高效液相色谱法测定维生素C

实验一HPLC测定水果中维生素C一、实验目的（1）掌握高效液相色谱法的原理。

（2）掌握高效液相色谱仪的操作。

（3）应用标准曲线法测定物质含量。

二、实验原理以C18键和反向柱为固定相，乙腈-0.05mol/L醋酸钠溶液为流动相，在216nm的波长下根据保留时间和峰面积进行定性定量分析维生素C。

三、试验方法（1）色谱条件Water515型高效液相色谱仪色谱柱：C18，25cm×0.46cm，0.5μm流动相：0.05mol/lNaAc:乙腈=95:5 流速：0.6ml/min紫外检测器，波长：256nm 进样量：20μL（2）维生素C的提取：准确称取一定量的水果（约15g），放入食品粉碎机中，加少许水，打成匀浆，然后全部转移到100ml容量瓶中，在超声波震荡15min。

用0.45μm膜过滤，稀释10倍后待测。

（3）标准样品的配置准确称取100mgVc，溶解在100ml容量瓶中并定容，得到1mg/ml 的Vc溶液，稀释100倍配成浓度为10μg/ml的标准液为储备液。

然后分别称取2、4、6、8、10ml储备液至10ml容量瓶中，并定容，配制浓度为2、4、6、8、10μg/ml的标准溶液。

（4）开机平衡，打开稳压电源，打开泵、检测器、电脑电源，打开色谱工作站，设置流动相流速，检测器波长。

放上配制好的流动相，打开泵，平衡色谱柱。

到基线基本走平为止。

（5）样品测定：首先依次测定不同浓度的标准品（浓度从小到大），制作标准曲线。

再进样分析待测样品。

四、实验记录水果质量m水果= 标准Vc质量m Vc=外标峰面积法：以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标制作标准曲线。

由工作曲线查出样品组分含量（1）思考题使用紫外检测器时为什么选择最大吸收波长？答：选择最大吸收波长，被测组分的灵敏度最高.吸光度最大的峰值附近斜率要比其他的区域要小，波长偏差Δλ对应的吸光度偏差ΔA当然也比别的区域要小，减小实验误差。

（2）如是测定单组分含量（没有其他杂质存在），改变那些条件可以缩短实验时间？答：更换短的色谱柱，增加有机相比例，提高流速，提高柱温箱温度；缩短进样阀与检测器之间的管路。

维生素c检测方法
维生素C的检测方法包括化学法、色谱法和光谱法等。

以下是常用的几种检测方法：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：这是最常用的维生素C检测方法之一。

它使用高效液相色谱仪来分离和测定维生素C。

样品先经过样品前处理（如提取或衍生化），然后通过HPLC进行分离，并使用紫外或荧光检测器进行定量测定。

2. 红牛氏法：这是一种化学滴定法，使用二氧化碳（红牛氏溶液）和碘化钾作为滴定剂，通过滴定柠檬酸钠或番茄酱来测定维生素C的含量。

维生素C的含量与滴定所需的体积成正比。

3. 荧光光谱法：维生素C具有明显的荧光特征，可以通过测量样品的荧光强度来定量测定维生素C的含量。

荧光光谱法可以用于水溶液、血浆等样品的测定。

4. 比色法：利用维生素C与酸性溶液中的二氧化锰反应生成亚铁离子，再与柠檬酸反应生成琥珀色化合物，通过测量化合物的吸光度来测定维生素C的含量。

这些检测方法各有优缺点，选择合适的方法取决于需要测定的样品类型、所需灵敏度和检测成本等因素。

高效液相色谱法测定化妆品中的维生素C及其衍生物摘要：维生素C(VC)，又称L-抗坏血酸，是一种天然抗氧化剂，抑制皮肤中酪氨酸酶活性，阻断黑色素生成，达到美白效果。

维生素C虽然活性高，但在溶液中不稳定，容易受到光、热、氧等因素的破坏，失去还原能力，限制了其在化妆品中的有效利用率。

关键词：高效液相色谱；维生素Ｃ；抗坏血酸葡糖苷；抗坏血酸磷酸酯镁；抗坏血酸乙基醚；一、样品处理1. 水易分散的样品。

适合化妆水、水乳液等含油脂较少的样品。

准确称取约 0. 500 ｇ样品于 50 ｍＬ具塞比色管中，加入 30 ｍＬ 0. 02 ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0），涡旋混合 2 ｍｉｎ，转移至 50 ｍＬ容量瓶中，用 0. 02ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0）定容至刻度。

混匀后取 10 ｍＬ溶液于 15 ｍＬ离心管中，在10 ℃、12 000 ｒ／ｍｉｎ条件下离心 10 ｍｉｎ，上清液过0. 22μｍ滤膜，滤液待测。

2. 水不易分散的样品。

适合面膏等含油脂较高及凝胶类、啫喱类样品。

准确称取约 0. 250 ｇ样品于 50 ｍＬ具塞比色管中，加入 1. 0 ｍＬ二氯甲烷，涡旋混合至样品均匀分散后，准确加入 25 ｍＬ 0. 02 ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0），涡旋混合 2 ｍｉｎ。

混匀后取 10 ｍＬ溶液于15 ｍＬ离心管中，在10 ℃、12 000 ｒ／ｍｉｎ条件下离心 10 ｍｉｎ，上清液过0. 22 μｍ滤膜，滤液待测。

被测物含量超过标准曲线的线性范围时可取适量试样滤液用提取溶剂稀释后再测定。

二、样品前处理条件的优化维生素Ｃ和抗坏血酸磷酸酯镁易溶于水，抗坏血酸葡糖苷和抗坏血酸乙基醚是亲油亲水两性物质；维生素Ｃ在碱性和中性条件下不稳定，因此考虑采用酸性溶液作为提取溶剂。

化妆品基本上分为不需要乳化的液体类及需要乳化的膏霜类两大类。

前者含水量高，在水溶剂中容易分散形成均匀体系；后者含有一定的油脂，密度较高，在水溶液中不易分散。

高效液相色谱法测定果珍中维生素C 含量 金黎明　姜　波　郝　苗 (大连民族学院生命科学学院,大连　116600)　(大连市产品质量监督检验所,大连　116021) 摘要　用0.1%的草酸作为流动相,高效液相色谱法测定了果珍中维生素C 的含量。

维生素C 的浓度c 在0～300μg /m L 范围内与色谱峰面积A 呈正比关系,线性相关系数为0.9993。

方法的回收率为96.2%～103.2%,测定结果的相对标准偏差为0.6%(n =8)。

利用高效液相色谱法测定果珍中的维生素C 的含量,具有试剂用量少、操作简单、结果准确等特点,采用弱酸性的草酸为流动相,避免了维生素C 的分解。

关键词　维生素C 果珍　高效液相色谱 维生素C 是一种水溶性维生素,又被称为抗坏血酸,它是维持人体正常生理代谢的一种重要化合物,若严重缺乏会引起坏血病,维生素C 还可参与体内氧化还原反应,具有解毒作用。

近年的研究表明,维生素C 可预防癌症,具有抗氧化、抗衰老的作用,并对肝炎、肝硬化有疗效。

但是人体自身不能合成维生素C ,必须由食物中摄取,维生素C 广泛存在于新鲜水果、蔬菜中[1]。

维生素C 测定的方法一般有碘量法[2]、比色法[3]、荧光法[4]等,这些方法操作繁琐,近年来普遍采用高效液相色谱法测定维生素C[5,6]。

笔者利用高效液相色谱法,通过采用低浓度的草酸流动相,分析了果珍中的维生素C 含量,本方法所用试剂较少,操作简单,且通过采用弱酸性的草酸流动相,避免了维生素C 的分解,测定结果较为理想。

1　实验部分1.1　主要仪器与试剂 高效液相色谱仪:L C-10A 型,日本岛津公司; 二极管阵列检测器:S P D-M 10A 型,日本岛津公司; 高压输液泵:L C -10A 型,日本岛津公司; 自动进样器:S I L -10A 型,日本岛津公司; 维生素C 标准对照品:维生素C 含量99.7%。

中国医药上海化学试剂公司; 草酸:分析纯,沈阳医药有限公司; 甲醇:H P L C 级,使用前经0.45μm 滤膜过滤,美国T c d i a 公司; 草酸溶液:0.1%。

维生素C含量的测定(高效液相色谱法)1．原理试样中的抗坏血酸用溶解超声提取后，以离子对试剂为流淌相，经反相色谱柱分别，其中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸挺直用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245nm)测定；试样中的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液举行还原后，用紫外检测器(波长245nm)测定L(+)-抗坏血酸总量，或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量。

以色谱峰的保留时光定性，外标法定量。

2．试剂与设备 (1)试剂偏磷酸(HPO3)n：含量(以HPO3计)≥38% ,(Na3PO4·12H2O),(KH2PO4) ,(H3PO4) ; 85%, (C3H7NO2S)：优级纯，(C19H42BrN)：色谱纯，(CH3OH)：色谱纯。

(2)试剂配制偏磷酸溶液(200g/L)：称取2008(精确至0.1g)偏磷酸，溶于水并稀释至1L，此溶液于4℃的环境下可保存一个月；偏磷酸溶液(20g/L)：量取50mL 200g/L偏磷酸溶液，用水稀释至500mL; 溶液(100g/L)：称取100g(精确至0.1g)，溶于水并稀释至1L, 溶液(40g/L)：称取4g ，溶于水并稀释至100mL，临用时配制。

(3)标准品L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6)：纯度≥99%, D(+)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6)：纯度≥99%。

(4)标准溶液配制L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL)：精确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.0lg(精确至0.01mg)，用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。

该贮备液在2～8℃避光条件下可保存一周。

D(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL )：精确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01mg)，用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。

该贮备液在2～8℃避光条件下可保存一周。

高效液相色谱法测维生素c原理宝子们，今天咱们来唠唠高效液相色谱法测维生素C的原理，可有趣啦。

咱先得知道维生素C是个啥。

维生素C呀，那可是个对咱们身体超重要的小机灵鬼呢。

它在好多身体的机能里都起着关键作用，像让咱皮肤变好啦，增强免疫力啦之类的。

在食物里也到处都有它的身影，水果里、蔬菜里，它就像个小小的健康守护者。

那高效液相色谱法又是个啥神奇的东西呢？想象一下啊，它就像是一个超级精密的分拣小能手。

这个方法里有个很重要的部分就是流动相和固定相。

固定相就像是一个个小房子，安安静静地待在那里，而流动相呢，就像是一群勤劳的小快递员，带着要检测的东西跑来跑去。

对于维生素C的检测啊，样品被制备好之后，就被流动相带着在这个系统里溜达。

维生素C这个小不点就开始了它的奇妙之旅。

当它在流动相的带领下经过固定相的时候，就会发生一些很有趣的互动。

因为维生素C它有自己独特的化学结构呀。

这个化学结构就决定了它和固定相、流动相之间的相处模式。

就好比每个人都有自己独特的性格，维生素C也有它自己独特的“性格”来决定它在这个系统里的行为。

在这个过程中，不同的物质，因为它们的化学结构不一样，在固定相和流动相之间的分配比例就不一样。

这就像是不同的小朋友在玩游戏的时候，有的喜欢在这个角落，有的喜欢在那个角落。

维生素C呢，就会按照它自己的规律，在固定相和流动相之间跑来跑去，这个过程就会产生一个时间差。

然后呢，仪器就会很聪明地检测到这个时间差。

这个时间差就像是维生素C的一个小标签，告诉我们，“我就是维生素C”。

而且啊，根据这个时间差的长短，还能知道这个维生素C的含量呢。

如果含量高，那它在这个系统里的表现就会更明显，就好像一群人里，人多的那一组就更引人注目一样。

这个高效液相色谱法测维生素C啊，还有个很厉害的地方。

它超级精确呢。

就像拿一个超级精细的小尺子去量东西一样。

一点点小小的维生素C它都能发现。

不像咱们有时候凭感觉去判断一个东西有没有维生素C，这个方法可是科学又准确的。

实训项目十七高效液相色谱法测定食品中的维生素 C一、实验目的（1）掌握高效液相色谱法测定维生素C的方法。

（2）熟悉蔬菜或水果中维生素C的提取方法。

二、实验原理维生素C （分子式：G6H806）,极易溶于水，水溶液显酸性，具有较强的还原性，不稳定。

见光易氧化，氧化产物为脱氢型维生素C,并进一步水解成2, 3-二酮古洛糖酸。

样品经偏磷酸-乙酸提取，经高效液相色谱分离，测定波长266 nm,在相同的实验条件下，将不同浓度的维生素C标准溶液也注入色谱系统，分别测定样品和标准溶液中维生素C色谱峰的保留时间和峰面积，进行定性和定量分析。

三、主要仪器和试剂1•仪器高效液相色谱仪（附紫外检测器）；C i8色谱往（4. 6 mmx250 mm，5叩）；超声波清洗器；25卩m微量进样器；微孔过滤器及0.45卩:微孔滤膜滤膜（水系和有机系）；10~200卩L精密移液器；定量滤纸。

2•试剂偏磷酸一乙酸液；0.15 mol/L硫酸；偏磷酸一乙酸一硫酸液；0.04%百里酚蓝指示剂；0.02 mol/LpH5.6磷酸二氢钾缓冲盐溶液；甲醇（色谱纯）。

四、操作步骤1.色谱条件流动相：甲醇：0.01 mol/L pH5.6磷酸缓冲溶液（40: 60）（此比例可根据所使用的色谱柱性能进行适当调节），使用前过滤和超声波脱器；流速1.0mL/min ；检测波长：266nm。

2.试剂配制①偏磷酸曲酸溶液：称取15g偏磷酸，加入40 mL冰醋酸及250 mL水，加热搅拌，冷却后用水定容至500 mL。

②0. 15 mol/L硫酸：取10 mL硫酸，小心加入水中并不断搅拌，再加水稀释至1200 mL。

③ 偏磷酸 闿酸-硫酸液：以0.15 mol/L 硫酸为溶剂，其余同①配制。

④ 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取 0.1 g 百里酚蓝，加0.02 mol/L 氢氧化钠溶 液约10 mL ，在研钵中研磨至溶解，用水稀释至 250 mL 。

⑤ 维生素C 标准溶液的配制：准确称取维生素 C10 mg ，加少量偏磷酸一乙酸一 硫酸液溶解，用棕色容量瓶定容至100 mL ，即得0.1 mg/mL 的维生素C 标准储 备液，4 C 贮存。

HPLC法测定饮料中维生素C含量内蒙古呼和浩特 010070摘要：通过比较食品及保健食品中维生素C的测定方法，发现使用高效液相色谱法测定维生素C更加方便准确。

分析了影响测试的色谱条件，发现在选用反相色谱柱、偏磷酸溶液作为提取液，以离子对试剂为流动相（pH=2.5）,柱温为25℃时，测定饮料基质中维生素C含量，可以获得较好的线性、稳定性及回收率。

关键词：高效液相色谱法；饮料；维生素C含量维生素C又称L（+）抗坏血酸[1]，是维持人类正常生命活动所必需的有机化合物，主要来源于新鲜蔬菜、水果。

其中，L（+）抗坏血酸对人体有生物活性，而D（-）抗坏血酸对人体无生物活性。

维生素C可以促进胶原蛋白合成，延缓细胞衰老和凋亡，具有抗癌作用；它还参与神经介质和激素的生物合成；可以调节胆固醇代谢，将胆固醇转化为胆汁酸。

维生素C广泛应用于食品工业、分析化学、农林牧业及医药领域。

维生素C与舌尖上的安全息息相关，在我国相关食品标准中，维生素C可以在水果、罐头食品、水果泥、饮料、糖果和婴儿食品中适度添加。

因此，研究维生素C的特性并掌握维生素C的准确测定对人类营养和健康非常重要。

1.食品及保健品中维生素C的检测方法维生素C的检测方法有分光光度法、化学发光法,电化学分析法。

由于维生素C具有很强的还原能力，在中性和碱性条件下不稳定，在处理样品时遇热很容易失去维生素C，这对检测有很大的限制。

近年来维生素检测技术取得重大进展，特别是现代分析工具和计算机技术的完美结合。

高效液相色谱法目前是最常见的分析工具，可以快速、敏感、精确地测量，并可以与其他分析方法结合使用，只需要少量的样品。

近年来，维生素C是通过高效液相色谱法来测量的，但实验中的色谱条件差别很大。

通过比较近年来维生素C的测量方法，对色谱柱、浸提剂、流动相、流动相pH值、流速、柱温、检测器等色谱测定条件进行讨论，探索出更合适的测定方法。

2.色谱条件对维生素C测定的影响2.1色谱柱的选择反相色谱柱具有非常广泛的应用和较长的使用寿命，近年来有关液相色谱测定维生素 C 多数采用反相色谱柱。