AGP手性柱应用实例
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CHIRAL-AGPα-酸糖蛋白(AGP)是一种非常稳定的蛋白质,它不溶于各种有机溶剂,耐高温以及较高或较低的PH值。
AGP是CHIRAL-AGP柱的手性选择体,键合5μm的球形硅颗粒。
CHIRAL -AGP柱适用于反相色谱,用途十分广泛,不仅能用于直接分离没有衍生物的对映异构体,也能分离分子量很广的药物化合物的对映异构体。
CHIRAL-AGP 是目前使用最广泛的手性柱之一。
能分离的化合物:∙胺(伯、仲、叔、季胺)∙酸(强酸、弱酸)∙非光解质(酰胺、酯、醇、亚砜等)尤其还能分离坦索罗辛,分离度达1.5以上。
应用范围在制药公司、医院、大学和化工厂,CHIRAL-AGP用于对映体的纯度分析及生物分析。
随着应用范围的扩大,半制备柱也可分离纯的对映异构体。
流动相大多数的分离都是非常简单的流动相系,水缓冲流动相与低浓度有机溶剂,如异丙醇或乙腈。
该柱的手性选择性及保留值可以通过改变流动相的PH、缓冲液的浓度和性质以及有机改性剂的浓度来调节。
绝大多数(>95%)的分离使用上述简单的流动相。
但是,控制相为DMOA(N,N-二甲基辛胺)、辛酸和丁胺化合物时可提高对异构体的选择性。
尺寸CHIRAL-AGP提供内径为2,3,4和10mm,长度为50,100和150mm几种类型的柱子。
保护柱提供长10mm、内径2,3,4mm三种类型。
CHIRAL-AGP产品规格应用谱图用CHIRAL-AGP 100x4.0 ,低pH值条件下分离带三个芳环碱性化合物。
Alimemazine缓冲液浓度对甲氧萘丙酸对映体的保留时间的影响0.01M 磷酸钠缓冲液pH7.0 0.05M磷酸钠缓冲液pH7.0。
Nov 2005 Page 1手性柱 CHIRALPAK? AD使用手册请在使用色谱柱前仔细阅读本《使用手册》色谱柱描述:10卩硅胶表面涂布有直链淀粉—三(3,5 —二甲苯基氨基甲酸酯)出厂保存溶剂: 正己烷/异丙醇(90:10 v/v )0 to 40 ° C最大流速也和流动相粘度(流动相成分)有关,必须小心不能超过柱压上限流动相 250 x 4.6mm ID250 x 10mm ID 250 x 20mm ID 烷烃/醇类 90:10 1.0 to 1.5 ml/min5.0 to 7.0 ml/min 18 to 25 ml/min 100%乙醇0.5 ml/min 2.0 to 3.0 ml/min5.0 to 8.0 ml/min 100% 异丙醇0.2-0.3 ml/min1.0 ml/min3.0 to 5.0 ml/min柱压指色谱柱压降,即接上柱子后系统的压力与未接柱子时系统压力的差值。
填料结构: CH250 x 4.6 mm ID250 x 10 mm ID半制备柱250 x 20 mm ID半制备柱流动相方向 参照色谱柱标签上的箭头典型流速 1.0 ml/min 不要超过1.5ml/min 柱压范围5.0 ml/min 不要超过7ml/min< 30 Bar ( 约 430 psi) 不要超过50 Bar ( 约700 psi) 18 ml/min 不要超过25ml/min温度R =OCH该色谱柱在岀厂之前都已经通过了检测,检测条件、结果和批号信息请查阅“岀厂检测报告”。
有助于柱子最长寿命的理想值,但是只要在50 Bar之内柱子就没事。
A -流动相烷烃:正己烷,异己烷或正戊烷,不同的烷烃有不同的选择性。
己烷/乙醇5/15〜40/60的流动相会损坏固定相,从而影响基线稳定性。
如果要将15%乙醇换成60%乙醇的流动相,建议使用100 %的异丙醇作为过渡溶剂,过渡流速要小一些(异丙醇的粘度较大)。
手性药物的分离在色谱法中的应用手性药物是指具有手性结构的药物,也就是说它们的分子是非对称的,存在左右手两种立体异构体。
其中一种形式可能具有治疗作用,而另一种可能无效甚至有害。
对手性药物的分离至关重要。
色谱法是一种常用的手性药物分离技术,本文将着重介绍手性药物在色谱法中的应用及其原理。
色谱法是一种利用不同成分在固定相和流动相之间相互分配系数不同来进行分离的分析方法。
色谱法可以分为气相色谱(GC)和液相色谱(LC)两种。
对于手性药物的分离,通常采用的是LC方法。
LC色谱法中,通常使用手性色谱柱和手性色谱填料进行手性药物的分离。
手性色谱柱是针对手性化合物设计的专用柱子,具有对手性分子选择性的特点。
手性色谱填料是填充在手性色谱柱中的固体填料,可以提供手性分离所需的手性识别性。
手性色谱柱和手性色谱填料的使用,使得手性药物的分离更加准确和高效。
手性药物在色谱法中的分离原理主要包括手性识别机理和手性分离机理。
手性识别机理是指手性色谱填料对手性分子产生特异性作用的机制。
手性色谱填料通常由手性选择性的分子构成,当手性分子进入填料内部时,它们会与填料发生作用,使得分子在填料中进行分离。
手性分离机理是指手性分子在手性色谱柱上进行分离的机制,它涉及到分子在固定相表面吸附、解吸和扩散的过程。
手性色谱法在手性药物分离中的应用十分广泛。
它具有分离效果好、操作简便、灵敏度高等优点,被广泛应用于制药、医药等领域。
下面我们将通过实例介绍手性药物在色谱法中的应用。
实例一:利他净(Racemic Amphetamine)的手性分离利他净是一种常用的治疗多动症和注意力缺陷障碍的药物,其分子中含有手性中心,存在左旋和右旋两种手性异构体。
对于多数病患来说,其中仅含有右旋异构体的单一药物是更有效的。
需要对其进行手性分离。
利他净的手性分离可以采用手性色谱柱进行。
利他净通常使用液相色谱法进行手性分离,选择手性色谱柱进行分离。
手性色谱柱的填料对利他净的手性分离起到关键作用。
蛋⽩质型: 蛋⽩质型⼿性⾊谱柱属于第5种类型。
分离依赖于疏⽔相互作⽤和极性相互作⽤。
已经有多种蛋⽩质⽤于此类⼿性⾊谱柱。
⽬前使⽤较多的是α-酸性糖蛋⽩(α-Acid Glycoprotein,AGP),⼈⾎清⽩蛋⽩(Human Serum Albumin,HSA),⽜⾎清⽩蛋⽩(Bovine Serum Albumin,BSA)和卵类粘蛋⽩(Ovomucoid,OV)。
α-酸性糖蛋⽩分⼦由181个氨基酸残基和40个唾液酸(sialic acid)残基构成。
α-酸性糖蛋⽩分⼦偏酸性,等电点为2.7。
含有两个⼆硫键,性质很稳定。
α-酸性糖蛋⽩分⼦可以共价键合到硅胶上,制成⼿性⾊谱柱,可以分离许多化合物。
α-酸性糖蛋⽩⼿性⾊谱柱使⽤的流动相通常为pH 4-7的磷酸盐缓冲液和很⼩⽐例的有机相。
有机相⾸选异丙醇,如达不到分离要求,可以尝试⼄腈,⼄醇,甲醇或四氢呋喃。
有机相的改变导致蛋⽩结构发⽣暂时的改变。
⾊谱柱的负载量⾄关重要,典型的负载量为0.02mg/ml的浓度样品,进样20µl。
pH 的改变对⼿性选择性起关键作⽤,尤其是胺类化合物。
pH降低导致蛋⽩质负电荷的降低,引起胺类化合物保留时间减⼩,然⽽这意味着可以减⼩有机相⽐例,使选择性增加,峰形改善。
通过调节有机相⽐例仍⽆法达到分离效果时,有时需⽤电荷调节剂。
但这可能引起蛋⽩结构的永久改变,这些电荷调节剂包括丁酸、⾟酸、癸酸和⼆甲基⾟胺。
有时也⽤到1,2 亚⼄基⼆醇,1,2丁醇和氯化钠。
温度对分离也有影响,温度增加保留时间,减⼩分离因⼦。
⼈⾎清⽩蛋⽩(HSA)分⼦量为69,000,等电点为4.8。
蛋⽩中认为存在两个药物结合位点:华法令-氮杂普鲁帕宗(warfarin-azapropazone)和苯基⼆氮杂-吲哚(benzodiazapine-indole)结合位点。
流动相中加⼊⾟酸,采⽤⼈⾎清⽩蛋⽩⼿性⾊谱柱可以有效分离benzodiazapine。
agp色谱柱说明书一、引言AGP色谱柱是一种常用的色谱柱,广泛应用于药物代谢研究和生物样品分析领域。
本说明书将详细介绍AGP色谱柱的特性、使用方法和注意事项,以帮助用户正确选择和操作该色谱柱,获得准确可靠的实验结果。
二、产品特性1. 良好的分离性能:AGP色谱柱采用独特的固定相材料,能够有效分离和富集药物代谢产物和生物样品中的目标化合物。
2. 超高效分离:该色谱柱具有较高的分离效率和分离峰对称性,能够满足对分析灵敏度和分辨率要求较高的应用。
3. 良好的稳定性:AGP色谱柱具有较好的化学稳定性和热稳定性,可适应不同的工作条件和样品溶剂。
4. 广泛适用性:该色谱柱适用于各种常见的HPLC分析设备,可广泛应用于药物代谢研究、生物样品分析等领域。
三、使用方法1. 样品制备:将待分析的样品按照常规方法制备,保证样品的纯度和浓度。
2. 色谱条件设置:根据实验需要,选择合适的流动相组成和流速,控制柱温、检测波长等参数。
3. 样品进样:使用适量的样品溶液,通过自动进样器或手动进样器将样品注入色谱柱。
4. 色谱分离:打开色谱柱系统,开始进行分离。
根据实验需要,可以进行梯度洗脱或等温洗脱等操作。
5. 数据采集与分析:使用合适的软件进行数据采集和分析,记录分离峰的保留时间和峰面积。
四、注意事项1. 色谱柱的储存:请将色谱柱存放于干燥、避光、低温的环境中,避免暴露于阳光和高温环境中。
2. 色谱柱的使用寿命:根据实验条件的不同,AGP色谱柱的使用寿命会有所差异。
一般情况下,建议每天使用后进行正常的冲洗和保养,以延长色谱柱的寿命。
3. 流动相的选择:根据分析物的特性和目的,选择适合的流动相,保证色谱柱的稳定性和分离效果。
4. 样品溶剂的选择:请使用纯度较高的溶剂,并应用过滤器滤除杂质,以防止对色谱柱造成损坏。
5. 柱温的控制:适当控制柱温,可以改善色谱柱的稳定性和分离效果,提高分析的重复性和可靠性。
6. 操作安全:在使用色谱柱时,应遵守实验室的安全操作规范,避免对自身和他人造成伤害。