一、选择题（每小题1分，共12分。
）1-5：DABCC 6-10：BCDAB 11-12：CA二、判断正误题（每题2分，共10分。
）1-5：×√×√√三、名词解释（每小题XX分，共XX分。
）1．：荧光探针与蛋白质或其他大分子结构非共价相互作用而使一种或几种荧光性质发生改变的小分子物质。
可用于研究大分子物质的性质和行为。
2．荧光量子产率定义为荧光发射量子数与被物质吸收的光子数之比，也可表示为荧光发射强度与被吸收的光强之比，或表示为荧光发射速率与吸收光速率常数之比，或者用公式表示： 荧光量子产率 =荧光发射量子数/吸收的光子数 = kf [S1]/吸光速率 = If/Ia，，只要给出一种定义即可。
3．激发光谱：在一定条件下，固定发射波长（λem），扫描激发波长（λex），记录荧光强度（F），以荧光强度F对激发波长λex作图得到的曲线为激发光谱。
激发光谱说明不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光的相对效率。
激发光谱形状与吸收光谱相似。
4．延时荧光分子受到激发后，处于激发单重态，通过内转换、振动弛豫和体系间跨越，跃迁到第一激发三重态的最低振动能级，如果分子再次受激发，又回到激发单重态，然后以辐射形式回到基态的各个振动能级发射的光。
四、简答题（简要回答下列各题，要求依据明确、条理清楚。
共4小题，共30分。
）1．基态（S0态）到S1态为激发谱,S1态到S0态为荧光谱.一般而言,S0和S1的振动能级相对比较接近能级间距比较近,所以光谱的形状比较相似；另外,从S0态到S1的振动态的吸收光谱与S1的振动基态到S0的各个振动能级的能量要高,所以,荧光光谱线对于激发谱要有所红移,于是形成了镜像。
意思正确即可。
2. （1）荧光分光光度计有两个单色器,而紫外只有一个单色器（2）荧光分光光度计的光源和检测器是成直角分布的,而紫外是成一条直线的.（3）荧光分光光度计是以氘灯做为光源,而紫外是以氢灯或氘灯作为紫外区光源,钨灯或卤钨灯作为可见光区的光源（4）荧光分光光度计的比色皿是四壁均为光学面,而紫外仅为两面为光学面.3.（1）入射光为单色光；（2）Ecl≤0.05；（3）入射光的强度I0一定；（4）样品池厚度一定。
（答出一个1分，两个3分，三个4分，四个5分。
）4.（下面任意答出一种得5分）荧光衍生法：是运用某种手段将自身不发荧光的分析物，转变成一种发荧光的化合物，再通过测定该化合物的荧光强度，以间接测定分析物。
荧光猝灭法：有些分析物本身不发荧光，但却能使某种荧光试剂的荧光发生猝灭，且荧光猝灭的程度与分析物的浓度有着定量的关系，通过测定该荧光试剂荧光强度的下降程度，便可间接地测定该分析物。
