呼吸道病毒7项检测试剂(优推材料)

2024呼吸道7项检测的临床意义肺炎衣原体IgM抗体肺炎衣原体(Cpneumoniae,CP)是呼吸道感染主要病原之一,与小儿肺炎、哮喘及慢性咳嗽等呼吸道疾病密切相关。

CP感染所致的肺炎占5%-20%,症状和体征无特异性，多数起病缓慢,潜伏期一般为30天左右，临床开始时出现流感样的上呼吸道症状,如咽炎、头痛、发热，一般低于38℃,数天至数周后出现持续性干咳,如不积极治疗可持续数月,痰分泌很少或无痰，肺部可闻及干湿啰音。

胸片表现类似非典型性肺炎，常为单侧节段性肺炎，严重者病变较广泛，甚至波及双肺，也可伴胸膜炎或胸腔积液。

肺炎衣原体的实验室检测可辅助诊断急性肺炎衣原体感染，常用的检测方法有分离培养、血清学检测、核酸扩增技术等，目前临床主要使用血清学检测方法。

IgM抗体在感染后1~2周出现,3~4周达高峰。

因此,CP-IgM阳性可作为急性期感染的辅助诊断指标。

肺炎支原体IgM抗体肺炎支原体(M.pneumoniae,MP)是引起无症状性、轻度或少数严重上呼吸道和下呼吸道感染的常见人类病原体，已经发现肺炎支原体感染占所有肺炎病例的15-20%,肺炎支原体主要通过呼吸道飞沫传播，平时多为散发病例，全年均可发病，但发病季节以秋冬初春为高峰,约每隔3~7年发生一次地区性流行。

学龄儿童患病较多,学龄前儿童包括婴幼儿也可发生肺炎支原体感染。

肺炎支原体的实验室检测可辅助诊断急性肺炎支原体感染，常用的检测方法有分离培养、血清学检测、核酸扩增技术等，目前临床主要使用血清学检测方法。

IgM 抗体在感染后1-2周出现，3~4周达高峰，由于MP的潜伏期为2~3周,当患者出现症状就诊时MP-IgM水平已经很高,因此，MP-IgM阳性可作为急性期感染的诊断指标。

甲型、乙型流感病毒IgM抗体甲、乙型流感病毒属于正黏病毒科，为单股、负链RNA病毒，是引起流行性感冒（简称流感）的主要病原体之一；流感是一种传播性强、传播速度快的呼吸道感染疾病,其典型症状是发热且有咳嗽、上呼吸道症状（如咽痛、流鼻涕）和全身症状（如头痛、肌痛、萎靡不振）。

中国乡村医药324例呼吸道感染患儿7种呼吸道病原体核酸检测结果分析刘飞吴素玲呼吸道感染是儿科常见病，引起儿童呼吸道感染的病原体种类繁多，主要有细菌、病毒和非典型病原体，由于环境污染、抗菌药物的使用等原因，细菌性感染率有所下降[1]。

呼吸道感染患儿无特异性临床表现，严重时可并发多器官、多系统损害，明确掌握其流行特征和病原谱对防治儿童呼吸道感染有重要意义[2]。

笔者分析我院接诊的324例呼吸道感染患儿咽部分泌物中的病原体，旨在了解其流行特点，为儿童呼吸道感染的防控工作提供依据。

1 临床资料1.1 一般资料我院2017年1—12月接诊的呼吸道感染患儿324例，均符合呼吸道感染诊断标准；排除患有先天性遗传性疾病、血液系统疾病、抗核抗体阳性等免疫系统疾病，排除有糖皮质激素、免疫抑制药、抗病毒、抗肿瘤等药物服用史。

男186例，女138例；年龄3个月至12岁，平均（3.7±1.1）岁。

采用双扩增法测定患儿咽部分泌物7种呼吸道病原体，包括甲型流感病毒（FL UA）、乙型流感作者单位：310014 杭州市儿童医院儿科通信作者：刘飞，Email:xiaoxiaofei@ 病毒（FL UB）、呼吸道合胞病毒（RSV）、副流感病毒（PIV）、肺炎支原体（MP）、肺炎衣原体（Cpn）、腺病毒（AdV）。

1.2 324例呼吸道病原体核酸检测结果患儿咽部分泌物标本病原体核酸检测阳性88例（27.2%）：其中MP检出48例（14.8%），FLUB检出25例（7.7%），Cpn检出5例（1.5%），PIV检出4例（1.2%），AdV检出3例（0.9%），FLUA检出2例（0.6%），RSV检出1例（0.3%）。

88例病原体核酸检测阳性患儿中，单一感染63例（71.6%），双重感染18例（20.5%），三重感染5例（5.7%），四重感染2例（2.3%）。

1.3 不同年龄段患儿呼吸道病原体阳性检出情况（表1）324例患儿中，＜1岁检出率最低，1～2岁检出率较低，3～6岁检出率最高，≥7岁检出率仅次于3～6岁。

常见七项呼吸道病毒是这样检测的呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道，在呼吸道粘膜上皮细胞增殖，引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为侵入门户，主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。

常见的七项呼吸道病毒包括：A型流感病毒（甲型流感病毒）、B型流感病毒（乙型流感病毒）、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型,它们在电镜下的形态是这样的：据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起，诱发流感、婴儿支气管炎及小儿肺炎等。

病毒虽然可怕，但是如果能够早发现早治疗，病情是能够得到缓解和控制的。

所以早期快速的诊断就至关重要了！目前临床上使用较多的是抗原检测和抗体检测，从理论上讲，只要有病毒感染，通过抗原检测都能鉴定出，而抗体检测却要在人体产生免疫应答以后才能进行鉴定。

机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免疫缺陷或免疫系统不健全的个体如儿童，特别是3岁以下的小孩，其产生抗体往往需要更久，且抗体产生的水平也较低。

若检测的是IgG，则不能很好地区分既往感染和急性感染。

因此，抗原检测的方法对婴幼儿和儿童的呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势。

我院对七项呼吸道病毒的检测就是基于抗原的检测，包括 A型流感病毒（甲型流感病毒）、B型流感病毒（乙型流感病毒）、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型。

下面看看我们是如何检测的。

病毒侵入呼吸道黏膜柱状上皮细胞，与细胞膜上的唾液酸受体结合，并在细胞内增值引起细胞变性、坏死、脱落、黏膜充血、水肿等。

因此，鼻咽部的柱状上皮细胞内含的病毒滴度相对较高，采集该部位的样本利于病毒的检出。

这是我们使用的鼻咽拭子（呢绒植绒拭子）。

临床医师利用鼻咽拭子（呢绒植绒拭子）采集标本，拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，伸入距离为从耳垂部到鼻尖长度的一半，一般针对两周岁以下儿童，伸入距离约为拭子绒毛头的长度两倍。

拭子伸入后要轻轻捻动拭子转圈，取样后用生理盐水没过拭子头及时送至检验科。

上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述.................................................................... 错误!未定义书签。

2．D3Ultra DFA试剂 ............................................... 错误!未定义书签。

2.1 D3Ultra DFA试剂规格.........................................................................错误!未定义书签。

2.2 D3Ultra DFA试剂用途.........................................................................错误!未定义书签。

2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势.............................................................错误!未定义书签。

2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤.........................................................错误!未定义书签。

2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读.........................................................错误!未定义书签。

3．D3Ultra DFA试剂竞争优势................................ 错误!未定义书签。

3.1 检验的特异性和灵敏度.....................................................................错误!未定义书签。

上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒 7 项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒 7 项检测试剂目录1．概述 (1)2．D3 Ultra DFA试剂 (2)2.1D 3Ultra DFA试剂规格 (2)2.23Ultra DFA试剂用途 (2)D2.3D 3Ultra DFA试剂特点和优势 (2)2.4D 3Ultra DFA试剂实验操作步骤 (3)2.53Ultra DFA试剂实验结果判读 (4)D3．D3 Ultra DFA试剂竞争优势 (5)3.1检验的特异性和灵敏度 (5)3.2市场竞争 (5)附录 1七种病毒检测的临床意义 (7)附录 2实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (8)附录 3进口荧光显微镜参数 (9)1．概述日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。

在医院和急诊室中， 这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。

常见的呼吸道病毒包括： A 型（甲型）流感病毒， B 型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（ RSV ），腺病毒，副流感病毒 1 型，副流感病毒 2 型和副流感病毒 3 型。

在病毒检测方法中， 抗原检测 有其无法比拟的优势： 1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要； 2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。

DHI 公司的 D 3Ultra DFA 试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法 。

该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7 种呼吸道病毒。

D 3Ultra DFA 试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。

2．D3 Ultra DFA试剂2.1 D3 Ultra DFA试剂规格D3 Ultra DFA试剂分为 7 项呼吸道病毒筛查试剂和 7 项呼吸道病毒鉴定试剂。

检测病毒种类： A 型（甲型）流感病毒， B 型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（ RSV），腺病毒， 1、2、3 型副流感病毒。

我院病理科分子病理学开展新项目
七项呼吸道病毒检测
检测项目：A 型（甲型）流感，B 型（乙型）流感，呼吸道合胞病毒，腺病毒，副流感1、2和3型。

检测原理：荧光素（FITC ）标记的单克隆抗体与病毒抗原结合。

检测方法：直接免疫荧光法，一步染色，减少非特异性反应。

呼吸道病毒检测的临床意义
2.病毒治疗有时效性
大部分呼吸道病毒越早治疗效果越好，比如：奥司他韦的最佳使用时间是在出现流感症状的48小时内，过了这个时间段后疗效甚微。

3.避免抗生素的滥用
病毒不同于细菌、衣原体、支原体等原核生物，其对抗生素不敏感，不能使用抗生素进行治疗。

准确的诊断有助于医生确定是否使用抗生素来治疗病人。

4.减少患者看病负担
合理准确的用药能帮助患者更快地痊愈，同时减少开支。

5.监控疾病的大规模传染
呼吸道病毒相对其它病原体更容易在人群中大规模传播，因此对于危害性较大、传播速度快、范围广的呼吸道病毒有必要进行监控，从而防止疾病的扩散和减少损失。

附.标本采集及送检方法
拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。

伸入距离为从耳垂部到鼻尖长度的一半，一般针对两周岁以下儿童，伸入距离约为拭子绒毛头的长度两倍。

拭子伸入后要轻轻捻动拭子转3圈。

取样后在一小时之内洗脱到生理盐水中,12小时内送检。

病理科 赵梓斐。

七项呼吸道病毒检测试剂盒（鉴定）使用说明书【产品名称】通用名称：七项呼吸道病毒检测试剂盒英文名称：D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screen & ID Kit【包装规格】鉴定试剂：80人份/盒【预期用途】用于临床定性检测7种呼吸道病毒：甲型（A型）流感病毒，乙型（B型）流感病毒，呼吸道合胞病毒，腺病毒，副流感病毒1、2和3型。

【检验原理】荧光素（FITC）标记的单克隆抗体与病毒抗原结合，形成稳定的抗原-抗体复合物，在荧光显微镜下观察，呈现特异性绿色荧光。

【主要组成成份】组份名称规格主要成分1 DFA染色试剂鉴定试剂流感A试剂：2 mL每试剂瓶为一项与病毒抗原相对应的荧光单克隆抗体流感B试剂：2 mL腺病毒试剂：2 mL呼吸道合胞病毒试剂：2 mL副流感1试剂：2 mL副流感2试剂：2 mL副流感3试剂：2 mL2 40X浓缩洗液25 mL PBS3 固定液15 mL 甘油4 阳性质控板5块包被病毒抗原【储存条件及有效期】2ºC-8ºC避光保存18个月。

【适用仪器】荧光显微镜，激发波长490 nm，发射波长520 nm。

【样本要求】鼻咽部取样后保存于生理盐水中，应在24小时内送检。

【检验方法】1、取样：用鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有生理盐水）。

2、样本准备步骤：①将样本充分震荡混匀约10-15秒。

②在400-600xg转速下离心5-10分钟。

③弃上清。

④在沉淀中加2-3 mL PBS缓冲液（不能使用试剂盒中的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。

⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟。

⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。

⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。

⑧在沉淀中加0.5-1 mL的PBS缓冲液。

⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。

3、直接样本测试步骤：①在8孔板上的孔内滴加25 µL的细胞悬浊液，每样本需滴加七孔。

七项呼吸道病毒综合检测项目简介七项呼吸道病毒综合检测采用抗原检测方法，能覆盖常见的大多数呼吸道病毒，包括：A型（甲型）流感，B型（乙型）流感，呼吸道合胞病毒，腺病毒，副流感病毒1、2和3型，共七种呼吸道疾病相关病毒。

使用国外先进的直接免疫荧光法，灵敏度最低可以检测1.0PFC的病毒量，而且和多种病毒、细胞及细菌均无交叉反应。

临床意义
适检症状
学龄儿童高热，鼻炎，咽炎，细支气管炎，肺炎等呼吸道感染；成年人持续性高烧不退，不明原因发热，急性呼吸道感染等。

标本采集要求
1.拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入（不要向鼻腔伸入），伸入距离为从耳垂部到鼻尖长
度的一半，一般针对两周岁以下儿童，伸入距离约为拭子绒毛头的长度两倍。

2.拭子伸入后要轻轻捻动拭子转圈
3.取样后在一小时之内洗脱到生理盐水管中
4.4、2-8℃保存运输。

临床项目收费标准。

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2．D3Ultra DFA试剂 ............................................... 错误!未定义书签。

2.1 D3Ultra DFA试剂规格.........................................................................错误!未定义书签。

2.2 D3Ultra DFA试剂用途.........................................................................错误!未定义书签。

2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势.............................................................错误!未定义书签。

2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤.........................................................错误!未定义书签。

2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读.........................................................错误!未定义书签。

3．D3Ultra DFA试剂竞争优势................................ 错误!未定义书签。

3.1 检验的特异性和灵敏度.....................................................................错误!未定义书签。

呼吸道病毒抗原检测进院可行性报告美国DIAGNOSTIC HYBRIDS公司睿信®呼吸道病毒抗原检测系统在儿童群体中，呼吸道感染是一种极为常见的疾病之一。

相关数据显示，90%的呼吸道感染均由病毒引起。

呼吸道感染的发病率极高，该疾病的临床表现主要为呕吐、头痛、腹泻、流涕、低热、咳嗽轻喘、呼吸困难等，严重者还会产生肺感染、肺炎、中耳炎、支气管炎、鼻窦炎等并发症，从而使患儿的身心健康遭到严重危害。

呼吸道感染分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，而上呼吸道感染基本上都是病毒感染，细菌性感染非常少。

上呼吸道病毒感染发生比较频繁，儿童每年大约被感染6--9次，青少年和成年人每年大约2-4次。

目前，多数诊疗机构对呼吸道的感染未进行病毒检测，而直接使用抗生素进行治疗，而抗生素无法治疗病毒引起的呼吸道感染，造成抗生素滥用，同时造成相关细菌的抗药性增强。

虽然下呼吸道感染发生的频率较少，但是这些感染对人体危害更加严重。

患有下呼吸道病毒感染的1.8%学龄儿童和13%的学前儿童需要住院治疗，11%患有下呼吸道病毒感染的成年人需要住院，而且1.2%的感染者会导致死亡。

同时，值得注意的是:RSV，细菌，腺病毒，和流感病毒是最大可能导致医生接触传染的病原体。

因此，呼吸道病毒检测是非常必要和重要的。

本产品采用免疫荧光法，直接检测病毒抗原，具有更好的临床意义。

公司介绍DIAGNOSTIC HYBRIDS公司总部位于美国俄亥俄州，分支机构和合作伙伴遍布全球30多个国家。

公司主要致力于研发,生产应用于检测呼吸道疾病,衣原体和疱疹感染,肠道病毒的细胞和分子诊断试剂。

目前呼吸道病毒抗原荧光检测试剂占有美国55%到65%的市场，在全球28个国家得到广泛使用，比如澳大利亚(澳洲)，秘鲁(南美)，英国(欧洲)，加拿大(北美)，韩国(亚洲)等等。

现已被美国Quidel公司收购。

Quidel China Ltd.是其在中国的全资子公司，营业地点设在中国（上海）自由贸易试验区盛荣路88弄1号3层315室。

上海复星医学科技发展有限公司呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述 (1)2．D3 Ultra DFA试剂 (2)2.1 D3 Ultra DFA试剂规格 (2)2.2 D3 Ultra DFA试剂用途 (2)2.3 D3 Ultra DFA试剂特点和优势 (2)2.4 D3 Ultra DFA试剂实验操作步骤 (3)2.5 D3 Ultra DFA试剂实验结果判读 (4)3．D3 Ultra DFA试剂竞争优势 (5)3.1 检验的特异性和灵敏度 (5)3.2 市场竞争 (5)附录1 七种病毒检测的临床意义 (7)附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (8)附录3 进口荧光显微镜参数 (9)1．概述日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。

在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。

常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。

在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。

DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。

该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。

D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。

2．D3Ultra DFA试剂2.1 D3Ultra DFA试剂规格D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂。

检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒。

具体规格如下：筛查试剂：10 mL，可用于400次测试鉴定试剂：每项鉴定试剂2 mL X 7，可用于80次测试另外，每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL，固定液15 mL，正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL（用于阴性质控），含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块。

7项呼吸道病毒试剂盒操作流程1、取样：（此步骤大多由临床医生完成。

）用特制的鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有缓冲液）。

使用鼻咽拭子取样时，拭子进入鼻部后，应水平向鼻腔伸入。

伸入的深度约为耳垂到鼻尖的二分之一处，取样前可事先大致测量一下。

二岁一下的儿童，伸入深度约为拭子绒毛长度的二倍。

拭子伸入至指定深度后，缓缓贴壁旋转2-3周，约停留10秒钟，取出拭子。

取样后一小时内向取样管中加入生理盐水，样本最好在24小时内进行操作。

2、样本准备步骤：（此步骤除离心以外，建议都在二级生物安全柜内操作）①将样本充分震荡混匀约10-15秒。

②在3000rpm转速下离心10分钟。

③弃上清。

④在沉淀中加5 mL PBS缓冲液（请使用普通PBS，不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。

⑤在3000rpm转速下离心10分钟。

⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。

⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。

注意：一定要将黏液去除干净，否则会造成非特异荧光从而影响实验结果。

以看不见粘液为准。

一般重复两到三次即可，若肉眼不可粘液，洗一次即可。

⑧在沉淀中加0.5到1 mL的PBS缓冲液。

视沉淀的量而定，若无可见沉淀则加入0.2mL.⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。

这个悬浊液可用于直接样本测试。

3、直接样本测试步骤：在操作前请将试剂盒内40×的高浓缩洗液稀释40倍后使用。

①在8孔板上的每孔内滴加25 µL的细胞悬浊液。

（若在之前步骤清洗沉淀中可明显见大块沉淀，则滴加15µL细胞悬浊液即可。

②样本完全风干。

风干时若操作实验室温度较低，建议置于25ºC烘箱，可以使风干更短时间内完成。

③在20ºC到25ºC，用预冷的100%丙酮固定细胞约10分钟。

注意：丙酮是易挥发、可燃性物质，使用时请远离明火。

复星医学科技发展呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述 (2)2．D3Ultra DFA试剂 (3)2.1 D3Ultra DFA试剂规格 (3)2.2 D3Ultra DFA试剂用途 (3)2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势 (3)2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤 (4)2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读 (5)3．D3Ultra DFA试剂竞争优势 (6)3.1 检验的特异性和灵敏度 (6)3.2 市场竞争 (6)附录1 七种病毒检测的临床意义 (8)附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含） (9)附录3 进口荧光显微镜参数 (10)1．概述日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。

在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。

常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。

在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间得出结果，节省实验室的劳动力和成本。

DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。

该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。

D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。

2．D3Ultra DFA试剂2.1 D3Ultra DFA试剂规格D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂。

检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒。

具体规格如下：筛查试剂：10 mL，可用于400次测试鉴定试剂：每项鉴定试剂2 mL X 7，可用于80次测试另外，每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL，固定液15 mL，正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL（用于阴性质控），含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块。

呼吸道病毒多重核酸检测试剂-医疗器械技术审评中⼼附件1呼吸道病毒多重核酸检测试剂技术审查指导原则（征求意见稿）本指导原则旨在指导注册申请⼈对呼吸道病毒多重核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。

本指导原则是对呼吸道病毒核酸测定试剂的⼀般要求，申请⼈应依据产品的具体特性确定其中内容是否适⽤，若不适⽤，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进⾏充实和细化。

如申请⼈认为有必要增加本指导原则未包含的研究内容，可⾃⾏补充。

本指导原则是供申请⼈和审查⼈员使⽤的指导⽂件，不涉及注册审批等⾏政事项，亦不作为法规强制执⾏，如有能够满⾜法规要求的其他⽅法，也可以采⽤，但应提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使⽤本指导原则。

本指导原则是在现⾏法规、标准体系及当前认知⽔平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进⾏调整。

⼀、范围呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）是⼈类最常见的⼀类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发⽣，是全球范围内引起⼈群发病和死亡的最主要原因之⼀。

呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为⿐炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起⽓管炎、⽀⽓管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗⽅法、疗效和病程也不尽相同。

⽬前已证明，⼤部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。

本指导原则适⽤于呼吸道病毒多重核酸检测试剂，适⽤样本类型应为⿐咽拭⼦、咽拭⼦、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物样本等。

检测对象应可引发相似的临床表现，可包括但不限于：甲型流感病毒、⼄型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、⼈偏肺病毒、腺病毒、呼吸道感染肠道病毒（肠道病毒/⿐病毒）、冠状病毒、博卡病毒。

本指导原则适⽤于利⽤荧光探针聚合酶链式反应（Real-time PCR）或其他分⼦⽣物学⽅法，以特定的呼吸道病毒基因序列为检测⽬标，对来源于⼈体样本中的呼吸道病毒核酸进⾏体外定性检测，临床⽤于辅助诊断呼吸道病毒感染相关性疾病。

上海复星医学科技成长有限公司之五兆芳芳创作呼吸道病毒7项检测试剂2011-1-10呼吸道病毒7项检测试剂目录1．概述12．D3Ultra DFA试剂22.1 D3Ultra DFA试剂规格22.2 D3Ultra DFA试剂用途22.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势22.4 D3Ultra DFA试剂实验操纵步调32.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读43．D3Ultra DFA试剂竞争优势53.1 查验的特异性和灵敏度53.2 市场竞争5附录1 七种病毒检测的临床意义7附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含）8附录 3 进口荧鲜明微镜参数9 1．概述日常生活中，几种罕有的呼吸道病毒往往给人们的任务和生活带来极大的便利，有些甚至威胁到人们的安康和生命.在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也经常是诊断和治疗的难题.罕有的呼吸道病毒包含：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型.在病毒检测办法中，抗原检测有其无法比较的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗很是重要；2. 快速、简洁的诊断办法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本.DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法.该试剂可以同时筛查和判定出罕有的7种呼吸道病毒.D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院.2．D3Ultra DFA试剂2.1 D3Ultra DFA试剂规格D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒判定试剂.检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒.具体规格如下：筛查试剂：10 mL，可用于400次测试判定试剂：每项判定试剂2 mL X 7，可用于80次测试另外，每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL，固定液15 mL，正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL（用于阴性质控），含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块.2.2 D3Ultra DFA试剂用途D3Ultra DFA试剂能对疑似呼吸道病毒传染的患者进行快速的病毒筛查和判定.实时、准确地诊断对于病人的治疗很是重要，这主要体现在以下几点：1、病毒治疗针对性强金刚烷乙胺、瑞乐沙、奥司他韦（达菲）等是抗流感病毒的特效药.RSV和副流感病毒可以使用利巴韦林和免疫球蛋白进行治疗.目前没有专门的抗腺病毒药物，主要采纳支持疗法.2、病毒治疗有时效性大部分呼吸道病毒越早治疗效果越好.比方，奥司他韦在体内的活性形式是一种强效的高选择性的流感病毒NA 抑制剂，它主要通过搅扰病毒从被传染的宿主细胞中释放，从而削减甲型或乙型流感病毒的传播.因此，在出现流感症状的48小时内使用奥司他韦才有用，过了这个时间段后疗效甚微.3、避免抗生素的滥用病毒不合于细菌、衣原体、支原体等原核生物，其对抗生素不敏感，不克不及使用抗生素进行治疗.准确的诊断能帮忙医生确定是否使用抗生素来治疗病人.2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势1、产品几近笼盖了所有罕有呼吸道病毒的诊断2、采取直接免疫荧光法，较其他检测办法有较大优势（详见表一）3、实验步调较简洁，在短时间内能得出结果，从而帮忙医生更好地治疗病人4、使用质量优异的抗体，染色步调仅需15分钟，大大节省了实验室的劳动力和成本，同时提高了临床诊断的成功率，削减重复实验5、可以监控传染的大范围流行6、拥有强大的科研团队，不竭研制和改良单克隆抗体表1、几种经常使用检测办法的比较2.4 D3Ultra DFA试剂实验操纵步调1、样品准备步调：①将样本充分震荡混匀约10-15秒.②在400-600xg转速下离心5-10分钟.③弃上清（如果预留上清可用于细胞培养）.④在沉淀中加5 mL PBS缓冲液（请使用普通PBS，不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒.⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟.⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀.⑦重复步调4到6，直至黏液层被完全去除.注意：一定要将黏液去除洁净，不然会造成非特异荧光从而影响实验结果.⑧在沉淀中加0.5到1 mL的PBS缓冲液.⑨用移液器频频吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液.这个悬浊液可用于直接样本测试.2、直接样本测试步调：①在2孔或8孔板上的每孔内滴加25 µL的细胞悬浊液.②样本完全风干.③在20ºC到25ºC，用预冷的100%丙酮固定细胞约5到10分钟.注意：丙酮是易挥发、可燃性物质，使用时请远离明火.④从丙酮中取出载玻片并风干.⑤在固定并风干的细胞上滴加一滴DFA染色试剂（如图1），使其完全笼盖细胞（注意：2孔或8孔板上有一孔是阴性对照孔，请勿滴加DFA染色试剂）. ⑥在呼吸道病毒抗原对照板的每孔内也要滴加DFA染色试剂.抗原对照板包含了被病毒传染的细胞和未传染的细胞，只能一次性使用.⑦在阴性对照孔内滴加正常鼠丙种球蛋白试剂，使其完全笼盖细胞.⑧将载玻片放于35ºC到37ºC的恒温箱内孵育15到30分钟，为保持其湿润最好放置于带盖的盒子内.⑨用事先稀释好的洗液漂洗染色细胞.为了更有效地洗涤，请将玻片在洗液中频频浸蘸4次左右.⑩使用新的1X洗液再洗一次.⑪用去离子水再洗一遍.图1、在玻璃板上滴加D3Ultra DFA染色试剂3、不雅察实验结果滴加2到3滴固定液，并加盖盖玻片（20X50 mm），要注意避免产生气泡.在200倍缩小荧鲜明微镜下不雅察结果.2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读带FITC标识表记标帜的抗体在荧鲜明微镜下会呈现明亮的绿色，如果细胞概略存在病毒抗原，染色后就会显绿色.在荧鲜明微镜下，传染不合病毒的细胞会呈现独有的特征（如图2）.图2、显微镜下不雅察染色细胞（注：按照不合荧鲜明微镜，布景色不一定为白色）3．D3Ultra DFA试剂竞争优势查验的特异性: 用D3Ultra DFA 呼吸道病毒筛查和判定试剂对多种细胞和微生物进行穿插反响测试.对64种病毒、18种细胞、19种细菌均没有穿插反响.查验的灵敏度：荧光标识表记标帜的单克隆抗体平均能检测出病毒的最低浓度约为1.0 PFU.主要竞争对手为西班牙Vircell公司的9项呼吸道产品.D3Ultra DFA试剂与其主要有两点不合：1. 检测项目不合；2. 检测原理不合1、Vircell产品检测项目除了以上7种病毒外，还包含肺炎衣原体、支原体等原核生物检测项目.但是，90%的伤风是由病毒引起的.如果是细菌、衣原体、支原体等传染，一般白细胞和C-反响蛋白（CRP）都会显著升高，而病毒传染，这两项指标一般不会升高.我们建议医生可以先做血常规或CRP检测，这样就能区分是病毒仍是细菌传染，而这两项测试不但快速（一般20-30分钟），并且价钱相对廉价.2、D3Ultra DFA试剂的检测原理是用荧光（FITC）标识表记标帜的单克隆抗体检测病毒抗原，属于直接荧光免疫法.Vircell产品的检测原理是用抗原检测抗体（IgM），使用的办法是直接免疫荧光法.虽然检测IgM能区分出是既往传染仍是急性传染，但是抗体产生的个别差别较大，特别是1岁以下的婴幼儿和有免疫缺陷的人群，其抗体往往产生较慢.短时间内，在体内抗体缺乏的情况下，可能会出现假阴性，从而错过了治疗的最佳时期.甲型流感病毒其概略抗原变异较快，而人体往往不克不及实时产生针对新毒株的抗体，这时也会造成假阴性.直接免疫荧光法会增加非特异性反响的概率.表2、Vircell与D3Ultra DFA试剂对比*备注：引用自《流行性伤风诊断与治疗指南（2011年版）》附录1 七种病毒检测的临床意义流感病毒侵入呼吸道，经1-2天的潜伏期，传染者便可出现流感症状.病毒在上皮细胞内复制，很少入血，但可释放内毒素样物质入血，引起全身中毒症状：发热、头痛、全身酸痛、疲乏无力、白细胞数下降等.幼儿或年老体弱病人传染流感病毒易继发细菌传染，如归并肺炎等，病死率高.婴幼儿特别是2-6个月的婴儿对RSV特别敏感，常引起较为严重的呼吸道疾病，如细支气管炎、肺炎等，患儿常出现呼吸暂停，气管或细支气管坏死物与粘液、纤维蛋白等结集在一起，极易阻塞患儿的呼吸道，严重者造成死亡.在我国RSV仍是引发流行性喘憋性肺炎的主要病原，可引起婴幼儿尤其是新生儿较高的死率.腺病毒主要引起呼吸道传染，症状有急性发热、咽炎、扁桃体炎等.腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10%，多由腺病毒3、7型引起；婴幼儿腺病毒肺炎的病死率为8%-10%.除呼吸道疾病外，腺病毒亦可引起其他疾病，如流行性角膜炎、出血性结膜炎、急性滤泡性结膜炎等.腺病毒与婴幼儿胃肠道疾病也有可能相关，包含阑尾炎、急性胃肠炎，有时可引起脑炎和脑膜炎、出血性膀胱炎等.副流感病毒是引起小儿急性呼吸道传染的罕有病因，仅次于RSV.副流感1、2型是哮喘的主要病因，以2-4岁儿童中最为严重.副流感3型，亦可引起哮喘，但主要易引起婴幼儿支气管炎、肺炎，并以1岁以内的婴儿较为严重.病毒及其对应抗病毒药附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含）此列表中的器材和试剂是实验所必须的，但是未包含在试剂盒中，需要单独采办.9 量筒 1 L（配置洗液）10 带盖瓶 1 L（储存稀释洗液）11 加样枪和枪头多种12 丙酮纯度100%13 普通PBS溶液0.01 M (Na2HPO4, KH2PO414 去离子水15 乳胶手套16 镊子附录3 进口荧鲜明微镜参数生产厂商Digital Bio产地韩国电源AC 100-240 V，50-60 HzCPU AMD AU1250缩小倍数约200倍光源白色/蓝色LED，寿命达40,000小时激起波长488 nm，发射波长520 nm 摄像头130万像素CMOS（1280 X 1024）。

T7-链接双信号放大技术检测呼吸道七项病原RNA在儿童呼吸道感染中的应用摘要：目的应用T7-连接双信号放大技术进行呼吸道七项病原RNA检测，探讨其在儿童呼吸道感染方面的应用价值。

方法收集我院门诊及住院处390例呼吸道感染的患儿呼吸道分泌物，进行T7-连接双信号放大技术检测呼吸道七项病原体RNA，同时采集我院住院处522例支原体、衣原体和184例流感三项抗体检测，比较分析其灵敏性和特异性及临床应用价值。

结果 T7-连接双信号放大技术检测时间仅需要2-3小时，其灵敏度和可靠性和时效性均优于抗体检测，且不需要昂贵的特殊设备，具有实验室前期投入少，线性范围宽，无需内参，直接定量，试剂盒价格便宜等优点。

结论 T7-连接双信号放大技术可方便快捷的检测呼吸道七项病原体RNA，其检测效能灵敏性、特异性及时效性均较高，适宜临床推广应用。

关键词：T7-连接双信号放大技术；病原体RNA；呼吸道感染[Abstract] Objective To detect seven pathogenic RNA in respiratory tract by T7-linked double-signal amplification technique and explore its application value in children with respiratory tract infection.Methods Respiratory tract secretions of 390 children with respiratory tract infections in outpatient and inpatient departments ofour hospital were collected and T7-junction double signal amplification technique was used to detect the RNA of seven pathogens in the respiratory e value.Results The detection time of T7-linked double-signal amplification technique was only 2-3 hours.The sensitivity，reliability and timeliness of T7-linked double-signal amplification technique were superior to that of antibody detection，and it did not need expensive special equipment.It had the advantages of less pre-laboratory input，wide linear range，no internal parameters，direct quantification，and cheapkit.Conclusion T7-linked double-signal amplification technique can detect seven pathogenic RNA in respiratory tract conveniently and quickly.It has high sensitivity，specificity and timeliness，and is suitable for clinical application.[keyword] T7- connected dual signal amplification technology；pathogen RNA；respiratory tract infection呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统，分为上呼吸道感和下呼吸道感染，常见病原体为病毒，少数为细菌和肺炎支原体、衣原体。