细胞转染操作步骤
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RNAi or siRNA Transfection
以24孔板为例，其余规格的转染见表1
1 中板，细胞密度为30-50%适宜。
注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。
2 第二天（24-36小时后）每个孔转染方式如下：
A 将20pmol siRNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。
B 将1ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。
C 将A B两管混合，放置20min。
3 转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。
Plasmid DNA Transfection
DNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3
转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。
1 中板。
贴壁细胞：0.5-2X105 cells/well，第二天待细胞密度达到90%以上时转染
悬浮细胞：4-8X105 cells/well，中板后随即转染。
2 转染。
A 将0.8ug DNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。
B 将2ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。
C 将A B两管混合，放置20min。
转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix
加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。
Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfection
中板密度*Culture
vessel Surf.
area
per
well
Vol. of
plating
medium
Vol. of
dilution
medium
DNA Lipofectamine
™2000
cell/well
96-well0.3cm2100ul2X25ul0.2ug0.5ul
0.5-2X105
cell/well
24-well2cm2500ul2X50ul0.8ug 2.0ul
1-3X105
cell/well
12-well4cm21ml2X100ul 1.6ug 4.0ul
2-3X105 cell/well 6-well
(35mm)
10cm22ml2X250ul 4.0ug**10ul
8-10X105
cell/dish
60mm20cm24ml2X0.5ml8.0ug***20ul
2-3X106
cell/dish
10cm60cm215ml2X1.5ml24ug60ul *：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参
考
**：6孔板细胞质粒转染量1-2ug足以。
***：6cm dish细胞质粒转染量4-6ug足以。