转染试剂

广东转染试剂类型
广东转染试剂类型
广东省作为全国经济重心之一，其科技实力在行业内也是一直走在前列。

转染试剂作为生物科研中不可缺少的试剂之一，在广东制造商也
有相当的生产水平和供应能力。

转染试剂，是指将外来的目的基因（DNA、RNA等）引入到靶细胞内，并使其表达的试剂。

其种类繁多，在广东也有着相应的常规类型。

1. 磷脂体基转染试剂
主要由磷脂体和质粒DNA组成，优点是容易制备和操作，适合于大规模生产。

缺点是转染率相对不高，有一定的毒性。

2. 聚乙烯酰胺转染试剂
聚乙烯酰胺（PEI）是一种化学合成剂，使用时与DNA分子组合形成
复合物，可以将DNA有效转染到细胞内。

优点是转染率高且毒性低，目前在广东科研中得到广泛应用。

3. 蛋白质/肽转染试剂
蛋白质/肽转染试剂通常是根据蛋白质或肽与DNA分子的作用机制设计制备的，可以有效地将目的分子转染到靶细胞内。

优点是转染效率高且无毒性，但缺点是价格昂贵。

4. 常规转染剂
常规转染剂是一类较为通用的转染试剂，主要包括羧甲基纤维素钠（CMC-Na）、聚乙烯醇（PVA）、去离子水等，优点是价格低廉且易于操作，但其转染效率较低，通常适用于一些较为简单的试验。

总体来说，转染试剂在广东科研中扮演着不可或缺的角色，其种类繁多，需根据实验需要选择合适的试剂。

在使用转染试剂时，需注意试剂质量和实验条件，以确保实验结果的准确性和科学性。

各种转染试剂的中文转染方法FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。

将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。

将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。

使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。

1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。

2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。

3. 加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。

4. 室温孵育20分钟。

5. 将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。

6. 将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。

7. 3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。

Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。

细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。

2. 对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。

3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。

Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。

NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。

4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。

室温放置20分钟。

5. （optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。

转染是将核酸导入真核细胞中的过程。

相关实验方案和技术包括转染试剂（脂质体转染、阳离子聚合物转染等）、以及化学法（DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法等）或物理方法（如电穿孔、基因枪粒子轰击法、显微注射等）。

其中，转染试剂已然成为实验室细胞转染主流方法。

转染试剂是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，已被广泛应用于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。

具有高效转染、细胞毒性很低，不被血清清除、操作简便易行，高重复性等特点。

特点
● 转染效率高
对原代培养细胞HUV-EC有较高的转染效率，而大多数阳离子脂质体对此细胞的转染效率很低。

● 细胞毒性低
在正确的转染方法及条件下，常用的细胞存活率高于90%。

● 试剂不被血清清除，转染操作简单
新型转染试剂不被血清清除，转染时可直接将转染试剂/DNA复合物直接加到细胞培养基中，无需更换培养基质和清洗细胞，整个操作过程可在半小时内完成。

图1.与传统转染实验程序比较
● 适应于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。

●新型转染试剂成功转染的部分细胞株：。

PEI细胞转染液是一种广泛应用于实验室的转染试剂，用于将外源DNA或RNA 转染到细胞中。

以下为PEI细胞转染液的标准使用方法：一、准备工作1. 细胞：选择合适的细胞类型，如HEK293、CHO等。

确保细胞状态良好，密度适中。

2. 转染试剂：PEI细胞转染液。

3. 外源DNA或RNA：需转染的基因或表达载体。

4. 实验器材：离心机、显微镜、培养皿、移液器等。

二、操作步骤1. 细胞培养：将细胞接种于适当的培养皿中，用含适当抗生素的培养基培养细胞。

将培养皿放入37℃、5% CO₂的培养箱中，进行细胞培养。

2. 转染液制备：根据实验要求，将PEI细胞转染液按照一定比例稀释。

一般情况下，可以使用10倍稀释的PEI细胞转染液。

3. 转染操作：（1）将稀释后的PEI细胞转染液与外源DNA或RNA混合均匀。

（2）用移液器将混合液滴加到细胞培养皿中，注意不要直接将液体倒在细胞上，以免破坏细胞。

（3）将培养皿轻轻摇晃，使转染液与细胞充分接触。

然后将培养皿放入培养箱中，继续培养。

4. 转染后处理：转染后的细胞需要继续培养，观察转染效果。

根据实验要求，可使用荧光显微镜、实时定量PCR等方法检测转染效果。

三、注意事项1. 操作过程中，应确保实验器材干净无菌，避免污染。

2. 转染过程中，应控制转染液的浓度和滴加速度，避免对细胞造成过度刺激。

3. 转染后，注意观察细胞状态，如出现异常情况，应立即处理。

4. 实验过程中，应遵循实验室安全规定，确保人身安全。

以上为PEI细胞转染液的标准使用方法。

实际操作过程中，可能因实验条件、细胞类型等因素而有所调整。

在实际应用中，请根据具体情况进行操作。

Lip3000转染说明书一、引言本说明书旨在提供关于使用Lip3000进行转染实验的详细步骤和操作注意事项。

Lip3000是一种常用的基因转染试剂，适用于各种细胞类型的转染，无论是质粒DNA转染还是RNA干扰实验。

本转染试剂的使用方法简单且高效，能够快速将外源基因导入到细胞内。

在进行Lip3000转染实验之前，请阅读本说明书并仔细按照步骤进行操作。

二、实验材料•Lip3000转染试剂•承载目标基因的质粒DNA（或RNA）•细胞培养基•细胞培养器具（离心管、无菌培养皿等）•离心机•PCR仪（或其他适用于转染验证的仪器）三、实验步骤1. 细胞预处理在进行转染之前，首先需要对待转染细胞进行预处理。

以下是一般的细胞预处理步骤：1.将细胞培养在含有适宜培养基的培养皿中，以确保细胞处于最佳状态。

2.细胞密度应达到80%~90%的收缩。

注意不要使细胞超过90%的收缩，否则会影响转染效率。

3.在转染前，将培养皿中的培养基抽去，并用预暖的PBS洗涤细胞，以确保细胞表面不含有培养基或其他干扰物。

2. 转染操作请按照以下步骤进行转染操作：1.将Lip3000转染试剂放在室温下静置10分钟，使其回到室温并充分混匀。

2.在一个无菌离心管中，将转染试剂按照以下比例混合：–将500μl Opti-MEM培养基加入离心管中；–加入2.5μl Lip3000试剂，轻轻混匀；–静置20分钟，使转染试剂和培养基充分结合。

3.将预处理后的细胞培养皿中的PBS抽去，加入稀释后的Lip3000转染试剂。

注意：转染试剂的添加量需根据细胞的情况进行优化，典型的转染试剂与细胞的最佳比例为2:1。

4.搅拌培养皿或转动培养皿，使转染试剂均匀分布在培养皿上的细胞中。

5.保持培养皿平放，在37°C的细胞培养箱中孵育转染混合液4至6小时。

细菌转染时间的长短根据细胞的特性和转染效果进行调整。

3. 转染验证与后续处理待转染时间到达后，即可以进行转染效果的验证。

FuGENE6（Roche）转染步骤:转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。

将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。

将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。

使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。

1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100ul。

2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。

3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。

4.室温孵育20分钟。

5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。

6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。

7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。

Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。

细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。

2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0ugDNA，轻轻混匀。

3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。

Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。

NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。

4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。

室温放置20分钟。

5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。

加入2ml无血清配养基。

转染试剂的作用原理一、转染试剂的基本概念转染试剂是一种用于将外源基因或其他生物分子转移到目标细胞中的化学物质。

转染试剂可以通过物理或化学方法改变细胞的通透性，使外源物质能够进入细胞内，并达到转染的目的。

转染试剂在基因治疗、基因表达研究和细胞工程等领域广泛应用。

二、转染试剂的分类转染试剂按照机理和性质的不同可分为多种类型，常见的转染试剂包括：1.脂质体（Liposome）：脂质体是由磷脂双分子层构成的微小囊泡，可与细胞膜融合，将目标物质转移到细胞中。

2.内源蛋白介导的转染：通过利用特定的蛋白质，如病毒衣壳蛋白或细胞内运输蛋白，将目标物质转移到目标细胞中。

3.阳离子聚合物：阳离子聚合物具有正电荷，能够与负电荷的DNA或RNA结合形成复合物，进而转染入细胞。

4.高分子基质：高分子材料如凝胶、纤维或微球等可用于载体，将目标物质与细胞接触，实现转染。

5.电穿孔：利用电场或离子流导致细胞膜破裂，使目标物质通过细胞膜进入细胞质。

三、脂质体转染试剂的作用原理脂质体是一种常用的转染试剂，其作用原理主要包括以下几个步骤：1.与DNA结合：脂质体通过与目标DNA相互作用，形成脂质体-DNA复合物。

脂质体由于其亲油性能与DNA中的疏水部分相互作用，同时脂质体表面带有正电荷，可以与DNA的负电荷相吸引。

2.细胞摄取：脂质体-DNA复合物与细胞膜结合后，脂质体会在细胞膜上形成微囊泡。

随后，微囊泡与细胞膜融合，释放出脂质体-DNA复合物进入细胞质。

3.脱脂质体：脂质体在细胞质中逐渐失去其亲油性，释放出DNA。

由于脂质体-DNA复合物在细胞膜上的微囊泡中形成的电位差，使得DNA被吸引到细胞核附近。

4.核入：DNA由细胞质进入细胞核，最终与染色体结合或进入细胞核内的胞浆，实现转基因。

四、脂质体转染试剂的优缺点脂质体转染试剂具有一些优点和缺点，需要根据实际应用情况选择使用：优点：1.安全性：脂质体转染试剂大多采用合成非病毒载体，通常比病毒载体更安全，不会引起病毒感染及遗传毒性。

高效真核转染试剂( VigoFect )产品说明：本试剂采用一类阳离子非脂性物质为主的配方，可以与DNA形成稳定的复合物，透过细胞膜进入细胞内，并保护DNA免受核酸酶的降解。

该试剂对细胞毒性很小，可在含血清与抗生素的完全培养液中充分发挥作用。

对多数培养细胞种类都有较高的转染效率（不同种类细胞的转染效率可有明显差异）。

此类试剂是目前非病毒介导方法中效率最高的转染试剂。

产品内容与储存方法：名称数量保存条件mlVigoFect 0.44℃可进行200次转染（6孔板或35 mm平皿）。

常温运输，4℃保存。

有效期6个月。

所需其它试剂：使用者需准备150 mM NaCl （超纯水配制，高压或过滤灭菌）或注射用生理盐水作为VigoFect及DNA的稀释液，和要转染的DNA溶液（高纯度，浓度0.1~2 μg/μl）。

操作方法：准备培养细胞：1)转染前24小时，接种适量细胞（接种数量可参考附表）。

至转染时细胞密度以40~60%为宜（80~90%亦可）。

2)转染前1小时，更换新鲜的完全培养液（体积可参考附表），置37℃，5% CO2 培养。

配制转染工作液：（6孔板或35 mm平皿，2 ml培养液）3)取5~8 μg DNA（起始用量5 μg），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室温放置。

4)取VigoFect 1~4μl（起始用量2 μl），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室温放置5分钟。

5)将稀释的VigoFect逐滴加入稀释的DNA溶液中，轻轻混匀，所得的转染工作液在室温放置15分钟。

6)将转染工作液轻轻混匀，逐滴加入2 ml培养液中，轻轻混匀培养液，置37℃，5% CO2培养。

细胞后续处理：7)24~48小时后，观察或收取细胞。

8)稳定转染时，于转染后24~48小时消化细胞分至3~5个培养皿中，加适当浓度的相应抗生素（如G418）筛选。

注意事项：1) 少量使用Vigofect 时，可取精确量的VigoFect 用无菌超纯水稀释一定倍数，以便精确取样量。

Lipo293转染试剂是一种高效的转染试剂，特别适用于贴壁生长的HEK293、HEK293T、HEK293A、293FT等293系列细胞的转染。

以下是Lipo293转染试剂的使用说明书：适用范围：Lipo293转染试剂适用于贴壁生长的HEK293、HEK293T、HEK293A、293FT等293系列细胞的转染。

转染步骤：（1）准备转染试剂和DNA：按照推荐的DNA用量，将DNA溶解在无菌水中，然后与Lipo293转染试剂按照1:1的比例混合。

（2）细胞处理：将细胞按照推荐的培养条件在细胞培养箱中培养至适宜的密度。

（3）转染：将DNA-Lipo293复合物与细胞混合，并轻轻摇晃，使复合物均匀分布。

（4）培养：将转染后的细胞继续培养，期间注意观察细胞的生长状态。

注意事项：（1）使用高质量的DNA：为了获得最佳的转染效果，建议使用高质量的DNA。

（2）细胞密度和状态：转染前，细胞需要处于良好的生长状态，密度适宜。

（3）保存条件：Lipo293转染试剂应保存在4℃或-20℃的条件下，避免反复冻融。

（4）过敏反应：对于过敏体质的用户，建议在使用前进行皮肤过敏试验。