各种转染试剂的中文转染方法
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fugene 4k 转染试剂 中文说明书
2022版 CTM694原英文技术手册TM694中 文 说 明 书适用产品目录号：E5911和E5912FuGENE ®4K TransfectionReagent普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址：北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话：************网址：技术支持电话：400 810 8133技术支持邮箱：*************************CTM 6942022制作1所有技术文献的英文原版均可在/ protocols 获得。
请访问该网址以确定您使用的说明书是否为最新版本。
如果您在使用该试剂盒时有任何问题，请与Promega 北京技术服务部联系。
电子邮箱：*************************1. 描述 (2)2. 产品组分和储存条件 (2)3. 一般注意事项 (2)3. A. 转染试剂与DNA的比例 (3)3. B. DNA (3)3. C. 时间 (3)3. D. 血清 (3)3. E. 细胞培养条件 (3)3. F. 稳定转染 (3)4. 推荐操作步骤 (4)4. A. 细胞铺板 (5)4. B. FuGENE® 4K Transfection Reagent准备 (5)4. C. 一般转染操作步骤 (6)4. D. 稳定转染操作步骤 (8)4. E. 转染优化 (9)4. F. 报告基因活性和细胞健康的多重检测方案 (11)5. 疑难解答 (12)FuGENE® 4K Transfection Reagent普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址：北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话：************网址：技术支持电话：400 810 8133技术支持邮箱：*************************CTM 6942022制作21. 描述FuGENE® 4K Transfection Reagent是一个多组分，非脂质体试剂，用于将DNA高效、低毒地转染至多种哺乳动物细胞系中，无需在加入试剂-DNA复合物后更换培养基。
RNAi-Mate转染试剂操作手册说明书
目录号 C-01
产品说明 RNAi-Mate 转染试剂
规格 0.1mL
价格 ￥160
交货期限 2 个工作日
操作方法
一、体外转染方法 1. 细胞培养
可广泛应用于多种细胞系的DNA和siRNA转染。已成功地应用于多种代表各种来源的细胞类 型,包括 Hela(人宫颈癌细胞), MCF-7(人乳腺癌细胞), Hep3B(人肝细胞癌细胞), COS-7(猴肾细胞), Neuro-2a(鼠神经 母细胞瘤细胞),NIKS(人角质化细胞),C6(鼠神经胶质瘤细胞), DLD-1(人结肠癌细胞), NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细 胞), HT-29(人结肠腺癌细胞), A549(人肺癌细胞), CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5 DNA转化的人胚胎 肾细胞), SVRbag4细胞。
3. 细胞出现明显死亡
问题 与细胞生存相关的关键基因被关闭
细胞状态欠佳
siRNA/RNAi-Mate(或DNA/RNAiMate) 复合物浓度过高
重新设计实验
建议
使用传代次数较低的细胞;细胞接种后在24小时内达 到70-90%,并在24小时内完成转染
siRNA/RNAi-Mate(或 DNA/RNAi-Mate)浓度过高 时,有时也会产生毒性
4.悬浮细胞转染程序 本程序适用于使用24孔板悬浮细胞的转染。选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要。 siRNA(DNA)和DNA的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。 4.1 转染的当天,收集细胞离心,重悬。 4.2 在50μl的DMEM(或Opti-MEM, 或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或 0.8μg DNA), 柔和混匀。 4.3 混匀RNAi-Mate试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释 1μl RNAi-Mate试剂(DNA转染时,则加入2μl RNAi-Mate试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟。 4.4 将稀释好的siRNA和RNAi-Mate试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/RNAiMate(或DNA/RNAi-Mate)复合物。 4.5 将100μl siRNA/RNAi-Mate(或DNA/RNAi-Mate)复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔 中,来回轻柔摇晃细胞培养板。 4.6 再加入400μL细胞悬浮液(细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间)。 4.7 细胞在37℃温育24h-48h后进行转染后的其它步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去 复合物,更换培养基。
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤转染是指将外源DNA或RNA导入到目标细胞中的过程，LIPOFECTAMINE2000是一种常用的转染试剂。
下面是使用LIPOFECTAMINE2000进行转染的详细步骤：步骤一：细胞处理1.1培养要转染的细胞株，并确保细胞达到70%-80%的密度。
1.2使用无菌PBS洗涤细胞，将细胞悬浮于含有10%FBS的完全培养基中。
1.3通过计数细胞数来得到适当的细胞密度，以确保每个孔或皿中有足够的细胞进行转染。
步骤二：DNA/RNA和转染试剂的配制2.1在无菌离心管中配制DNA/RNA和转染试剂的混合液。
按照试剂的说明书中的推荐比例将DNA/RNA和转染试剂混合在一起，并使用无菌PBS 或者培养基和其它试剂进行稀释。
2.2轻轻摇晃混合液，避免产生气泡。
步骤三：转染3.1将配制好的转染混合液加入到每个孔或皿中，并轻轻摇晃培养皿/板使其均匀分布。
3.2将细胞和转染试剂混合液共孵育4-6小时，在37℃的CO2培养箱中进行转染反应。
转染时间可以根据目标细胞的特性进行调整。
步骤四：更换培养基4.14-6小时后，将转染混合液完全去除，并用预温热的完全培养基洗涤细胞，以去除未吸附的DNA/RNA和转染试剂。
4.2加入足够的完全培养基来覆盖细胞，尽量减少液体涡流，以避免对转染效率的不良影响。
步骤五：细胞培养和分析5.1将培养皿/板放回37℃的CO2培养箱中，并进行适当的培养条件。
5.2根据实验需要的时间点收集转染后的细胞进行后续的实验和分析。
需要注意的是，转染步骤中的各种参数（例如细胞密度、转染试剂的浓度和比例等）可能因不同的实验目的和目标细胞而有所不同。
因此，在具体操作中请参考所使用转染试剂和目标细胞的说明书，并根据实验需要进行相应的优化。
各种转染试剂的中文转染方法
各种转染试剂的中文转染方法FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。
2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3. 加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。
4. 室温孵育20分钟。
5. 将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。
6. 将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7. 3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2. 对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。
3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5. （optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
转染试剂的转染过程及特点
转染是将核酸导入真核细胞中的过程。
相关实验方案和技术包括转染试剂（脂质体转染、阳离子聚合物转染等）、以及化学法（DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法等）或物理方法（如电穿孔、基因枪粒子轰击法、显微注射等）。
其中，转染试剂已然成为实验室细胞转染主流方法。
转染试剂是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，已被广泛应用于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。
具有高效转染、细胞毒性很低，不被血清清除、操作简便易行，高重复性等特点。
特点
● 转染效率高
对原代培养细胞HUV-EC有较高的转染效率，而大多数阳离子脂质体对此细胞的转染效率很低。
● 细胞毒性低
在正确的转染方法及条件下，常用的细胞存活率高于90%。
● 试剂不被血清清除，转染操作简单
新型转染试剂不被血清清除，转染时可直接将转染试剂/DNA复合物直接加到细胞培养基中，无需更换培养基质和清洗细胞，整个操作过程可在半小时内完成。
图1.与传统转染实验程序比较
● 适应于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。
●新型转染试剂成功转染的部分细胞株：。
Xfect转染试剂操作中文手册(clontech)
Xfect 质粒DNA 转染试剂• 操作简便且兼容血清 • 转染效率高 • 细胞毒性极低 • 细胞类型广泛操作流程图：Xfect 质粒DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)：1. 转染前的准备贴壁细胞: 在转染的前1d ，接种1ml 合适密度的细胞于6-孔板的单孔中，使转染当天细胞融合度能够达到50–80%。
悬浮细胞: 在混匀Xfect Polymer 前，将细胞以5 x10e5–1.25 x10e6/1ml 接种于6-孔板中培养。
2. 漩涡混匀Xfect Polymer 。
3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂： Tube 1 (质粒DNA)---μl (5 μg) 质粒DNA---μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积T ube 2 (Polymer) 1.5 μl Xfect Polymer (100μg /μl ) 98.5 μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积注意:• 上述为6-孔板单孔转染所需的量。
• 每1μg 质粒DNA 加0.3 μl Xfect Polymer 。
• 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒DNA 是最佳使用量。
若您是首次使用Xfect 转染细胞，需要按照2.5 μg ，5 μg 和7.5 μg 的质粒DNA 的量进行梯度实验，确定质粒DNA 的最优使用量。
实验证明，质粒DNA 的量不能少于2.5 μg ，不然会造成转染效率低（经转染Hela 细胞实验验证）。
• Xfect Polymer 预混液室温放置不要超过30min 。
4. 漩涡混匀每管混合物。
5. 将Xfect Polymer 预混液和DNA 预混液混合，再将混合液以适中的速度漩涡10sec 。
6. 室温孵育10 min ，形成Xfect/DNA 复合物。
7. 将200μl 纳米复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。
注意:无需去除培养基中的血清，当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是正常的。
PEI细胞转染液使用方法(标准版)
PEI细胞转染液是一种广泛应用于实验室的转染试剂，用于将外源DNA或RNA 转染到细胞中。
以下为PEI细胞转染液的标准使用方法：一、准备工作1. 细胞：选择合适的细胞类型，如HEK293、CHO等。
确保细胞状态良好，密度适中。
2. 转染试剂：PEI细胞转染液。
3. 外源DNA或RNA：需转染的基因或表达载体。
4. 实验器材：离心机、显微镜、培养皿、移液器等。
二、操作步骤1. 细胞培养：将细胞接种于适当的培养皿中，用含适当抗生素的培养基培养细胞。
将培养皿放入37℃、5% CO₂的培养箱中，进行细胞培养。
2. 转染液制备：根据实验要求，将PEI细胞转染液按照一定比例稀释。
一般情况下，可以使用10倍稀释的PEI细胞转染液。
3. 转染操作：（1）将稀释后的PEI细胞转染液与外源DNA或RNA混合均匀。
（2）用移液器将混合液滴加到细胞培养皿中，注意不要直接将液体倒在细胞上，以免破坏细胞。
（3）将培养皿轻轻摇晃，使转染液与细胞充分接触。
然后将培养皿放入培养箱中，继续培养。
4. 转染后处理：转染后的细胞需要继续培养，观察转染效果。
根据实验要求，可使用荧光显微镜、实时定量PCR等方法检测转染效果。
三、注意事项1. 操作过程中，应确保实验器材干净无菌，避免污染。
2. 转染过程中，应控制转染液的浓度和滴加速度，避免对细胞造成过度刺激。
3. 转染后，注意观察细胞状态，如出现异常情况，应立即处理。
4. 实验过程中，应遵循实验室安全规定，确保人身安全。
以上为PEI细胞转染液的标准使用方法。
实际操作过程中，可能因实验条件、细胞类型等因素而有所调整。
在实际应用中，请根据具体情况进行操作。
各种转染试剂中文说明
FuGENE6（Roche）转染步骤:转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100ul。
2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。
4.室温孵育20分钟。
5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。
6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0ugDNA，轻轻混匀。
3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
加入2ml无血清配养基。
转染试剂的作用原理
转染试剂的作用原理一、转染试剂的基本概念转染试剂是一种用于将外源基因或其他生物分子转移到目标细胞中的化学物质。
转染试剂可以通过物理或化学方法改变细胞的通透性，使外源物质能够进入细胞内，并达到转染的目的。
转染试剂在基因治疗、基因表达研究和细胞工程等领域广泛应用。
二、转染试剂的分类转染试剂按照机理和性质的不同可分为多种类型，常见的转染试剂包括：1.脂质体（Liposome）：脂质体是由磷脂双分子层构成的微小囊泡，可与细胞膜融合，将目标物质转移到细胞中。
2.内源蛋白介导的转染：通过利用特定的蛋白质，如病毒衣壳蛋白或细胞内运输蛋白，将目标物质转移到目标细胞中。
3.阳离子聚合物：阳离子聚合物具有正电荷，能够与负电荷的DNA或RNA结合形成复合物，进而转染入细胞。
4.高分子基质：高分子材料如凝胶、纤维或微球等可用于载体，将目标物质与细胞接触，实现转染。
5.电穿孔：利用电场或离子流导致细胞膜破裂，使目标物质通过细胞膜进入细胞质。
三、脂质体转染试剂的作用原理脂质体是一种常用的转染试剂，其作用原理主要包括以下几个步骤：1.与DNA结合：脂质体通过与目标DNA相互作用，形成脂质体-DNA复合物。
脂质体由于其亲油性能与DNA中的疏水部分相互作用，同时脂质体表面带有正电荷，可以与DNA的负电荷相吸引。
2.细胞摄取：脂质体-DNA复合物与细胞膜结合后，脂质体会在细胞膜上形成微囊泡。
随后，微囊泡与细胞膜融合，释放出脂质体-DNA复合物进入细胞质。
3.脱脂质体：脂质体在细胞质中逐渐失去其亲油性，释放出DNA。
由于脂质体-DNA复合物在细胞膜上的微囊泡中形成的电位差，使得DNA被吸引到细胞核附近。
4.核入：DNA由细胞质进入细胞核，最终与染色体结合或进入细胞核内的胞浆，实现转基因。
四、脂质体转染试剂的优缺点脂质体转染试剂具有一些优点和缺点，需要根据实际应用情况选择使用：优点：1.安全性：脂质体转染试剂大多采用合成非病毒载体，通常比病毒载体更安全，不会引起病毒感染及遗传毒性。
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤
LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤1.准备转染试剂：取出存储在-20℃的LIPOFECTAMINE2000试剂，并将其溶解在适量的去离子水或者PBS缓冲液中，制备转染试剂。
2. 根据实验需要确定转染的质粒DNA量和细胞数量。
一般来说，每个转染需要1-2ug的质粒DNA，细胞密度则根据细胞类型的不同而有所变化。
3.将准备好的转染试剂和质粒DNA混合在一起。
首先将质粒DNA加入到含有LIPOFECTAMINE2000的管中，并轻轻混合均匀，然后将混合物静置15-30分钟，使其形成脂质-DNA复合物。
4.在脂质-DNA复合物静置的同时，准备待转染的细胞。
将细胞用无血清培养基洗涤一次，并将其悬浮在新的无血清培养基中。
5.将静置好的脂质-DNA复合物滴加到细胞中。
将脂质-DNA复合物滴加到含有细胞的培养皿中，并轻轻摇晃培养皿，使复合物均匀分布在细胞表面。
6.将转染后的细胞培养在37℃的CO2培养箱中孵育。
具体培养时间视实验需求而定，一般来说，24-48小时后可以进行下一步实验。
7. 检测转染效率。
可以通过荧光显微镜观察细胞内是否表达了目的基因或荧光标记，也可以采用Western blotting或者RT-PCR等方法进行进一步的检测。
总的来说，LIPOFECTAMINE2000转染试剂转染步骤相对简单，但需要注意的是在每一步操作中都要轻柔并避免产生气泡，以确保脂质-DNA复合物可以均匀地与细胞相结合，从而提高转染效率。
同时，在实验过程中需要注意质粒DNA的质量和浓度，以及细胞的健康状态，这些因素都会对转染效果产生影响。
希望以上介绍对您有所帮助，祝您实验顺利。
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各种转染试剂的中文转染方法FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。
2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3. 加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。
4. 室温孵育20分钟。
5. 将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。
6. 将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7. 3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2. 对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。
3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5. （optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
加入2 ml无血清配养基。
6. 直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
中保温24-48小时。
无需去掉复合物或更换培养基。
7. 在37℃，5％CO2或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。
8. 在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。
这依赖于细胞类型和启动子活性。
对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。
进行稳定表达需要数天或数周。
贴壁细胞的稳定转染：转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。
Lipofectamine 2000转染试剂转染步骤（24孔板）：1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数（0.5-2×105），细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在0.5 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2. 对于每孔细胞，使用50 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释0.8-1.0 ugDNA，轻轻混匀。
3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用50ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释1-3 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5. （optional）将24孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
加入0.5ml无血清配养基。
6. 直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
中保温24-48小时。
无需去掉复合物或更换培养基。
7. 在37℃，5％CO2或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。
8. 在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。
这依赖于细胞类型和启动子活性。
对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。
进行稳定表达需要数天或数周。
贴壁细胞的稳定转染：转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。
Effectene Transfection Reagent(Qiagen) 转染步骤：以下步骤适用于在6孔培养板中转染贴壁细胞。
开始时，每6孔培养板使用0.4 ug DNA。
尽管DNA的量看起来很少，但已足够用于转染。
如果想获得最高的转染效率，对每种细胞系的转染条件都要进行优化。
1. 转染前一天，用5ml含血清和抗生素的培养基分装使每6孔培养板含2-8×105的细胞（根据细胞类型而定）。
）。
转染当天细胞应40-80％2. 在细胞的正常培养条件下培养（通常37℃和5％CO2融合。
3. 转染时，用DNA浓缩缓冲液（EC Buffer）稀释1 ug DNA至100 ul总体积（DNA 用pH 7-8的TE Buffer溶解，DNA最低浓度：0.1ug/ul）。
加入3.2 ul Enhancer，涡旋1s以混合溶液。
重要：请保持DNA与Enhancer比例恒定。
注意：质粒DNA的质量会显著影响几个转染参数如转染效率、细胞增殖和细胞毒性、以及对于结果的解释。
因此，只应该使用最高纯度的DNA。
使用HiSpeed，QIAfilter和QIAGEN Plasmid Kits抽提纯化的质粒适合于大多数细胞系的转染。
要获得最好的重复性和最好的结果，我们推荐使用Endofree Plasmid Kit，该试剂盒可以快速有效地在质粒纯化过程中去除细菌内毒素，从而获得最佳的转染结果。
4. 室温（15-25℃）孵育2-5分钟，离心（spin down）几秒钟以从管顶去除液滴。
5. 向DNA-Enhance混合液中加入10ul Effectene Transfection Reagent，反复吸取5次或涡旋10秒钟以混合。
注意：没必要一直把Effectene Reagent置于冰上。
在室温中放置10-15分钟不会改变它的稳定性。
6. 室温下（15-25℃）孵育5-10分钟以形成转染复合物。
7. 孵育过程中，从培养板上轻柔地吸出培养液，用4 ml PBS洗涤一次细胞。
加入1.6 ml新鲜培养液（可以包含血清和抗生素）到细胞中。
8. 加入0.6 ml培养液（可以包含血清和抗生素）至包含转染转染复合物的EP管中。
吸取两次以混合，立即将转染复合物drop-wise加入6孔培养板的细胞中。
轻摇培养板使转染复合物分布均匀。
9. 将细胞与转染复合物在它们的正常培养条件下孵育适当的时间直至转染基因表达。
孵育时间和由所采用的实验和所使用的基因决定。
Optional: 大多数情况下，不需去除转染复合物。
然而，如果观察到细胞毒性，则需在转染后6-18小时移除Effectene-DNA混合物，用PBS洗涤一次细胞，然后加入5 ml新鲜细胞培养液。
10. 瞬时转染时，进一步试验分析转染基因的表达。
转染β-gal 或 cat 报告基因的重组子常在转染后孵育24-48小时以使转染基因的表达最大化。
稳定转染时，在转染后24-48小时，将细胞以1:5~1:10传代至合适的选择性培养基中。
保持细胞在选择性培养基中直至克隆出现。
注意：我们推荐对每一细胞系和使用的抗生素建立一个致死曲线（剂量-反应曲线）。
但是一定要记住致死曲线受细胞密度的影响。
以下步骤有时是必须的：将转染的细胞置于它们正常的培养液（如：不含选择性抗生素的培养液），然后孵育1-2天，然后再加入选择性培养液。
Superfect Transfection Reagent(Qiagen) 转染步骤：以下步骤适用于在6孔培养板中转染贴壁细胞。
如果想获得最高的转染效率，对每种细胞系的转染条件都要进行优化。
1. 转染前一天，用含血清和抗生素的培养基分装使每6孔培养板含2-8×105的细胞（根据细胞类型而定）。
）。
转染当天细胞应40-80％2. 在细胞的正常培养条件下培养（通常37℃和5％CO2融合。
3. 转染时，用无血清培养基稀释2 ug DNA至100 ul总体积（DNA用pH 7-8的TE Buffer溶解，DNA最低浓度：0.1 ug/ul）。
混合，离心几秒钟以从管顶去除液滴。
注意：质粒DNA的质量会显著影响几个转染参数如转染效率、细胞增殖和细胞毒性、以及对于结果的解释。
因此，只应该使用最高纯度的DNA。
使用HiSpeed，QIAfilter和QIAGEN Plasmid Kits抽提纯化的质粒适合于大多数细胞系的转染。
要获得最好的重复性和最好的结果，我们推荐使用Endofree Plasmid Kit，该试剂盒可以快速有效地在质粒纯化过程中去除细菌内毒素，从而获得最佳的转染结果。
4. 向DNA稀释液中加入10 ul Superfect Transfection Reagent，反复吸取5次或涡旋10秒钟以混合。
注意：没必要一直把Superfect Reagent置于冰上。
在室温中放置10-15分钟不会改变它的稳定性。
5. 室温下（15-25℃）孵育5-10分钟以形成转染复合物。
6. 孵育过程中，从培养板上轻柔地吸出培养液，用2ml PBS洗涤一次细胞。
7. 加入600 ul培养液（包含血清和抗生素）至包含转染转染复合物的EP管中。
吹打两次以混合，立即将转染复合物加入6孔培养板的细胞中。
轻摇培养板使转染复合物分布均匀。
8. 将细胞与转染复合物在它们的正常培养条件下孵育2-3小时。
9. 小心移除Superfect-DNA混合物，用2 mlPBS洗涤3-4次细胞10. 加入新鲜的正常培养基，孵育24-48小时。
11. 瞬时转染时，进一步试验分析转染基因的表达。
转染β-gal 或 cat 报告基因的重组子常在转染后孵育24-48小时以使转染基因的表达最大化。
稳定转染时，在转染后24-48小时，将细胞以1:10~1:15传代至合适的选择性培养基中。
保持细胞在选择性培养基中直至克隆出现。
注意：我们推荐对每一细胞系和使用的抗生素建立一个致死曲线（剂量-反应曲线）。
但是一定要记住致死曲线受细胞密度的影响。
以下步骤有时是必须的：将转染的细胞置于它们正常的培养液（如：不含选择性抗生素的培养液），然后孵育1-2天，然后再加入选择性培养液。