4.3.7微生物学实验七水的细菌学检查 南开大学

水中细菌总数的检测1.?实验目的?1、学习并掌握水的细菌学检测方法?2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

?2.?菌落总数standard?plate-count?bacteria?水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48?h后，所得1?mL水样所含菌落的总数。

?细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。

由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。

?3.?培养基与试剂?2.1?营养琼脂成分?2.2?制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。

），经103.43?kPa（121°C,15?lb）湿热灭菌20?min，储存于冷暗处备用。

?4.?仪器和材料??仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。

??材料：灭菌平皿（直径9?cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。

?放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。

?5.?样品采集??自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5?min，用无菌空三角瓶接取水样200?ml。

??纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。

??地表水的取样：应取距水面10—15?cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。

?6.?检验步骤??生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1?mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15?ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

2022年南开大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、原生动物是______色、无______，能______运动的单细胞真核生物。

2、用孔雀绿和复红作细菌芽孢染色时，可使菌体呈______色，使芽孢呈______色。

3、大肠杆菌基因组的主要特点是：遗传信息的______，功能相关的结构基因组成______，结构基因的单拷贝及rRNA基因的多拷贝，基因组的重复序列少而短。

4、生产中，为了长期维持对数生长期可采取______。

5、酵母菌有性繁殖一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过______、______和______形成四个或八个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这样一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。

6、病毒的存在范围是病毒能够感染并在其中复制的______。

7、海洋细菌有______、______、______和______等共同特征。

8、蓝细菌的培养可用______培养基。

9、呼吸作用与发酵作用的根本区别是呼吸作用中电子载体不是将电子直接传递给底物降解的中间产物，而是交给______系统，逐步释放出能量后再交给______。

10、巨噬细胞在非特异性和特异性免疫中主要有以下四个作用： ______，______，______和______。

二、判断题11、当死海鱼在10～20℃下保存1～2d后，就可在黑暗处看到鱼体表面长有成片发荧光的菌苔或大量菌落，这是因为长有大量海洋光合细菌之故。

（）12、氮素营养物质不仅用来合成细胞中的蛋白质，还可以为部分微生物提供能源。

（）13、EMP途径主要存在于厌氧生活的细菌中。

（）14、影响较大的生物五界学说是由Whittaker于1969年提出的。

（）15、在G＋细菌细胞膜上，是找不到磷脂酰胆碱的。

（）16、酿酒酵母的双倍体细胞，既可通过不断出芽进行无性繁殖，也可在一定条件下通过形成子囊孢子进行有性生殖。

实验十水的卫生细菌学检验（综合）a)水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。

二、实验材料样品: 水样2.培养基: 乳糖胆盐发酵管(单料及双料), 伊红美兰琼脂(EMB)平板, 乳糖发酵管。

3.其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。

由于病原菌的数量少, 检测过程复杂, 因此, 直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。

由于大肠菌群在粪便中数量大, 在体外存活时间与肠道致病菌相近, 且检验方法比较简便, 因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。

如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量, 则说明此水已被粪便污染, 并有可能含有病原菌。

大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌, 并能在乳糖培养基中, 经37℃24~48h培养能产酸产气。

我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。

检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种, 其中稀释培养法是标准分析法, 为我国大多数卫生单位和水厂所使用。

它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

四、方法与步骤采样: 取100ml磨口带塞玻璃瓶, 包扎后, 干热灭菌备用。

1.取自来水样时, 至少应先放水5min, 以冲去龙头口所带的微生物, 获得主流管中有代表性的水样。

取样时, 用右手握瓶, 左手启开瓶塞, 用覆盖瓶口的纸托住瓶塞, 收集样品后, 连同覆盖纸一起将瓶口塞好, 并用线绳在原处扎好。

注意手指不得触及瓶口内部。

在静水中取样时, 先用右手揭去塞子, 瓶口朝下浸入水下约30cm处, 然后将瓶子反转过来, 待水注满后, 取出塞好瓶口。

如果水在流动, 瓶口必须迎着水流, 以免手上的细菌被水冲进瓶子。

2.水样放置过程中, 内含的细菌数目和类型会发生变化, 所以要求水样品应于6~10℃贮存,并不超过6h。

3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内, 10ml接种量采用双料发酵管, 而lml及lml以下接种量采用单料管。