2010版-高效液相色谱法

1 目的: 建立LC-2010AHT高效液相色谱仪标准操作程序，规范LC-2010AHT高效液相色谱仪的使用和操作。

2 范围: LC-2010AHT型高效液相色谱仪。

3 责任: QC全员。

4 程序:4.1 流动相的准备根据实际情况配制所需的流动相，用0.45µm滤膜过滤，经超声波清洗仪超声脱气约20分钟。

流动相的保质期一般为3天。

4.2 仪器的开机4.2.1 接通电源，按下仪器正面的电源开关按钮，仪器开始自检。

4.2.2 打开电脑，点击桌面的“LCsolution”图标，然后点击“instrument 1”，进入液相操作界面。

4.3 仪器的操作4.3.1 根据需要更换流动相，色谱柱，色谱柱更换时将色谱柱标签箭头方向指向检测器方向。

4.3.2 打开方法文件：点击菜单栏的“File”下拉菜单中的“Open Method File”按键，系统弹出一个对话框，找到所要方法的路径，双击方法文件或单击方法文件后点击“OK”按钮。

4.3.3 新建方法文件：点击菜单栏的“File”下拉菜单中的“New Method File”后，所有参数都被清除，在各项参数上设置好所需的数值，点击左上方的“保存”按钮或点击菜单栏的“File”下拉菜单中的“Save Method File”，在弹出的对话框中选择保存的路径和方法的文件名，点击“OK”按钮。

4.3.4 方法确定后，点击操作界面上方的“Pump”打开泵体，点击“Oven”打开柱温箱，或者直接按仪器上的“Pump”和“Oven”。

4.3.5 脱气：设置好要脱气的管路，点击操作界面上方的“Auto purge”，仪器开始脱气。

还有一种方法就是点击仪器上的“Purge”按钮，要注意的是，此时应将泵的开关打开，具体就是打开仪器最下方的侧盖，将泵开关逆时针旋转180度即可。

4.3.6 走基线：脱气完毕后，系统开始走基线。

4.3.7 批处理：点击操作界面左边的“Batch Processing”按钮，进入到批处理界面。

实用标准文案2010版药典黄曲霉毒素检验法（文字版）附录Ⅸ V 黄曲霉毒素测定法本法系用高效液相色谱法(附录ⅥD)侧定药材饮片剂制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水(10：18：42)为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测。

衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加人甲醇100ml使溶解，用谁稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每挣钟0.3ml 衍生化温度70℃；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm(或365nm），发射波长λem=450nm。

两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混和标准品（黄曲霉毒B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。

精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

供试品溶液的制备取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45um）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲和柱（AflaT-est@P），流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀。

即得。

测定法分别精密吸取上述混和对照品溶液5ul、10ul、15ul、20ul、25ul，诸如液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，另精密吸取上述供试品溶液20-25ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。

高效液相色谱法测定醋酸泼尼松片中相关物质含量贺颖;董得时【摘要】目的:探讨高效液相色谱法测定醋酸泼尼松片中相关物质含量.方法:采用ZORBAXSBC18(规格:4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(58:42),流速为1.0mL·min-1,柱温30℃,检测波长为240nm,进样量取10μL.结果:醋酸泼尼松、泼尼松、醋酸可的松在浓度范围0.52～30.81μgmL-1之间有良好的线性关系,平均回收率(n=6)为99.36％,RSD=1.31％.结论:本研究方法专属性强、重复性好、结果准确,为醋酸泼尼松片中醋酸泼尼松、泼尼松、醋酸可的松含量测定提供了科学、专属的方法.【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2012(012)006【总页数】3页(P531-533)【关键词】高效液相色谱法;醋酸泼尼松片;泼尼松;醋酸可的松【作者】贺颖;董得时【作者单位】大连医科大学附属第一医院药学部,辽宁大连116000;大连医科大学附属第一医院药学部,辽宁大连116000【正文语种】中文【中图分类】R977.1+1醋酸泼尼松为一种肾上腺皮质类激素药，能够抗过敏、抗炎、抗风湿及免疫抑制，是临床上的常用药之一。

《中华人民共和国药典:二部》(2000年版)中收录的醋酸泼尼松片含量测定方法为紫外分光光度法［1］，虽然此法简单，但其选择性较差，专属性不强，结果可能受片剂中的其他添加剂或辅料的干扰，而对于一些有意的造假产品，也常常出现“合格”的检测结果。

因此本文笔者根据相关资料［2-5］及《中华人民共和国药典》(2010年版)中醋酸泼尼松原料药有关物质检查方法，采用高效液相色谱法测定醋酸泼尼松片中醋酸泼尼松、泼尼松、醋酸可的松的含量，现报告如下。

1 仪器与试药Waters高效液相色谱仪(美国，2487型紫外检测器、1525型输液泵、717自动进样器、2996型检测器、waterts Empower色谱软件)，电子天平(SartorisBS110S十万分之一天平)。

应用报告 LC008高效液相色谱法测定甘油果糖氯化钠注射液 2010版药典（二部）规定采用高效液相色谱法对甘油果糖氯化钠注射液进行含量测定，以磺酸型聚苯乙烯与二乙烯基苯共聚体阳离子交换树脂H型为填充剂，要求理论塔板数按氯化钠峰计算不得低于2500。

上海舜宇恒平科学仪器有限公司采用LC1620高效液相色谱仪，使用Shodex SH1011色谱柱，推出符合药典要求的测定方法。

1实验部分1.1仪器与试剂LC1620高效液相色谱仪（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；FA2004电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；氯化钠、果糖、甘油、磷酸（国药试剂，AR）；纯净水（杭州娃哈哈）。

1.2标准溶液的配制1.2.1对照品溶液的配制准确称取甘油10g，果糖5g，和氯化钠0.9g标准品，于100ml容量瓶中，加水定容至刻度，得到甘油果糖氯化钠注射液的对照品溶液。

详细方法请参考中华人民共和国药典（2010版二部P84）1.2.2标准待测溶液准确量取5ml对照品溶液于100ml容量瓶中，加水定容至刻度，得到标准待测溶液。

1.3色谱条件色谱柱：Shodex SH1011（8.0×300mm）流动相：0.04mol/L磷酸溶液流速：1.0ml/min柱温：50℃进样量：20µl检测波长：200nm2实验结果将1.2.2中所配制的标准待测溶液，在1.3描述的高效液相色谱条件下进样，三种主要成分均能得到有效的分离（见图一），以氯化钠峰计算理论塔板数为19282。

重复进样五次重复性良好（见图二），如表1所示RSD均在2.0%以内。

图 1 氯化钠甘油果糖标准品谱图出峰顺序：氯化钠、果糖、甘油图 2 连续五次进样谱图表1 五次进样重复性结果氯化钠果糖甘油保留时间 0.07% 0.06% 0.05%峰面积 1.90% 0.94% 1.37%峰高 0.43% 0.26% 1.14%理论塔板数 1.75% 1.75% 1.53%3结论（1）采用LC1620高效液相色谱仪，按照中华人民共和国药典（2010版）的方法，氯化钠、果糖、甘油能够在Shodex SH1011色谱柱上得到良好分离。

岛津LC-2010A HT型高效液相色谱仪操作规程一、准备（一）准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气至少20min。

（二）根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）。

（三）配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用0.45μm滤膜过滤。

（四）检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

二、开机接通仪器电源，按下系统控制器面板上的电源开关，色谱仪面板画面上显示要输入Login Pass-ID-No的对话框，输入00000后，按 [OK]，显示Menu画面，然后打开电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。

三、更换流动相并排气泡打开排气阀，按下控制面板[purge]键，选择排气管道，排出管道内气泡，排气完毕后关闭排气阀。

四、设定洗脱参数（一）等度洗脱方式1.点击激活泵（和柱温），泵（和柱温）启动，pump（和oven）指示灯亮，用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积（约30min）的流动相。

2.检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。

3.观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。

（二）梯度洗脱方式1.以检验方法规定的梯度初始条件平衡系统。

2.在进样前运行1~2次空白梯度。

五、平衡系统打开“LC solution色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，等待系统平衡。

六、进样观察基线变化。

如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。

设定好进样的位置、参数，点击确定，系统自动进样。

七、清洗柱及进样系统和关机（一）数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗120min后，（如流动相含缓冲盐，换为高水相流动相向高有机相递增的流动相低流速冲洗120min），最后用甲醇或乙腈冲洗至少30min。

（二）冲洗完柱后，清洗整个流路及进样系统。

（三）清洗完成后，先将流量降到0，关闭电源开关。

高效液相色谱法测定杜仲叶中绿原酸含量
（董娟娥—2010-04-----2010-06）
一实验目的与要求
1、了解高效液相色谱仪的构造及工作原理；
2、学习高效液相色谱仪的应用过程；
3、掌握高效液相色谱法测定绿原酸的操作及注意事项。

二实验原理
1液--液色谱、分配色谱；
2反相色谱：流动相的极性大于固定相的极性,C18柱以18烷基键和材料为固定相；3通过检测装置将要测定的物质在等波长吸收的光信号转变成电信号显示出来，并通过物质浓度与信号之间的关系可以完成定量工作。

三仪器与试药
1仪器：美国Waters公司高效液相色谱仪（包括输入泵、进样系统、检测器等）；超声波清洗器、高速离心机、超纯水制备装置。

2试药：绿原酸标准品（德国），色谱甲醇（天津），冰乙酸（分析纯），乙醇（分析纯）、超纯水。

四色谱条件
色谱柱C18柱（VP-ODS 150mm×4.6mm，5um）；流速：1.0ml/min；流动相甲醇：水：冰乙酸=25：75：1 ；检测波长：240nm。

五实验步骤
1对照品溶液的配制：0.1mg/ml的色谱甲醇溶液
2供试品溶液的配制：称取0.07—0.08g杜仲叶粉（记录重量），置5ml离心管中，加入80%乙醇-水溶液4ml，超声波提取25min，充分混匀，取约1.5ml转移至2ml 的离心管于12000rpmin离心10miin；取上清液经0.45μm的微孔滤膜过滤，取5ul用于分析。

3计算校正因子吸取5ul标准溶液进样以峰面积和浓度计算校正因子。

4样品含量计算利用计算出的校正因子在色谱工作站计算出样品中绿原酸的含量。

六撰写实验报告。