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［作者简介］刘梅芳（1978－），女，本科，主管检验师，主要从事理化检验工作。
【化学测定方法】高效液相色谱法测定保健品中β－胡萝卜素刘梅芳1，李帮锐2，刘永康1，蔡亚辉1，冯家力2（1．湖南省岳阳市疾病预防控制中心，湖南岳阳414000；2．湖南省疾病预防控制中心，长沙410005）［摘要］目的：建立不同剂型保健品中（片剂样品、粉末状样品及油状样品）β－胡萝卜素的提取方法，同时采用高效液相色谱法进行测定。
方法：样品用水溶解破膜，以三氯甲烷提取，处理过程中加入维生素C及焦性没食子酸抗氧化，用HPLC测定β－胡萝卜素的含量。
结果：本法的线性范围为0．01mg/L 10．0mg/L，相关系数为0．9997，检测限为0．005mg/L，含微胶囊的片剂，粉状，油状样及不含微胶囊的油状样品平均加标回收率分别为91．4%，96．3%，89．8%，101．8%，平均相对标准偏差分别为3．59%，3．17%，4．87%，2．86%。
结论：本法操作简单，提取效率高，能有效降低前处理过程中氧化损失，是一种测定保健品中的β－胡萝卜素的可靠方法。
［关键词］高效液相色谱;β－胡萝卜素;保健品［中图分类号］O657．7+2［文献标识码］A［文章编号］1004－8685（2013）04－0847－02 HPLC for determination ofβ－carotene in health care productsLIU Mei－fang1，LI Bang－rui2，LIU Yong－kang1，CAI Ya－hui1，FENG Jia－li2（1．Yueyang Center for Disease Control and Prevention，Yueyang414000，China；2．Hunan Provincial Center for Disease Control and Prevention，Changsha410005，China）［Abstract］Objective：To develop different methods forβ－carotene extraction in tablet samples，powder samples and oily samples，and theβ－carotene was determined by HPLC．Methods：β－carotene were extracted with chlor-oform after microcapsule membrane was ruptured by water．Vitamin C and pyrogallic acid were added during the whole process to prevent oxidation，thenβ－carotene conten in samples was determined by HPLC．Results：The lin-ear range ofβ－carotene was0．01mg/L 10．0mg/L，r=0．9997．The detection limit ofβ－carotene was 0．005mg/L．The average recoveries were from89．8%to101．8%，with RSD less than4．87%．Conclusion：The method is simple，sensitive，accuracy and reliable in determination ofβ－carotene in health care products．［Key words］HPLC；β－carotene；Health care products随着我国经济的发展，人们对食物的需求从温饱型转向功能型，保健食品应运而生。
第31卷 第5期2013年10月江 西 科 学JIANGXI SCIENCE Vol.31No.5Oct.2013 文章编号:1001-3679(2013)05-0596-03超高效液相色谱法测定螺旋藻片中β⁃胡萝卜素张 云 伟(江西省分析测试研究所,江西 南昌330029)摘要:建立了超高效液相测定天然β⁃胡萝卜素软胶囊中β⁃胡萝卜素的方法。
采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50mm,1.7μm)色谱柱,以甲醇为流动相,流速为0.3mL/min,柱温为40℃,检测波长为450nm,β⁃胡萝卜素与其它组分分离良好。
回收率在80%~90%之间。
本方法简便快速,结果准确可靠。
关键词:超高效液相色谱法;螺旋藻片;β⁃胡萝卜素中图分类号:O657.7+2 文献标识码:ADetermination ofβ⁃carotene in Spirulina Tabletsby Ultra Performance Liquid ChromatographyZHANG Yun⁃wei(Jiangxi Institute of Analyzing and Testing,Jiangxi Nanchang330029PRC)Abstract:A UPLC method for the determination ofβ⁃carotene in spirulina tablets was established. Using methanol as the mobile phase at flow rate0.3mL/min,the column temperature was40℃,β⁃carotene was completely separated from other composition on a ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50mm,1.7μm),then was detected at450nm.The average recovery for real samples ranged from 80%to90%.The method was simple,rapid,accurate and reliable.Key words:UPLC,Spirulina tablets,β⁃carotene0 引言螺旋藻含有丰富的β⁃胡萝卜素。
p中国科技核心期刊Special Wild Economic Animal and Plant Research2005年第2期57文章编号:1001-4721(2005)02-0057-04高效液相色谱法测定螺旋藻中几种色素的研究王林,朱惠贤,章新,吴献花,胡秋芬(玉溪师范学院化学与环境科学系,云南玉溪653100)摘要:目的建立螺旋藻中主要色素成分(叶绿素-a、叶绿素-b、叶黄素、B-胡萝卜素和新叶黄素)的高效液相色谱快速分析方法。
方法螺旋藻中的色素用90%的丙酮提取,以安捷仑ZORBAX Stable Bound(2.1@50m m,1.8L m)色谱柱为固定相,四氢呋喃和水梯度洗脱为流动相,用二极管矩阵检测器检测。
结果5种色素在2.0min内分离,标准回收率为98%~102%,相对标准偏差为1.1%~1.4%。
结论本方法样品前处理简便、快速,分析时间比常规色谱柱大大缩短,较常规色谱柱流动相消耗减少,结果满意。
关键词:高效液相色谱;固相萃取;螺旋藻;色素中图分类号:O657.7+2;Q949.2文献标识码:A螺旋藻属是一种新型食品能源。
其蛋白质含量高,氨基酸组成可与鸡蛋、牛奶相媲美,且易被人体和动物消化吸收;此外,还含有丰富的维生素原和色素,可作为食品的天然添加剂。
因此,近年来螺旋藻引起了各国生物技术开发部门的广泛重视。
天然植物色素是螺旋藻中的重要营养成分,目前色素的测定方法主要有光度法和色谱法,其中高效液相色谱法是最有效的方法[3~5]。
由于微柱高效液相色谱具有流动相消耗小、分析时间短、可不分流直接和质谱连用等特点,近几年来得到了迅速发展[7,8]。
我们研究了用安捷仑ZORBAX Stable Bound(2.1@50mm, 1.8L m)微柱高效液相色谱分析螺旋藻中色素的方法,几种主要的色素成分在2.0min内可达到基线分离,大大缩短了分析时间,而且流动相流速只需0.3mL/min。
1试验部分111主要仪器与试剂美国安捷仑公司1100高效液相色谱仪,包括H P1100四元泵、H P1100紫外二极管矩阵检测器、HP1100自动进样器、Chem Station色谱工作站。
超高效液相色谱法测定螺旋藻片中β-胡萝卜素
张云伟
【期刊名称】《江西科学》
【年(卷),期】2013(031)005
【摘要】建立了超高效液相测定天然β-胡萝卜素软胶囊中β-胡萝卜素的方法.采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50 mm,1.7 μm)色谱柱,以甲醇为流动相,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,检测波长为450 nm,β-胡萝卜素与其它组分分离良好.回收率在80％～90％之间.本方法简便快速,结果准确可靠.
【总页数】3页(P596-598)
【作者】张云伟
【作者单位】江西省分析测试研究所,江西南昌330029
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7+2
【相关文献】
1.RP-HPLC法测定螺旋藻中β-胡萝卜素的含量 [J], 罗光宏;王勤;袁小龙;祖廷勋
2.超高效液相色谱法测定天然β-胡萝卜素软胶囊中β-胡萝卜素 [J], 张云伟;鄢兵
3.超高效合相色谱/二极管阵列检测器测定螺旋藻保健食品中的类胡萝卜素 [J], 李兵;赵海燕;刘伟;范赛;李丽萍;吴国华;薛颖;赵榕
4.超声萃取-超高效液相色谱法快速测定烤烟中的类胡萝卜素 [J], 李小玉; 肖丽凤; 杨懋勋
5.超高效液相色谱法测定饲料中斑蝥黄和β-阿朴-8'-胡萝卜素酸乙酯含量方法的研究 [J], 章厉劼;钱莘莘;孙真峥;王庆红;廖欢;赵贵
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文章编号：1673—2103（201205— 0030— 05螺旋藻粉B-胡萝卜素含量测定方法的优化*赵楠1,李勇勇1,邵明飞2,郁章玉1,3，秦松4（1 •曲阜师范大学化学与化工学院，山东曲阜273165;2 •南京农业大学资源与环境科学学院江苏省海洋生物学重点实验室，江苏南京210095;3 •菏泽学院化学与化工系，山东菏泽274015;4•中国科学院烟台海岸带研究所生物资源实验室，山东烟台264003摘要:采用可见分光光度法测定螺旋藻藻粉中B-胡萝卜素含量，并对测定过程中有关B—胡萝卜素的提取工艺进行了优化，确定了最佳工艺参数为：提取剂为v （正庚烷?V（丙酮?（无水乙醇?V （甲苯=10?7?6?7,提取剂体积为30mL ,浸提时间为12h，浸提温度为35?.在该工艺下测得螺旋藻藻粉的B—胡萝卜素含量为134. 15mg /100g.关键词:螺旋藻粉；阡胡萝卜素；含量;测定中图分类号：Q562文献标识码:A螺旋藻是丝状的多细胞蓝藻，具有很高的药用及营养价值，被联合国粮油组织推荐为“21 世纪最优秀的食品”.螺旋藻中B—胡萝卜素的含量非常丰富，所含的B—胡萝卜素达1700mg /kg （干重［1］•B-胡萝卜素是维生素A的前体物质，大量研究证实B-胡萝卜素是有效的抗氧化剂，能消除人体中的活性氧，消除自由基，在防癌［2］抗癌［3］、预防心血管疾病，增强免疫功能［4］等方面有明显作用［5］•螺旋藻粉中的B—胡萝卜素含量为所有食物之冠，比胡萝卜中的B—胡萝卜素含量还要高出10倍⑹•B—胡萝卜素作为螺旋藻综合开发利用的一种功能因子，有很大的商业化前景•因此，有关螺旋藻中B—胡萝卜素成分的研究和测定方法倍受重视•目前常用的测定p-胡萝卜素含量的方法有纸层析法、分光光度法和高效液相色谱法［7,8］•由于高效液相色谱法样品的前处理较为麻烦且所需仪器昂贵,所以还未能广泛普及•而纸层析法步骤比较繁琐，故本文采用分光光度法进行螺旋藻粉B-胡萝卜素含量的测定，并对该方法操作条件进行优化•1材料与方法材料螺旋藻粉,2011年12月份购于广西，置于阴凉抽屉中避光保存.1. 2试剂与仪器仪器:恒温水浴锅，上海福玛试验设备有限公司产品；电子分析天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司产品；TU - 1901紫外可见分光光度计，北京普析通用有限责任公司产品；50mL具塞比色管，分液漏斗等.试剂:标准B—胡萝卜素（Sigma公司产品，质量分数〉97%,无水硫酸钠、正庚烷、丙酮、无水乙醇、甲苯、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、石油醚均为国产分析纯.1. 3B-胡萝卜素最大吸收波长的测定及标准曲线的绘制[5]取一定量的胡萝卜素标准品，溶解在石油醚中,在波长300 600nm范围内，用紫外可见分光3第34卷第5期Vol . 34No. 5菏泽学院学报Journal of Heze University 2012年10 月Oct. 2012*收稿日期:2012- 10- 09基金项目：国家海洋公益性行业科研专项经费项目（201205027国家海洋公益性行业科研专项经费项目（200905021—3;山东省自然科学基金资助项目（JQ200914山东省自然科学基金资助项目（ZR2012DQ015作者简介:赵楠（1987—,女,山东临沂人，在读硕士研究生，研究方向：分析化学.有障玉（I960—，男，山东临沂人教授，博士生导师，研究方向：生命电分析化学•秦松（1968—，男，山东莱州人，研究员，博士生导师，研究方向:海岸带生物技术.光度计进行波谱扫描，得到B-胡萝卜素的特征吸收峰，作为B-胡萝卜素的测定波长.准确称取2. 50mg3—胡萝卜素标准品，溶于石油醚，并定容于100mL棕色容量瓶中,配制成25ug/mL的B—胡萝卜素标准溶液，分别吸取0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0mL于5个10mL棕色容量瓶中，用石油醚定容，以石油醚为参比溶液，在450nm处测定各样品的吸光度，并绘制标准曲线.1. 4样品的测定准确称取0. 2g左右的螺旋藻藻粉于50mL的比色管中加入30mL提取剂和1mL 质量浓度为400g/L的KOH溶液，混合均匀；比色管放于35?恒温水浴中浸泡12h后,将浸泡液过滤，滤液倒入内盛50mL的20g/L硫酸钠溶液的250mL分液漏斗中，用10mL提取剂冲洗滤渣，重复两次,将洗液、过滤液收集到分液漏斗中.向分液漏斗中加入30mL乙醚及100mL蒸馏水，振摇后静置分层，弃去下层溶液，上层溶液再重复萃取两次.萃取所得上层溶液通过一装有10g无水硫酸钠的小漏斗滤入100mL棕色容量瓶中，用少量石油醚洗涤分液漏斗，并洗去无水硫酸钠表面的色素，定容至刻度线，摇匀，用分光光度计测定其在450nm处的吸光度.1. 5提取剂在50mL具塞比色管中加入0. 2g螺旋藻粉后再分别加入30mL下列溶液:V（正庚烷?V（丙酮?V（无水乙醇?V（甲苯=10?7?6?7;V （石油醚?V（丙酮=1?1;V（甲醇?V（石油醚=2?1;乙酸乙酯;V（石油醚?V（丙酮=4?1;V （丙酮?V（氯仿=1?2;V（丙酮?V（甲醇=7?2;石油醚.其余步骤按1. 4所述步骤进行操作.1. 6浸提温度在50mL具塞比色管中加入0. 2g螺旋藻粉、30mL最佳提取剂后，分别于25,35,45,55,65, 75?恒温水浴中浸泡12h,其余步骤按1. 4所述步骤进行操作.1. 7提取剂体积在50mL具塞比色管中加入0. 2g螺旋藻粉后，再分别加入15,20,25,30,35,40mL 最佳提取剂，于最佳浸提温度恒温水浴中浸泡12h其余步骤按1. 4所述步骤进行操作.1. 8浸提时间在50mL具塞比色管中加入0. 2g螺旋藻粉、最佳提取剂体积的提取剂后，于最佳温度恒温水浴中，分别密封避光浸泡2,4,6,8,10,12h其余步骤按1. 4所述步骤进行操作.1. 9正交试验设计采用L9（33正交试验表，以V（正庚烷？V（丙酮?V（无水乙醇?V（甲苯=10?7?6?7为提取剂，选取浸提温度、提取剂体积、浸提时间3个因素，每个因素取3个水平，其因素水平见表1.表1L9（33正交试验的因素水平水平A浸提温度/?B提取剂体积/mL C浸提时间/h 125258235301034540122结果与分析2. 1 p-胡萝卜素的吸收光谱及标准曲线图B—胡萝卜素的吸收光谱，如图1所示•从图1可见，—胡萝卜素在波长300 600nm范围内有两处较大的吸收峰，其中在450nm处吸收峰值最大,是B—胡萝卜素的特征吸收峰,本试验选择450nm作为阡胡萝卜素的测定波长Alflgbhblip-.1 'Hww ■didLLiMlMtdf 耳Imui E图1 B—胡萝卜素光谱扫描曲线B—胡萝卜素的质量浓度（p在0 2. 5ug/mL范围内与吸光度值（A呈现很好的线性关系，如图2所示.其标准曲线公式为:A=0 . 3089p—0. 0088, r2=0. 999ChhnAllMhiriwt I low.■.J FWW jeribLnil1*4-101 Tl lMWtniN' Iwni* fJiKWnwfl:-Hr(4*n-■fl.t5.图2 B—胡萝卜素的标准曲线132012年赵楠，等:螺旋藻粉B-胡萝卜素含量测定方法的优化第5期2. 2提取剂对B-胡萝卜素含量测定的影响各提取剂对胡萝卜素含量测定的影响见表2.由表2知,V（正庚烷？V（丙酮?V （无水乙醇?V（甲苯=10?7?6?7为最佳提取剂，其提取到的胡萝卜素含量测定最高，以下实验中均以此为提取剂.表2提取剂对B-胡萝卜素含量测定的影响提取剂B—胡萝卜素测定含量/（mg/100g标准偏差V（正庚烷?V（丙酮?V（无水乙V（甲苯=10?7?6?7134. 51?）. 869 V（石油醚?V（丙酮=1?198. 75?）. 800 V（甲醇?V（石油醚=2?178. 97?1. 640乙酸乙酯119. 7?1. 253 V（石油醚?V（丙酮=4?185. 85?1. 523 V（丙酮?V（氯仿=1?294. 42?1. 406 V（丙酮?V（甲醇=7?291. 69?2. 193 石油醚125. 83?3. 1872. 3浸提温度对胡萝卜素含量测定的影响随着浸提温度的升高,，胡萝卜素的测定含量呈先增大后减小的趋势，见表3.当恒温水浴温度为35?时，卜胡萝卜素测定的含量最大，为134. 15mg/100g.此后随着恒温水浴温度的升高,，胡萝卜素的测定含量开始平缓地减小.这表明适当地提高浸提温度可提高胡萝卜素的测定含量，过高的温度可能会影响B-胡萝卜素的稳定性，可能会使阡胡萝卜素发生降解而被破坏，使得阡胡萝卜素的测定含量较低.表3浸提温度对B-胡萝卜素含量测定的影响浸提温度/?旷胡萝卜素测定含量/(mg/100g标准偏差25125. 79?3. 463 35134. 15?0. 869 45127. 59?0. 723 55118. 36?1. 562 65121. 56?2. 785 75109. 89?1. 2602. 4提取剂体积对B—胡萝卜素含量测定的影响当提取剂体积为30mL时提取效果较好，此时提取物中的f—胡萝卜素的测定含量达到最高值，见表4.试验表明，提取剂的体积过大或过小，都不利于f—胡萝卜素的提取，因此30mL为最佳提取剂体积.表4提取剂体积对f—胡萝卜素含量测定的影响提取剂体积/mL f-胡萝卜素测定含量/(mg/100g标准偏差15113. 88辺.10920118. 34?3. 06925118. 78?5. 21230134. 5170. 86935116.517. 65440121. 8772. 698232012年菏泽学院学报第5期2. 5浸提时间对胡萝卜素含量测定的影响当浸提时间为12h时，浸提效果最好，此时提取物中的3-胡萝卜素测定含量达到最高值为134. 15mg/100g见表5.浸提时间过短，不利于3-胡萝卜素的充分溶出.随着浸提时间的延长,-胡萝卜素测定含量逐渐增大.表5浸提时间对3—胡萝卜素含量测定的影响浸提时间/h —胡萝卜素测定含量/（mg/100g标准偏差2109. 17?2. 3274111. 85辺.613 6115. 11?2. 023 8117. 04?2. 544 10126. 4271. 732 12134. 5170. 8692. 6正交设计优化提取工艺3—胡萝卜素含量测定的正交试验结果见表6.由表6可知，影响3—胡萝卜素含量测定的因素依次为：浸提温度〉提取剂体积〉浸提时间，最佳提取工艺为A2B2C3,即以V（正庚烷?V（丙酮?V（无水乙醇?V（甲苯=10777677为提取剂，提取剂体积为30mL,浸提时间为12h,浸提温度为357.表6L(33正交试验结果与分析试验号A浸提温度/?B提取剂体积/mL C浸提时间/h阡胡萝卜素含量/(mg/100g 111199. 20212297.773133103.284212105.675223126.42623112187.731397.458321108.03933295.82K1100. 08100. 77109. 70K2117. 99110. 7499. 75K100. 43106. 99109. 05R17. 919. 979. 95优水平A2B2C3主次因素A > B >C3讨论与结论1 3-胡萝卜素易被氧化，见光易分解，故本试验须在遮光条件下进行.样品在提取过程中，遮光条件下浸泡12h,在一定程度上减少了3-胡萝卜素的损失，从而提高了3—胡萝卜素的测定含量.2通过正交试验得出,提取3-胡萝卜素的最佳工艺条件为：V（正庚烷？V（丙酮?V（无水乙332012年赵楠，等:螺旋藻粉3-胡萝卜素含量测定方法的优化第5期醇?V（甲苯=10?7?6?7为提取剂，提取剂体积为30mL,35?下浸提12h;在最佳工艺条件下3—胡萝卜素的测定含量为134. 5mg/100g.3本试验方法简单，实验所需仪器均较为普通，便于企业生产过程对3-胡萝卜素进行快速检测及监控.参考文献：[1] 王文博.螺旋藻的生物活性成分分析及其免疫特性研究[D].呼和浩特:内蒙古农业大学,2009.[2] 赵文恩，韩雅珊，苏震，等.类胡萝卜素对H202—NaCIO体系生成的102的淬灭作用[J].生物物理学报,1997,13(1:137—142.[3] Gregory G K,Chen T S,Philip T. 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Biological Resources Laboratory,Yantai Institute of Coastal Zone Research,Chi nese Academy of Scie nces,Ya ntai Sha ndo ng264003,Chi naAbstract:I n this paper,the beta- carote ne of Spiruli na Powder was determ ined by UV —visible spectropho-tometry. The process for the extraction of bet—carotene was optimized as followed:n —hepta ne?acet on e?etha-nol ?toluene=10?7?6?7as extracti on age nt,extracti on solve nt volume30mL,the extract ion time12h,extrac-ti on temperature35?Key words:Spiruli na Powder;Beta— carote ne;c onten t;determ ine2012年菏泽学院学报第5期。
高效液相色谱法测定β-胡萝卜素含量任科;李清平;张海容【摘要】用高效液相色谱法(HPLC)同时测定野核桃、胡萝卜两种食品中的β-胡萝卜素含量.采用的色谱条件为:Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),以60%乙腈、20%乙酸乙酯、20%甲醇混合溶液为流动相,在波长450 nm,柱温25 ℃流速1 mL/min;进样量10 μL条件进行试验.在优化实验条件下,测得野核桃中含β-胡萝卜素为6.5 μg/g,胡萝卜中含β-胡萝卜素为358.15 μg/g.方法简便、快速,适合高效液相色谱法测定植物样品中β-胡萝卜含量.%The contents of β-carotene in wild walnut and carrot were simultaneously determined by HPLC. The chromatographic conditions were as follows:symmetryC18column (4.6 mm×250 mm,5 μm) was used with mobile phase of a mixture of 60% acetonitrile, 20% methanol at a wavelength of 450 nm, and a column temperature of 25 ℃ with 1 mL/min as the flow rate, injection volume of 10 μL. Under the optimized experimental conditions, the β-carotene content was obtained in wild walnut conta ining 6.5 μg/g and in carrots containing 358.15 μg/g for real samples. The method was simple, rapid and suitable for the determination of β-carrot content in plant samples by high performance liquid chromatography.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2018(046)004【总页数】3页(P104-106)【关键词】β-胡萝卜素;高效液相色谱;野核桃;胡萝卜【作者】任科;李清平;张海容【作者单位】忻州师范学院生化分析研究所,山西忻州 034000;忻州师范学院生化分析研究所,山西忻州 034000;忻州师范学院生化分析研究所,山西忻州 034000【正文语种】中文【中图分类】O657.7β-胡萝卜素(C40H56)是类胡萝卜素之一，也是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。
高效液相色谱法测定保健食品中β-胡萝卜素蔡伟江;黄康惠【摘要】建立保健食品中β-胡萝卜素含量的测定方法。
采用高效液相色谱法，色谱柱：岛津Inertsil C18（4.0 mm ×75 mm，3μm），以甲醇∶乙腈=90∶10为流动相，流速1.0 mL/min。
结果：β-胡萝卜素的浓度与峰面积线性关系良好（R2=0.99981），平均回收率为99.4%，RSD=0.4%（n=9）。
因此，高效液相色谱法可靠、灵敏、快速，可用于保健食品中β-胡萝卜素含量测定。
%To establish a method for determination ofβ-carotene in health foods. Methods:high performance liquid chromatography (HPLC), column:using Shimadzu Inertsil C18column (4.0 mm ×75 mm, 3 μm),Methanol∶Acetonitrile=90∶10 as the mobile phase, flow rate:1.0 mL/min. The linear relatio nship betweenβ-carotene concentration and peak area are good (R2=0.999 81), the average recovery was99.3%,RSD=0.4%(n=9).Conclusion:The method is reliable, sensitive, rapid and can be used for determination ofβ-carotene in health foods.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2016(037)004【总页数】3页(P161-163)【关键词】β-胡萝卜素;保健食品;高效液相色谱;含量测定【作者】蔡伟江;黄康惠【作者单位】汤臣倍健股份有限公司，广东珠海519040;汤臣倍健股份有限公司，广东珠海519040【正文语种】中文β-胡萝卜素是类胡萝卜素之一，是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。
快速溶剂萃取-超高效液相色谱法测定螺旋藻中β-胡萝卜素的含量咸瑞卿，李启艳，刁飞燕，王小兵，胡德福（山东省食品药品检验所，山东济南 250101）摘要：本文采用快速溶剂萃取技术结合超高效液相色谱仪，建立了一种快速提取和测定螺旋藻中β-胡萝卜素含量的分析方法。
利用单因素试验和正交试验对快速溶剂萃取法从螺旋藻中提取β-胡萝卜素的工艺条件（萃取溶剂、温度、静态萃取时间和循环次数）进行优化，结果表明最佳工艺为：石油醚（30~60 ℃）为萃取溶剂，温度120 ℃，萃取时间5 min 、静态循环3次。
萃取液无需净化，经稀释过滤后用Agilent Eclipse Pluse C18色谱柱（1.8 μm ，2.1 mm ×50 mm ）分离，以甲醇:乙腈（85:15）为流动相，柱温为25 ℃，采用超高效液相色谱法，利用二极管阵列检测器于450 nm 波长处检测。
结果表明：β-胡萝卜素在1~50 μg/mL 范围内呈良好线性关系，相关系数0.999，加标回收率为98.65~103.18%，相对标准偏差为0.68~1.74%，检测限为0.10 mg/kg 。
该方法简便、快速、准确、灵敏度高、重现性好，适用于螺旋藻中β-胡萝卜素的含量测定及质量评价。
关键词：快速溶剂萃取；超高效液相色谱；螺旋藻；β-胡萝卜素 文章篇号：1673-9078(2014)3-239-243Determination of β-Carotene in Spirulina by ASE-UPLCXIAN Rui-qing, LI Qi-yan, DIAO Fei-yan, WANG Xiao-bing, HU De-fu (Shandong Institute for Food and Drug Control, Ji’nan, 250101, China)Abstract: A novel method has been developed for the rapid extraction and determination of β-Carotene in Spirulina by accelerated solvent extraction (ASE) coupled with ultra performance liquid chromatography (UPLC). The ASE parameters (extraction solvent, temperature, static time and cycles) were optimized by Single factor experiment and Orthogonal experiment design in order to maximize the extraction efficiency. The result showed that the optimum condition for extraction was as followed: petroleum ether (30~60 ℃) as solvent, extraction temperature of 120 ℃, extraction time of 5 min and static loop of three times. The ASE extract was then diluted and determined by UPLC on the Agilent Eclipse Pluse C18 column (1.8 μm, 2.1 mm×50 mm) at 25 ℃, using 85% CH 3OH-15% CH 3CN as mobile phase and a Diode array detector at 450 nm. The results showed that the linear ranges of β-Carotene was 1~50 μg/mL with correlation coefficient higher than 0.999. The recoveries ranged from 98.65% to 103.18% with RSDs of 0.68~1.74% and the limit of detection was 0.10 μg/kg. The method was simple, rapid and accurate, with high sensitivity and reproducibility, which was suitable for the determination of β-Carotene in Spirulina.Key words: accelerated solvent extraction; ultra performance liquid chromatography; Spirulina; β-Carotene螺旋藻是一种营养成分丰富的微型蓝藻，被联合国粮农组织（FAO ）誉为“21世纪最佳的理想食品”，也被世界卫生组织评为“人类21世纪的最佳保健品”[1]。
它不仅含有高蛋白、多糖、氨基酸、矿物质、不饱和脂肪酸等, 而且富含多种维生素，特别是β-胡萝卜素的含量是一般植物的十几至几十倍。
β-胡萝卜素是一种重要的营养添加剂和天然色素，不仅具有维生素A 的生物活性，而且在增强免疫、预防心血管和退化性疾病、抗癌及抗氧化上都有显著的功效[2~3]。
β-胡萝卜素是螺旋藻类产品的主要功效成分之239收稿日期：2013-10-20作者简介：咸瑞卿（1981-），男，主管药师，研究方向食品保健品检测 通讯作者：胡德福（1962-），男，主任药师，研究方向食品保健品检测一，但在日常检验工作发现螺旋藻产品中β-胡萝卜素的含量差异非常大，而且不合格产品较多，因此检测其含量是控制螺旋藻产品质量的重要方法。
目前食品中β-胡萝卜素多采用常规浸泡法提取，需用有机溶剂反复提取至提取液无色，提取液经浓缩后利用氧化铝层析柱净化[4]。
但对于存在大量叶绿素干扰的螺旋藻类样品，该方法不易判断提取终点，有机溶剂消耗量大，提取效率较低，操作繁琐。
β-胡萝卜素测定以反相高效液相色谱法检测为主[5~6]，但普遍存在流动相及洗脱程序复杂、与其它类胡萝卜素分离差、分析时间较长等问题。
因此开发建立一种快速、可靠、低消耗的β-胡萝卜素检测方法是加强螺旋藻类产品监管的迫切需求。
快速溶剂萃取技术（ASE ）是近年来发展起来的一种低耗、高效的样品前处理方法，其主要原理是通过高温（50~200 ℃）及高压（1000~3000 psi ）来破坏溶剂和基质之间的范德华力、氢键和偶极矩，增加物质溶解度和溶质扩散效率，以提高提萃效率。
与常用的索氏提取、超声提取、微波萃取技术等方法相比具有耗时少、消耗溶剂少、提取效率高、安全性高及自动化程度高等优点[7]。
ASE 方法的开发优化是当前食品检测、药物分析、环境监测等领域的研究热点，有着广阔的应用前景[8~10]。
利用ASE 技术快速提取螺旋藻中β-胡萝卜素的方法国内尚未见报道。
我们利用单因素试验和正交试验优化了从螺旋藻中提取β-胡萝卜素的快速溶剂萃取工艺，极大提高了样品前处理效率，节约溶剂，同时优化了超高效液相色谱法测定β-胡萝卜素的色谱条件，缩短了分析时间、提高了准确性和灵敏度。
1 实验部分1.1 仪器与试剂Agilent1 290超效液相色谱仪带二极管阵列检测器；Thermo Fisher ASE-350 快速溶剂萃取仪配10 mL 萃取池；Mettler Toledo MS 电子天平；石油醚（30~60 ℃）、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷均为分析纯，使用前超声脱气；甲醇、乙腈、三氯甲烷均为色谱纯；α-胡萝卜素、β-胡萝卜素标准品（Sigma ）。
1.2 β-胡萝卜素标准溶液的配制精密称取β-胡萝卜素标准品适量，加少量三氯甲烷溶解，石油醚定容，配制成浓度为250 μg/mL 标准储备液。
精密量取标准储备液，以石油醚定容，配制浓度分别为1.0、10.0、20.0、30.0、50.0 μg/mL 的β-胡萝卜素标准溶液，临用前配制。
1.3 样品制备称取均匀试样1.00 g 与等量硅藻土混匀，置于萃取池内，以1.4.1项下萃取条件进行萃取。
萃取液用石油醚（30~60 ℃）稀释至25 mL ，经0.22 μm 滤膜过滤后供测定用。
1.4 实验条件1.4.1 快速溶剂萃取条件萃取溶剂：石油醚（30~60 ℃）；萃取温度：120 ℃；静态循环时间：5 min ；静态循环次数：3次；萃取池内压力：1500 psi ；吹扫时间：60 s ；冲洗体积：50%；仪器所用气体均为高纯氮。
1.4.2 色谱条件色谱柱：Agilent Eclipse Pluse C18柱（1.8 μm ，2.1mm×50 mm ）；流速：0.3 mL/min ；流动相：甲醇-乙腈（85:15），柱温：25 ℃；进样量：2 μL ；DAD 检测器扫描范围：300~650 nm ；检测波长：450 nm 。
1.5 数据分析每个实验重复三次，采用方差分析的方法对数据进行分析，评价各个实验因素对实验结果影响的差异性，确定最优组合提取条件。
2 结果与讨论 2.1 单因素实验 2.1.1 萃取溶剂的选择根据β-胡萝卜素性质脂溶性的特点，优选常用提取溶剂石油醚（30~60 ℃）、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷进行提取。
分别取均匀试样1.00 g 与等量硅藻土混匀，置于萃取池内，在温度120 ℃，静态循环1次，萃取时间5 min 的固定条件下分别用上述溶剂萃取，测定萃取液中的β-胡萝卜素含量，计算β-胡萝卜素得率，实验结果如图1所示：提取溶剂为石油醚时得率最高，所以提取溶剂优选石油醚。
图1 提取溶剂对β-胡萝卜素得率的影响 Fig.1 Effect of solution on extraction2.1.2 萃取温度的影响分别取均匀试样1.00 g 与等量硅藻土混匀，置于萃取池内，石油醚为萃取溶剂，静态循环1次，静态萃取时间为5 min 的固定条件下，分别在80、100、120、140、160 ℃进行萃取，测定萃取液中的β-胡萝卜素含量，计算β-胡萝卜素得率，实验结果见图2：在120 ℃时，得率最高。
但随着温度的继续增加，得率则有所下降，这可能是由于β-胡萝卜素在高温下易被分解的缘故。
因此，萃取温度120 ℃最为合适。
240图2 萃取温度对β-胡萝卜素得率的影响 Fig.2 Effect of temperature on extraction2.1.3 静态循环时间的影响241图3 萃取时间对β-胡萝卜素得率的影响Fig.3 Effect of time on extraction分别取均匀试样1.00 g 与等量硅藻土混匀，置于萃取池内，石油醚为萃取溶剂，在温度120 ℃，静态循环1次的固定条件下，静态萃取时间分别在1、3、5、10、15 min 进行萃取，测定萃取液中的β-胡萝卜素含量，计算β-胡萝卜素得率，实验结果见图3：β-胡萝卜素得率随着时间增加而赠加，在5 min 的时候达到最大值，但随着时间继续加长，得率变化不明显，5 min 左右为最佳萃取时间。
