水 中 细 菌 总 数 的 检 测

水中细菌总数的检测及大肠菌群的测定一、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。

细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。

我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。

所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。

因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。

本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。

由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。

目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数。

此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。

缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。

生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤3个大肠菌群/1L饮水，≤100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和材料(三)实验器材(1) 菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。

2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。

(2)大肠菌群的测定；1)培养基：伊红美蓝琼脂培养基：蛋白胨10g，乳糖10g， K2HP042g， 2％伊红水溶液20Ml，0.65％美蓝水溶液lOmL，琼脂17g，水1000mL，pH7.1。

制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于水中，校正pH后分装．121℃灭菌15min备用。

临用时加入乳糖并熔化琼脂，冷至50-55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测摘要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。

初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。

对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。

关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。

水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。

细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)]，可用稀释平板计数法检测。

水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。

特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。

多管发酵法初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气；分离培养：伊红美蓝（EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落；复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。

材料和方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5.0 g，琼脂8g，蒸馏水1000ml；pH 7.0乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵1×：蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL（调pH值后加）、水1000mL、pH 7.2－7.4三倍浓缩液（3×）：除水以外，其余成分取三倍用量分装：1×的培养基分装9ml/管，3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。

灭菌条件：115℃，15min。

EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基，按说明书操作，水用量为90%。

水源：紫竹院河水仪器：高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。

试剂：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤：1），相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。

水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。

一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。

二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。

2．干热灭菌(烘箱)。

3．水浴隔热培养箱。

4．冰箱。

5.培养皿(直径9ml)。

6．吸管(10.0ml、1.0m1)。

三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。

四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。

[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。

二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。

饮用水中菌落总数的测定饮用水是人们生活中必不可少的资源之一，因此其质量问题也非常重要。

菌落总数测定是饮用水质量检验中的一项重要指标，它可以反映饮用水中微生物污染的情况。

本文将介绍饮用水中菌落总数的测定方法。

一、实验原理菌落总数测定是通过将水样分别接种在含营养物质的固体培养基上，在适宜的温度下培养一定时间后，观察菌落形成的数量来表示水样中菌落总数的多少。

菌落总数包括细菌、真菌、放线菌等不同种类的微生物。

二、实验材料1.培养基：通用营养琼脂培养基。

2.试剂：无菌纯水。

3.实验器材：培养皿、无菌玻璃滴管、高压蒸汽灭菌器、无菌工作台、温度控制器、数码计数器等。

三、实验步骤1. 准备工作：将通用营养琼脂培养基溶解，加入适当的营养成分，灭菌后，倒入消毒好的培养皿中，存放于恒温箱内。

2. 取样：在取样前，应将集水设施、自来水输送管道和水龙头清洗干净，进行彻底冲洗，然后使用无菌玻璃滴管从水源处取样，放入无菌瓶内。

3. 接种：将取出的水样用无菌玻璃滴管滴入消毒好的培养皿上，每个培养皿中加入约1ml水样，然后轻轻摇晃培养皿，使水样与琼脂培养基充分混合。

4. 培养：消毒好的培养皿放入恒温箱中，在恒温箱内控制温度为35℃左右，培养时间一般为24小时。

5. 统计菌落：在培养24小时后，取出培养皿，观察菌落的数量和形态，使用数码计数器统计菌落数量。

四、实验注意事项1. 取样前，应使用无菌玻璃滴管，避免外界细菌和真菌的污染。

2. 原水样取到之后应及时送到实验室或者进行现场测定，避免对样品存放时间过长而影响实验结果。

3. 在接种培养皿时，应将培养皿扣开盖盖起来，避免细菌、真菌等污染。

4. 培养皿在放入恒温箱时，要均匀摆放，避免温度分布不均，影响菌落的生长。

5. 统计菌落时，应仔细观察，避免漏掉菌落数，影响实验结果。

五、实验结果分析1.道路和公共场所的饮用水菌落总数标准为1000 CFU/ml。

通过菌落总数的测定可以了解饮用水中微生物的污染状况，若菌落总数超出标准值，则说明水源存在严重的微生物污染，需要进行处理和消毒。

介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。

这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。

2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。

通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。

3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。

这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。

4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。

这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。

5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。

这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。

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介绍几种新的水中细菌总数检测方法近年来，随着水污染问题的加剧，水资源的保护和管理变得越来越重要，其中水中细菌总数检测是水质监测的重要指标之一。

本文将介绍几种新的水中细菌总数检测方法，以期为水质监测提供更加可靠和高效的手段。

1.高通量细菌量检测技术高通量细菌量检测技术可以同时检测多种细菌，检测速度快，可靠性高、检测方法简便。

它基于基因分析技术，将PCR技术与微孔板自动化操作技术相结合，通过多重PCR检测技术，可以在很短的时间内迅速检测出水样中的多种细菌，可以检测多达100种以上的微生物群体；与传统的培养基技术比较，减少了很多操作时间，而且可以避免细菌在营养基中生长的误差，大大提高了检测的准确性和精度。

2.荧光定量PCR技术荧光定量PCR技术是一种基于PCR技术的定量检测方法，通过特异载体或FAM（荧光素丙酸酯）依赖基因和所需定量基因并列进行扩增，可以快速、准确地测定样品中细菌的数量。

它将实时检测平台与计量分析相结合，具有检测速度快、精确、灵敏度高、标准化程度高等优点，被广泛应用于水质监测领域，是一种更为先进的具有优势的技术手段。

3.自动化细胞计数法自动化细胞计数法是一种新型的自动计数方法，基于图像处理技术和机器学习算法，同时识别并统计生长在液体中的微生物的数量和大小，具有操作简便、检测速度快、精度高、可靠性好等优点。

此方法不受培养基、肌红蛋白等耗时耗费的因素的影响，而且能够快速而准确地检测出微生物数量，对于微生物的定量和质量检测具有很高的应用价值和推广前景，已成为最具有前景的水中细菌检测技术之一。

虽然上述三种水中细菌总数检测方法在水质监测中得到了广泛应用，但仍存在一些局限性。

因此，在推广过程中需要结合实际情况，选择合适的检测方法，并根据需要进行优化，以实现更加科学、现代、高效、准确的水质监测。

水质细菌总数的测定菌落计数1.适用范围本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水细菌总数的测定。

2.原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。

因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。

所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。

3.仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱解剖镜。

采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121°C（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。

培养基营养琼脂培养基：市售营养琼脂培养基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121C高压蒸汽灭菌15min,经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。

4.步骤4.1选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30〜300之间。

大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL,所得的菌落总数可适于计数。

4.2水样的稀释方法①将水样用力振摇20〜25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。

②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。

按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。

注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。

4.3操作方法①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2〜3个适宜浓度的稀释水样ImL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

每个水样应倾注两个平皿。

②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37C恒温箱内培养24h,进行菌落计数。

4.4菌落计数培养之后，立即进行平皿菌落计数。

如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5〜10C冰箱内，且不得超过24h。

但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。