时间分辨荧光免疫层析技术简介共28页

荧光免疫层析法定量摘要：一、荧光免疫层析法的概述二、荧光免疫层析法的原理三、荧光免疫层析法的定量方法四、荧光免疫层析法的应用领域五、荧光免疫层析法的优势与局限性正文：一、荧光免疫层析法的概述荧光免疫层析法是一种基于抗原抗体反应原理的免疫学检测方法，它利用荧光标记的抗体或抗原与待检测样本中的相应抗原或抗体结合，通过层析技术将结合物与游离物分离，最后通过荧光信号检测系统实现对目标分子的定量检测。

二、荧光免疫层析法的原理荧光免疫层析法主要利用抗原抗体特异性结合原理，将荧光标记的抗体或抗原与待检测样本中的相应抗原或抗体结合，形成荧光标记的抗原抗体复合物。

然后，通过层析介质将荧光标记的抗原抗体复合物与游离的荧光标记抗体或抗原分离。

最后，通过检测系统检测层析介质上的荧光信号强度，从而实现对目标分子的定量检测。

三、荧光免疫层析法的定量方法荧光免疫层析法的定量方法主要通过测量荧光信号的强度来实现。

一般采用相对荧光强度（RFI）或绝对荧光强度（AFU）作为定量指标。

相对荧光强度是通过比较样本荧光信号与对照荧光信号的强度比值来计算的，而绝对荧光强度则是通过测量样本荧光信号的强度值来计算的。

四、荧光免疫层析法的应用领域荧光免疫层析法广泛应用于生物医学、食品安全、环境监测等领域。

例如，在生物医学领域，荧光免疫层析法可用于疾病诊断、疾病标志物的检测等；在食品安全领域，荧光免疫层析法可用于检测食品中的有害物质，如重金属、农药残留等；在环境监测领域，荧光免疫层析法可用于检测水体、土壤中的污染物，如重金属、有机污染物等。

五、荧光免疫层析法的优势与局限性荧光免疫层析法的优势主要体现在以下几个方面：1.高灵敏度，可实现对低浓度目标分子的检测；2.高特异性，可避免非特异性荧光信号的干扰；3.快速简便，适合现场快速检测；4.定量准确，可实现对目标分子的准确定量。

时间分辨荧光免疫层析技术原理
时间分辨荧光免疫层析技术（TRFIA）是一种非同位素免疫分析技术，利用
镧系元素标记抗原或抗体，通过时间分辨技术测量荧光。

具体来说，当含有待测抗原（抗体）的样品滴在加样区时，待测样品中的抗原（抗体）与结合垫中的荧光纳米微球标记的抗体（抗原）结合并通过毛细作用向前层析。

当达到检测区后，与检测线上固定的抗体（抗原）结合，形成微粒-抗体-抗原-抗体夹心复合物并被固定在检测线上，而多余的荧光微
球标记物继续向前层析，与固定在质控线上的二抗结合。

反应结束后，用紫外光源（340nm）对检测区扫描检测，检测线和质控线
上荧光纳米微球发出高强度的荧光（615nm），且衰变时间也较长。

通过
测量延缓时间，待样品基质中自然发生的短寿命荧光（1-10ns）全部衰变后，再测量稀土元素的特异性荧光，这样就可以排除非特异本底荧光的干扰。

通过检测线和质控线荧光强度的强弱及其比值，即可分析出样品中待测物的浓度。

这种技术具有高灵敏度、高特异性和可定量分析等特点。

以上内容仅供参考，如需更多信息，建议查阅时间分辨荧光免疫层析相关文献或咨询该领域专家。

时间分辨荧光免疫分析时间分辨荧光免疫分析(time-reso1vedfIuoroimmunoassay,TRFIA)是80年代初问世的一种超灵敏度的标记免疫检测技术。

其主要特点是以锢系元素铺(Eu3υ等标记抗体或抗原为示踪剂，利用增强液的荧光放大作用和时间分辨荧光法排除样品或试剂中非特异性荧光物质的干扰，最大限度地提高了检测方法的灵敏度和特异性，还具有量程宽,操作简便,标记物容易制备，稳定性好，保存期长等诸多优点。

一、基本原理与放免分析相似，总体上分为竞争法和非竞争法两类，前者多用于小分子半抗原，后者用于大分子化合物。

铺系元素第(Eu).彭(Sn1)、轼(Tb)和钛(Nd)通过双功能螯合剂，在水溶液中很容易与抗原或抗体分子以共价双键结合。

经抗原、抗体间特异性的免疫结合反应，测定免疫复合物的荧光强度，就可推算待测物质的浓度。

辆系离子的荧光信号极弱，需要在酸性条件下，解离出铺系离子，然后与荧光增强液中的B-二酮体生成新的螯合物，经紫外光激发可产生强而持久的荧光信号，其增强效力可达100万倍，故又称解离增强铺系荧光免疫分析(dissociation-enhanced-1anthanidefIuoroimmunoassay,DE1FIA)o锢系元素的发光时间延长，如Eu*和Snr的荧光衰变时间分别达到 4.3×IOns和4.1×10,ns,而样品和试剂中的自然本底荧光的衰变时间仅为4-10ns,通过延迟测量时间，使信号不受本底荧光影响。

此外，锢系元素螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，StOkeS位移大，有利于排除非特异性散射光的干扰，进一步提高荧光信号的特异性。

二、试剂组成(一)EuS标记物：可分为标记抗体、标记抗原，要求有较高的纯度、比活性和免疫活性。

密封后4。

C或-20。

C保存，但应避免反复冻融。

若发现蛋白质聚合，非特异性结合升高，则应停止使用。

(二)固相抗体或抗原：固相载体多用聚苯乙烯微孔条，要求透明度高，吸附性能好，材质均匀，孔间差异小，不同品牌甚至不同批号的微孔条间都会有明显的性能差异，应引起注意。

一、前言近百年来,“特效试剂"一直是分析化学家追求的目标。

所谓“特效试剂”，就是指的是只与一种待测物质反应的试剂。

事实上，目前使用的所谓的“铜试剂"、“铁试剂”、“硝酸试剂”等等,都是“盛名之下，其实难副”的.20世纪40—50年代追求合成特效试剂的狂热，早已降温.正在分析化学家心灰意冷之际，人们从免疫学与生物化学的成就看到了这一理想的曙光:免疫系统简直就是天然存在的一部特异性试剂的合成机器。

抗原与抗体之间的免疫反应具有高度的特异性，这种识别的专一性超过酶对底物的识别水平，抗原-抗体复合物的稳定常数一般为109，有些高达1010—1015，具有很高的稳定性。

免疫反应的特点使得免疫分析已成为一个跨学科的新型分析技术，广泛应用于临床体液分析、药物分析、环境分析、食品分析和生物化学研究，尤其在毒品的鉴定、吸毒人员的认定和疾病的诊断方面，发挥了重要作用。

时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是自80年代以来新发展起来的一种新型分析技术，与其它免疫分析技术相比，有其独特的优点。

它克服了放射性免疫分析法（RIA）中放射性同位素带来的污染问题；克服了酶免疫分析法（EIA）中酶不稳定的缺点；而且,由于TRFIA法能够很好的消除背景荧光的干扰，使其灵敏度比普通荧光法（FIA）高出几个数量级.正是由于TRFIA的独特优点，使得它成为免疫分析中最有发展潜力的一种分析方法。

二、时间分辨荧光免疫分析的原理时间分辨荧光免疫分析的原理就是使用三价稀土离子（如Eu3+、Tb3+、Sm3+、Dy3+）作为示踪物，通过这些稀土离子与具有双功能结构的螯合剂以及抗原形成稀土离子-螯合剂-抗原螯合物。

当标记抗原、待测抗原共同竞争抗体，形成免疫复合物,由于免疫复合物中抗原抗体结合部分就含有稀土离子,当采取一些办法将结合部分与游离部分分开后，利用时间分辨荧光分析仪，即可测定复合物中的稀土离子发射的荧光强度,从而确定待测抗原的量。