本科生实验-水的细菌学检查

实验十水的卫生细菌学检验（综合）a)水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。

二、实验材料样品: 水样2.培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料), 伊红美兰琼脂(EMB)平板, 乳糖发酵管。

3.其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。

由于病原菌的数量少, 检测过程复杂, 因此, 直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。

由于大肠菌群在粪便中数量大, 在体外存活时间与肠道致病菌相近, 且检验方法比较简便, 因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。

如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量, 则说明此水已被粪便污染, 并有可能含有病原菌。

大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌, 并能在乳糖培养基中, 经37℃24~48h培养能产酸产气。

我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。

检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种, 其中稀释培养法是标准分析法, 为我国大多数卫生单位和水厂所使用。

它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

四、方法与步骤1.采样: 取100ml磨口带塞玻璃瓶, 包扎后, 干热灭菌备用。

2.取自来水样时, 至少应先放水5min, 以冲去龙头口所带的微生物, 获得主流管中有代表性的水样。

取样时, 用右手握瓶, 左手启开瓶塞, 用覆盖瓶口的纸托住瓶塞, 收集样品后, 连同覆盖纸一起将瓶口塞好, 并用线绳在原处扎好。

注意手指不得触及瓶口内部。

在静水中取样时, 先用右手揭去塞子, 瓶口朝下浸入水下约30cm处, 然后将瓶子反转过来, 待水注满后, 取出塞好瓶口。

如果水在流动, 瓶口必须迎着水流, 以免手上的细菌被水冲进瓶子。

3.水样放置过程中, 内含的细菌数目和类型会发生变化, 所以要求水样品应于6~10℃贮存,并不超过6h。

4.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内, 10ml接种量采用双料发酵管, 而lml及lml以下接种量采用单料管。

水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后,所得1 mL水样所含菌落的总数.细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。

由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。

3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分2.2 制法：根据实际需要量,按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7。

6,分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤.），经103。

43 kPa（121°C，15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

4.仪器和材料4.1仪器:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱.4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。

4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。

5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3—5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml.5.2纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.5.3地表水的取样:应取距水面10-15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。

6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

水质的细菌学检查一、目的要求(一)学习水质的细菌学检查法(二)了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。

二、基本原理检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。

饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。

大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37℃培养24小时即能产酸、产气，所以常将其作为粪便污染的标志。

饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水肠菌群数不得超过3个。

三、实验材料培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。

四、实验客(一)采取水样1、自来水：从学校各生活区取样。

先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2分钟后，用无菌空瓶接取水样。

2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面 10—15厘米深层水样。

水样采取后应立即检验，不得超过4小时。

(二）水中细菌总数测定l、自来水：稀释水样：原水样和10-1 水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。

每皿各加13--15毫升已融化并冷却到4 5-- 50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温箱，培养24小时进行菌落计数。

制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备培养基配方：附录二、常用培养基之一培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数2、池水、湖水或河水等。

稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。

试验六水质的细菌学检验Ⅱ、水中大肠菌群（Coliform group）细菌的检测一、目的和原理如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起肠道传染病。

由于肠道病原菌在水中数量较少，故从水中特别是自来水中分离病原菌常常非常困难。

大肠菌群细菌是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌，所以常常将其作为粪便污染的指示菌。

即根据水中大肠菌群细菌的数目来判断水源是否受粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。

一般规定每1000ml自来水中大肠菌群细菌不得超过3个。

大肠菌群细菌是指一类好氧或兼性厌氧，能发酵乳糖，在乳糖培养基中经37℃24小时培养，能产酸产气，革兰氏阴性，无芽孢的杆菌。

本试验采用多管发酵法，以最近似数的方式来记载，此一数字是根据概率公式来估算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减少偏差。

本法除了用于检测水样（淡水或海水）外，尚可用于泥浆、沉积物、污泥等的检测。

测定时先将这类固体或半固体样品预先称重，再加水稀释，可取50克样品，置于盛有450ml灭菌磷酸盐缓冲液并装有玻璃珠、石英砂的锥形瓶中，振荡1—2分钟，便成10-1稀释，以用于检验。

二、材料与器皿1、培养基二倍浓度的乳糖胆汁液体培养基一倍浓度的乳糖胆汁液体培养基伊红——美蓝琼脂（E．M．B．）培养基亮绿乳糖胆汁（B．G．B）液体培养基营养琼脂培养基2、灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染液、灭菌培养皿。

方法与步骤（1）假定试验①用10ml水样，接种到二倍浓度的乳精胆汁管中去，重复接三支。

②用lml水样，接种到一倍浓度的乳精胆汁管中去，重复接种三支。

③制备水样10-1和10-2的稀释液。

④分别接种lml10-1和10-2稀释液到一倍浓度的乳糖胆汁管中，每个稀释液接种三支。

⑤在35℃中培养48小时，观察有无气体和酸产生。

⑥在48小时以内，培养管内倒置的杜汉氏管中有任何量的气体积累，便可断定为阳性假定试验。

水质的细菌学检测一、实验目的学习水中细菌总数及大肠菌群数测定的原理，并掌握其操作方法。

二、实验原理1、细菌总数的测定：水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。

由于重金属及其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。

本实验采用标准平皿法对水样中细菌做计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度。

由此法所得的菌落数实际上要低于水样中实际活菌的数目。

一般规定，1ml饮用水中总菌数不得超过100个。

2、大肠菌群数测定：采用多管发酵法，以最近似数的方法来记载。

此一数字是根据概率公式来计算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减小偏差。

三、实验器材培养基：营养琼脂培养基材料：无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿、盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管、杜氏小管、革兰氏染液四、实验步骤（一）细菌总数的测定1、样品稀释液的制备采集水样，吸取10ml水样，注入盛有90ml无菌水或生理盐水与三角瓶中，混匀成10-1稀释液，按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3，每个稀释度分别注入两个培养皿中，每皿1ml。

2、平板接种培养采用混合平板培养法计数，每一稀释度设置2个重复，然后在6个培养皿中分别倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷凝后倒置，适温培养，至长出菌落即可计数。

3、结果报告与计算计算结果时，每个稀释度使用两个平板，取其平均值，达到规定培养时间，应立即计数，应将平板放置于0~4℃，但不得超过24h，不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。

（二）大肠菌群检验1、乳糖发酵试验样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管，并留一管作为空白对照，36±1℃培养24±2h，观察是否产气。

2、报告根据观察到的产气管数，即大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml （g）大肠菌群的MPN值。

实验五水中细菌总数的检测一、实验目的1.采用标准平皿法对水样中细菌作计数。

2.掌握微生物实验中无菌操作技术方法。

二、实验原理水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。

由于重金属及某些其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。

试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。

细菌总数是指l ml水样在营养琼脂培养基中，37ºC、24h 培养后所生长的菌落数。

一般规定，1ml自来水中总菌数不得超过100个。

三、材料和器皿1.培养基：营养琼脂培养基牛肉膏：3-5 g ；NaCl ：5 g ；蛋白胨：10 g ；琼脂：15-20 g；H2O ：1000 ml ；pH ：7.0-7.2.2.无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。

四、方法和步骤1.采集水样。

2.吸取10ml水样(河水、污水、游泳池水或港湾水等)，注入罐有90ml无菌水的三角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。

3.按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、l0-4。

4.营养琼脂培养基(用于河水样)倒平皿(厚度约2-3毫米，12毫升）水平放置至固化。

5.根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、l0-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿0.2 ml，用玻璃刮刀涂匀。

稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30～300个之间。

6.将培养皿倒置于37ºC 培养24h，可观察出明显菌落。

检测水中细菌实验报告实验目的本实验旨在探究不同水源中细菌的存在情况，以检测水质是否安全，并且比较不同水源中细菌的数量差异。

实验材料1. 不同水源的取样瓶- A组：自来水，B组：河水，C组：井水2. 细菌培养基3. 培养皿4. 恒温培养箱5. 显微镜6. 微生物鉴定手册实验步骤1. 将取样瓶置于实验台上，避免受到其他污染源的干扰。

2. 分别取代表性的自来水、河水和井水样品，并将每个样品分别装入对应组别的取样瓶中。

3. 将每个样品的取样瓶稍微晃动，以确保细菌均匀分布于水中。

4. 取样瓶的标签上注明所属组别。

5. 在实验室中，为每个组别准备三个培养皿，并在每个培养皿中倒入细菌培养基（约满一半）。

6. 分别将A组、B组和C组的水样倒入相应的培养皿当中。

7. 用试管夹将每个培养皿退出4毫升的液体（水样+培养基），并转移到三个不同的培养皿中，确保菌液均匀地分散。

8. 紧密盖上培养皿的盖子，将其放入恒温培养箱中，设置合适的培养温度（例如37）。

9. 培养72小时后，取出培养皿进行观察，并使用显微镜观察细菌的形态。

10. 根据细菌的形态和相应的实验结果，使用微生物鉴定手册进行细菌的鉴定与分类。

实验结果观察培养皿后，我们发现以下结果：- A组（自来水）：培养皿上观察到一些细菌的生长，但数量较少。

- B组（河水）：培养皿上观察到大量细菌的生长，并且形成了密集的细菌菌落。

- C组（井水）：培养皿上观察到适量细菌的生长，数量介于A组和B组之间。

实验分析根据细菌的生长情况，可以初步得出以下结论：1. 自来水中的细菌数量较少，说明自来水的水质较为安全。

2. 河水中的细菌数量较多，可能存在潜在的食品污染风险，需要处理后才能安全饮用。

3. 井水中的细菌数量处于中等水平，需要进一步检测和处理，以确保水质安全。

实验总结通过实验我们了解到不同水源中细菌的存在情况，同时比较了各个水源中细菌数量的差异。

实验结果显示，自来水的水质较为安全，而河水和井水中细菌的数量则需要进一步处理。