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时间分辨荧光免疫层析技术原理
时间分辨荧光免疫层析技术（TRFIA）是一种非同位素免疫分析技术，利用
镧系元素标记抗原或抗体，通过时间分辨技术测量荧光。
具体来说，当含有待测抗原（抗体）的样品滴在加样区时，待测样品中的抗原（抗体）与结合垫中的荧光纳米微球标记的抗体（抗原）结合并通过毛细作用向前层析。
当达到检测区后，与检测线上固定的抗体（抗原）结合，形成微粒-抗体-抗原-抗体夹心复合物并被固定在检测线上，而多余的荧光微
球标记物继续向前层析，与固定在质控线上的二抗结合。
反应结束后，用紫外光源（340nm）对检测区扫描检测，检测线和质控线
上荧光纳米微球发出高强度的荧光（615nm），且衰变时间也较长。
通过
测量延缓时间，待样品基质中自然发生的短寿命荧光（1-10ns）全部衰变后，再测量稀土元素的特异性荧光，这样就可以排除非特异本底荧光的干扰。
通过检测线和质控线荧光强度的强弱及其比值，即可分析出样品中待测物的浓度。
这种技术具有高灵敏度、高特异性和可定量分析等特点。
以上内容仅供参考，如需更多信息，建议查阅时间分辨荧光免疫层析相关文献或咨询该领域专家。
免疫荧光技术免疫荧光技术（immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术。
始创于40年代初，1942年coons等多次报道用异氰酸荧光素标记抗体。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
免疫荧光技术包括荧光抗体技术和荧光抗原技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。
主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
一、实验的基本原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。
由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。
免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
二、实验方法1、直接法这是荧光抗体技术最简单和基本的方法。
滴加荧光抗体于待检标本片上，经反应和洗涤后在荧光显微镜下观察。
标本中如有相应抗原存在，即与荧光抗体特异结合，在镜下可见有荧光的抗原抗体复合物。
此法的优点是简单、特异。
但其缺点是检查每种抗原均需制备相应的特异性荧光抗体，且敏感性低于间接法。
图一、直接免疫荧光法原理示意图2、间接法根据抗球蛋白试验的原理，用荧光素标记抗球蛋白抗体(简称标记抗抗体)的方法。
检测过程分为两步：第一次，将待测抗体(第一抗体)加在含有已知抗原的标本片上作用一定时间，洗去未结合的抗体。
第二，滴加标记抗抗体。
如果第一步中的抗原抗体已发生结合，此时加入的标记抗抗体就和已固定在抗原上的抗体(一抗)分子结合，形成抗原-抗体-标记抗抗体复合物，并显示特异荧光。
此法的优点是敏感性高于直接法，而且无需制备一种荧光素标记的抗球蛋白抗体，就可用于检测同种动物的多种抗原抗体系统。
构建下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条用于快速检测黄曲霉毒素B1王邹璐琪1，李立煌1，李丹阳1，艾超超1，任磊1,*，孙本强2,*（1.厦门大学材料学院，福建厦门361005；2.厦门医学院附属口腔医院，福建厦门361005）摘 要：构建下转换荧光-适配体免疫层析试纸条用于食品中黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）的快速高效检测。
体系中AFB1存在会减弱下转换荧光-适配体纳米颗粒层析至T线时与AFB1半抗原的结合能力，从而导致下转换荧光信号衰减，进而实现对AFB1的高效检测。
该方法在AFB1质量浓度1～40 ng/mL范围内与荧光信号呈良好的线性关系，线性相关系数为0.994，检测限为0.287 ng/mL。
该方法利用稀土掺杂荧光纳米颗粒的长寿命发光及近红外荧光特性，有效降低了生物背景荧光干扰并提高了检测体系的特异性。
该方法在AFB1的快速高灵敏检测中具有良好的应用前景。
关键词：稀土掺杂荧光纳米颗粒；荧光免疫层析；黄曲霉毒素B1；快速检测Construction of Down-conversion Fluorescence-Aptamer Immunochromatographic Strip for Rapid Detection of Aflatoxin B1 WANG Zouluqi1, LI Lihuang1, LI Danyang1, AI Chaochao1, REN Lei1,*, SUN Benqiang2,*(1. College of Materials, Xiamen University, Xiamen361005, China;2. Stomatological Hospital of Xiamen Medical College, Xiamen361005, China)Abstract: In this study, a down-conversion fluorescence-aptamer immunochromatographic strip was constructed for the rapid and efficient detection of aflatoxin B1 (AFB1) in foods. The presence of AFB1 in the system will weaken the binding ability of down-conversion-aptamer fluorescent nanoparticles to the hapten AFB1 when down-conversion-aptamer fluorescent nanoparticles reach the T-line, thus leading to the attenuation of down-conversion fluorescence signal and consequently highly efficient detection of AFB1. In the range of 1–40 ng/mL, the concentration of AFB1 had a good linear relationship with the fluorescence signal, showing a correlation coefficient of 0.994, and the detection limit for AFB1 was0.287 ng/mL. By taking advantage of the long-lived luminescence and the near infrared fluorescence characteristics of rareearth doped fluorescent nanoparticles, this method effectively reduced the interference of biological background fluorescence and improved the specificity of the detection system, making it a promising candidate for application in the rapid and sensitive detection of AFB1.Keywords: rare earth doped fluorescent nanoparticles; fluorescence immunochromatographic assay; aflatoxin B1; rapid detection DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191030-337中图分类号：TS201.2 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2021）12-0295-07引文格式：王邹璐琪, 李立煌, 李丹阳, 等. 构建下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条用于快速检测黄曲霉毒素B1[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 295-301. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191030-337. WANG Zouluqi, LI Lihuang, LI Danyang, et al. Construction of down-conversion fluorescence-aptamer immunochromatographic strip for rapid detection of aflatoxin B1[J]. Food Science, 2021, 42(12): 295-301. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191030-337. 收稿日期：2019-10-30基金项目：福建省自然科学基金项目（2017Y0078）；国家自然科学基金面上项目（31870994）第一作者简介：王邹璐琪（1996—）（ORCID: 0000-0002-7715-1267），女，硕士研究生，研究方向为生物医学材料。
荧光免疫法和免疫荧光层析法一、免疫标记法及其分类1.荧光免疫法原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。
底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min内得出结果。
结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。
该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。
以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。
除去未结合抗体，然后加受检标本，使其中的蛋白抗原与固相抗体形成抗原抗体复合物。
洗涤除去未结合物，接着加入荧光标记的抗体，使之与抗原特异性结合，形成抗体—抗原—抗体复合物。
最后根据荧光强度，即可对蛋白抗原进行定量。
传统的荧光免疫法受本底荧光的干扰较大，时间分辨荧光免疫测定法是以具有特长寿命的稀土金属如铕，作为标记物，加入正常液后激发测定，能有效去除短寿命本底荧光的干扰。
2.放射免疫法放射免疫法是以过量的未标记抗原与放射性物质标记的抗原，竞争性地与抗体结合，形成有放射性的抗原—抗体复合物与无放射性的抗原—抗体复合物，并有过剩的标记抗原与未标记的抗原。
然后通过离心沉淀等方法，将抗原—抗体复合物与游离抗原分离，分别测定其放射性强度与标准曲线比较，即可对未标记的待测抗原进行定量。
RIA法测定血清蛋白灵敏度高、特异性强，可准确定量到ng／ml水平。
但早期的方法操作麻烦，耗时长，且有放射性污染。
近年来，随着单克隆抗体的应用，RIA的灵敏度又有了较大提高，且操作大为简化，并已有商品试剂盒供应，使用方便。
3.酶联免疫法(ELISA)ELISA法有竞争法和夹心法两种。
竞争法是基于标准或血清Mb 和微孑L板上包被的Mb竞争性地与单克隆抗体相结合的原理而建立，该法的最低检测限为10μg／L，线性范围达1 000ug ／L。
夹心ELISA法与EIA具有良好的相关性(r＝0.92)。
ELISA法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，操作简单，适用于多份标本的检测，不需特殊仪器设备等优点，易于推广普及。
荧光免疫层析法定量一、荧光免疫层析法简介荧光免疫层析法（Fluorescent Immunoassay，FIA）是一种常用于生物分析和医学诊断的定量分析方法。
它基于免疫学原理，利用荧光标记的抗体与待测物相互作用，通过测量荧光信号的强度来定量分析待测物的浓度。
二、荧光免疫层析法原理荧光免疫层析法的原理基于免疫学的两个重要原理：抗原与抗体的特异性结合以及荧光标记技术。
1.抗原与抗体的特异性结合荧光免疫层析法利用抗原与抗体的特异性结合来检测待测物。
首先，待测物（通常是蛋白质或分子）被与之特异性结合的抗体捕获。
然后，荧光标记的二抗与被捕获的抗原-抗体复合物结合，形成荧光信号。
待测物的浓度可以通过测量荧光信号的强度来定量。
2.荧光标记技术荧光免疫层析法中，荧光标记的二抗是关键。
荧光标记的二抗是一种与荧光染料结合的二抗，通过荧光染料的发射信号来检测待测物。
常用的荧光染料有荧光素（Fluorescein）、罗丹明（Rhodamine）等。
荧光标记的二抗能够与抗原-抗体复合物结合，形成荧光信号，从而实现待测物的定量分析。
三、荧光免疫层析法的步骤荧光免疫层析法的步骤通常包括样品处理、反应体系构建、免疫反应、荧光信号检测和结果分析等。
1.样品处理样品处理是荧光免疫层析法中的第一步。
样品可以是血液、尿液、细胞培养液等。
在样品处理过程中，需要将样品与适当的缓冲液混合，以提取待测物，并去除干扰物质。
2.反应体系构建反应体系构建是荧光免疫层析法中的第二步。
在这一步骤中，需要将样品与荧光标记的二抗和捕获抗体混合，形成反应体系。
反应体系中的荧光标记的二抗能够与待测物结合，形成荧光信号。
3.免疫反应免疫反应是荧光免疫层析法中的核心步骤。
在这一步骤中，待测物与荧光标记的二抗之间发生特异性结合，形成抗原-抗体复合物。
这种特异性结合是荧光免疫层析法的关键，它使得待测物能够被准确地定量。
4.荧光信号检测荧光信号检测是荧光免疫层析法中的重要步骤。
