第八章荧光免疫技术

主管检验师资格考试临床免疫学和免疫检验复习习题第八章荧光免疫技术（附答案解析）1、荧光效率的决定因素是（）A、荧光素本身特性B、激发光波长C、激发光强度D、环境因素E、温度2、FITC的吸收波长为（）A、495nmB、520nmC、570nmD、450nmE、360nm3、荧光素发射荧光属于（）A、光照发光B、化学发光C、生物发光D、电化学发光E、偏振光4、纯化荧光素标记抗体时，去除游离荧光素可采用的方法是（）A、盐析法B、离子交换层析C、亲和层析D、透析法E、活性炭吸附5、下列何种方法的灵敏度最高（）A、荧光法B、磷光法C、分光光度法D、比浊法E、化学发光法6、下列哪项方法不属于免疫荧光细胞化学（）A、直接法B、夹心法C、间接法D、补体法E、捕获法7、为了保证免疫荧光细胞化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，必须在初次实验时进行对照试验。

下列选项中不必要的（）A、替代对照B、吸收试验C、阴性对照D、阳性对照E、补体对照8、下列组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是（）A、光源B、滤板C、聚光器D、目镜E、物镜9、荧光色素中呈现明亮黄绿色荧光的是（）A、藻红蛋白B、四甲基异硫氰酸罗丹明C、四乙基罗丹明D、异硫氰酸荧光素E、亮绿10、荧光效率是（）=A、指荧光色素将吸收的光能转变为荧光的百分率B、指荧光色素产生荧光的强度C、指接受激发光后，荧光物质所产生的荧光的色调D、指特异性荧光和非特异性荧光的强度比E、指物质产生荧光的效率11、在荧光素标记抗体技术中，荧光素的抗体之间的结合是靠（）A、范德华力B、氢键C、离子键D、共价键E、静电引力12、免疫荧光技术的基本原理是（）A、将特异性抗体标记上荧光检测抗原B、将特异性抗原标记上荧光检测抗体C、将特异性抗体标记上荧光检测抗原或抗体D、将特异性抗原标记上荧光检测抗原或抗体E、以上都不对13、荧光免疫技术中，间接法所使用的第二抗体可以是（）A、抗种属特异性IgA荧光抗体B、抗种属特异性IgG荧光抗体C、抗种属特异性IgM荧光抗体D、以上都正确E、以上都不正14、免疫荧光技术的基本原理是（）A、将特异性抗体标记上荧光检测抗原B、将特异性抗原标记上荧光检测抗体C、将特异性抗体标记上荧光检测抗原或抗体D、将特异性抗原标记上荧光检测抗原或抗体E、以上都不对15、下列哪项方法不属于免疫荧光细胞化学（）A、直接法B、夹心法C、间接法D、补体法E、捕获法16、实验本身即可避免内源性非特异性荧光干扰的检测方法为（）A、时间分辨荧光免疫测定B、荧光偏振免疫测定C、荧光酶免疫测定D、直接荧光抗体染色法E、间接荧光抗体染色法17、下述间接法描述不确切的是（）A、第一抗体为针对抗原的特异性抗体.B、第二抗体为荧光标记抗体，是针对第一抗体的抗抗体C、可用于检测抗原，也可用于检测抗体D、操作简便，特异性高E、可以用于多种抗体的检测18、下列有关间接荧光法的叙述错误的是（）A、敏感性高于直接荧光法B、以荧光素标记针对抗原的特异性抗原C、既可检测抗原，也可检测抗体D、荧光素标记抗体是抗抗体E、一种标记物可对多种抗原进行检测19、用于标记抗体的荧光素应符合下列要求，除外（）A、与蛋白质分子形成离子键B、荧光效率高，与蛋白结合后仍能保持较高的荧光效率C、荧光色泽与背景组织色泽对比鲜明D、与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫学性质E、标记方法简单，安全无毒20、双标记法荧光素标记抗体技术的主要用途是（）A、提高荧光强度B、提高荧光效率C、可同时检测同一标本中两种抗原D、使用一种标记物可检测多种抗原E、减少非特异性荧光21、下列不符合荧光素标记免疫技术直接法的描述是（）A、荧光抗体直接加于标本上B、常用于抗核抗体的检测C、每检查一种抗原需制备特异的荧光素标记抗体D、灵敏度偏低E、特异性高，非特异荧光染色因素少22、目前公认的最有效的检测抗核抗体的方法（）A、ELISAB、放射免疫技术C、直接荧光法D、间接荧光法E、补体法答案部分1、【正确答案】 A【答案解析】荧光效率的决定因素是荧光素本身特性。

荧光免疫组织化学技术一、概述荧光免疫组织化学技术（Fluorescent Immunohistochemistry，简称IHC）是一种用来检测组织中特定蛋白质表达及其定位的重要工具。

通过使用荧光标记的抗体与组织标本中的特定抗原相结合，荧光免疫组织化学技术能够提供可视化的结果，有助于研究人员深入了解细胞和组织中蛋白质的表达模式与定位。

本文将从多个方面介绍荧光免疫组织化学技术的原理、应用、优缺点以及对研究领域的意义。

二、原理荧光免疫组织化学技术的原理基于免疫印记反应和荧光探针的特性。

待检组织标本经过特定处理，包括固定、脱水和脱脂等步骤，以保持其形态和结构。

采用特异性的抗体与目标抗原结合，形成免疫复合物。

接下来，引入荧光标记的二抗与免疫复合物发生特异性结合，形成荧光信号。

在荧光显微镜下观察和分析荧光信号，以获得有关目标抗原在组织中表达和定位的信息。

三、应用领域荧光免疫组织化学技术广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。

在基础研究中，荧光免疫组织化学技术被用于研究组织生物学过程、发育学、疾病发生机制等。

通过定量和定位分析蛋白质的表达和定位，可以帮助科研人员深入了解蛋白质与常见疾病之间的关系。

在临床诊断中，荧光免疫组织化学技术可以用于医学实验室中针对疾病相关标志物的检测，如癌症标记物、免疫学指标等。

荧光免疫组织化学技术的高灵敏度和高特异性使其成为现代医学诊断技术中不可或缺的工具。

四、优点与挑战1. 优点：（1）高灵敏度：荧光免疫组织化学技术具有较高的灵敏度，能够检测到很低浓度下的目标抗原。

（2）高特异性：通过选择性地使用荧光标记的抗体与目标抗原结合，可以提供高度特异的检测结果。

（3）可视化结果：荧光免疫组织化学技术能够提供清晰的可视化结果，有助于研究人员直观地观察和分析目标抗原的定位和表达情况。

2. 挑战：（1）非特异性背景信号：在使用荧光免疫组织化学技术时，可能会出现非特异性背景信号，干扰对目标抗原信号的准确分析。

实验八免疫荧光染色技术细胞骨架主要包括微管、微丝和中间纤维以及核骨架-核纤层体系。

微管主要分布在核周围，呈放射状分布；微丝主要分布在细胞质膜的内侧，而中间纤维则分布在整个细胞中。

细胞骨架具有维持细胞形态结构和内部结构的有序性、参与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递和细胞分裂等重要功能。

常用的细胞骨架的观察方法有：考马斯亮蓝R250染色法、荧光素标记的鬼笔环肽染色法和间接免疫荧光法等。

考马斯亮蓝R250染色法和荧光素标记的鬼笔环肽染色法能清晰的显示出微丝结构。

本实验中采用间接免疫荧光法观察细胞中的微管蛋白，结合荧光素标记的鬼笔环肽标记F-肌动蛋白。

实验原理微管是由管蛋白结构单体构成。

抗微管蛋白的抗体特异识别细胞内存在的微观蛋白，在加入荧光素偶联的二抗与一抗结合，从而使细胞内的微管间接带上荧光素。

在激发光下，荧光素发光，从而显示出细胞中微管的形态和分布。

材料和试剂培养细胞、6孔板、胰蛋白酶、完全培养基、湿盒、无水乙醇、Triton X-100、载玻片、盖玻片、指甲油（封片）。

0.01M PBS，固定液（0.01M PBS，2％葡萄糖，1％甲醛）、洗涤液（0.01mol/L PBS），封闭液（0.01mol/L PBS，2%BSA），透化液（0.25% Triton, 5mM EDTA，0.01mol/L PBS），考马斯亮蓝R250。

实验方法1.盖玻片处理，圆形盖玻片的处理： 3%醋酸浸泡盖玻片半小时，经过洗衣粉水洗净，蒸馏水冲洗三遍，再用75%的乙醇浸泡1小时以上。

于超净台中镊子取出盖玻片，过酒精灯火焰烧一下，使盖玻片上酒精及水分蒸发，最后放入12孔培养板中备用。

2.细胞爬片：经处理的盖玻片放入12孔板中，加入1x105/ml 细胞，细胞生长于盖玻片并通过细胞自身分泌的细胞外基质，粘附于盖玻片上，过夜培养后，取出玻片0.01mol/LPBS充分洗涤，5分钟洗1次；3. 固定30 min，0.01mol/L PBS洗3次，每次5分钟；4. 封闭30 min.5. 透化处理：0.2% TritonX-100的封闭液中10分钟；6. 加入anti-Tubulin抗体，室温1小时。

关于荧光免疫技术详细介绍荧光免疫技术是一种基于抗体-抗原反应原理的分析方法，利用荧光染料标记的抗体或抗原与靶标结合后，通过测量荧光信号的强度来检测和定量分析靶标物质。

荧光免疫技术的原理主要包括标记物准备、信号检测和结果分析三个方面。

首先，需要将抗体或抗原与荧光染料标记结合，一般通过共价键合、生物素-链霉亲和素体系或其他化学反应进行标记。

标记物的选择应该满足荧光发射波长范围广、发射光强、稳定性好等要求。

然后，标记物与待检测样品中的靶标物质结合，形成抗原-抗体复合物。

最后，通过荧光检测仪器，测量荧光信号的强度，并将其转化为定量结果。

荧光免疫技术具有以下优势：首先，荧光信号强度大，可以实现高灵敏度的检测。

其次，荧光染料具有多样化的波长特性，可以实现多通道的同时测量。

此外，荧光免疫技术还具有选择性高、重复性好、灵敏度高、分析速度快、自动化程度高的特点。

荧光免疫技术在医学、生物学和环境监测等领域有广泛的应用。

在医学上，荧光免疫技术可以用于疾病的早期诊断和预防，如肿瘤标记物检测、感染病原体的检测和体液中特定蛋白质的定量等。

在生物学研究中，荧光免疫技术可以用于检测细胞和分子的定位、定量和相互作用等。

在环境监测中，荧光免疫技术可以用于检测污染物、重金属和有害物质等。

衡量荧光免疫技术的指标主要包括检测灵敏度、检测限、特异性、线性范围、准确性和重现性等。

检测灵敏度是指该技术能够检测到的最低浓度，一般以荧光信号的强度来表示。

检测限是指能够可靠地检测到的最低浓度，一般是指信号与噪声之间的差异。

特异性是指该技术与其他分子之间的交叉反应能力。

线性范围是指该技术在一定浓度范围内与浓度之间的线性关系。

准确性是指该技术的结果与真实值之间的接近程度。

重现性是指该技术在相同条件下的重复实验结果的一致度。

在实际应用中，荧光免疫技术还可以与其他技术相结合，如酶标记技术、化学发光技术等，以扩大分析范围和提高灵敏度。

同时，随着荧光探针和检测仪器的不断发展，荧光免疫技术将会不断创新和完善，为医学和生物科学研究提供更多的选择和便利。

第八章荧光免疫技术一、A11、下列组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是A、光源B、滤板C、聚光器D、目镜E、物镜2、荧光色素中呈现明亮黄绿色荧光的是A、藻红蛋白B、四甲基异硫氰酸罗丹明C、四乙基罗丹明D、异硫氰酸荧光素E、亮绿3、用于标记抗体的荧光素应符合下列要求，除外A、与蛋白质分子形成离子键B、荧光效率高，与蛋白结合后仍能保持较高的荧光效率C、荧光色泽与背景组织色泽对比鲜明D、与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫学性质E、标记方法简单，安全无毒4、下列何种方法的灵敏度最高A、荧光法B、磷光法C、分光光度法D、比浊法E、化学发光法5、目前公认的最有效的检测抗核抗体的方法A、ELISAB、放射免疫技术C、直接荧光法D、间接荧光法E、补体法6、免疫荧光技术的基本原理是A、将特异性抗体标记上荧光检测抗原B、将特异性抗原标记上荧光检测抗体C、将特异性抗体标记上荧光检测抗原或抗体D、将特异性抗原标记上荧光检测抗原或抗体E、以上都不对7、下列有关间接荧光法的叙述错误的是A、敏感性高于直接荧光法B、以荧光素标记针对抗原的特异性抗原C、既可检测抗原，也可检测抗体D、荧光素标记抗体是抗抗体E、一种标记物可对多种抗原进行检测8、荧光效率是（）。

A、指荧光色素将吸收的光能转变为荧光的百分率B、指荧光色素产生荧光的强度C、指接受激发光后，荧光物质所产生的荧光的色调D、指特异性荧光和非特异性荧光的强度比E、指物质产生荧光的效率9、双标记法荧光素标记抗体技术的主要用途是A、提高荧光强度B、提高荧光效率C、可同时检测同一标本中两种抗原D、使用一种标记物可检测多种抗原E、减少非特异性荧光10、下列哪项方法不属于免疫荧光细胞化学A、直接法B、夹心法C、间接法D、补体法E、捕获法11、在荧光素标记抗体技术中，荧光素的抗体之间的结合是靠A、范德华力B、氢键C、离子键D、共价键E、静电引力答案部分一、A11、【正确答案】D【答案解析】组成荧光显微镜的结构中，只有目镜与普通光学显微镜相同。

免疫荧光技术荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。

很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。

这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescentantibodytechnique）。

荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。

与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。

国外生产的TDM用试剂盒，有相当一部分即属于此类，并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。

由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。

近年来发展了几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。

有关荧光的基本知识一、荧光现象（一）荧光的产生一此化学物质能从外界吸收并储存能量（如光能、化学能等）而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射（即发光）。

荧光发射的特点是：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光；而一旦停止供能，发光（荧光）现象也随之在瞬间内消失。

可以引起发荧光的能量种类很多，由光激发所引起的荧光称为致荧光。

由化学应所引起的称为化学荧光，由X线或阴极射线引起的分别称为X线荧光或阴极射线荧光。

荧光免疫技术一般应用致荧光物质进行标记。

（二）荧光效率荧光分子不会将全部吸收的光能都转变成荧光，总或多或少地以其他形式释放。

荧光效率是指荧光分子将吸收的光能转变成荧光的百分率，与发射荧光光量子的数值成正比。

荧光效率＝发射荧光的光量分子数（荧光强度）／吸收光的光量子数（激发光强度）发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。

各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱（荧光光谱），即在某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰。