蛋白质专用转染试剂

广东转染试剂类型
广东转染试剂类型
广东省作为全国经济重心之一，其科技实力在行业内也是一直走在前列。

转染试剂作为生物科研中不可缺少的试剂之一，在广东制造商也
有相当的生产水平和供应能力。

转染试剂，是指将外来的目的基因（DNA、RNA等）引入到靶细胞内，并使其表达的试剂。

其种类繁多，在广东也有着相应的常规类型。

1. 磷脂体基转染试剂
主要由磷脂体和质粒DNA组成，优点是容易制备和操作，适合于大规模生产。

缺点是转染率相对不高，有一定的毒性。

2. 聚乙烯酰胺转染试剂
聚乙烯酰胺（PEI）是一种化学合成剂，使用时与DNA分子组合形成
复合物，可以将DNA有效转染到细胞内。

优点是转染率高且毒性低，目前在广东科研中得到广泛应用。

3. 蛋白质/肽转染试剂
蛋白质/肽转染试剂通常是根据蛋白质或肽与DNA分子的作用机制设计制备的，可以有效地将目的分子转染到靶细胞内。

优点是转染效率高且无毒性，但缺点是价格昂贵。

4. 常规转染剂
常规转染剂是一类较为通用的转染试剂，主要包括羧甲基纤维素钠（CMC-Na）、聚乙烯醇（PVA）、去离子水等，优点是价格低廉且易于操作，但其转染效率较低，通常适用于一些较为简单的试验。

总体来说，转染试剂在广东科研中扮演着不可或缺的角色，其种类繁多，需根据实验需要选择合适的试剂。

在使用转染试剂时，需注意试剂质量和实验条件，以确保实验结果的准确性和科学性。

2022版 CTM694原英文技术手册TM694中 文 说 明 书适用产品目录号：E5911和E5912FuGENE ®4K TransfectionReagent普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址：北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话：************网址：技术支持电话：400 810 8133技术支持邮箱：*************************CTM 6942022制作1所有技术文献的英文原版均可在/ protocols 获得。

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如果您在使用该试剂盒时有任何问题，请与Promega 北京技术服务部联系。

电子邮箱：*************************1. 描述 (2)2. 产品组分和储存条件 (2)3. 一般注意事项 (2)3. A. 转染试剂与DNA的比例 (3)3. B. DNA (3)3. C. 时间 (3)3. D. 血清 (3)3. E. 细胞培养条件 (3)3. F. 稳定转染 (3)4. 推荐操作步骤 (4)4. A. 细胞铺板 (5)4. B. FuGENE® 4K Transfection Reagent准备 (5)4. C. 一般转染操作步骤 (6)4. D. 稳定转染操作步骤 (8)4. E. 转染优化 (9)4. F. 报告基因活性和细胞健康的多重检测方案 (11)5. 疑难解答 (12)FuGENE® 4K Transfection Reagent普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址：北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话：************网址：技术支持电话：400 810 8133技术支持邮箱：*************************CTM 6942022制作21. 描述FuGENE® 4K Transfection Reagent是一个多组分，非脂质体试剂，用于将DNA高效、低毒地转染至多种哺乳动物细胞系中，无需在加入试剂-DNA复合物后更换培养基。

Xfect 质粒DNA 转染试剂• 操作简便且兼容血清 • 转染效率高 • 细胞毒性极低 • 细胞类型广泛操作流程图：Xfect 质粒DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)：1. 转染前的准备贴壁细胞: 在转染的前1d ，接种1ml 合适密度的细胞于6-孔板的单孔中，使转染当天细胞融合度能够达到50–80%。

悬浮细胞: 在混匀Xfect Polymer 前，将细胞以5 x10e5–1.25 x10e6/1ml 接种于6-孔板中培养。

2. 漩涡混匀Xfect Polymer 。

3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂： Tube 1 (质粒DNA)---μl (5 μg) 质粒DNA---μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积T ube 2 (Polymer) 1.5 μl Xfect Polymer (100μg /μl ) 98.5 μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积注意:• 上述为6-孔板单孔转染所需的量。

• 每1μg 质粒DNA 加0.3 μl Xfect Polymer 。

• 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒DNA 是最佳使用量。

若您是首次使用Xfect 转染细胞，需要按照2.5 μg ，5 μg 和7.5 μg 的质粒DNA 的量进行梯度实验，确定质粒DNA 的最优使用量。

实验证明，质粒DNA 的量不能少于2.5 μg ，不然会造成转染效率低（经转染Hela 细胞实验验证）。

• Xfect Polymer 预混液室温放置不要超过30min 。

4. 漩涡混匀每管混合物。

5. 将Xfect Polymer 预混液和DNA 预混液混合，再将混合液以适中的速度漩涡10sec 。

6. 室温孵育10 min ，形成Xfect/DNA 复合物。

7. 将200μl 纳米复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。

注意:无需去除培养基中的血清，当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是正常的。

Lip3000转染说明书一、引言本说明书旨在提供关于使用Lip3000进行转染实验的详细步骤和操作注意事项。

Lip3000是一种常用的基因转染试剂，适用于各种细胞类型的转染，无论是质粒DNA转染还是RNA干扰实验。

本转染试剂的使用方法简单且高效，能够快速将外源基因导入到细胞内。

在进行Lip3000转染实验之前，请阅读本说明书并仔细按照步骤进行操作。

二、实验材料•Lip3000转染试剂•承载目标基因的质粒DNA（或RNA）•细胞培养基•细胞培养器具（离心管、无菌培养皿等）•离心机•PCR仪（或其他适用于转染验证的仪器）三、实验步骤1. 细胞预处理在进行转染之前，首先需要对待转染细胞进行预处理。

以下是一般的细胞预处理步骤：1.将细胞培养在含有适宜培养基的培养皿中，以确保细胞处于最佳状态。

2.细胞密度应达到80%~90%的收缩。

注意不要使细胞超过90%的收缩，否则会影响转染效率。

3.在转染前，将培养皿中的培养基抽去，并用预暖的PBS洗涤细胞，以确保细胞表面不含有培养基或其他干扰物。

2. 转染操作请按照以下步骤进行转染操作：1.将Lip3000转染试剂放在室温下静置10分钟，使其回到室温并充分混匀。

2.在一个无菌离心管中，将转染试剂按照以下比例混合：–将500μl Opti-MEM培养基加入离心管中；–加入2.5μl Lip3000试剂，轻轻混匀；–静置20分钟，使转染试剂和培养基充分结合。

3.将预处理后的细胞培养皿中的PBS抽去，加入稀释后的Lip3000转染试剂。

注意：转染试剂的添加量需根据细胞的情况进行优化，典型的转染试剂与细胞的最佳比例为2:1。

4.搅拌培养皿或转动培养皿，使转染试剂均匀分布在培养皿上的细胞中。

5.保持培养皿平放，在37°C的细胞培养箱中孵育转染混合液4至6小时。

细菌转染时间的长短根据细胞的特性和转染效果进行调整。

3. 转染验证与后续处理待转染时间到达后，即可以进行转染效果的验证。

英格恩entranster转染试剂说明书一、产品概述英格恩 Entanster 转染试剂是一种用于转染外源 DNA/RNA 到细胞内的试剂。

它是经过优化的化学试剂组合，可以将外源 DNA/RNA 高效地传递到各种细胞中，并促进其定向表达。

本试剂适用于体外转染实验和基因工程研究，具有高转染效率、低细胞毒性、简单易用等优点。

二、试剂成分英格恩 Entanster 转染试剂主要成分包括转染缓冲液和转染增强剂。

转染缓冲液中包含有机溶剂、非离子表面活性剂等，用于稳定 DNA/RNA与转染剂的结合。

转染增强剂含有具有阴离子表面活性剂、脂质、蛋白质等物质，可以提高细胞膜通透性和转染效率。

三、使用说明1.储存和稀释：试剂应储存于-20℃的冰箱中，保持干燥和避光。

使用前需要将试剂溶解在适当体积的转染缓冲液中，最佳稀释比例为1：9、溶液需充分混匀，离心并去除任何沉淀物。

2.样品准备：在转染前，将目标DNA/RNA溶解在适当的缓冲液中，浓度通常在0.1-1μg/μL最佳。

确保样品充分溶解并无明显沉淀。

3.转染操作：对于已经培养至适当倍数的细胞，将细胞用预先暖和的转染缓冲液洗涤一次，并去除缓冲液。

将转染缓冲液和溶解好的目标DNA/RNA混合，稍微搅拌均匀。

与此同时，将适量的转染增强剂加入到混合物中，充分混合。

然后将混合物直接滴加到细胞上，并轻轻摇晃培养板以确保混合物均匀分布。

4.培养和检测：将含有转染混合物的培养板放回恒温培养箱中，保持恒定的温度和CO2浓度。

培养时间和温度根据需要进行调整，通常在24-48小时后可以进行下一步实验或观察。

四、注意事项1.试剂需保存在干燥、阴凉、避光的环境中，避免结冰或暴露在高温环境中。

2.操作中需佩戴手套并遵循生物安全实验操作规范。

3.使用前需充分摇匀试剂瓶，确保所有试剂成分充分混合均匀。

4.转染缓冲液中的有机溶剂可能对一些细胞有毒性，因此在选择试剂时应参考相关文献或尝试不同的浓度和时间，以确定最佳条件。

转染试剂的作用原理一、转染试剂的基本概念转染试剂是一种用于将外源基因或其他生物分子转移到目标细胞中的化学物质。

转染试剂可以通过物理或化学方法改变细胞的通透性，使外源物质能够进入细胞内，并达到转染的目的。

转染试剂在基因治疗、基因表达研究和细胞工程等领域广泛应用。

二、转染试剂的分类转染试剂按照机理和性质的不同可分为多种类型，常见的转染试剂包括：1.脂质体（Liposome）：脂质体是由磷脂双分子层构成的微小囊泡，可与细胞膜融合，将目标物质转移到细胞中。

2.内源蛋白介导的转染：通过利用特定的蛋白质，如病毒衣壳蛋白或细胞内运输蛋白，将目标物质转移到目标细胞中。

3.阳离子聚合物：阳离子聚合物具有正电荷，能够与负电荷的DNA或RNA结合形成复合物，进而转染入细胞。

4.高分子基质：高分子材料如凝胶、纤维或微球等可用于载体，将目标物质与细胞接触，实现转染。

5.电穿孔：利用电场或离子流导致细胞膜破裂，使目标物质通过细胞膜进入细胞质。

三、脂质体转染试剂的作用原理脂质体是一种常用的转染试剂，其作用原理主要包括以下几个步骤：1.与DNA结合：脂质体通过与目标DNA相互作用，形成脂质体-DNA复合物。

脂质体由于其亲油性能与DNA中的疏水部分相互作用，同时脂质体表面带有正电荷，可以与DNA的负电荷相吸引。

2.细胞摄取：脂质体-DNA复合物与细胞膜结合后，脂质体会在细胞膜上形成微囊泡。

随后，微囊泡与细胞膜融合，释放出脂质体-DNA复合物进入细胞质。

3.脱脂质体：脂质体在细胞质中逐渐失去其亲油性，释放出DNA。

由于脂质体-DNA复合物在细胞膜上的微囊泡中形成的电位差，使得DNA被吸引到细胞核附近。

4.核入：DNA由细胞质进入细胞核，最终与染色体结合或进入细胞核内的胞浆，实现转基因。

四、脂质体转染试剂的优缺点脂质体转染试剂具有一些优点和缺点，需要根据实际应用情况选择使用：优点：1.安全性：脂质体转染试剂大多采用合成非病毒载体，通常比病毒载体更安全，不会引起病毒感染及遗传毒性。

LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤转染是一种将外源DNA或RNA导入到细胞内的技术，以研究基因功能、蛋白质表达、细胞信号转导等方面的问题。

LIPOFECTAMINE2000是一种常用的转染试剂，广泛应用于多种细胞系中。

以下是LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤的详细介绍。

一、细胞种植与处理准备1.1细胞传代：将细胞进行传代，以保证其在良好的状态下进行实验。

1.2细胞密度调整：将细胞于适宜培养皿中培养至60-80%的密度，以保证细胞的适宜转染。

1.3细胞处理准备：在转染前，将细胞用无酶EDTA或胰酶剥离并重新悬浮在适宜的培养基中，以保持细胞的完整性和适宜的状态。

二、试剂配制2.1DNA或RNA的制备：将外源DNA或RNA在无菌条件下制备，并使用纯化试剂进行纯化和浓缩。

2.2转染试剂配制：将冻干的LIPOFECTAMINE2000转染试剂通过加入合适的无菌水，稀释成适宜浓度的转染试剂。

三、转染操作3.1转染试剂与DNA/RNA的混合：将适量的LIPOFECTAMINE2000转染试剂与DNA或RNA混合在无菌的管中，轻轻混合均匀。

注意，避免过量试剂和核酸的使用，以减少细胞的毒性和副作用。

3.2孵育混合物：将混合物在常温条件下孵育15-30分钟，以促使脂质体与核酸形成稳定的复合体。

四、转染过程4.1转染试剂与细胞的混合：将混合物缓慢滴加到处理好的细胞培养基上，缓慢摇晃培养皿以使混合物均匀分布。

4.2转染时间及培养条件：将细胞放置在转染液中，保持静止状态，同时将培养皿放回培养箱中，在37℃、5%CO2的恒温恒湿条件下进行转染。

转染时间需要根据细胞系和转染试剂的要求进行优化，一般为4-6小时。

4.3转染液的去除：将转染液小心去除，并将细胞用含有适宜抗生素或筛选剂的培养基洗涤一次，以去除残留的转染试剂。

五、细胞处理及分析5.1细胞培养：将细胞放回恒温恒湿培养箱中，用适宜培养基进行细胞的培养。

蛋白质转染技术是一种将表达出的目标蛋白直接转入细胞的过程。

这个过程中，通常会用到辅助蛋白或构建融合蛋白来帮助目标蛋白进入细胞质。

转染方法通常是共孵育。

具体制备方法如下：
1.准备实验材料，包括细胞（如鼠成纤维细胞）、试剂和试剂盒（如丙戊酸培养液）、仪器和耗材
（如培养皿、移液枪和枪头等）。

2.将目标蛋白（如重组重新编程蛋白质，包括Oct4-11R、Sox2-11R、Klf4-11R和c-Myc-11R）
与培养基混合，并可能添加其他辅助剂（如丙戊酸和HDAC抑制剂）来提高编程效率。

3.将处理过的细胞在特定条件下培养一段时间（如36小时），使目标蛋白有机会进入细胞并发挥
作用。

4.在完成多次（如四次）蛋白转导后，处理过的细胞可能需要进行后续处理，如转移到其他类型的
细胞上，并在特定培养基中保存和扩增。

另外，值得注意的是，由于蛋白质转染技术并不涉及基因的导入，因此它只适用于瞬时转染，即目标蛋白的作用会在一段时间后消失。

如果需要长期的蛋白表达，可能需要考虑其他方法，如基因转染。

此外，对于蛋白质转染，也有一些专门的试剂，如PULSinTM，这是一种由Polyplus Transfection公司开发的新型转染试剂，它可以通过正电荷外衣包裹许多蛋白质/抗体，使其能够有效地转染到活细胞中。

蛋白共定位步骤质粒转染
蛋白共定位是一种研究蛋白质相互作用的方法，其可以描述两个或多个蛋白质之间的关系，包括它们的结合位置、交互作用、功能等。

在进行蛋白共定位实验时，质粒转染是一个重要的步骤，下面我们来了解一下质粒转染的具体步骤。

首先，我们需要准备好需要转染的质粒和目标细胞。

质粒是一种可以被细胞摄取并在其中进行表达的DNA分子。

而目标细胞是我们希望进行共定位实验的细胞，通常选择表达目标蛋白质的细胞。

在准备好这些材料之后，我们可以进行质粒转染实验了。

第一步，我们需要将质粒与转染试剂（例如聚乙烯亚胺）混合均匀，并在室温下静置一段时间，使其形成复合物。

这种复合物可以帮助质粒进入细胞。

第二步，我们需要将转染复合物加入到目标细胞中。

在加入复合物之前，需要将细胞培养在适当的培养基中，并保证细胞处于生长状态。

第三步，我们需要对转染后的细胞进行处理，以保证蛋白质表达和共定位实验能够进行。

例如，可以使用药物或化合物来诱导或抑制蛋白质表达，或者对细胞进行特定的处理，以激活或抑制某些基因表达。

第四步，我们需要对转染后的细胞进行共定位实验。

在这一步中，我们可以使用各种分析方法，例如共免疫共沉淀、荧光共定位、双杂交等方法，来研究蛋白质之间的相互作用。

最后，在完成共定位实验后，我们可以通过分析和解释实验结果，来深入了解蛋白质之间的相互作用和功能，并为后续研究提供重要的信息和指导。

总之，质粒转染是蛋白共定位实验的重要步骤之一，其可以帮助我们将质粒有效地引入到目标细胞中，为后续的共定位实验提供必要的条件和保证。