α-L-岩藻糖苷酶_(AFU)

血清三种酶及α-L-岩藻糖苷酶活力测定在肝癌诊断的临床意义单建山【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2005(013)002【摘要】探讨测定血清三种酶及α-L-岩藻糖苷酶活力的方法对肝癌的诊断价值。

用本方法测定85例健康人，116例肝胆疾病患者，其中原发性肝癌42例、转移性肝癌13例、胆管癌9例、乙肝38例、肝囊肿或良性肿块14例，结果分别为正常人血清ALT酶活力为9～34U/L，平均为22.8U/L；ALP酶活力范围为71～132U/L，平均99U/L；γ-GT酶活力范围为11～39U/L，平均23.4U/L；AFU酶活力范围为7～33U/L，平均为19.3U/L。

血清ALT酶活力对肝癌诊断意义不大，血清ALP及γ-GT酶活力对肝癌诊断较为灵敏，肝癌时可引起血清ALP及γ-GT 的增高，酶的活力范围均值明显高于其它疾病组，其阳性检出率分别为ALP：42例原发性肝癌为85.3％、13例转移性肝癌为92.3％、9例胆管癌为98.9％。

γ-GT：42例原发性肝癌及13例转移性肝癌为100％、89例胆管癌为100％。

AFU 阳性检出率分别为：42例原发性肝癌为85.7％、13例转移性肝癌为100％、9例胆管癌为100％。

故认为测定血清ALP、γ-GT、AFU对肝癌患者诊断有着重要的意义【总页数】2页(P255-256)【作者】单建山【作者单位】江苏省南通市肿瘤医院检验科,江苏,南通,226361【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)在原发性肝癌诊断中的临床意义 [J], 杨继明2.血清α-L-岩藻糖苷酶、甲胎蛋白、脱γ-羧基异常凝血酶原检测在原发性肝癌诊断中的价值及临床意义研究 [J], 林召;党小军;侯智辉;刘发全3.血清同型半胱氨酸、α-L-岩藻糖苷酶、血清铁蛋白检测在原发性肝癌诊断中的应用 [J], 卓雪芽; 吕微风4.血清α-L-岩藻糖苷酶及超氧化物歧化酶对原发性肝癌诊断价值的探讨 [J], 徐萍;朱宝泉;黄重发5.血清α—L岩藻糖苷酶活力测定对原发性肝癌诊断的临床应用 [J], 王晓玲;刘春;卢志明;赵继梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

α-L-岩藻糖苷酶的研究进展及临床应用吴曼丹【摘要】α-L-岩藻糖苷酶(AFU)是一种溶酶体酸性水解酶,分类名为α-L-岩藻糖苷岩藻糖水解酶(EC3.2.1.51),参与含α-L-岩藻糖的糖脂、糖蛋白、糖苷等糖复合物的水解.AFU广泛分布于人体细胞及体液中,其中以肝肾组织含量较高.AFU在血清或组织中活性的改变与肿瘤的发生具有显著相关性,是肝细胞癌、胰腺癌、结直肠癌等肿瘤的诊断、疗效和预后的重要监测指标.%The acid α-L-fucosidase( AFU ) is usually found as a soluble component of lysosomes, the systematic name is α-L-fucosidase( EC3.2.1.51 ).It is involved in the hydrolytic degradation of fucose-con-taining molecules.AFU distributes in human tissues and body fluids, especially high concentration is seen in the liver and kidney.Alterations in the activity of AFU in serum or tissue have been observed in cancer.AFU is a significant index for the diagnosis,therapeutic effect and prognosis of hepatocellular carcinoma,pancreatic adenocarcinoma, and colon adenocarcinoma.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2013(019)009【总页数】3页(P1578-1580)【关键词】α-L-岩藻糖苷酶;肿瘤;诊断【作者】吴曼丹【作者单位】广州军区武汉总医院检验科,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】R446;R73α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)是一种溶酶体外切糖苷酶，最早发现于细胞溶酶体中，主要参与含岩藻糖的糖类复合物的水解。

一种α-l-岩藻糖苷酶的制备一、引言α-l-岩藻糖苷酶是一种重要的酶类蛋白，具有广泛的应用前景。

它能够催化α-1,3-和α-1,4-糖苷键的水解，从而将α-l-岩藻糖苷水解为岩藻糖和葡萄糖。

本文将探讨α-l-岩藻糖苷酶的制备方法和相关应用。

二、α-l-岩藻糖苷酶的制备方法1. 微生物发酵法微生物发酵法是制备α-l-岩藻糖苷酶的主要方法之一。

首先，从自然环境中筛选获得产酶菌株，如嗜盐菌、厌氧菌等。

然后，通过优化培养基的成分和培养条件，如温度、pH值、培养时间等，提高菌株产酶能力。

最后，通过离心、超滤等分离纯化技术，获得纯度较高的α-l-岩藻糖苷酶。

2. 基因工程法基因工程法是一种高效的α-l-岩藻糖苷酶制备方法。

首先，通过PCR扩增等技术，获得编码α-l-岩藻糖苷酶的基因序列。

然后，将该基因序列插入表达载体中，并转化到宿主菌中进行表达。

最后，通过蛋白纯化技术获得纯度较高的重组α-l-岩藻糖苷酶。

三、α-l-岩藻糖苷酶的应用1. 生物燃料的生产α-l-岩藻糖苷酶可用于生物燃料的生产过程中。

通过将α-l-岩藻糖苷酶与其他酶类蛋白一起使用，可以高效地将植物纤维素转化为可用于生产生物燃料的糖类物质。

2. 食品工业中的应用α-l-岩藻糖苷酶在食品工业中有广泛的应用。

例如，它可以用于葡萄糖酸乳酸饮料的生产过程中，通过水解α-l-岩藻糖苷，提高饮料的口感和稳定性。

3. 医药领域中的应用α-l-岩藻糖苷酶在医药领域中也具有重要的应用价值。

例如，它可以用于制备抗癌药物，通过水解α-l-岩藻糖苷酶，将药物转化为更容易被人体吸收和利用的形式。

四、α-l-岩藻糖苷酶的发展前景随着生物技术的不断发展，α-l-岩藻糖苷酶的制备方法和应用领域将不断扩大。

未来，可以通过改良酶的结构和功能，提高酶的催化效率和稳定性，进一步拓展α-l-岩藻糖苷酶的应用范围。

五、结论α-l-岩藻糖苷酶是一种重要的酶类蛋白，具有广泛的应用前景。

通过微生物发酵法和基因工程法可以有效地制备α-l-岩藻糖苷酶。

a-L-岩藻糖苷底物测定AFU酶活的评估元升生物科技技术研发部1概述a-L-岩藻糖苷酶(a-L-Fucosidase，AFU)的分类名为a-L-岩藻糖苷酶水解酶(EC3．2．1．51），催化岩藻糖苷键水解，参与含岩藻糖的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖脂的分解代谢。

AFU合成于细胞内，定位于溶酶体，是一种酸性水解酶，它的本质是糖蛋白。

广泛分布于人体肝、肾、胰、脑和胎盘等组织以及血清、尿液、唾液和泪液中。

AFU在人体内呈多形性，在等电聚焦电泳中AFU 可分出5～9条区带，血清中AFU除含有PI为4．68和4．84两种主要成分以外，还可见到5个次要成分。

AFU具有3型同工酶，即AFU1、AFU2和AFU3，是由1个位于第一号染色体短臂（1p34）上基因位点的2个等位基因所表达，由于不同人所表达的同工酶类型不同，所以正常人群AFU活性也有所不同，大约有10%左右的正常人血浆AFU呈低活性。

测定a-L-岩藻糖苷酶(a-L-Fucosidase,AFU)对诊断原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)具有重要临床意义。

它是PHC的特异性标志物,可用于PHC的早期诊断.2 原理底物CNP-AFU在血清样本中a-L-岩藻糖苷酶酶作用下，生成产物CPNP，而产物CPNP的生成量与样本中AFU的酶活性成正比，通过测定黄色产物在405nm波长的生成速率，即可计算出样本中AFU的活性。

3 实验方法3.1 样本瑞安市人民医院临床新鲜血清样品。

3.2 仪器和试剂CNP-AFU元升生物科技生物科技有限公司生产，批号1213M05QH。

进口底物购自美国sigma公司，批号1013C07QH；仪器为日立7080全自动生化分析仪、抗坏血酸、胆红素、人胎盘a-L-岩藻糖苷酶均购自sigma公司，血红蛋白标准品购自上海血液中心。

3.3 试剂配制方法按常法配制，所用原料均为分析纯。

3.4 测定方法HITACHI 7080自动分析仪参数反应类型：Rate-A法；反应温度：37℃；波长：(主)340/(次)405nm；样本：25μl，试剂250μl，读点时间6-12点。

α- L-岩藻糖苷酶检测的几点临床价值α-L-岩藻糖苷酶(α-L-Fucosidase，AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，早期测定本酶主要用于遗传性AFU缺乏症的诊断，并借以与其他遗传性粘多糖贮积病的鉴别。

1980 年Deugnier发现原发性肝癌(PHC)患者的AFU升高，并被后来研究证实，故有人提出AFU可作为PHC的肿瘤标志物，从此对AFU临床意义有了更多更深的研究。

近年来研究发现，AFU对某些疾病的发生、发展均具有重要意义，特别在肝炎、妊娠等多种临床病理、生理中得到应用。

2 生物学特性AFU系统命名为α-L－岩藻糖苷岩藻糖水解酶（EC3.2.1.51）其生理功能是参与含岩藻糖基的各种糖脂、糖蛋白、粘多糖等大分子物质的分解代谢。

AFU广泛存在于人体各组织细胞溶酶体和体液中，胎盘、胎儿组织、脑、肺、肝、胰、肾以及血清、尿液、唾液和泪液中均含有AFU。

AFU的化学本质是一种糖蛋白，血清中的AFU分子量为270～390 kD。

用神经氨酸苷酶处理血清AFU，可使其分子量降至37 kD±4 kD，在pH值3.8～5.9酶活性基本消失，而在pH6.2～7.0酶活性增强。

AFU分子具有多态性，这可能由决定这些酶单位形成的结构基因位点的突变引起。

AFU的糖蛋白性质和分子中含唾液酸说明它确实存在核蛋白合成后的修饰，从而使血清中的AFU独具特性[1]。

3 血清α-L-岩藻糖苷酶对于原发性肝癌的诊断原发性肝癌（PHC）是一种常见的恶性肿瘤，血清甲胎蛋白（AFP）曾被认为是PHC的特异性好、阳性率高的标志物，但有30％左右的PHC患者血清AFP阴性。

因此，寻找AFP以外的肝癌标志物显得尤为重要。

近年来，血清α-L-岩藻糖苷酶（AFU）被认为是肝癌的一个新的标志物。

肝癌时AFU升高机制：AFU是一种溶酶体酶，广泛分布于各种组织细胞体液中，参与糖蛋白等多种生物活性物质的分解代谢。

肝脏是富含溶酶体的器官，当肝脏细胞癌变时，AFU合成增加并大量释放入血，其机制可能为：①血清AFU激活物存在影响酶活性。

临床意义α-L-岩藻糖苷酶(AFU)测定检验原理:CNP-α-L-Fucoside：2-氯-对硝基苯-α-L-岩藻吡喃糖苷(CNPF)AFU：α-L-岩藻糖苷酶以2－氯－对硝基苯－α－L－岩藻吡喃糖苷（CNPF）为底物用AFU连续监测，反应产物2－氯－对硝基酚（CNP），在AFU反应最适pH时呈现显著黄色。

临床意义:α-L-岩藻糖苷酶（α-L-Fucosidase，AFU）是一种溶酶体酸性水解酶。

基本生理功能是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖苷的分解代谢，广泛分布于人体内的各种组织、细胞及体液中。

如肝、脑、肾、胰、胎盘组织；细胞培养液中的成纤维细胞、白细胞以及血清、尿液、唾液、泪液和垂体液中均含此酶。

遗传性AFU缺乏可使含岩藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖苷这些物质从初生儿起就在组织中堆积，引起岩藻糖苷贮积病。

组织细胞、尿液和血清中AFU测定可协助该病的诊断，并借以与其他遗传性粘多糖贮积病鉴别，这也是早期对AFU检测的主要目的。

病人准备与样品要求：病人需空腹，标本采用不溶血的血清或肝素抗凝血浆，常温下保存8小时，2~8℃可稳定7天。

白蛋白(ALB)测定检验原理:白蛋白溴甲酚绿复合物的生成，引起在波长630nm处吸光度的上升，吸光度的变化与样品中白蛋白含量成正比临床意义：血清（血浆）白蛋白是分子量为66.3KD的单链分子，生理功能广泛，包括营养价值；有效胶体渗透压的保持；血清Ca²、未结合胆红素、游离脂肪酸、药物、菑类激素以及甲状腺素的运输。

白蛋白的多种生理功能使其成为检测肝脏疾病的重要指标。

病人准备与样品要求：不溶血的血清或血浆。

样品中ALB在2~8℃可稳定7天。

及时分离血清；黄疸血，溶血，脂血标本应作样本空白管。

碱性磷酸酶(ALP/AKP)测定检验原理:AMP：2-氨基-2-甲基-1,3-丙醇4-NPP：磷酸对硝基苯酚磷酸对硝基苯酚（4-NPP）在碱性磷酸酶（ALP）的作用下，将磷酸基转移到2-氨基-2-甲基-1,3-丙醇(AMP)受体分子上，释放出的对硝基苯酚(4-NPP)在碱性溶液中分子重排形成黄色醌，可在405nm下检测，黄色醌形成速率与ALP活力成正比。

α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒 (CNPF底物法)适用范围：用于体外定量测定人血清中的α-L-岩藻糖苷酶（AFU）的含量。

1.1 包装规格1×30mL，1×60mL，4×60mL，2×45mL，1×1L，1×5L。

1.2 主要组成成分2.1外观无色或淡黄色溶液。

外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.2净含量用通用量具测量，液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度405nm波长下，试剂空白吸光度，应≤0.3。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.002。

2.4 分析灵敏度测试30U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应≥0.005。

2.5 准确度参照EP9-A2的方法，与已上市产品进行比对试验：样本浓度在[2，250]U/L 范围内，其相关系数r≥0.975；[2，50]U/L范围内，其绝对偏差应在±5.0U/L 范围内；（50，250]U/L范围内，其相对偏差应在±10%范围内。

2.6线性2.6.1在[2，250]U/L范围内，线性回归的相关系数r应不低于0.990；2.6.2 在[2，50]U/L范围内，其绝对偏差应在±5.0U/L范围内；（50，250]U/L 范围内，其相对偏差应在±10%范围内。

2.7重复性重复测试（45±15）U/L的样本，所得结果的变异系数（CV）应≤4%。

2.8 批间差测试（45±15）U/L的样本，所得结果的批间相对极差（R）应≤8%。

2.9 稳定性该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为12个月，有效期满后2个月内测试，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7的要求。

1.1 包装规格
2×1 mL；4×1 mL。

1.2 主要组成成分
两水平冻干品，pH：7.40（7.20-7.60），磷酸盐缓冲液（10mM），α-L-岩藻糖苷酶，牛血清白蛋白（2%），叠氮钠（0.1%）。

靶值范围：（15-30）U/L、（35-60）U/L。

质控品浓度具有批特异性，具体数值见瓶标签。

2.1 性状
质控品为冻干品，复溶后为无色至黄色澄清液体；标签内容清晰。

2.2可接受区间/值：检测结果在可接受区间/值内。

2.3 均匀性
2.3.1瓶内均匀性：CV瓶内＜10%
2.3.2瓶间均匀性：CV瓶间＜10%
2.4 水分含量：＜5%。

2.5 稳定性
2.5.1效期稳定性
原包装质控品在规定的储存条件2℃～8℃下有效期为18个月，在稳定期内赋值结果的变化趋势不显著。

2.5.2复溶稳定性
原包装质控品开瓶复溶后，在2℃～8℃密封保存，可以稳定24小时，在稳定期内赋值结果的变化趋势不显著；在-20℃密封保存，可以稳定30天，在稳定期内赋值结果的变化趋势不显著。