大赛路手性柱Q&A及手性分离经验

1、OD柱与ODH柱是不是一种柱子啊，另外还有AD与ADH，OJ与OJH关于手性柱，OD柱与ODH柱是不是一种柱子啊？OD柱与ODH柱是不是一种柱子啊，另外还有AD与ADH，OJ与OJH，谢了柱子的型号不同说明他的手性填充物不同。

OD和OD－H的区别是相同的填充物，OD－H的填充密度大，更紧，效果更好。

CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD是什么区别？CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。

只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK AD-H是5 μm，CHIRALPAK AD是10 μm。

CHIRALPAK AD-H能代替CHIRALPAK AD并且CHIRALPAK AD-H柱效更高。

2.手性柱谱图中异构体的分离度下降了，这可能是什么原因，该怎么办？分离度下降的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。

首先查看是否是因为温度、流动相成分等外在因素发生了变化导致分离度下降，如果排除了各种外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降导致的。

如果分离度在短时间内急剧下降伴随柱压上升，可能是有强极性溶剂损害了柱子；如果分离度在长时间内慢慢下降，可能是柱头受污染或柱头塌陷，需要更换保护柱或者更换分析柱。

3.正相手性色谱柱柱压高了怎么办？手性柱压力高的原因有可能是流动相中醇的含量太高，或者液相流路中有堵塞，或者柱头有样品析出，或者填料被压缩柱头塌陷等。

针对不同的原因请有针对性的采取相应的措施。

如果是流动相中醇含量太高，则需要升高温度或者降低流速。

如果液相流路中有堵塞需要排除堵塞。

如果柱头有样品析出则需要使用流动相溶解样品以及样品预处理除掉样品中易析出的成分。

如果填料被高压压缩柱头塌陷，则需要重新购买新的手性柱。

4.正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不超过柱压上限，柱子就不会损坏。

大赛璐多糖衍生物反相手性柱产品概述：CHIRALPAK AD-H，AS-H和CHIRALCEL OD-H，OJ-H在正相领域中获得了广泛的应用，大赛璐同时也开发了相应的反相手性柱。

与正相柱相比较，反相柱涂敷的手性聚合物与正相柱相同，但是所用的硅胶不同。

反相高效液相色谱手性系列柱CHIRALPAK AD-RH、CHIRALPAK AS-RH、CHIRALCEL OD-RH和CHIRALCEL OJ-RH是分别将淀粉-3，5-二甲苯基氨基甲酸酯、淀粉-s-a-甲基苄基氨基甲酸酯、纤维素-3，5-二甲苯基氨基甲酸酯和纤维素-4-甲苯甲酸酯涂敷在5μm的硅胶表面。

反相柱也适合应用于LC/MS中。

CHIRALPAK AD-3R、CHIRALPAK AS-3R、CHIRALCEL OD-3R和CHIRALCEL OJ-3R 是填料粒径为3μm 的反相手性色谱柱，使用了高通用性的手性选择剂，可对各类化合物进行光学拆分。

由于能实现很高的理论塔板数，即使是短柱也可以在缩短分析时间的基础上显示出优异的分离能力。

更小粒径填料的优点：更高效更快出峰时间优化HPLC系统一般而言，这四种反相手性柱的应用范围和手性分离性能与它们各自相应的正相柱（CHIRALPAK? AD、CHIRALPAK? AS、CHIRALCEL? OD和CHIRALCEL? OJ）相似，但需要说明的是反相柱里的色谱填料基质与正相柱有所不同。

为避免损坏手性柱，正相与反相两类手性柱不宜混用。

反相柱使用水－有机溶剂流动相，适合分析水溶性样品（比如生物活性样品），或者对pH有特定要求的样品。

要避免极端pH，因为这样会损伤固定相的硅胶基质。

反相柱主要适用于下列分析对象：1. 使用含水的流动相进行手性拆分；2. 手性拆分水溶性样品；3. 离解或可离解样品的拆分；另外，反相手性柱在必要时可以与通常的非手性普通反相柱（如ODS柱）串联使用，以便使待分离组分与样品中的其他杂质分开。

大赛璐if色谱柱说明书一、产品概述大赛璐if色谱柱是一种优质、高效的液相色谱分析仪器配件。

色谱柱内填充着特制的大赛璐if固定相，可广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。

本说明书详细介绍了大赛璐if色谱柱的性能特点、使用方法和注意事项，以帮助用户正确高效地使用该产品。

二、产品特点1. 高效分离能力：大赛璐if色谱柱填充物具有独特的表面性质，能够有效分离复杂混合物中的成分，提高分析效果。

2. 快速分析速度：采用高效的填充材料和优化的柱片结构，大赛璐if色谱柱能够在短时间内完成复杂样品的分析，提高工作效率。

3. 耐酸碱性能强：大赛璐if色谱柱的填充物具有良好的耐酸碱性能，能够适应不同样品的酸碱条件。

4. 耐高温性能好：大赛璐if色谱柱能够在高温下保持稳定的性能，提供长时间的使用寿命。

三、使用方法1. 样品前处理：在使用大赛璐if色谱柱进行分析前，需要对样品进行前处理以去除杂质和提纯样品。

2. 柱片连接：将色谱柱与色谱分析仪器连接，在连接过程中要保证连接处密封严密，以避免柱片泄漏。

3. 流动相准备：根据分析要求，准备好合适的流动相，并将其加载到色谱仪中。

4. 参考标准品：准备好参考标准品，在分析过程中进行检测和校准。

5. 样品加载：将经过前处理的样品加载到色谱仪中，控制好样品的注入速度和量。

四、注意事项1. 色谱柱存储：大赛璐if色谱柱应存放在阴凉、干燥的地方，避免阳光直射和高温。

2. 柱片清洗：每次使用完毕后，应将色谱柱进行清洗，以避免污染和交叉感染。

3. 流动相选择：根据样品的性质和分析要求，选择合适的流动相，并进行必要的调整和优化。

4. 柱片更换：当发现色谱柱分离效果下降或柱片出现损坏时，应及时更换新的色谱柱。

5. 操作规范：在使用大赛璐if色谱柱时，应严格按照说明书和操作规范进行操作，以确保分析结果的准确性。

五、售后服务大赛璐if色谱柱提供全面的售后服务，包括产品技术支持、常见问题解答以及售后维修等。

手性色谱柱知识介绍手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。

通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。

要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。

这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。

手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。

这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。

由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。

在手性拆分中，温度的影响是很显著的。

低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。

因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。

迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。

不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。

根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。

第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。

此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。

第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。

这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。

第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。

第5类：蛋白质型手性色谱柱。

手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。

一、键合手性柱简介多糖涂敷型手性柱，如CHIRALPAK®AD-H/CHIRALPAK®AS-H/CHIRALCEL®OD-H/CHIRALCEL®OJ-H等，其涂敷在硅胶表面上的各种衍生物有可能被一些有机溶剂溶解或溶胀。

因此，可用作流动相组分及样品溶解液的溶剂非常有限。

通过化学键合的方法将多糖衍生物固定在硅胶表面而制得的键合型手性固定相，即可克服涂敷型手性固定相的不足之处。

为了满足市场的需求，大赛璐公司凭借多年的研究成果和独有的技术，已推出了新一代化学键合型手性色谱柱系列：CHIRALPAK®IA，CHIRALPAK®IB和CHIRALPAK®IC。

CHIRALPAK®IA是将淀粉-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µm），相应的涂敷型色谱柱是CHIRALPAK®AD （CHIRALPAK®AD-H）；CHIRALPAK®IB 是将纤维素-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µM）, 相应的涂敷型色谱柱是CHIRALCEL®OD （CHIRALCEL®OD-H）；CHIRALPAK®IC将纤维素-3,5-二氯苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µM）（注意：相应的涂敷型色谱柱没有商品化）。

其化学结构式如下图所示。

新一代化学键合型手性柱具有下列特点：·通用于所有液相色谱流动相·新分离选择性·样品溶解液没有任何限制·高柱效高分离性能·柱寿命长，可再生·操作方便，简单，灵活新一代共价键合手性柱不仅可以使用那些常用在涂敷型手性柱上的流动相体系，如烷烃/醇类，更为重要的是还适用于诸如乙酸乙酯、四氢呋喃、甲基叔丁基醚、二氯甲烷、三氯甲烷等这些不适宜用在涂敷型手性柱上的溶剂。

Nov 2005 Page 1请在使用色谱柱前仔细阅读本《使用手册》填料结构： 5 μ硅胶表面涂布有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]出厂保存溶剂： 正己烷 / 异丙醇（90:10 v/v ）该色谱柱在出厂之前都已经通过了检测，检测条件、结果和批号信息请查阅“出厂检测报告”。

警 告 ：将色谱柱接到色谱仪之前，必须先用合适的溶剂冲洗流路（包括流通阀和定量环）。

有些溶剂（比如丙酮、氯仿、DMF 、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF ）会破坏手性固定相的结构。

如果使用的是自动进样器，进样间隔的冲洗液也必须更换成合适的溶剂。

150 x 4.6 mm ID 250 x 4.6 mm ID分析柱250 x 10 mm ID半制备柱250 x 20 mm ID半制备柱流动相方向 参照色谱柱标签上的箭头典型流速• 1.0 ml/min不要超过 1.5 ml/min5.0 ml/min 不要超过7.0 ml/min 18 ml/min 不要超过25 ml/min 柱压范围‚ < 50 Bar (约700 psi)ƒ 不要超过100 Bar (约1400 psi)温度0 to 40°C• 最大流速也和流动相粘度（流动相成分）有关，必须小心不能超过柱压上限。

流动相 250 x 4.6 mm ID 150 x 4.6mm ID 250 x 10 mm ID 250 x 20 mm ID 烷烃/醇类 90:101.0 to 1.5 ml/min 5.0 to 7.0 ml/min 18 to 25 ml/min100% 乙醇0.5 ml/min2.0 to3.0 ml/min5.0 to 8.0 ml/min100% 异丙醇0.2-0.3 ml/min1.0 ml/min3.0 to 5.0 ml/minR =手性柱 CHIRALCEL ® OD-H使用手册33‚柱压指色谱柱压降，即接上柱子后系统的压力与未接柱子时系统压力的差值。

第十一期常见手性色谱柱的使用条件，2014-03-10蒋竞波谱分析常见手性色谱柱的使用条件1）使用频率最高的还是常说的四大金刚，据大赛璐说这四大金刚能解决90%的手性化合物的差分，即正相的 AD-H,AS-H,OD-H,OJ-H,反相的AD-RH,AS-RH,OD-RH,OJ-RH,个人使用过程的体会来看，发现这四根柱子的确不愧为四大金刚，效果的确很不错2）另外大赛璐新推出的IA,IB,IC,ID,使用起来感觉主要好处是，正反相都能用，另外就是感觉好像要比四大金刚耐用一些，3）常见色谱柱分类情况如下正相有：l直链淀粉衍生物CHIRALPAK®AD / AD-H/AD-3CHIRALPAK®AS / AS-H/AS-3CHIRALPAK®AY-H/AY-3CHIRALPAK®AZ-H/AZ-3l纤维素衍生物CHIRALCEL® OD / OD-H/OD-3CHIRALCEL®OJ / OJ –H/OJ-3CHIRALCEL®OZ –H /OZ-3CHIRALCEL®OA, OB, OC CHIRALCEL®OF, OG, OK CHIRALCEL®CA-1反相有：反相CHIRALPAK®AD-RH/AD-3RCHIRALPAK®AS–RH/AS-3RCHIRALCEL®OD-RH/OD-3RCHIRALCEL®OJ–RH/OJ-3RCHIRALPAK®AY–RH/AY-3RCHIRALCEL®OZ–RH/OZ-3R正反相都能用的：共价键合型CHIRALPAK®IA/IA-3CHIRALPAK®IB/IB-36）从倾向来看，我比较推荐的使用反相，因为一般来说，反相纯度方法一般会优先于手性方法开发，如果用反相开发手性，流动相pH以及梯度，温度等基本可以参考，基本不会有峰型的问题，后期需要做的主要是柱子填料的选择，相对来说要来的快，不过也有很多人比较喜欢正相，正相有的时候的确有它的优越性，从大赛璐附的一些谱图来看，正相分离的时候，看起来分离度一般都不反相要好，这个就是萝卜白菜各有所爱了。

手性柱应用介绍1 Daicel手性柱使用溶剂的限制众所周知，手性柱固定相对溶剂很敏感，使用时稍有不慎，即可对固定相造成不可修复的损伤。

一般情况下，要避免使用的溶剂有丙酮、氯仿、二氯甲烷、THF和DMSO等，即使少量上述溶剂残留在管路、进样阀中也是色谱柱的潜在威胁，所以事先必须清洗干净。

2 为什么柱效会降低？有没有再生方法？所有大赛璐柱子在出厂前均已检测柱效合格。

造成柱效降低的原因有：1）柱效急速下降绝大多数情况是色谱柱固定相被损伤(溶解/水解脱落)，造成固定相损伤的物质可能来源于样品，溶剂，也可能来源于上一次进样残留于管路、进样阀中的杂质。

这种情况对柱子冲洗或再生已无效。

2）柱效逐渐下降原因：有强保留物质逐渐聚集在柱头筛板甚至是固定相上解决办法：用强溶剂冲洗或更换筛板3）旧柱子能分开的化合物换上新柱子就分不开了原因：“记忆效应”（有时，也有批次间的差异），一些强保留物质（如additive）保留在固定相上对手性诱导环境有一定的影响。

解决办法：如果之前用过添加剂，就在流动相中继续添加此类添加剂，并对柱子平衡数小时再进样，但此方法有时仍然解决不了问题，这时应该可虑更换其它的分离条件。

3 如果样品不溶于正己烷/醇体系，怎么办？一般情况下，分析用时，0.5-1mg/mL的浓度就可以满足检测，所以不用加大样品浓度对于酸、碱化合物，在流动相中适当的加入少量的强酸或强碱（如TFA/DEA）有助于样品的溶解，推荐添加浓度在0.1-0.2%，大于此浓度会损坏固定相。

4 几种常用手性柱的使用（以5μ和10μ填料为例）1）Chiralpak ADIPA：0-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane）EtOH: 0-15% in alkane or 60-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane）MeOH: (1)0-100% EtOH or IPA in MeOH or 0-15% ACN in MeOHIdeal starting conditions: MeOH/EtOH 50:50(v/v) when alcohol mixtures are required(2)0-15% in alkane or 60-100% in alkane（n-hexane or iso-hexane, or n-heptane）【注意：使用纯极性溶剂做流动相后，此色谱柱应做到专柱专用】ACN：not compatible with alkane0-100% IPA in ACN or 0-15% MeOH or EtOH in CAN【注意：使用纯极性溶剂做流动相后，此色谱柱应做到专柱专用】MTBE: Not allowedAcid: TFA or CH3COOH, <0.5%, Typically 0.1%Base: DEA or Butyl amine or Ethanol amine, <0.5%, Typically 0.1%Column-Temp: below 40DEG2）Chiralpak AD-H同Chiralpak AD，不同之处在于，当使用正己烷/乙醇（甲醇）体系时，醇比例范围可以是0-100% 3）Chiralpak OD-H同AD-H，不同之处在于，OD-H可以使用MTBE/alkane（或Alkane/EtOH），MTBE<50%, 当使用MTBE 后，色谱柱平衡时间要加长4）Chiralpak OD同OD-H，不同之处在于，OD不能使用ACN体系CYCLOBOND I 2000CYCLOBOND I 2000 是β-环糊精化学键合固定相，CYCLOBOND I 2000及其衍生物CYCLOBOND I 2000 AC，SP和RSP可以运行于反相或极性有机相模式。