转染试剂使用说明书

2022版 CTM694原英文技术手册TM694中 文 说 明 书适用产品目录号：E5911和E5912FuGENE ®4K TransfectionReagent普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址：北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话：************网址：技术支持电话：400 810 8133技术支持邮箱：*************************CTM 6942022制作1所有技术文献的英文原版均可在/ protocols 获得。

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电子邮箱：*************************1. 描述 (2)2. 产品组分和储存条件 (2)3. 一般注意事项 (2)3. A. 转染试剂与DNA的比例 (3)3. B. DNA (3)3. C. 时间 (3)3. D. 血清 (3)3. E. 细胞培养条件 (3)3. F. 稳定转染 (3)4. 推荐操作步骤 (4)4. A. 细胞铺板 (5)4. B. FuGENE® 4K Transfection Reagent准备 (5)4. C. 一般转染操作步骤 (6)4. D. 稳定转染操作步骤 (8)4. E. 转染优化 (9)4. F. 报告基因活性和细胞健康的多重检测方案 (11)5. 疑难解答 (12)FuGENE® 4K Transfection Reagent普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址：北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话：************网址：技术支持电话：400 810 8133技术支持邮箱：*************************CTM 6942022制作21. 描述FuGENE® 4K Transfection Reagent是一个多组分，非脂质体试剂，用于将DNA高效、低毒地转染至多种哺乳动物细胞系中，无需在加入试剂-DNA复合物后更换培养基。

天净沙系列CAT#:220722-1常温运输，2-4℃保存高效转染试剂Lipo3000HighTransfectionReagentLipo3000使用手册V1.2北京天恩泽基因科技有限公司北京市海淀区西二旗智学苑配套商业用房 B 座二层 212 室网址： ；电话：400-6765278；电邮：****************产品及特点Lipo3000试剂采用了先进的脂质纳米颗粒技术，实现绝佳转染性能和可重复性的结果。

其可针对最广泛类型的常见及难转染细胞，实现超高转染效率，同时提供更高的细胞活力。

Lipo3000性质温和毒性低优化了转染过程的全部四个步骤，并结合先进的脂质纳米颗粒技术。

绝佳的转染性能可以降低所需的试剂量，并降低所有可能对您的细胞系产生毒性的风险。

对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。

适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。

1.卓越的转染效率—针对最广泛类型的难转染细胞，可将效率提升3～10倍2.作用温和，细胞毒性低—可改善细胞活力3.高性价比高，同时实现顶级的转染结果适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。

规格及成分成份编号塑料袋包装Lipo3000A 220722A 1 mLLipo3000B 220722B 1 mL使用手册220722sc 1份运输及保存常温运输及2-4℃保存，有效期一年。

（避免冷冻）使用方法DNA的转染对大多数细胞来说，转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1.接种细胞至70-90%汇合度时转染2.使用Opti-MEM培养基稀释Lipo3000®试剂(2管)，充分混匀3.使用Opti-MEM培养基稀释DNA，制备DNA预混液，然后添加Lipo3000®-A 试剂，充分混匀。

4.在每管已稀释的Lipo3000®-B试剂中加入稀释的DNA (1:1比例)。

Lip3000转染说明书一、引言本说明书旨在提供关于使用Lip3000进行转染实验的详细步骤和操作注意事项。

Lip3000是一种常用的基因转染试剂，适用于各种细胞类型的转染，无论是质粒DNA转染还是RNA干扰实验。

本转染试剂的使用方法简单且高效，能够快速将外源基因导入到细胞内。

在进行Lip3000转染实验之前，请阅读本说明书并仔细按照步骤进行操作。

二、实验材料•Lip3000转染试剂•承载目标基因的质粒DNA（或RNA）•细胞培养基•细胞培养器具（离心管、无菌培养皿等）•离心机•PCR仪（或其他适用于转染验证的仪器）三、实验步骤1. 细胞预处理在进行转染之前，首先需要对待转染细胞进行预处理。

以下是一般的细胞预处理步骤：1.将细胞培养在含有适宜培养基的培养皿中，以确保细胞处于最佳状态。

2.细胞密度应达到80%~90%的收缩。

注意不要使细胞超过90%的收缩，否则会影响转染效率。

3.在转染前，将培养皿中的培养基抽去，并用预暖的PBS洗涤细胞，以确保细胞表面不含有培养基或其他干扰物。

2. 转染操作请按照以下步骤进行转染操作：1.将Lip3000转染试剂放在室温下静置10分钟，使其回到室温并充分混匀。

2.在一个无菌离心管中，将转染试剂按照以下比例混合：–将500μl Opti-MEM培养基加入离心管中；–加入2.5μl Lip3000试剂，轻轻混匀；–静置20分钟，使转染试剂和培养基充分结合。

3.将预处理后的细胞培养皿中的PBS抽去，加入稀释后的Lip3000转染试剂。

注意：转染试剂的添加量需根据细胞的情况进行优化，典型的转染试剂与细胞的最佳比例为2:1。

4.搅拌培养皿或转动培养皿，使转染试剂均匀分布在培养皿上的细胞中。

5.保持培养皿平放，在37°C的细胞培养箱中孵育转染混合液4至6小时。

细菌转染时间的长短根据细胞的特性和转染效果进行调整。

3. 转染验证与后续处理待转染时间到达后，即可以进行转染效果的验证。

英格恩entranster转染试剂说明书一、产品概述英格恩 Entanster 转染试剂是一种用于转染外源 DNA/RNA 到细胞内的试剂。

它是经过优化的化学试剂组合，可以将外源 DNA/RNA 高效地传递到各种细胞中，并促进其定向表达。

本试剂适用于体外转染实验和基因工程研究，具有高转染效率、低细胞毒性、简单易用等优点。

二、试剂成分英格恩 Entanster 转染试剂主要成分包括转染缓冲液和转染增强剂。

转染缓冲液中包含有机溶剂、非离子表面活性剂等，用于稳定 DNA/RNA与转染剂的结合。

转染增强剂含有具有阴离子表面活性剂、脂质、蛋白质等物质，可以提高细胞膜通透性和转染效率。

三、使用说明1.储存和稀释：试剂应储存于-20℃的冰箱中，保持干燥和避光。

使用前需要将试剂溶解在适当体积的转染缓冲液中，最佳稀释比例为1：9、溶液需充分混匀，离心并去除任何沉淀物。

2.样品准备：在转染前，将目标DNA/RNA溶解在适当的缓冲液中，浓度通常在0.1-1μg/μL最佳。

确保样品充分溶解并无明显沉淀。

3.转染操作：对于已经培养至适当倍数的细胞，将细胞用预先暖和的转染缓冲液洗涤一次，并去除缓冲液。

将转染缓冲液和溶解好的目标DNA/RNA混合，稍微搅拌均匀。

与此同时，将适量的转染增强剂加入到混合物中，充分混合。

然后将混合物直接滴加到细胞上，并轻轻摇晃培养板以确保混合物均匀分布。

4.培养和检测：将含有转染混合物的培养板放回恒温培养箱中，保持恒定的温度和CO2浓度。

培养时间和温度根据需要进行调整，通常在24-48小时后可以进行下一步实验或观察。

四、注意事项1.试剂需保存在干燥、阴凉、避光的环境中，避免结冰或暴露在高温环境中。

2.操作中需佩戴手套并遵循生物安全实验操作规范。

3.使用前需充分摇匀试剂瓶，确保所有试剂成分充分混合均匀。

4.转染缓冲液中的有机溶剂可能对一些细胞有毒性，因此在选择试剂时应参考相关文献或尝试不同的浓度和时间，以确定最佳条件。

JetPRIME 转染试剂转染siRNA简易说明书
第0天：细胞接种
第一天：转染
在有血清存在的情况下转染，
使用JetPRIME缓冲液
以6孔板为例
●在1.5mL或0.5mL的EP管中加入200μL的JetPRIME 缓冲液，然后加入20μM(1.1μL)
的siRNA，旋涡10s后离心（或者用移液器吹打5次混匀）；
●加入4μL的JetPRIME试剂，旋涡10s后离心（或者用移液器吹打5次混匀）；
●室温孵育10min;
●将转染复合物加入到要转染的含血清的培养基中；
●必要时，转染后4h更换细胞培养基；
●孵育24-48h，检测转染效率。

不同规格培养皿的使用量
注：
siRNA enhancer的应用：
在转染复合物加入到所需转染的细胞中后，加入培养基体积的1/1000体积的siRNA enhancer,其他步骤与以前一致；
在6h或4h更换培养基时，也需要加入相应体积的siRNA enhancer（培养基体积的1/1000）。

JetPRIME转染试剂转染siRNA简易说明书
第0天：细胞接种
第一天：转染
在有血清存在的情况下转染,
使用JetPRIME缓冲液
以6孔板为例
在1.5mL或0.5mL的EP管中加入200 ^L勺JetPRIME缓冲液，然后加入20卩M（1.1卩L）的siRNA，旋涡10s后离心（或者用移液器吹打5次混匀）；
加入4^L的JetPRIME试剂，旋涡10s后离心（或者用移液器吹打5次混匀）;
室温孵育10mi n;
将转染复合物加入到要转染的含血清的培养基中；
必要时，转染后4h更换细胞培养基；
孵育24-48h，检测转染效率。

注：siRNA enhancer 的应用：
在转染复合物加入到所需转染的细胞中后，加入培养基体积的1/1000体积的siRNA
en ha ncer其他步骤与以前一致；
在6h或4h更换培养基时，也需要加入相应体积的siRNA enhancer（培养基体积的1/1000）。

慢病毒专用转染试剂LentiFit TM使用说明书产品简介：LentiFit TM脂质体转染试剂是一种高效的阳离子脂质体转染试剂。

与其他脂质体转染试剂相比，汉恒生物独立研发的LentiFit TM脂质体转染试剂具有转染效率高，重复性好，操作简单，无明显细胞毒性，抗血清干扰等优点。

对于大多数细胞，用LentiFit TM转染后72小时内不更换培养液无明显细胞毒性。

同时，血清的存在不影响LentiFit TM的转染效率，这样可以减小无血清对细胞的损伤。

基于以上优点，LentiFit TM常用做慢病毒包装的转染试剂。

包装清单以及储存条件：试剂名货号储存条件规格有效期LentiFit TM转染试剂Let10004℃保存 1 mL12个月使用方法：1.细胞培养：以1个10 cm培养皿转染293T细胞为例，转染前一天接种细胞(20-24小时)，接种细胞约3.5×106，接种体积10 mL，确保第二天转染时细胞汇合度（confluent）能达到约50%~70%。

2.在进行转染步骤前，把10 cm培养皿中的培养液更换成新鲜细胞培养液，培养液的体积为5 mL，放回培养箱中继续培养，并准备转染体系（步骤3-6）。

3. 把LentiFit TM脂质体转染试剂轻轻混匀。

4. 对于待转染的10 cm培养皿中的细胞，取一只洁净无菌离心管，加入24 µg质粒（目的质粒和辅助质粒的比例根据不同包装系统进行调整）到500 µL DMEM溶液，用枪轻轻吹打混匀。

5. 取另一只洁净无菌离心管，加入500 µL DMEM溶液，再加入40 µL LentiFit TM，用枪轻轻吹打混匀,室温放置5分钟。

6. 将步骤4与5中的质粒溶液与LentiFit TM溶液混合，用枪轻轻吹打混匀。

不可V ortex 或离心。

室温孵育20分钟。

有可能出现絮状沉淀物，属正常现象，不会影响转染效率。

7. 将转染复合物逐滴加入到培养皿中，轻轻“8”字形摇晃混匀后，放回培养箱继续培养。

EndoFectin TM -Max 转染试剂高效转染核酸到哺乳动物细胞产品编号：EF003 / EF004 / EF003T 包装规格：1 mL / 3 mL / 100 μL储存条件：4℃~8℃密闭保存，可保持稳定至少12个月，常温运输。

产品概述EndoFectin TM -Max 转染试剂是以脂质体转染为原理的转染试剂，它能与核酸形成复合物，并使该复合物进入哺乳动物细胞。

EndoFectin TM -Max 转染试剂广泛适用于常见细胞系，如HEK-293、HEK293T 、CHO-K1、Hep G2、Hela 、MCF-7、NIH/3T3和A549等。

即使在有血清存在的情况下，该试剂仍能高效将核酸导入细胞。

GeneCopoeia 公司提供的EndoFectin TM -Max 转染试剂具有如下优点： y 转染效率更优良 y 细胞毒性低y 适用于多种细胞系的转染操作，操作简便y 与含血清的培养基相兼容，转染前不需去除细胞培养液或血清，转染后不需清洗细胞质量控制每批次EndoFectin TM -Max 转染试剂均经过转染测试。

将eGFP 表达质粒（GeneCopoeia Cat.No. EX-EGFP-M02）用EndoFectin TM -Max 转染试剂转入亚融合状态的HEK-293细胞，转染24小时后，超过95%的细胞表达eGFP 。

注意事项使用高质量的质粒：请务必使用高质量的转染级无内毒素质粒。

可通过260 nm 光吸收测定DNA 浓度，并以260 nm / 280 nm 比值确定DNA 纯度（比值应在1.8~2.0的范围内）。

如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

保证细胞状态：请使用适当保存和经常传代的健康细胞，并确保培养基无细菌、真菌或支原体污染。

如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。

实验材料y EndoFectin TM -Max 转染试剂、含目的基因的DNA 质粒y 无蛋白细胞培养液（如Opti-MEM I TM ，来自Life Technologies . 货号：31985-088） y 培养至70~80%汇合度的目的细胞条件摸索在进行正式转染前，推荐以EndoFectin TM -Max 转染试剂摸索目的细胞的最佳转染条件。

FuGENE®HD转对于表格中未列出的细胞，采用以下步骤进行实验后，可寻找到适用于您所研究细胞的最佳质粒与转染试剂的配比：FuGENE®HD 转染试剂简明操作步骤II. 准备实验所需的细胞、试剂及耗材：•细胞：在合适的培养条件下（建议采用无抗生素培养基，可以含任意比例的血清），实验前细胞系培养至长满60%-80%，原代细胞培养至适当的时间；•转染试剂：使用前，将转染试剂放至室温，颠倒混匀(FuGENE®HD转染试剂储存于4℃，如不慎将FuGENE®HD冰冻，融化后可能会看到不溶物。

这时可将试剂短暂升温至37℃，颠倒混匀后不溶物消失)；•质粒：携带报告基因或荧光蛋白的质粒，用于计算转染效率;•无菌、无血清培养基：用于配制质粒与转染试剂的混合物；•无菌的枪头、离心管，超净工作台等。

简易流程图培养细胞至60%-80%融合度配制质粒与转染试剂的混合物混合物加入培养的细胞中检测，计算转染效率I I I.操作步骤1.将无血清培养基预热至室温，按下表的比例配制质粒与转染试剂的混合物：FuGENE®HD与质粒DNA的比例4:1 3.5:13:1 2.5:12:1 1.5:1培养基100μl100μl100μl100μl100μl100μl质粒2μg2μg2μg2μg2μg2μg FuGENE®HD8μl7μl6μl5μl4μl3μl注意：FuGENE®HD应直接加入培养基中，不用沾到离心管的管壁上2.混合物室温静置10-15 min。

3.将混合物滴加至培养的细胞中，96孔板每孔加入5µl，其他孔板的加入量可以按照右侧的表格进行计算。

摇晃或吹打混匀。

继续培养24-48 hr。

4.检测转染效率。

进行报告基因检测或计数表达绿色荧光蛋白的细胞数目，确定最佳的质粒与转染试剂的比例。

注：FuGENE®HD转染试剂对细胞几乎没有毒性，遇到特别难转染的细胞，希望提高转染效率时，可以将混合物的加入量加倍至10μl/孔或15μl/孔（96孔板，其他培养板按培养面积放大）。