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毒理学上半部分总结目前还存在以下几点需要补充和细化的地方：⑴代谢活化的两相⑵癌基因的分类，具体机制⑶细胞恶性转化后的特点第十六章药物致突变作用的研究及其试验方法一、Ames试验（一）原理组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌在缺乏组氨酸的培养基上不能生长，但在加有致突变原的培养基上培养，可产生回复突变，恢复合成组氨酸的能力成为野生型，能在缺乏组氨酸的的培养基上生长成为菌落，通过计数菌落出现的数目就可以估算药物诱变性的强弱。
正向突变鼠伤寒沙门菌组氨酸+ 鼠伤寒沙门菌组氨酸-（野生型）回复突变（突变型、营养缺陷型）S9混合液受试物（二）常用试验菌株菌株名称突变基因附加突变突变类型修复LPS R因子TA97、TA98 hisD △uvrB rfa PKM101 移码突变TA100 hisG △uvrB rfa PKM101 碱基取代TA102 hisG △uvrB rfa PKM101 移码突变、碱基取代注：hisD,组氨酸脱氢酶的结构基因；hisG，磷酸核糖ATP合成酶的基因，TA100和TA98可推荐用于大多数致突变物和致癌物的检测（三）计量设计西药＜＝5mg/皿，中药可超过5mg/皿，最低剂量1ug/皿或0.1ug/皿，至少五种不同剂量（药物不溶于水可用DMSO或乙醇作溶剂）（四）对照组用溶媒作阴性对照；已知致突变作阳性对照；使用间接诱变物作对照时，注意平行设加S9与不加S9的对照。
（五）代谢活化：S9（经诱导剂处理过的肝脏微粒体酶）（六）试验方法：渗入法；点试法（七）结果判断1、渗入法：当药物浓度达到5mg/皿仍为阴性者，可以认为是阴性。
2、点试法：凡在滤纸片周围长出一圈密集的回变菌落，该药物即为致突变物质，如只在平皿上出现少数散在的自发回变菌落，则为阴性。
二、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验（对象，选材，剂量，实验设计（理解），结果判定，公式（考试不给））（一）动物1、细胞：中国仓鼠肺细胞（CHL）2、剂量：至少三种不同剂量，高剂量以50%细胞生长抑制浓度，但最高不要超过10mmol/L，中低剂量采用倍量稀释法。
名词解释副作用：是药物在治疗剂量下发生的不符合用药目的的不适反应，是药物本身固有的作用。
毒性反应：是指剂量过大或用药时间过长药物在体内蓄积过多时发生的危害性反应。
首过效应：从胃肠道吸收入门静脉系统的药物在到达全身血液循环前必先通过肝脏，如果肝脏对其代谢能力很强，或有胆汁排泄的量大，则进入全身血液循环内的有效药物量明显减少的一种现象。
生物利用度：是指制剂中药物被吸收进入人体循环的速度与程度。
肾上腺素翻转：α受体阻断药能选择性地与α肾上腺素受体结合，其本身不激活或较少激活肾上腺素受体，却能阻碍去甲肾上腺素能神经递质及肾上腺素受体激活药与α受体结合，从而产生抗肾上腺素作用。
耐药性：系指微生物、寄生虫以及肿瘤细胞对于化疗药物作用的耐受性，耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。
耐药性根据其发生原因可分为获得耐药性和天然耐药性。
耐受性：是指人体对药物反应性降低的一种状态，按其性质有先天性和后天获得性之分。
耐受性是一种生物学现象，是药物应用的自然结果。
调节麻痹：是一种调节障碍可为单侧或双侧。
可突然发病，也可由部分性调节衰竭迁延发展形成。
原因可为眼局部或全身等多种因素，可为先天性异常，或神经性；也可为药物作用、感染、中毒、外伤等。
二重感染：抗广谱抗生素长期使用，使敏感菌受到抑制，不敏感菌（如真菌等）趁机在体内繁殖生长，造成二重感染，又称菌群交替症。
合并应用肾上腺皮质激素，抗代谢或抗肿瘤药物更易引发二重感染。
抗菌谱：是泛指一种或一类抗生素（或抗菌药物）所能抑制（或杀灭）微生物的类、属、种范围。
治疗指数：为药物的安全性指标。
通常将半数致死量（LD50）与半数有效量（ED50）的比值称为治疗指数。
但治疗指数并不能完全反映药物的安全性。
药物半衰期：一般可称作生物半效期或者是生物半衰期，也可以简写为“t1/2”，指的是血液中药物浓度或者是体内药物量减低到二分之一所花费的时间。
反跳现象β受体阻断药停药后的现象：心动过速、血压升高、心绞痛等“停药综合征”。
第一篇药理学总论一绪论附加题：试述你对未来研究工作的设想（设计）或建议（或对药理学的见解）93比较用离体标本和整体动物研究药物的优缺点95一个新药的研制，从初筛到上市，需经过哪些研究步骤00试列举评价药物毒性的参07药物在组织内浓集对其发挥药理作用和产生毒性作用均有影响，请各举一例说明这两方面的影响07试述毒理学实验中常用的参数有哪些07什么是GLP？GLP的目的及实验范围？10二药物代谢动力学何谓生物利用度，试述其实用意义95列举药物与血浆蛋白结合后产生的后果95影响药物分布的因素99某药按一级动力学消除，其消除速常数（Ke）为1.0h-1，求出该药的t1/2.99药物与血浆蛋白结合后产生的后果00何谓半衰期？其临床意义是什么01对口服给药，静脉滴注，采取何法使血药浓度循序达到稳态浓度01何谓半衰期，有何临床意义03半衰期是不是一个固定数值04药物与血浆蛋白结合的意义06三药物效应动力学在从事新药的药效学研究中，应注意哪些主要问题94何谓“首过效应”，如何避免它95请解释：高敏性，耐受性和变态反应95激动剂的量-效关系有三种作图方式，试作图和解说97Sigma受体激动时的药理作用97何谓受体数目的上调（up-regulation）和下调（down-regulation）00何为不良反应？举例说明其分类07药物不良反应有哪些，分别举例说明其特征07四影响药物作用的因素何谓血脑屏障，哪些药物不易通过它？举例说明新生儿血脑屏障的差别95试举例说明躯体依赖性与psychological dependence与药物依赖性之间的关系97何为身体依赖性？简述其产生机制。
如何评价之07什么是药物的身体依赖性，简述其评价方法和原理07第二篇化学治疗药五抗微生物药物概论有一位确诊的厌氧菌感染者，请为其提供可选的药物（不少于4种）01请列出可供选择的抗厌氧菌药物03举例说明广谱和窄谱抗菌药，并比较两类药物的优缺点05细菌耐药机制有那些06六B内酰胺类抗生素用何药可减慢青霉素从肾小管的分泌93试述青霉素的抗菌谱、作用原理，并以作用原理解释其作用特点95青霉素作用的主要环节97第三代头孢菌素的特点99β-内酰胺类抗生素主要有哪几类？并阐明其抗菌机制01β-内酰胺类抗生素有几大类，各类抗菌谱的主要区别03β—内酰胺类的分类，代表药，各自抗菌特点04青霉素的抗菌原理和临床首选用途05β-内酰胺类抗生素的抗菌机制及耐药性产生机制07B-内酰胺类抗生素的抗菌机制和耐药机制07七大环内酯类，林可霉素类及多肽类抗生素八氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素的不良反应。
中国药科大学研究生入学考试药物分析复试题汇总A.10年药分复试 共十道大题，考3h1.为什么要进行砷盐检查？砷盐检查方法有哪些及装置2.复方。
包括丹参、冰片、三七，及各自特征成分及如何进行质量控制？含量测定3.光谱题：苯佐卡因，画出氢谱和碳谱 二维谱中HMBC、HMQC 、NOESY、ROESY 名词解释4.色谱分析，确定所用色谱分析方法（多为书中例题)，考过二甲双胍、硝酸异山梨酯、好像还有个多糖5.质谱离子化方法有哪些，各自特点，有哪些质谱仪（）如离子肼6.好像还有个关于青霉素杂质的检查实验与专外1.配流动相2.画下FID检测器及气化室3.阿司匹林分析挑错，水解后剩余滴定法。
4.英文翻译（）基本都为药物分析方向期末考试所用专外书上内容B.08年药分复试一、单选二、多选三、问答题1.盐酸伪麻黄碱的质量控制项目应有哪些，各自目的，并各自简述一种合适的控制方法及简要步骤、2.抗生素类药物的分类，其含量测定方法与化学分析方法有何区别3.按色谱条件选对应物质条件一：ODS柱...，流动相：庚烷磺酸钠的磷酸缓溶液：水（）2:98）条件二：ODS柱....，流动相：甲醇：水：冰醋酸，254nm;条件三：ODS柱....，流动相：乙腈：水（72:28）;条件四：ODS柱....，流动相：甲醇：水（20:80）；物质：柴胡皂苷，二氟尼柳，醋酸甲地孕酮，CH3N(CH3)2RCOO4.(1)盐酸普萘洛尔含量测定方法？方程式？滴定度（2）用ODS柱时拖尾的原因？解决方法？（3）盐酸普萘洛尔，...普萘洛尔,.......普萘洛尔出峰顺序。
5.尼可刹米（1）（2）IR峰归属，振动形式，3032cm1,2975,1685,1589,1570,1465,1210,1120,711(3)NMR峰归属偶合裂分原因，图中化学位移：9.0；7.0；3.0；1.0；0；（4）C13谱：10个峰，a j,J=0指出对应C，及原因（5）质谱：m/z 178;177;163;150;28;51;78;106（基峰），裂解方程式6.什么是GC衍生化？特点（目的）？写出三种衍生化方程式7.系统适应性试验包括？各自标准。
中国药科大学2013年招收科学学位硕士研究生复试、录取工作办法一、我校各学科所属学科门类我校各学科所在的学科门类为：学科代码为1006**，1007**，1008**的学科属于医学门类；“思想政治教育（030505）”属于法学门类；“生物化工（081703）”属于工学门类；“生物学（071000）、生物医学工程（077700）、化学（070300）”属于理学门类；“企业管理（120202）”属于管理学门类。
二、复试时间安排3月31日-4月8日，进行科学学位研究生复试、录取工作；三、复试比例确定原则：全校总复试人数与全校招收统考生总计划数的比例为1.5:1.生源数达不到1.5:1比例的学科，上“国家线”考生全部参加复试。
已录取的推荐免试生不参加复试。
四、复试内容与方式复试总分400分，分为两大部分。
1、专业课笔试，满分为200分科学学位研究生笔试考试时间为： 4月1日上午9：00－12：00。
各学科复试的专业课笔试考试科目见《中国药科大学二○一三年硕士研究生招生专业目录》。
2、综合测试（含技能考核、英语测试、面试），满分200分。
原则上在4月2日-4月3日完成。
具体时间由各学科自行确定。
综合测试成绩的计算方法：复试小组全体成员对考生成绩的平均分。
综合测试时间原则上不少于每生20分钟。
五、填报导师综合测试结束后，由各学科组织考生填报导师志愿表，每位考生必须填报2个不同导师志愿。
六、录取成绩计算方法我校科学学位研究生的最终录取成绩为：总成绩＝初试成绩＋科学学位专业课笔试成绩（总分200）+综合测试成绩（总分200）。
如果1:1拟录取名单最后一名有相同分数时，则初试成绩分数高者优先录取。
如果考生出现在1：1名单上则必须在本学科录取，如不录取则该考生与该录取计划一同收回。
对愿为西部地区委托培养的考生，同等条件下优先录取。
七、调剂原则1、校内调剂①符合国家相关调剂政策；②仅限于复试人数未满招生计划数的学科；③调入学科与调出学科的初试考试科目须相同或相近；④各学科接收调剂的考生须是在我校科学学位研究生复试名单上的考生；⑤先在本院（部）内各学科间调剂，然后在学校内各院（部）间调剂。
药物毒理学学习要点一.名词解释促长剂：Growth promoting agent，本身并无致癌性，但可使化学物诱发突变细胞的克隆扩增，与致癌物共同作用或在致癌物作用之后，这类物质反复作用于细胞，具有促进癌的发生或加速癌细胞发展成为癌瘤的间接致癌作用。
常见的促癌物有佛波酯（TPA），巴豆油，煤焦油中的酚类、卤代烃，烟草中的某些成分等。
完全致癌物：complete carcinogen，指同时具有引发、促长和恶性进展作用的化学致癌物。
致畸指数：teratogenic index，指药物对母体的LD50与最小致畸剂量之比。
指数<10者判为不致畸，10~100为致畸，>100为强致畸。
交叉依赖性：cross dependence，有的药物可以抑制另一种药物戒断后出现的戒断症状，并有替代或维持后者所产生的身体依赖状态的能力，这种现象称之为交叉依赖性。
这种相互替代可以是全部的，也可以是部分的。
例如中枢抑制剂之间，阿片类药物之间具有交叉依赖性，镇静催眠药与酒精之间具有部分交叉依赖性。
催促戒断试验：precipitation or withdrawal test，在较短时间里药物以较大剂量、多次递增方式对动物给药，然后以阿片类拮抗剂，催促其产生戒断反应，若出现吗啡样阶段症状，说明其与吗啡属同类型药物。
催促试验戒断症状发作快，症状重且典型，持续时间短，便于观察比较。
此法只适用于有竞争性受体拮抗剂的阿片类药物。
常用的受体拮抗剂有纳洛酮，亦可用环丙羟丙吗啡。
生殖毒理学：reproductive toxicology，主要研究外源化学物对生殖细胞发生、卵细胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳过程的损害作用及其评定-生殖毒性试验。
发育毒理学：Developmental toxicology，主要研究外源化学物对胚胎发育、胎仔发育以及出生幼仔发育的影响及其评定-发育毒性试验，其中主要为致畸试验。
胚胎毒性：embryotoxicity，指药物对胚胎的选择毒性作用。
中国药科大学毒理复习纲要毒理复习纲要季老师部分一、名词解释1)蓄积毒性：当较长时间连续反复给药，或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力时，出现药物进入机体的速度或总量超过排出的速度或总量的现象。
这时，药物就有可能在体内逐渐增加并贮存起来产生毒性。
2)选择毒性：一种化学物质只对某种生物或机体内某一器官产生损害作用，而对其它种类或器官无损害。
3)最大无作用剂量(ED0或EC0)：指药物在一定时间内，按一定方式与机体接触，按目前最灵敏的检测方法或观察指标，不能观察到任何损害作用的最高剂量。
（当药物的剂量减到一定量，但尚未到零时，生物学变化已达到零，即不能再观察到药物所引起的生物学变化，此剂量即为最大无作用剂量。
）4)中毒阈剂量：也叫最小有作用剂量，是能使机体在某项观察指标发生异常变化所需要的最小剂量，即能使机体开始出现毒性反应的最低剂量。
5)急性毒作用带Zac：是半数致死量与急性阈剂量的比值，公式：Zac=LD50/Limac6)慢性毒作用带Zch：是急性阈剂量与慢性阈剂量的比值，公式：Zch=Limac/Limch7)QAU：质量保证部门（Quality Assurance Unit）的简称。
是负责保证安全性研究机构的各项研究工作符合本规定要求的机构。
8)SOP：标准操作规程（Standard Operating Procedures）的简称。
是GLP中最重要的工作软件。
9)近似致死量：近似致死量ALD是介于最小致死量MLD与最大非致死量MNLD之间的剂量。
其中，MLD是指药物在最低剂量组的一群实验动物中仅引起个别动物死亡的剂量，在急性毒性试验中可表示为LD10或LD5；MNLD实际上是急性毒性试验中以死亡为毒效应时的一种最大耐受量，指药物不引起实验动物死亡的最大剂量，可以表示为LD0。
10)SPF动物：是无特殊病原体（Specific Pathogen Free）动物的缩写。
指机体内无特殊的微生物和计生虫存在的实验动物。
药物代谢动力学1、首关效应：有些药物在进入体循环之前首先在胃肠道、肠粘膜和肝脏灭活代谢一部分（主要在肝脏），导致进入体循环的实际药量减少的现象。
2、肝肠循环：有些药物在肝脏转化后可由胆汁排出进入肠道，在肠道细菌作用下，使结合型药物水解成游离药物。
这些游离药物可再吸收入肠道的毛细血管中，然后经门静脉进入肝脏。
3、血脑屏障组织学基础：脑组织内的毛细血管内皮细胞紧密相连，内皮细胞之间无间隙，且毛细血管外表面几乎均为星形胶质细胞包围，这种特殊结构形成了血浆与脑脊液之间的屏障。
生理学意义：阻碍大分子、水溶性或解离型药物通过。
药理学意义：两个方面（维持中枢神经系统的稳态、治疗时可诱导血脑屏障的开放）4、胎盘屏障：胎盘绒毛与子宫血窦之间的屏障称为胎盘屏障。
生理学意义：胎盘对药物的通透性与一般毛细血管无显著差别，不能保获胎儿免遭外源性化合物的影响。
药理学意义：孕妇应禁用致畸或胎毒性药物5、药物的肝肠循环：自胆汁排进十二指肠的药物有的直接从粪便排出，但多数结合型药物在肠道中经水解后再吸收进入肝脏重新进入体循环，是药物的作用明显延长。
6、血浆半衰期：指血药浓度降低一半所需要的时间7、生物利用度：血管外给药后能被吸收进入体循环的相对量和速度（药物被机体吸收利用的速度和程度）8、药代参数的临床意义如：某病人病情危急，需立即达到稳态浓度以控制，应如何给药？最佳给药方案：每隔一个半衰期给予一个有效量，首剂加倍。
生理药理学1、研究的3个水平：细胞水平、器官水平、整体水平2、研究方法：急性实验法（离体实验和在体实验）、慢性实验法3、人体的4大组织：上皮、结缔、肌肉、神经组织4、肌组织肌组织主要由肌细胞组成，肌细胞之间有少量的结缔组织以及血管和神经；肌细胞成长纤维型，又称为肌纤维；肌纤维的细胞膜称为肌膜，细胞质称为肌浆，肌浆中有许多与细胞长轴相平行排列的肌丝，它们是肌纤维舒缩功能的主要物质基础。
肌组织可分为骨骼肌、心肌和平滑肌。
第一篇药理学总论一绪论附加题：试述你对未来研究工作的设想（设计）或建议（或对药理学的见解）93 比较用离体标本和整体动物研究药物的优缺点95一个新药的研制，从初筛到上市，需经过哪些研究步骤00试列举评价药物毒性的参07药物在组织内浓集对其发挥药理作用和产生毒性作用均有影响，请各举一例说明这两方面的影响07试述毒理学实验中常用的参数有哪些07什么是GLP？GLP的目的及实验范围？10二药物代谢动力学何谓生物利用度，试述其实用意义95列举药物与血浆蛋白结合后产生的后果95影响药物分布的因素99某药按一级动力学消除，其消除速常数（Ke）为 1.0h-1，求出该药的t1/2.99药物与血浆蛋白结合后产生的后果00何谓半衰期？其临床意义是什么01对口服给药，静脉滴注，采取何法使血药浓度循序达到稳态浓度01何谓半衰期，有何临床意义03半衰期是不是一个固定数值04药物与血浆蛋白结合的意义06三药物效应动力学在从事新药的药效学研究中，应注意哪些主要问题94何谓“首过效应”，如何避免它95请解释：高敏性，耐受性和变态反应95激动剂的量-效关系有三种作图方式，试作图和解说97Sigma受体激动时的药理作用97何谓受体数目的上调（up-regulation）和下调（down-regulation）00何为不良反应？举例说明其分类07药物不良反应有哪些，分别举例说明其特征07四影响药物作用的因素何谓血脑屏障，哪些药物不易通过它？举例说明新生儿血脑屏障的差别95试举例说明躯体依赖性与psychological dependence与药物依赖性之间的关系97 何为身体依赖性？简述其产生机制。
如何评价之07什么是药物的身体依赖性，简述其评价方法和原理07第二篇化学治疗药五抗微生物药物概论有一位确诊的厌氧菌感染者，请为其提供可选的药物（不少于4种）01请列出可供选择的抗厌氧菌药物03举例说明广谱和窄谱抗菌药，并比较两类药物的优缺点05细菌耐药机制有那些06六B内酰胺类抗生素用何药可减慢青霉素从肾小管的分泌93试述青霉素的抗菌谱、作用原理，并以作用原理解释其作用特点95青霉素作用的主要环节97第三代头孢菌素的特点99β-内酰胺类抗生素主要有哪几类？并阐明其抗菌机制01β-内酰胺类抗生素有几大类，各类抗菌谱的主要区别03β—内酰胺类的分类，代表药，各自抗菌特点04青霉素的抗菌原理和临床首选用途05β-内酰胺类抗生素的抗菌机制及耐药性产生机制07B-内酰胺类抗生素的抗菌机制和耐药机制07七大环内酯类，林可霉素类及多肽类抗生素八氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素的不良反应。
毒理学上半部分总结目前还存在以下几点需要补充和细化的地方：⑴代谢活化的两相⑵癌基因的分类，具体机制⑶细胞恶性转化后的特点第十六章药物致突变作用的研究及其试验方法一、Ames试验（一）原理组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌在缺乏组氨酸的培养基上不能生长，但在加有致突变原的培养基上培养，可产生回复突变，恢复合成组氨酸的能力成为野生型，能在缺乏组氨酸的的培养基上生长成为菌落，通过计数菌落出现的数目就可以估算药物诱变性的强弱。
正向突变鼠伤寒沙门菌组氨酸+ 鼠伤寒沙门菌组氨酸-（野生型）回复突变（突变型、营养缺陷型）S9混合液受试物（二）常用试验菌株菌株名称突变基因附加突变突变类型修复LPS R因子TA97、TA98 hisD △uvrB rfa PKM101 移码突变TA100 hisG △uvrB rfa PKM101 碱基取代TA102 hisG △uvrB rfa PKM101 移码突变、碱基取代注：hisD,组氨酸脱氢酶的结构基因；hisG，磷酸核糖ATP合成酶的基因，TA100和TA98可推荐用于大多数致突变物和致癌物的检测（三）计量设计西药＜＝5mg/皿，中药可超过5mg/皿，最低剂量1ug/皿或0.1ug/皿，至少五种不同剂量（药物不溶于水可用DMSO或乙醇作溶剂）（四）对照组用溶媒作阴性对照；已知致突变作阳性对照；使用间接诱变物作对照时，注意平行设加S9与不加S9的对照。
（五）代谢活化：S9（经诱导剂处理过的肝脏微粒体酶）（六）试验方法：渗入法；点试法（七）结果判断1、渗入法：当药物浓度达到5mg/皿仍为阴性者，可以认为是阴性。
2、点试法：凡在滤纸片周围长出一圈密集的回变菌落，该药物即为致突变物质，如只在平皿上出现少数散在的自发回变菌落，则为阴性。
二、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验（对象，选材，剂量，实验设计（理解），结果判定，公式（考试不给））（一）动物1、细胞：中国仓鼠肺细胞（CHL）2、剂量：至少三种不同剂量，高剂量以50%细胞生长抑制浓度，但最高不要超过10mmol/L，中低剂量采用倍量稀释法。
3、代谢活化：S9（哺乳动物肝微粒体酶）进行体外代谢活化。
4、药物作用时间：非活化组分别作用24和28小时收获细胞，活化组作用6小时以上。
5、标本制作时间：分别在24和48h收获细胞制作标本，活化组可省略48h时间点。
6、对照：空白对照、阳性对照、溶剂对照和S9对照。
1 7、镜检：每种浓度至少观察100个中期分裂相细胞的染色体结构。
8、结果判定染色体畸变率（%）= 染色体畸变总数/分析染色体的总数＊100%细胞畸变率（%）=有染色体畸变的细胞数/分析染色体的细胞总数＊100%畸变率<5%为阴性（-）；畸变率＞5%为可疑（+）；畸变率＞10%为弱阳性（++）；畸变率＞20%为中度阳性；畸变率＞50%为强阳性；若某一测试点呈现可重复的并有统计学意义的增加也为阳性。
（二）人体外周血淋巴细胞染色体畸变试验1、剂量：同动物2、对照：溶媒作阴性对照，已知染色体断裂剂作阳性对照。
3、外周血的采集与培养，静脉2-3ml，加抗凝剂，培养加肝微粒体酶，药物处理24h 或48h终止培养前加秋水仙素获得更多中期细胞4、培养细胞的处理，离心，固定5、标本制作6、染色，Giemsa染色20min7、镜检8、结果判定三、啮齿动物微核试验（实验过程，剂量选择，步骤，镜检，如何分辨细胞）（一）原理骨髓细胞经致突变作用，染色体可发生畸变以致断裂，其断裂的碎片在分裂间期留在子代细胞内形成规则的一个或几个圆形或椭圆形结构的小块物质，由于它比普通细胞核要小，称之微核。
但骨髓细胞中缺乏代谢活化酶系，对间接诱变物反应较差。
有核细胞胞浆少，正常核叶极难与微粒相辨认，在无核的红细胞中才易于辨认。
微核检出率与染色体畸变率之间有明显相关性。
（二）剂量：至少三种剂量，最高剂量以1/2LD50为基准，低剂量结合药效学及临床拟用剂量，再按一定比例插入中间剂量。
（三）实验过程NIH小鼠，每组10只性成熟动物（雌雄各半）或至少6只性成熟雄性动物1、给药：一组生理盐水，一组环磷酰胺腹腔注射。
2、涂片：24h后处死，解剖取胸骨，骨髓挤于有一滴小牛血清的载玻片上，推片。
3、固定：甲醇固定15min4、染色：Giemsa染液5、观察计数：典型的微核呈圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，用Giemsa染色后呈紫红或蓝紫色。
多染红细胞PCE呈灰蓝色，正染红细胞呈桔黄色。
计数1000个PCE 中含有微核的PCE数。
如不易区分，记录总的微核率即可。
四、果蝇伴性隐性致死试验（实验设计原理，结果鉴定）（一）原理亲代雄性果蝇接触药物后X染色体出现隐性致死突变，则F1代雌性果蝇中不表达，而F2代雄性果蝇数中因有一半接受了这个已发生突变的X染色体，结果F2代雄性果蝇比雌性果蝇数目少了一半。
至少两个剂量：最高剂量为1/2LD50、低剂量为1/4LD50，无毒物最大给药量为5%（二）结果判定致死突变率%=致死管数/受试染色体数*100%1、致死突变率大于自然突变率的2倍，并有剂量反应关系时为阳性；2、F2代，有一支培养管中，雌雄合计20只以上而未发现有雄果蝇为阳性，有2只以上雄蝇为阴性。
3、F2代有一支培养管中，雌雄合计少于20只或只一只雄果蝇为可疑，需观察F3代。
4、仅存雌雄亲本而无子代为不育。
五、啮齿类动物显性致死试验（结果鉴定，活胎死胎鉴定方式，结果统计，最后公式）结果观察：于妊娠第14天处死雌鼠，观察双角子宫内着床数、吸收胎、晚期死胎及活胎数。
胚胎已完整成形，色鲜红，有自然运动，机械刺激后有运动反应的为活胎。
胚胎完整成形，并有明显胎盘，但色泽灰暗，无光泽，无自然运动，机械刺激后无运动反应的为晚期死亡胚胎。
早期死亡的胚胎的大小，外形和色泽可因死亡时间的相对早迟及死后自溶时间的长短变化很大，一般胎盘较小或不明显，胎盘形体较小，外形不完整，各部位发育尚不完全，呈紫红色，无自然动作。
2 1、平均受孕数（%）=受孕母鼠总数/同笼母鼠总数*100%2、平均着床数=总着床数（早死、迟死、活胎数）/受孕母鼠总数3、平均活胎数=活胎总数/受孕母鼠总数4、平均死胎数=死胎总数/受孕母鼠总数5、含死胎孕鼠数（%）=含一个以上死胎（早死、迟死）的孕鼠数/受孕母鼠总数*100%6、突变指数（M1）=总死胎数/总着床数*1007、显性致死率（DL，%）=（1-试验组的平均生存胎仔数/阴性对照妊娠鼠的平均生存胎仔数*100%结果判断：生存胎仔总数减少，死亡胎仔总数增加；胚胎总着床数减少或未着床胚胎数增加，这些结果有统计学意义并有剂量反应关系时记为阳性。
六、程序外DNA合成（UDS）试验（原理，方法）1、原理正常细胞仅在S期进行DNA复制合成，当DNA受损时可发生在S期以外的时期，称程序外DNA合成。
测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量，掺入量可反映DNA损伤后修复合成的情况。
2、方法选用人淋巴细胞或大鼠肝原代细胞，采用放射自显影方法，受试物至少三种浓度，最高仅对细胞产生轻微毒性或无毒性。
在显微镜下计数银粒数，给药组与对照组有统计显著差异，并有浓度效应关系时阳性。
七、SOS显色反应（原理）原理：DNA 分子在受到外因作用引起大范围损伤，其复制又受到抑制的情况下，会导致一种容易发生错误的修复。
通过直接检测DNA损伤后的SOS修复反应来检测化合物的生物遗传毒性。
SOS反应系统的RecA蛋白即转化为RecA蛋白水解酶分解阻遏蛋白，使受阻遏的sifA基因去阻遏，启动lacZ 基因翻译、转录、表达，表达产物即为半乳糖苷酶，可分解邻硝基苯β-D-半乳糖苷（ONPG），产生黄色可溶性物质，据颜色深浅对被诱导酶定量测定，从而判断DNA损伤程度。
比率R=β-半乳糖苷酶单位/碱性磷酸酶单位=A420B*tp / A420P*tBA420B:波长为420nm处β-半乳糖苷酶显色底物的光密度。
tp:碱性磷酸酶底物的显色时间。
A420P:波长为420nm处碱性磷酸酶显色底物的光密度。
t ：β-半乳糖苷酶显色底物的显色时间。
B第十七章生殖发育毒性（了解几个概念：FSH，LH等，下丘脑-垂体-睾丸图要记住，铅，镉的影响）LH：垂体促黄体激素，与G-蛋白偶合受体结合，刺激间质细胞产生睾酮。
FSH：促卵泡激素，促进支持细胞成熟，形成血-睾屏障，产生一系列调节蛋白和生长因子。
GnRH：促性腺激素释放素，由下丘脑产生。
+ —精子下丘脑GnRH 垂体LH，FSH 睾丸+ —+ —雄激素一、化学物质对下丘脑-垂体-性腺轴激素调节女性: 镉，蓄积在小鼠垂体前叶，使FSH，LH合成减少，进而影响卵巢发育和排卵，干扰雌激素和孕激素的合成和释放，导致输卵管和子宫萎缩，影响卵子的运行和胚胎的着床。
男性：铅作业的工人血清FSH，LH和睾酮的水平明显低于对照组，并与血铅含量有剂量反应关系。
原因是铅可影响下丘脑GnRH释放，表现为精子数目减少，活力减弱，性欲降低和性功能障碍。
二、胚胎发育各阶段及毒性（人类啮齿类发育的时间，每个阶段的时间，特点）1、着床前期：从受精到完成着床之前，对胚胎致死作用较为敏感，往往出现胚胎死亡；人类妊娠3最初11-12天，啮齿类最初6天左右。
特点：很少分化（受精-卵裂-形成胚囊）受精卵在着床前迅速分裂成一个内空的球状物，即胚泡。
未分化细胞收化学毒物损失致胚泡死亡称着床前丢失。
（甲基亚硝脲——神经管缺陷和腭裂）2、胚胎期（器官形成期）：致畸敏感期（第三周）；人3-8周，大鼠小鼠兔为6-15天—15-18天，器官形成容易受到致畸物作用而诱发器官结构的缺陷。
3、胎儿期：生长迟缓，器官形态结构异常，功能缺陷；（第9-41周）4、新生儿期：生长迟缓，神经、内分泌、以及免疫系统功能改变，儿童期肿瘤。
（出生后至一个月）三、致畸作用机理（一）基因突变（二）干扰基因表达（三）干扰核酸功能和有丝分裂（记住）1、抑制DNA合成2、干扰DNA复制，转录和翻译3、干扰纺锤体形成并阻碍染色体分离的化合物（四）营养缺乏和能量不足：维生素、无机盐类（五）重要酶类被抑制四、影响药物致畸的因素（一）种属差异和个体差异1、胚胎发育的遗传特征不同2、化合物在母体或子体内代谢过程不同3、物种胎盘构造差异使化合物透过胎盘屏障的量和速度不同（二）接触药物的时间（三）药物作用剂量（四）药物的理化性质（五）母体健康一般生殖毒性实验：剂量设置（详细记），所有内容，给药时间，指标，观察报告五、生殖评价一般方法：致畸实验：全部，实验设计围产期毒性实验（一）一般生殖毒性试验研究药物对整个生殖过程的影响，包括生殖细胞的发生、卵细胞受精、着床胚胎形成、胚胎发育阶段等。
检测药物对生殖腺，性周期，交配能力，受孕率和胚胎早期发育的影响。
1、动物：多用性成熟大鼠，或小鼠和白兔，每组雄性动物20只，雌性动物20只以上2、剂量与给药途径：3 个剂量组，高剂量可产生轻度毒性反应，低剂量不应有任何中毒症状中间剂量与高低成等比。
