毒理学上半部分总结
目前还存在以下几点需要补充和细化的地方：
⑴代谢活化的两相
⑵癌基因的分类，具体机制
⑶细胞恶性转化后的特点
第十六章药物致突变作用的研究及其试验方法
一、试验
（一）原理
组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌在缺乏组氨酸的培养基上不能生长，但在加有致突变原的培养基
上培养，可产生回复突变，恢复合成组氨酸的能力成为野生型，能在缺乏组氨酸的的培养基上生
长成为菌落，通过计数菌落出现的数目就可以估算药物诱变性的强弱。
正向突变
鼠伤寒沙门菌组氨酸+ 鼠伤寒沙门菌组氨酸-
（野生型）回复突变（突变型、营养缺陷型）
S9混合液
受试物
（二）常用试验菌株
菌株名称突变基因附加突变突变类型
修复R因子
97、98 △101 移码突变100 △101 碱基取代102 △101 移码突变、碱基取代注：,组氨酸脱氢酶的结构基因；，磷酸核糖合成酶的基因，100和98可推荐用于大多数致突变物和致癌物的检测
（三）计量设计
西药＜＝5皿，中药可超过5皿，最低剂量1皿或0.1皿，至少五种不同剂量（药物不溶于水可用或乙醇作溶剂）
（四）对照组
用溶媒作阴性对照；已知致突变作阳性对照；使用间接诱变物作对照时，注意平行设加S9与不加S9的对照。
（五）代谢活化：S9（经诱导剂处理过的肝脏微粒体酶）
（六）试验方法：渗入法；点试法
（七）结果判断
1、渗入法：当药物浓度达到5皿仍为阴性者，可以认为是阴性。
2、点试法：凡在滤纸片周围长出一圈密集的回变菌落，该药物即为致突变物质，如只在平皿上出现少数散在的自发回变菌落，则为阴性。
二、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验（对象，选材，剂量，实验设计（理解），结果判定，公式（考试不给））
（一）动物
1、细胞：中国仓鼠肺细胞（）
2、剂量：至少三种不同剂量，高剂量以50%细胞生长抑制浓度，但最高不要超过10，
中低剂量采用倍量稀释法。
3、代谢活化：S9（哺乳动物肝微粒体酶）进行体外代谢活化。
4、药物作用时间：非活化组分别作用24和28小时收获细胞，活化组作用6小时以上。
5、标本制作时间：分别在24和48h收获细胞制作标本，活化组可省略48h时间点。
6、对照：空白对照、阳性对照、溶剂对照和S9对照。
1 7、镜检：每种浓度至少观察100个中期分裂相细胞的染色体结构。
8、结果判定
染色体畸变率（%）= 染色体畸变总数/分析染色体的总数＊100%
细胞畸变率（%）=有染色体畸变的细胞数/分析染色体的细胞总数＊100%
畸变率<5%为阴性（-）；畸变率＞5%为可疑（+）；畸变率＞10%为弱阳性（）；畸变率
＞20%为中度阳性；畸变率＞50%为强阳性；若某一测试点呈现可重复的并有统计学意义
的增加也为阳性。
（二）人体外周血淋巴细胞染色体畸变试验
1、剂量：同动物
2、对照：溶媒作阴性对照，已知染色体断裂剂作阳性对照。
3、外周血的采集与培养，静脉2-3，加抗凝剂，培养加肝微粒体酶，药物处理24h或48h终止培养前
加秋水仙素获得更多中期细胞
4、培养细胞的处理，离心，固定
5、标本制作
6、染色，染色20
7、镜检
8、结果判定
三、啮齿动物微核试验（实验过程，剂量选择，步骤，镜检，如何分辨细胞）
（一）原理
骨髓细胞经致突变作用，染色体可发生畸变以致断裂，其断裂的碎片在分裂间期留在子代细
胞内形成规则的一个或几个圆形或椭圆形结构的小块物质，由于它比普通细胞核要小，称之微核。
但骨髓细胞中缺乏代谢活化酶系，对间接诱变物反应较差。有核细胞胞浆少，正常核叶
粒相辨认，在无核的红细胞中才易于辨认。微核检出率与染色体畸变率之间有明显相关性。
（二）剂量：至少三种剂量，最高剂量以1/250为基准，低剂量结合药效学及临床拟用剂量，
再按一定比例插入中间剂量。
（三）实验过程
小鼠，每组10只性成熟动物（雌雄各半）或至少6只性成熟雄性动物
1、给药：一组生理盐水，一组环磷酰胺腹腔注射。
2、涂片：24h后处死，解剖取胸骨，骨髓挤于有一滴小牛血清的载玻片上，推片。
3、固定：甲醇固定15
4、染色：染液
5、观察计数：典型的微核呈圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，用染色后呈紫红或蓝紫色。多染红细胞呈灰蓝色，正染红细胞呈桔黄色。计数1000个中含有微核的数。如不易区分，记录总的微核率即可。
四、果蝇伴性隐性致死试验（实验设计原理，结果鉴定）
（一）原理
亲代雄性果蝇接触药物后X染色体出现隐性致死突变，则F1代雌性果蝇中不表达，而F2代雄性果蝇数中因有一半接受了这个已发生突变的X染色体，结果F2代雄性果蝇比雌性果蝇数目少了一半。至少两个剂量：最高剂量为1/250、低剂量为1/450，无毒物最大给药量为5%
（二）结果判定
致死突变率致死管数/受试染色体数*100%
1、致死突变率大于自然突变率的2倍，并有剂量反应关系时为阳性；
2、F2代，有一支培养管中，雌雄合计20只以上而未发现有雄果蝇为阳性，有2只以上雄蝇为
3、F2代有一支培养管中，雌雄合计少于20只或只一只雄果蝇为可疑，需观察F3代。
4、仅存雌雄亲本而无子代为不育。
五、啮齿类动物显性致死试验（结果鉴定，活胎死胎鉴定方式，结果统计，最后公式）
结果观察：于妊娠第14天处死雌鼠，观察双角子宫内着床数、吸收胎、晚期死胎及活胎数。胚胎已完整成形，色鲜红，有自然运动，机械刺激后有运动反应的为活胎。
胚胎完整成形，并有明显胎盘，但色泽灰暗，无光泽，无自然运动，机械刺激后无运动反应的为晚期死亡胚胎。早期死亡的胚胎的大小，外形和色泽可因死亡时间的相对早迟及死后自溶时间的长短变化很大，一般胎盘较小或不明显，胎盘形体较小，外形不完整，各部位发育尚不完全，呈紫红色，无自然动作。
2 1、平均受孕数（%）=受孕母鼠总数/同笼母鼠总数*100%
2、平均着床数=总着床数（早死、迟死、活胎数）/受孕母鼠总数
3、平均活胎数=活胎总数/受孕母鼠总数
4、平均死胎数=死胎总数/受孕母鼠总数
5、含死胎孕鼠数（%）=含一个以上死胎（早死、迟死）的孕鼠数/受孕母鼠总数*100%
6、突变指数（M1）=总死胎数/总着床数*100
7、显性致死率（，%）=（1-试验组的平均生存胎仔数/阴性对照妊娠鼠的平均生存胎仔数*100%结果判断：
生存胎仔总数减少，死亡胎仔总数增加；胚胎总着床数减少或未着床胚胎数增加，这些结果有统计学意义并有剂量反应关系时记为阳性。
六、程序外合成（）试验（原理，方法）
1、原理
正常细胞仅在S期进行复制合成，当受损时可发生在S期以外的时期，称程序外
合成。测定S期以外3胸苷掺入胞核的量，掺入量可反映损伤后修复合成的情况。2、方法
选用人淋巴细胞或大鼠肝原代细胞，采用放射自显影方法，受试物至少三种浓度，最高
