水 中 细 菌 总 数 的 检 测

水中细菌总数的检测及大肠菌群的测定一、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。

细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。

我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。

所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。

因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。

本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。

由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。

目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数。

此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。

缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。

生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤3个大肠菌群/1L饮水，≤100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和材料(三)实验器材(1) 菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。

2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。

(2)大肠菌群的测定；1)培养基：伊红美蓝琼脂培养基：蛋白胨10g，乳糖10g， K2HP042g， 2％伊红水溶液20Ml，0.65％美蓝水溶液lOmL，琼脂17g，水1000mL，pH7.1。

制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶于水中，校正pH后分装．121℃灭菌15min备用。

临用时加入乳糖并熔化琼脂，冷至50-55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

1、样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无 菌移液管（放菌液时 吸管尖不要碰到液面
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之

实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测摘要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。

初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。

对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。

关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。

水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。

细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)]，可用稀释平板计数法检测。

水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。

特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。

多管发酵法初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气；分离培养：伊红美蓝（EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落；复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。

材料和方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5.0 g，琼脂8g，蒸馏水1000ml；pH 7.0乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵1×：蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL（调pH值后加）、水1000mL、pH 7.2－7.4三倍浓缩液（3×）：除水以外，其余成分取三倍用量分装：1×的培养基分装9ml/管，3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。

灭菌条件：115℃，15min。

EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基，按说明书操作，水用量为90%。

水源：紫竹院河水仪器：高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。

试剂：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤：1），相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。

水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。

一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。

二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。

2．干热灭菌(烘箱)。

3．水浴隔热培养箱。

4．冰箱。

5.培养皿(直径9ml)。

6．吸管(10.0ml、1.0m1)。

三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。

四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。

[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。

二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。

饮用水中菌落总数的测定饮用水是人们生活中必不可少的资源之一，因此其质量问题也非常重要。

菌落总数测定是饮用水质量检验中的一项重要指标，它可以反映饮用水中微生物污染的情况。

本文将介绍饮用水中菌落总数的测定方法。

一、实验原理菌落总数测定是通过将水样分别接种在含营养物质的固体培养基上，在适宜的温度下培养一定时间后，观察菌落形成的数量来表示水样中菌落总数的多少。

菌落总数包括细菌、真菌、放线菌等不同种类的微生物。

二、实验材料1.培养基：通用营养琼脂培养基。

2.试剂：无菌纯水。

3.实验器材：培养皿、无菌玻璃滴管、高压蒸汽灭菌器、无菌工作台、温度控制器、数码计数器等。

三、实验步骤1. 准备工作：将通用营养琼脂培养基溶解，加入适当的营养成分，灭菌后，倒入消毒好的培养皿中，存放于恒温箱内。

2. 取样：在取样前，应将集水设施、自来水输送管道和水龙头清洗干净，进行彻底冲洗，然后使用无菌玻璃滴管从水源处取样，放入无菌瓶内。

3. 接种：将取出的水样用无菌玻璃滴管滴入消毒好的培养皿上，每个培养皿中加入约1ml水样，然后轻轻摇晃培养皿，使水样与琼脂培养基充分混合。

4. 培养：消毒好的培养皿放入恒温箱中，在恒温箱内控制温度为35℃左右，培养时间一般为24小时。

5. 统计菌落：在培养24小时后，取出培养皿，观察菌落的数量和形态，使用数码计数器统计菌落数量。

四、实验注意事项1. 取样前，应使用无菌玻璃滴管，避免外界细菌和真菌的污染。

2. 原水样取到之后应及时送到实验室或者进行现场测定，避免对样品存放时间过长而影响实验结果。

3. 在接种培养皿时，应将培养皿扣开盖盖起来，避免细菌、真菌等污染。

4. 培养皿在放入恒温箱时，要均匀摆放，避免温度分布不均，影响菌落的生长。

5. 统计菌落时，应仔细观察，避免漏掉菌落数，影响实验结果。

五、实验结果分析1.道路和公共场所的饮用水菌落总数标准为1000 CFU/ml。

通过菌落总数的测定可以了解饮用水中微生物的污染状况，若菌落总数超出标准值，则说明水源存在严重的微生物污染，需要进行处理和消毒。

介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。

这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。

2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。

通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。

3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。

这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。

4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。

这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。

5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。

这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。

- 1 -。

3.3 生活饮用水细菌菌落总数的测定
冷却至50℃的 培养基
12～15ml
水样
各取1mL 水样
冷却 倒置
37℃、24h
计数
3.4 河水、池水等的菌落总数的测定
1. 水样稀释
9 ml 无菌水
1 ml
水样
9 ml 无菌水
1 ml
9 ml 无菌水
1 ml
10-1
10-2
10-3
稀释倍数视水污染程度而定，选择在平板上能长出30～300 个菌落的稀释倍数为宜。
细菌菌落总数的测定
教学目标
生活饮用水 水质检测
任务9
知识目标
（1）细菌总数、菌落；（2）细菌总 数与水质的关系；（3）水中细菌总数 的测定原理、平板菌落计数法。
能力目标 （1）水样采集；（2）培养基的配制和 灭菌技术，无菌操作，细菌的接种； （3）细菌的培养、菌落的观察、计数
素质目标 1）整洁、有序、规范；（2）多实践、 巧动手，严格执行无菌操作；（3）培 养实事求是、严谨认真的科学态度；善 于观察、分析问题
n 细菌的数量和大肠菌群数是生活饮用水监测的重要生物 指标。
1.2 菌落总数
菌落(colony)：在固体培养基上，一个母细菌不断繁殖， 形成一堆肉眼可见、有一定形态构造特征的细菌集合。
n 单个细菌难以直接计数，但细菌在固体培养基上生长，形 成具有各种颜色和不同外观的菌落，却易观察，易计数。
n 在水质卫生学检验中，细菌总数是指1mL水样在牛肉膏蛋白 胨培养基中经37℃、24h培养后，所生长出的细菌菌落总数。
教学内容
细菌及菌落总数
细菌菌落总数测定的原理 平板菌落计数法 注意事项与思考题
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ

[请在此处插入参考文献2]
[请在此处插入参考文献1]
01
03 02
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。

介绍几种新的水中细菌总数检测方法近年来，随着水污染问题的加剧，水资源的保护和管理变得越来越重要，其中水中细菌总数检测是水质监测的重要指标之一。

本文将介绍几种新的水中细菌总数检测方法，以期为水质监测提供更加可靠和高效的手段。

1.高通量细菌量检测技术高通量细菌量检测技术可以同时检测多种细菌，检测速度快，可靠性高、检测方法简便。

它基于基因分析技术，将PCR技术与微孔板自动化操作技术相结合，通过多重PCR检测技术，可以在很短的时间内迅速检测出水样中的多种细菌，可以检测多达100种以上的微生物群体；与传统的培养基技术比较，减少了很多操作时间，而且可以避免细菌在营养基中生长的误差，大大提高了检测的准确性和精度。

2.荧光定量PCR技术荧光定量PCR技术是一种基于PCR技术的定量检测方法，通过特异载体或FAM（荧光素丙酸酯）依赖基因和所需定量基因并列进行扩增，可以快速、准确地测定样品中细菌的数量。

它将实时检测平台与计量分析相结合，具有检测速度快、精确、灵敏度高、标准化程度高等优点，被广泛应用于水质监测领域，是一种更为先进的具有优势的技术手段。

3.自动化细胞计数法自动化细胞计数法是一种新型的自动计数方法，基于图像处理技术和机器学习算法，同时识别并统计生长在液体中的微生物的数量和大小，具有操作简便、检测速度快、精度高、可靠性好等优点。

此方法不受培养基、肌红蛋白等耗时耗费的因素的影响，而且能够快速而准确地检测出微生物数量，对于微生物的定量和质量检测具有很高的应用价值和推广前景，已成为最具有前景的水中细菌检测技术之一。

虽然上述三种水中细菌总数检测方法在水质监测中得到了广泛应用，但仍存在一些局限性。

因此，在推广过程中需要结合实际情况，选择合适的检测方法，并根据需要进行优化，以实现更加科学、现代、高效、准确的水质监测。

水质细菌总数的测定菌落计数1.适用范围本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水细菌总数的测定。

2.原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。

因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。

所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。

3.仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱解剖镜。

采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121°C（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。

培养基营养琼脂培养基：市售营养琼脂培养基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121C高压蒸汽灭菌15min,经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。

4.步骤4.1选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30〜300之间。

大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL,所得的菌落总数可适于计数。

4.2水样的稀释方法①将水样用力振摇20〜25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。

②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。

按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。

注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。

4.3操作方法①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2〜3个适宜浓度的稀释水样ImL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

每个水样应倾注两个平皿。

②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37C恒温箱内培养24h,进行菌落计数。

4.4菌落计数培养之后，立即进行平皿菌落计数。

如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5〜10C冰箱内，且不得超过24h。

但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。

水质菌落总数检测方法一、引言水质菌落总数是评估水体卫生质量的重要指标之一，它能够反映水体中细菌的数量，进而判断水质是否合格。

因此，准确测定水质菌落总数对于保障水源安全、防止水传播疾病具有重要意义。

1. 培养法培养法是目前最常用的水质菌落总数检测方法之一。

其基本原理是将水样涂布在含有营养物质的琼脂平板上，然后在适宜的温度下培养一定时间，观察并计数菌落的数量。

这种方法简单易行，可以检测各种类型的细菌，但需要较长的时间，通常需要24-48小时才能得到结果。

2. 膜过滤法膜过滤法是一种快速测定水质菌落总数的方法。

其原理是将水样通过一块细孔膜滤膜，过滤掉水中的微生物，然后将滤膜放置在含有营养物质的琼脂平板上进行培养。

菌落在滤膜上生长并形成可见的斑点，通过计数斑点的数量来测定水质菌落总数。

相比于培养法，膜过滤法缩短了检测时间，通常只需要6-12小时即可得到结果。

3. 流式细胞仪法流式细胞仪法是一种高效准确的水质菌落总数检测方法。

它利用光散射和荧光染色技术，将水样中的微生物分为不同的群体并进行计数。

流式细胞仪能够快速检测大量样品，并提供详细的菌落分布数据，具有高灵敏度和准确性。

但是，流式细胞仪法的设备较为昂贵，需要专业操作人员进行操作。

4. PCR法PCR法是一种基于DNA扩增的水质菌落总数检测方法。

它利用特定的引物和酶，在聚合酶链反应的条件下，扩增水样中细菌的DNA片段。

通过测定扩增产物的数量，可以间接测定水质菌落总数。

PCR 法具有高灵敏度和高特异性，并且可以快速得到结果，但需要专业的实验室设备和技术支持。

三、不同方法的优缺点比较1. 培养法的优点是操作简单，可以检测不同种类的细菌。

缺点是需要较长时间，无法实时监测水质。

2. 膜过滤法的优点是快速，可以在较短时间内得到结果。

缺点是只能检测活菌，对于耐热菌等特殊菌种的检测效果较差。

3. 流式细胞仪法的优点是高效准确，可以实时监测水质。

缺点是设备昂贵，需要专业操作人员。

水体细菌总数实验报告实验目的：研究水体中细菌的总数。

实验原理：水体中的细菌可以通过进行菌落计数的方法来确定数量。

菌落计数是一种常用的细菌计数方法，可以通过培养细菌在琼脂上形成的菌落来推测水体中的细菌数量。

实验过程主要包括取样、培养、计数等步骤。

实验材料：1. 取样容器：玻璃瓶或塑料容器。

2. 高温灭菌器：用于灭菌取样容器和培养用具。

3. 培养基：如琼脂培养基。

4. 培养皿：用于培养细菌。

5. 显微镜和培养皿计数器：用于观察和计数细菌菌落。

实验步骤：1. 高温灭菌：将取样容器放入高温灭菌器中，以杀灭所有可能存在的细菌。

2. 取样：使用洁净的容器，在研究对象的水体（如湖泊、河流、自来水等）中取样。

同时，注意避开周围的污染源，以确保取样的准确性。

3. 培养：将取样溶于适量的无菌水中，制备不同的稀释液。

如取1ml取样溶液与9ml稀释液混合，得到10^-1稀释液。

再取1ml 10^-1稀释液与9ml稀释液混合，得到10^-2稀释液，以此类推。

然后，将不同浓度的稀释液分别均匀涂布于琼脂平板培养基上，并用无菌铁环均匀划过，使细菌均匀生长。

4. 孵育：将培养皿密封，并置于恒温培养箱中，在适宜的温度下孵育。

5. 计数：在一定孵育时间后，取出培养皿，使用显微镜观察细菌生长情况，并使用培养皿计数器进行菌落计数。

将各个稀释液中的菌落个数相加，得到相应浓度下的菌落总数。

6. 统计分析：将不同浓度下的菌落总数乘以相应的稀释倍数，即可得到水体中细菌的总数。

实验注意事项：1. 所有工具和试剂必须经过高温灭菌处理，以减少实验中的细菌污染。

2. 在取样时，应避免接触周围环境的物质，保持取样器具的干净无菌。

3. 在计数过程中，应注意观察显微镜下的细菌形态和特征，避免误判。

4. 实验过程中要遵守实验室安全操作规范，确保个人安全。

实验结果：根据实验步骤和计数结果，我们可以得到不同浓度下的菌落总数，并根据稀释倍数计算得到水体中细菌的总数。

自来水中细菌总数的测定摘要水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物含量越大。

本实验应用平板菌落记数技术测定水中细菌总数。

由于水中细菌种类繁多，他们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，是水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的细菌总数仅是近似值[1]。

本实验采用普通营养琼脂培养基，该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。

所谓细菌总数，是指在1mL水样在普通营养琼脂培养基中，37℃经24h培养后，所生长出来的菌落数。

通过培养观测得到平均1mL自来水中含有85个细菌菌落，符合国家标准。

关键词自来水平板菌落计数技术细菌总数测定引言水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的[2]。

良好的饮用水细菌总数应<100CFU∕mL,而>500CFU∕mL则不适宜饮用，我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定，每毫升水样中细菌总数37℃培养24h不得大于100个[3]。

细菌种类对人类健康更为重要，许多致病细菌常常存在于水中，人们饮用后引发各种疾病，如痢疾，伤寒等，大多是饮用水污染了这些病原菌之故，因而测定饮用水中的病原菌是必需的。

本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。

通过此实验我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。

我们可以了解水质评价的微生物学卫生标准和本地区自来水的卫生状况，从而不断的改善并很好的治理。

1材料与方法1.1时间与地点2010年10月27日太原师范学院南区微生物实验室1.2实验材料牛乳膏蛋白胨琼脂培养基、自来水、蒸馏水、烧杯、玻璃棒、培养皿、电炉、高压蒸汽灭菌锅、天平、量筒等1.3方法1.3.1牛乳膏蛋白胨琼脂培养基的制备[4]计算并称量一定量的普通标准琼脂培养基固体置于烧杯中，先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅拌，然后再电炉上加热使其溶解，完全溶解后补充水量至所需的总体积，不断搅拌直至沸腾，沸腾后继续加热3~5分钟。

实验五水中细菌总数的检测一、实验目的1.采用标准平皿法对水样中细菌作计数。

2.掌握微生物实验中无菌操作技术方法。

二、实验原理水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。

由于重金属及某些其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。

试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。

细菌总数是指l ml水样在营养琼脂培养基中，37ºC、24h 培养后所生长的菌落数。

一般规定，1ml自来水中总菌数不得超过100个。

三、材料和器皿1.培养基：营养琼脂培养基牛肉膏：3-5 g ；NaCl ：5 g ；蛋白胨：10 g ；琼脂：15-20 g；H2O ：1000 ml ；pH ：7.0-7.2.2.无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。

四、方法和步骤1.采集水样。

2.吸取10ml水样(河水、污水、游泳池水或港湾水等)，注入罐有90ml无菌水的三角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。

3.按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、l0-4。

4.营养琼脂培养基(用于河水样)倒平皿(厚度约2-3毫米，12毫升）水平放置至固化。

5.根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、l0-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿0.2 ml，用玻璃刮刀涂匀。

稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30～300个之间。

6.将培养皿倒置于37ºC 培养24h，可观察出明显菌落。

POPULAR SCIENCE大众科普近年来，上海建科检验微生物实验室参加了由中国国家认证认可监督管理委员会组织的、中国检验检疫科学研究院测试评价中心负责实施的饮用水中微生物的检测能力验证。

能力验证是指利用实验室间比对来确定实验室检测/校准能力的活动，它是确保实验室维持较高的校准和检测水平而对其能力进行考核、监督和确认的一种验证活动[1]。

为了提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平，并顺利通过国家组织的能力验证考核，上海建科检验微生物实验室从“人、机、料、法、环、测”几个方面，制定了一份全新的符合检测项目考核的实施方案，并最终顺利通过了能力验证考核。

本文就如何提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平，制定特殊方案，以及解决能力验证考核过程中遇到的难点。

1 细菌总数和总大肠菌群检测方案1.1 明确岗位职责（1）在检测项目考核前，对仪器设备做好调试，确保状态稳定。

（2）在检测项目考核过程中，时刻做好自身安全的防护，检查冲眼器和冲淋器能否使用，并在试验结束后做好试验场所消杀工作。

（3）检测人员必须仔细地填写数据和原始记录，确保出具的结果准确无误。

作者简介：吴丽萍，工程师，主要研究方向为环境工程检测。

对生活饮用水细菌总数、总大肠菌群的检测吴丽萍上海建科检验有限公司，上海 201108科技视界SCIENCE & TECHNOLOGY VISION样和上述稀释度的水样1 mL 分别注入灭菌平板内，且做平行样。

倾注约12～15 mL 营养琼脂，并立即旋摇平板，使水样和培养基充分混匀。

同时，做空白对照。

在36 ℃±1 ℃的培养箱中，培养48 h [3]。

检测计数时，可用眼睛直接观察，或用放大镜检查，以防遗漏。

选择适当 稀释倍数的平板，读取菌落数量，求出同稀释度的平均菌落数[4]。

表2 生活饮用水样品中细菌总数检测实验操作（3）总大肠菌群检测实验操作（多管发酵法）[5]在做总大肠菌群检测实验操作（表3）时，先用10 mL 无菌移液管吸取待测样品到双料乳糖蛋白胨，再用1 mL 无菌移液管吸取待测液到10 mL 单料乳糖蛋白胨。

（新编）自来水中菌落总数的测定一、实验目的1.学习水的细菌学检查方法，看其是否合乎饮用标准。

2.了解水源的平板菌落计数的原则二、实验原理饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总指数和大肠菌群数来确定。

细菌总指数是指lml水样在普通肉膏蛋白琼脂培养基中，37℃24小时培养后所生长的菌落数。

一般规定，1ml自来水的总菌数不得超过100个。

三、实验器材肉膏蛋白琼脂培养基、灭菌水、灭菌三角烧瓶、灭菌的带玻璃塞瓶、灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌试管等。

四、实验步骤1．水样的采取(1)先将自来水龙头用火焰烧灼三min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以无菌容器接取水样。

以待分析。

(2)池水、河水或湖水应取距水面10～15cm的深层水样，先将无菌的带瓶塞的小口瓶，口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，样品最好立即检查，否则须放入冰箱中保存。

2．细菌总数测定(1)自来水1)用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。

共做2份样品。

2)分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的普通琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。

3)另取一空的灭菌培养皿，倾注普通琼脂培养基15m1，作空白对照。

4)培养基凝固后，翻转，置37℃培养箱中，培养24h，进行菌落计数。

两个培养皿的平均菌落数即为lml水样中的细菌总数。

(2)池水、河水或湖水等1)稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。

取1ml 水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀；再自第一管摇匀的水样中取1ml至下一灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。

稀释度倍数看水样污浊程度而定，以培养平板的菌落数在30～300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需进一步稀释或减小稀释倍数。

一般中等污秽水样，取10-1、10-2与10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3与10-4三个连续稀释度。

生活饮用水中水中微生物的检验生活饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少，但当其水源水不洁或处理达不到要求时，仍然会含相当量的微生物甚至含有致病性微生物。

供水管道破损及二次供水等环节也可能导致生活饮用水的污染。

因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的。

我国生活饮用水水质标准(GB5749-85)中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/ml，总大肠菌群不得大于3个/L。

细菌总数相关的检验方法为平皿计数法，总大肠菌群为多管发酵法和滤膜法(GB5750-85)。

生活饮用水卫生标准和标准检验法修订版已在报批中(简称“报批稿”，下同)，“报批稿”中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100cfu/ml，总大肠菌群和粪大肠菌群不得检出(0MPN/100ml)。

cfu即菌落形成单位(colony forming units)，MPN为最近似数。

细菌总数相关的检验方法为平皿计数法，总大肠菌群和粪大肠菌群为多管发酵法和滤膜法。

大肠菌群的测定结果采用了国际上通用的cfu/100ml(或 MPN/100ml)为单位，以利于与国外的测定结果具可比性。

“报批稿”中还增加了粪大肠菌群(fecal coliform)的测定项。

粪大肠菌群的基本性状与总大肠菌群相似，而且是总大肠菌群的一部分，但在44.5℃仍能生长，这又与总大肠菌群不同。

粪大肠菌群细菌来源于人和温血动物的粪便。

检出粪大肠菌群表明已被粪便污染，有可能存在其他肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。

因此粪大肠菌被列为重要的卫生指标菌。

可疑污染的生活饮用水或疫区的生活饮用水有必要进行致病菌或病毒等相关致病性微生物的检验。

一样本采集采集的水样必须具有代表性。

在采集样品的整个操作过程中，必须注意无菌操作；采样容器需经过严格的灭菌；并保证在水样的采集、运送、保存过程中不受任何污染。

在采取自来水样品时，先用酒精灯将水龙头烧灼灭菌，灭菌后把水龙头完全旋开，放水5～10min，待积留于水管中的水排净后再行取样。