某复星医学科技发展某
呼吸道病毒7项检测试
剂
2011-1-10
呼吸道病毒7项检测试剂
目录
1．概述1
2．D3Ultra DFA试剂1
2.1 D3Ultra DFA试剂规格1
2.2 D3Ultra DFA试剂用途2
2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势2
2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤3
2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读4
3．D3Ultra DFA试剂竞争优势5
3.1 检验的特异性和灵敏度5
3.2 市场竞争5
附录1 七种病毒检测的临床意义6
附录2 实验室所需设备清单（试剂盒中不含）7
附录3 进口荧光显微镜参数8
1．概述
日常生活中，几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不便，有些甚至威胁到人们的健康和生命。在医院和急诊室中，这些呼吸道病毒也常常是诊断和治疗的难题。
常见的呼吸道病毒包括：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型和副流感病毒3型。在病毒检测方法中，抗原检测有其无法比拟的优势：1. 可以用于病毒的早期诊断，这对治疗非常重要；2. 快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。DHI公司的D3Ultra DFA试剂属于抗原检测中的直接免疫荧光法。该试剂可以同时筛查和鉴定出常见的7种呼吸道病毒。
D3Ultra DFA试剂主要的测试对象为婴幼儿和儿童，所以目标客户群体为：儿童医院、妇幼保健院和有儿科的三甲医院。
2．D3Ultra DFA试剂
2.1 D3Ultra DFA试剂规格
D3Ultra DFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂。检测病毒种类：A型（甲型）流感病毒，B型（乙型）流感病毒，呼吸道合胞病毒（RSV），腺病毒，1、2、3型副流感病毒。具体规格如下：
筛查试剂：10 mL，可用于400次测试
鉴定试剂：每项鉴定试剂2 mL X 7，可用于80次测试
另外，每盒试剂中含有40x浓缩洗液25 mL，固定液15 mL，正常鼠丙种球蛋白试剂10 mL（用于阴性质控），含有7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板5块。
2.2 D3Ultra DFA试剂用途
D3Ultra DFA试剂能对疑似呼吸道病毒感染的患者进行快速的病毒筛查和鉴定。及时、准确地诊断对于病人的治疗非常重要，这主要体现在以下几点：
1、病毒治疗针对性强
金刚烷乙胺、瑞乐沙、奥司他韦（达菲）等是抗流感病毒的特效药。
RSV和副流感病毒可以使用利巴韦林和免疫球蛋白进行治疗。
目前没有专门的抗腺病毒药物，主要采取支持疗法。
2、病毒治疗有时效性
大部分呼吸道病毒越早治疗效果越好。
比如，奥司他韦在体内的活性形式是一种强效的高选择性的流感病毒NA抑制剂，它主要通过干扰病毒从被感染的宿主细胞中释放，从而减少甲型或乙型流感病毒的传播。因此，在出现流感症状的48小时内使用奥司他韦才有用，过了这个时间段后疗效甚微。
3、避免抗生素的滥用
病毒不同于细菌、衣原体、支原体等原核生物，其对抗生素不敏感，不能使用抗生素进行治疗。准确的诊断能帮助医生确定是否使用抗生素来治疗病人。2.3 D3Ultra DFA试剂特点和优势
1、产品几乎覆盖了所有常见呼吸道病毒的诊断
2、采用直接免疫荧光法，较其他检测方法有较大优势（详见表一）
3、实验步骤较简便，在短时间内能得出结果，从而帮助医生更好地治疗病人
4、使用质量优异的抗体，染色步骤仅需15分钟，大大节省了实验室的劳动力和成本，同时提高了临床诊断的成功率，减少重复实验
5、可以监控感染的大规模流行
6、拥有强大的科研团队，不断研制和改进单克隆抗体
表1、几种常用检测方法的比较
2.4 D3Ultra DFA试剂实验操作步骤
1、样品准备步骤：
①将样本充分震荡混匀约10-15秒。
②在400-600xg转速下离心5-10分钟。
③弃上清（如果预留上清可用于细胞培养）。
④在沉淀中加5 mL PBS缓冲液（请使用普通PBS，不要使用试剂盒内配套的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。
⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟。
⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。
⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。
注意：一定要将黏液去除干净，否则会造成非特异荧光从而影响实验结果。
⑧在沉淀中加0.5到1 mL的PBS缓冲液。
⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。这个悬浊液可用于直接样本测试。
2、直接样本测试步骤：
①在2孔或8孔板上的每孔内滴加25 µL的细胞悬浊液。
②样本完全风干。
③在20ºC到25ºC，用预冷的100%丙酮固定细胞约5到10分钟。注意：丙酮是易挥发、可燃性物质，使用时请远离明火。
④从丙酮中取出载玻片并风干。
⑤在固定并风干的细胞上滴加一滴DFA染色试剂（如图1），使其完全覆盖细胞（注意：2孔或8孔板上有一孔是阴性对照孔，请勿滴加DFA染色试剂）。
⑥在呼吸道病毒抗原对照板的每孔内也要滴加DFA染色试剂。抗原对照板包含了被病毒感染的细胞和未感染的细胞，只能一次性使用。
⑦在阴性对照孔内滴加正常鼠丙种球蛋白试剂，使其完全覆盖细胞。
⑧将载玻片放于35ºC到37ºC的恒温箱内孵育15到30分钟，为保持其湿润最好放置于带盖的盒子内。
⑨用事先稀释好的洗液漂洗染色细胞。为了更有效地洗涤，请将玻片在洗液中反复浸蘸4次左右。
⑩使用新的1X洗液再洗一次。
⑪用去离子水再洗一遍。
图1、在玻璃板上滴加D3Ultra DFA染色试剂
3、观察实验结果
滴加2到3滴固定液，并加盖盖玻片（20X50 mm），要注意避免产生气泡。在200倍放大荧光显微镜下观察结果。
2.5 D3Ultra DFA试剂实验结果判读
带FITC标记的抗体在荧光显微镜下会呈现明亮的绿色，如果细胞表面存在病毒抗原，染色后就会显绿色。在荧光显微镜下，感染不同病毒的细胞会呈现独有的特征（如图2）。
