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《文件已阅声明表》《Procedure circulation form》文件名称:总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02《文件修改记录页》《Procedure amendment form》表号:KM-MP03.02.03文件信息表(Procedure information form)表号：KM-MP03•02•04总1型胶原氨基端延长肽检测检测作业指导书(Total procollagen type 1 amino-terminalpropeptide(t-p1np )by Roche cobas e601)1原理（Test principle）“三明治”法，总检测时间：18 分钟。
第一次孵育：20μl 标本和一份生物素抗P1NP 特异性单克隆抗体一起孵育。
第二次孵育：在加入链亲和素包被的微粒和一份钌复合体标记的P1NP 特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原－抗体复合体，复合体在链亲和素和生物素相互作用下形成固相。
将反应液吸入检池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。
未结合的物质通过ProCell 除去。
在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。
2 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:样本类型(sample type)：血清(serum)必须用标准试管或内有分离胶的试管收集。
使用肝素锂和EDTA-K3 血浆(plasma)。
拒收标本（Specimen rejection）：严重溶血、脂血、或用叠氮钠防腐标本。
标本用量(volume)：200uL血清/血浆储存条件(sample storage conditions)：在15–25°C可保存24小时；在2--8°可保存5天，C在-20°C可保存6个月。
样品最多可以冻融5次。
3 试剂（Reagent）：3.1 Roche cobas e601 原装试剂。
小鼠Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）试剂盒使用方法检测范围：96T0.7 nmol/L -28 nmol/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）水平。
用纯化的小鼠Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ），再与HRP标记的Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（48 nmol/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
24 nmol/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液12 nmol/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液6 nmol/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液3 nmol/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液1.5 nmol/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
Rat IgG ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PI482Rat IgG ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Rat IgG ELISA Kit (Rat IgG Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠总免疫球蛋白G 酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IgG 的ELISA 试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。
多次重复检测结果表明，最小检出量为5.5ng/ml ，本试剂盒采用特异性抗体识别大鼠IgG ，包括IgG1、IgG2a 、IgG2b 和IgG3，检测值为总的IgG 浓度，板内、板间变异系数均小于10%。
免疫球蛋白G (Immunoglobulin G, IgG)是血清中最主要的免疫球蛋白形式，约占血清中免疫球蛋白总含量的75%，主要参与病原体及有毒物质的识别和清除，具有抗病毒、抗菌剂及免疫调节的功能。
IgG 是一种分子量为150kDa 的大分子糖蛋白，由两条轻链和两条重链组成，每条重链和轻链之间通过二硫键相连。
结构上可以分为可变区域和恒定区域，其中可变区域具有抗原识别位点。
IgG 具有4个亚型，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
IgG 也是唯一能够穿过胎盘的抗体，在新生儿抗感染中起到重要作用。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA 法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠IgG 的浓度，其原理见图1。
大鼠IgG 特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的大鼠IgG 会与捕获抗体结合。
当加入辣根过氧化物酶标记大鼠IgG 抗体后，辣根过氧化物酶标记大鼠IgG 抗体与大鼠IgG 结合，形成夹心的免疫复合物。
最后加入显色剂TMB 溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测450nm 处的吸光度值就能实现定量检测。
总I型胶原氨基端延长肽（Total-P1NP）测定试剂盒（电化学发光免疫分析法）组成：试剂盒由磁分离试剂（M）、试剂a（Ra）、试剂b（Rb）和定标品（Total-P1NP-Cal）（选配）组成。
组成及含量见下表：预期用途：本试剂盒用于体外定量测定人体血清样本中总I型胶原氨基端延长肽（Total-P1NP）的含量。
2.1 外观2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；2.1.2 磁分离试剂摇匀后应为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集、无絮状物；2.1.3 其它液体组分应澄清，无异物，沉淀物或絮状物；2.1.4 包装标签应清晰、无磨损、易识别。
2.2 空白限应不大于5.00μg/L。
2.3 准确度将已知浓度的Total-P1NP标准溶液加入到血清中，其回收率应在(85%～115%)范围内。
2.4 线性在[20.0，1200.0]μg/L范围内，线性相关系数（r）应不小于0.9900。
2.5 精密度2.5.1重复性在试剂盒的线性范围内，检测高低两个水平的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于8%。
2.5.2 批间差在试剂盒的线性范围内，用3个批号试剂盒分别检测高低两个水平的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于15%。
2.6 效期末稳定性本产品效期为15个月，试剂盒在2～8℃下保存至有效期末进行检测，检测结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1的要求。
2.7 溯源性依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求提供总I型胶原氨基端延长肽（Total-P1NP）定标品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，定标品溯源至企业工作校准品。
产品信息和操作指南Mouse TGF-β1Precoated ELISA kitCat#:1217102本试剂盒专用于科研，而非用于诊断Mouse TGF-β11217102目录产品简介 (1)知识背景 (1)试剂盒组分 (2)需要实验者自行准备的试剂与仪器 (2)注意事项 (3)试剂的配制 (6)操作过程 (8)结果分析 (10)试剂盒的保存 (10)操作步骤一览表 (11)参考文献 (12)ELISA测定中可能出现的问题及解决方法 (13)达优®ELISA系列产品 (16)1、产品简介：达优®小鼠TGF-β1ELISA试剂盒是通过酶联免疫吸附技术，体外定量检测小鼠血清、血浆、缓冲液或细胞培养液中的TGF-β1，可同时检测天然的和重组的TGF-β1。
本试剂盒为预包被板，整个过程孵育时间不超过4小时，洗涤12次。
本试剂盒专用于科研，而非用于诊断。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分，若有任何疑问请与北京行健雅生物技术有限公司联系，E-mail：**********************。
检测范围：1000-15.6pg/mL灵敏度：5pg/mL重复性：板内变异系数＜10％，板间变异系数＜15％。
2、知识背景：转化生长因子-β1（TGF-β1）能使正常的成纤维细胞的表型发生转化,具有细胞抑制和促进生长双重作用。
TGF-β1分子量25kDa，非糖基化同型二聚体蛋白，由二硫键连接。
TGF-β1基因结构具有高度保守性，人和小鼠TGF-β1的同源性高达99%（1-4）。
TGF-β1在治疗伤口愈合，促进软骨和骨修复以及通过免疫抑制治疗自身免疫性疾病和移植排斥等方面发挥重要作用（5）。
3、试剂盒组分：4、需要实验者自行准备的试剂与仪器：1．酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2．微量加液器及吸头：P10，P50，P100，P200，P1000 3．蒸馏水或去离子水4．全新滤纸5．旋涡振荡器和磁力搅拌器6．37℃温箱5、注意事项：1.试剂应按标签说明储存，使用前室温平衡20-30分钟。
人I型原胶原N端前肽(PINP)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中I型原胶原N端前肽(PINP)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人I型原胶原N端前肽(PINP)水平。
用纯化的人I型原胶原N端前肽(PINP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入I型原胶原N端前肽(PINP)，再与HRP标记的I型原胶原N端前肽(PINP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的I型原胶原N 端前肽(PINP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人I型原胶原N端前肽(PINP)浓度。
试剂盒组成：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
人Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)水平。
用纯化的人Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)，再与HRP标记的Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-I)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：900ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
ⅰ型前胶原氨基端肽(p1np) 偏高的原因一、前胶原氨基端肽（P1NP）的基本介绍前胶原氨基端肽（Procollagen type I N-terminal propeptide, P1NP）是一种在体内产生的蛋白质分子，其主要作用是参与胶原蛋白的合成和细胞外基质的重塑。
P1NP常用作评估骨代谢情况的指标，其浓度可以反映骨骼形成的水平。
二、P1NP偏高的原因1.骨骼增生和修复：P1NP是骨骼形成的标志物，在骨骼增生或修复过程中，P1NP的水平会升高。
例如，骨折、骨损伤、骨骼疾病等会引起骨骼增生和修复的过程，从而导致P1NP的升高。
2.高钙血症：高钙血症是指血液中钙离子浓度升高，多见于甲状旁腺功能亢进症、骨骼转移性疾病等，钙离子的释放会刺激骨骼的活性，从而增加P1NP的合成。
3.骨骼代谢紊乱：某些代谢性骨病，如骨质疏松症、特发性高钙尿症等，会导致骨骼代谢紊乱，进而引发P1NP的升高。
4.激素变化：某些激素变化，如雌激素水平的下降、甲状旁腺激素的增加等，会导致骨松的发生，从而引起P1NP的升高。
5.肝功能异常：肝脏是P1NP的代谢器官之一，患有肝功能异常的人群中，P1NP会升高。
6.慢性炎症和感染：某些慢性炎症和感染性疾病，如类风湿关节炎、慢性肾脏疾病等，会导致炎症反应的增加，从而增加骨骼的代谢水平，引发P1NP的升高。
7.肿瘤：某些肿瘤，如骨肉瘤、乳腺癌骨转移等，会导致骨骼代谢的改变，从而导致P1NP的升高。
8.某些药物的使用：某些药物，如可卡因、巴比妥类药物、类固醇类药物等，可能会干扰骨骼的代谢过程，引起P1NP的升高。
9.年龄：随着年龄的增长，骨质疏松的发生率也会增加，P1NP的水平也可能会升高。
10.其他因素：还有一些其他的因素，如营养不良、慢性肾脏病、甲状腺功能亢进等，都可能与P1NP的偏高有关。
三、结论前胶原氨基端肽（P1NP）偏高的原因是多方面的，包括骨骼增生和修复、高钙血症、骨骼代谢紊乱、激素变化、肝功能异常、慢性炎症和感染、肿瘤、某些药物的使用、年龄等。
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明货号：C8062保存：4℃保存，切勿冻存，有效期为一年。
规格：10mg,5mg/mL,溶解于0.006mol/L HAc,无菌。
产品简介：本鼠尾胶原蛋白I型(rattailtendon collagen type I)是通过Birkedal-Hansen的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。
鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞；也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。
1，在使用本鼠胶原蛋白I型包被的细胞培养皿中检查到PC-12细胞的贴壁和生长。
2，在1mg/mL浓度以上，pH为7左右时可形成具有一定强度的三维胶，检查到NIH-3T3细胞在三维胶内正常生长、PC-12细胞在三维胶表面正常生长。
使用方法：1、细胞培养器皿的表面包被推荐浓度：1-5μg/cm2以包被浓度为2μg/cm2为例：用无菌0.006mol/L(0.36g/L)乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。
按以下表格体积加到相应的培养器皿中：表面积（cm2,每孔或每皿）加入0.012mg/mL胶原的体积(μL)96孔细胞培养板0.35024孔细胞培养板 1.930012孔细胞培养板 3.86006孔细胞培养板9.5158035mm细胞培养皿8133060mm细胞培养皿213500100mm细胞培养皿559170确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。
也可以在室温放置1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。
包被好的器皿在4-25℃至少可保存3个月以上的时间。
2、三维胶原的制备鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/mL以上，pH7左右时可形成具有一定强度三维胶，建议成胶浓度1-2mg/mL。
胶原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06×体积的0.1mol/L NaOH来中和。
需要的溶液（均需要无菌、预冷）：10×PBS（可含10mg/L的酚红用于pH指示）或10×培养液，0.1mol/L NaOH，0.1mol/L乙酸(一般不用)，双蒸水A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1mL，1mg/mL三维胶为例）：将200μL鼠尾胶原蛋白I型(5mg/mL)加到置于冰浴的离心管中，加入690μL H2O。
大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽（PⅠNP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：0.78ng/ml-50ng/ml最低检测限：0.195ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠PⅠNP，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中PⅠNP 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗PⅠNP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PⅠNP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的PⅠNP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
