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标准操作规程STANDARD OPERATION PROCEDURE1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
精选全文完整版可编辑修改高效液相色谱法含量测定1检验方法高效液相色谱法2检验原理高效液相色谱法系采用高压输液泵，将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对样品进行测定的色谱方法。
注入样品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依此进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。
3检验试剂甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、纯水（高纯水）、磷酸等。
4供试品溶液制备取要测试的供试品适量，参照《药典》及《制剂规范》，用规定的溶剂适宜的提取精制方法，配制成一定浓度的供试品溶液。
供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。
5对照品溶液制备根据供试品所要测定的成分取相应的对照品，用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。
6流动相配制用高纯度的试剂配制流动相，水应为新鲜配制的高纯水。
配制好的流动相通过适宜的0.45nm 的滤膜滤过，用前脱气。
7操作7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱，进入工作站。
7.2自动进样器排气自动进样器排气用50%甲醇（用前脱气），点击自动进样器界面上的purge键，自动排气25分钟。
7.3泵排气分析界面中，设置方法参数，下载方法参数。
用流动相冲洗吸滤头，再把吸滤头浸入流动相中，逆时针旋转排气阀90-180度，点击purge键，排气3-4分钟，顺时针旋转排气阀90-180度，激活仪器。
7.4进样操作7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针旋紧，7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。
7.4.3设置方法参数，选择波长、柱温、流速、结束时间等，下载并保存方法文件，待色谱系统充分稳定，基线平直。
7.4.4设置批处理分析表。
分析界面主项目中，点击批处理分析，依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积，保存批处理分析表，点击批处理分析开始，开始数据采集。
7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。
高效液相色谱仪操作技巧及操作规程高效液相色谱仪操作技巧任何颗粒物进进高效液相色谱仪后都会在柱子进口端被筛板挡住，最后的结果是将柱子堵塞，表现出的特征是系统压力加添并使色谱峰变形。
因此，要实行各种防备措施，包括操纵步骤和商品仪器自身的各种过滤设计，努力防止或削减颗粒物进进高效液相色谱仪中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并进步数据的牢靠性。
在高效液相色谱仪中，颗粒物的紧要来源有三个途径：活动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。
1、被测样品使用针筒式过滤器不可能100%得到通过过滤器的被测样品，总会或多或少的丢失。
丢失来自这样几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。
2、活动相无论是高效液相色谱仪HPLC级的水还是在试验室使用超纯水净化系统制备的水，最后一步也是通过0.2μm微孔滤膜。
任何一种缓冲液中加进了固体物，必定活动相过滤将。
少量杂质颗粒存在于活动相中必定成为残渣。
解决方法：2.1.活动相制备仅接受HPLC级液体时不需要过滤，反之全部活动相构成在使用前必需过滤。
2.2.在连接储液瓶和泵的输液管的末端进口接受下沉式过滤器（常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种）也是很紧要的。
这个过滤器的规格为≥10μm的微孔物质，所以它不能取代活动相过滤步骤，但是它能除往系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的牢靠性。
2.3.推举在HPLC系统中接受一个0.45或0.5μm的在线多孔过滤器，接在自动进样器和柱子之间，即使已使用了保护柱。
这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板，而且如接受一个玻璃砂芯滤板，既便宜，更换又便利（几分钟就可更换）。
若接受在线过滤，高效液相色谱仪检测每批样品开始前记录下压力值，当压力上升确定值，例如25%或加添500psi，应当更换玻璃砂芯滤板了，更换以后冲洗几分钟系统将恢复到原来的压力值。
3、仪器系统部件的磨损物最后，在高效液相色谱仪HPLC系统中颗粒物的另一个紧要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。
标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
范围：原料、产品职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.原理——高效液相色谱法是将具一定性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。
——高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
2.操作前的准备2.1流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
凡规定PH值的流动相、应使用精密PH计进行调节。
配制好流动相应通过适宜的0.45µm滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相及时待用。
2.2供试溶液的配制供试品用规定溶剂配制成供试溶液定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。
供试溶液在注入色谱仪前，一般应经适宜的0.45µm滤膜滤过。
必要时在配制供试溶液前，样品需经提取净化。
以免对色谱系统产生污染或对色谱干扰。
3.系统适用性试验——按各品种项下要指法训练对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
3.1色谱柱理论板数（n）在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（Wh/2），按n=5.54(tR/ Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。
如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
3.2分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。
分离度（R）的计算公式为：2（tR2- tR1）R=W1+W2式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W 1及W2为此相邻两峰的峰宽。
高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。
为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。
b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。
c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。
2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。
b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。
3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。
b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。
4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。
b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。
5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。
b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。
6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。
b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。
7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。
b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。
8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。
b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。
总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。
遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。
hplc操作规程HPLC（高效液相色谱）是一种高效、准确、灵敏的分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等领域。
为了确保HPLC分析的准确性和可靠性，有必要制定一份详细的HPLC操作规程。
以下是一个HPLC操作规程的示例，共计1200字。
HPLC操作规程1. 实验前准备工作(1) 确保仪器处于正常工作状态。
检查HPLC系统的压力、流速、温度等参数，确保所有泵、检测器和采样器都能正常工作。
(2) 根据实验的需求，准备好HPLC色谱柱和色谱柱保护柱。
(3) 检查溶液的pH值、浓度等参数，确保样品溶液的配制准确无误。
2. 样品制备(1) 根据实验需求，准确称取适量的样品，并将其溶解于适量的溶剂中。
(2) 需要注意的是，溶解样品时要完全溶解，避免残留物对HPLC柱造成损害。
(3) 使用过滤器或离心机去除样品中的杂质和固体颗粒。
3. 系统平衡(1) 打开HPLC系统的所有阀门，确保流路畅通。
(2) 开始系统平衡前，关闭检测器和采样器，以避免样品流入检测器和采样器。
(3) 启动系统，调整流速至实验所需的流速。
通常流速为0.2-2 mL/min。
(4) 进行15-30分钟的系统平衡，确保系统稳定。
4. 校正和质量控制(1) 定期校正流速、温度和检测器灵敏度等参数，确保实验结果的准确性。
(2) 进行质量控制，包括运行标准曲线、检测器灵敏度和峰面积的稳定性等测试，以确保分析结果的可靠性。
5. 样品注射(1) 将样品以合适的方式注入采样环或自动采样器中。
(2) 确保注射量适当，一般不超过色谱柱的容量的10%。
(3) 使用空白样品作为对照，进行注射前和注射后的检测，以排除注射器、柱等可能引起的峰偏移或异常的情况。
6. 数据采集和分析(1) 设置合适的检测波长和积分时间，以获得准确的检测结果。
(2) 在实验过程中定期检查系统的稳定性和峰形。
(3) 根据实验要求，对分析结果进行计算和解释，包括峰高、峰面积、保留时间等指标。
(4) 记录得到的数据和结果，保存实验记录和报告。
戴安中国有限公司液相色谱操作规程-U3000一、操作前准备：1.1流动相的配制：1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理：1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。
二、开机：2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关；2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；2.4选择开始＞程序＞Chromeleon＞Sever Monitor或双击屏幕右下角快捷图标,出现对话界面后点击Ｓtart启动,等Dongle序号出来以后（表示Sever Monitor程序运行正常）可以点击Close来关闭界面。
2.5打开“开始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或双击在桌面上的Chromeleon图标（工作站主程序）打开HPLC软件系统主界面。
2.6 在左窗口中单击根目录，此时会在右边的窗口中出现一个“hplc.pan”文件，双击此文件打开HPLC控制面板程序。
2.7在控制面板“Pump”控制框中选中“connect”选框，Purge流路中气泡，设置总流速为适当的数值（建议要由0.2ml/min逐渐增加到适当的流速）后并按回车键（“Enter”）以示确定。
此时泵自动会以设置的流速进行运行。
目的：建立高效液相色谱使用标准操作规程，使其操作规范化。
范围：高效液相色谱。
责任人：高效液相色谱操作者和设备维修员。
内容：1 设备描述功能强大的高效液相色谱仪能适用于各种分析目的。
仪器具有完善的GLP/GMP法规认证，自我评价功能。
操作简便，高度可靠，灵敏度高，便于维护，组合灵活。
适用于从制备色谱，常规色谱到半微量色谱的一切范围。
1.1 主要技术参数1.1.1 泵类型：单泵1.1.2 流速设定范围：0.001-5ml/min（10-400kgf/cm2），001-9.999ml/min（10-200kgf/cm2）1.1.3 流速准确度：±2%或2μ1/min（0.1-5ml/min，10-400kgf/cm2，水，室温20o C）。
1.1.4 流速精密度：±0.3%（内以水作为流动相，流速为0.1-5ml/min，10-400kgf/cm2，水，室温20o C）1.1.5 压力设定范围：1.0－39.2MPa（10-400Kgf/cm2）1.1.6 压力准确性（±10%或±1.0MPa）1.1.7 检测器：SPD-10Avp灯1.1.8 光源：D21.1.9 波长范围：190nm-600nm1.1.10 光谱带宽：8nm1.1.11 波长精度：±1nm1.1.12 波长重现性：±0.1nm高效液相色谱标准操作规程编号ZL-C-616版次：01第 2 页共 4页1.1.13 漂移：±2x10-4AU/时（250nm，室温恒定，池内为空气）1.1.14 噪音水平：±0.35x10-5AU（250nm，池内为空气，时间常数相当于2秒）1.1.15 响应时间：相当于0.05,0.1,0.5,1.0,1.5,2.0,3.0,6.0,8.0,10.0秒的10转换档1.1.16 量程：0.0001-2.56AUFS,最小设定间隔可为0.0001AUFS1.1.17 调零：自动调零功能，基线位移功能1.1.18 极性：可转换1.1.19 检测池（光路长，容量，耐压、接触液体部件材料）：10nm,8μ1,30kgf/cm2,SUS316,特氟隆，石英1.1.20 2波长同时测定*2波长：190-370nm或371-600nm内的任意2波长1.1.21 2波长同时测定*2采样周期：1个波长需1.2秒1.1.22 比例色谱图显示*2：输出所设定的2波长的比1.1.23 波长扫描文件数：3（1个为背景用，输出减去背景的数据）1.1.24 波长扫描波长间隔：1-5nm，5档设定，用W灯时为2-5nm1.1.25 波长扫描速度：10nm/秒-50nm/秒，5档设定（根据波长间隔设定）1.1.26 时间程序控制：检测器本身，系统控制器均可1.1.27 时间程序设定项目：波长（2含波长）、自动调零、量程、标记、晌应时间、波长扫描、事件、极性、灯ON/OFF、LOOP（程序的循环）1.1.28 时间程序本体的步骤数：最大32步骤1.1.29 记录仪输出：10mv1.1.30 积分仪输出：0.5,1,2,4,1.25,1.5AU/V,6档转换1.1.31 光源使用时间监测功能：能够记忆到9999.9小时1.1.32 体积、重量：W260XD430XH140mm,13kg1.1.33 使用环境温度范围：4-35o C1.1.34 所需电源：AC220V,150VA,50/60HZ2 设备操作使用方法2.1 测试准备2.1.1 流动相的配制：配制后的流动相先过滤，用溶剂过滤器处理，使流动相充分混合以清除流动相中的气泡。
WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前要用过滤器过滤，有机相和纯水相通常可以不过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
同时一些缓冲盐溶液过夜后易生菌，使用前要抽滤或者重新配制。
实验室应有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水相时，要先用1-2ml 水润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
1.2保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
流动相瓶子要保持清洁。
1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：a、流动相再脱气；b、采用更有效的脱气方法（如抽滤）或两种方法配合使用；c、改系统内混合为系统外预混合。
1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装滤头沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞会引起管道和泵腔进气泡，压力不稳。
压力不稳时，如果已经排除流动相混合不均匀的状况，则观察滤头外部是否长毛（一般水相滤头易长毛），去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，是过滤器被微粒所阻塞或长霉。
解决方法：a、换上新的过滤器（滤头）。
b、将滤头拆下，先用纯水超声15min，再换50%甲醇水溶液超声，再换纯甲醇超声，如果是水相的滤头，在安装前还需要用纯水超声。
如果上述还不能解决问题，则使用10%稀硝酸水溶液超声滤头，可起到除去菌类微生物的作用。
1.4.3 检测器和流动相管路被污染由于污染，噪音越来越大，检测器被污染。
标准操作规程STANDARD OPERATION PROCEDURE1 目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2 适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3 责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1. 对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μ m。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1. 色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2? 8 之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2 或大于8 的流动相。
4.1.2. 检测器最常用的检测器为紫外- 可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与被测物质的量有关，还与其结构有关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器，对所有物质均有响应。
结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。
紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一定围呈线性关系，但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数转换。
不同的检测器，对流动相的要求不同。
紫外- 可见分光检测器所用流动相应符合紫外- 可见分光光度法（通则0401）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。
蒸发光散射检测器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。
4.1.3. 流动相反相色谱系统的流动相常用甲醇- 水系统和乙腈-水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。
流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。
用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般不低于5％，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。
正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。
品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。
调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变围为0.7X? 1.3X；当X 大于33%时，允许改变围为X—10% ?X+10% 。
若需使用小粒径（约2μm ）填充剂，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也应作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。
当必须使用特定牌号的色谱柱方能满足分离要求时，可在该品种正文项下注明。
4.2. 系统适用性试验色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等五个参数。
按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。
4.2.1. 色谱柱的理论板数（n）用于评价色谱柱的分离效能。
由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测物质或标物质的理论板数。
在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分色谱峰或标物质色谱峰的保留时间t R 和峰宽（W）或半高峰宽（W h /2 ），22按n 16t R /W 2或n 5.54t R/W h/2 2计算色谱柱的理论板数。
t R、W、W h/2 可用时间或长度计（下同），但应取相同单位。
4.2.2. 分离度（R）用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。
可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测物质与某一指标性成分（标物质或其他难分离物质）的分离度，或将供试品或对照品用适当的方法降解，通过测定待测物质与某一降解产物的分离度，对色谱系统分离效能进行评价与调整。
无论是定性鉴别还是定量测定，均要求待测物质色谱峰与标物质色谱峰或特定的杂质对照色谱峰及其他色谱峰之间有较好的分离度。
除另有规定外，待测物质色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于1.5 。
分离度的计算公式为；2 t R2R1W1 W22 t R2 t R11.70 （W1，h/ 2 W2,h/2）式中t R2为相邻两色谱峰中后一峰的保留时间；t R1为相邻两色谱峰中前一峰的保留时间；W1、W2及W1、h/2、W2、h/2 分别为此相邻两色谱峰的峰宽及半高峰宽（如图）。
当对测定结果有异议时，色谱柱的理论板数（n）和分离度（R）均以峰宽（W）的计算结果为准。
4.2.3. 灵敏度用于评价色谱系统检测微量物质的能力，通常以信噪比（S/N）来表示。
通过测定一系列不同浓度的供试品或对照品溶液来测定信噪比。
定量测定时，信噪比应不小于10 ；定性测定时，信噪比应不小于3。
系统适用性试验中可以设置灵敏度实验溶液来评价色谱系统的检测能力。
4.2.4. 拖尾因子（T）用于评价色谱峰的对称性。
拖尾因子计算公式为：T W0.05hT2d1式中： W 0.05h 为 5％峰高处的峰宽； 以峰高作定量参数时，除另有规定外， T 值应在 0.95-1.05 之间。
以峰面积作定量参数时，一般的峰拖尾或前伸不会影响峰面积积分，但严重拖尾会影响基 线和色谱峰起止的判断和峰面积积分的准确性，此时应在品种正文项下对拖尾因子作出规 定。
4.2.5. 重复性 用于评价色谱系统连续进样时响应值的重复性能。
采用外标法时，通常取 各品种项下的对照品溶液，连续进样 5 次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏 差应不大于 2.0%，采用标法时，通常配制相当于 80%、100%和 120%的对照品溶液，加入规 定量的标溶液，配成 3 种不同浓度的溶液，分别至少进样 2 次，计算平均校正因子，其相 对标准偏差应不大于 2.0%。
4.3 测定法4.3.1 标法按品种正文项下的规定，精密称 （量） 取对照品和标物质，分别配成溶液，各精密量取适量， 混合配成校正因子测定用的对照溶液。
取一定量进样，记录色谱图。
测量对照品和标物质 的峰面积或峰髙，按下式计算校正因子：校正因子 f式中 A S 为标物质的峰面积或峰高； A R 为对照品的峰面积或峰高；c S 为标物质的浓度； c R 为对照品的浓度。
再取各品种项下含有标物质的供试品溶液，进样，记录色谱图，测量供试品中待测成分和 标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：如图）。
A S /c S A R /c R式中 A X 为供试品的峰面积或峰高； c X 为供试品的浓度；A S ' 为标物质的峰面积或峰高；c'S 为标物质的浓度；f 为标法校正因子。
采用标法，可避免因供试品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。
4.3.2 外标法含量 c X AXA 'S /c 'S按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量， 进样，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测物质的峰面积 （ 或峰高），按下式 计算含量：含量 c X c R A XA R式中各符号意义同上。
由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定时，以手动进样器定量环或自动 进样器进样为宜。
4.3.3 加校正因子的主成分自身对照法 测定杂质含量时，可采用加校正因子的主成分自身对照法。
在建立方法时，按各品种项下 的规定，精密称（量 ） 取待测物对照品和参比物质对照品各适量，配制待测物校正因子的溶 液，进样，记录色谱图，按下式计算待测物的校正因子。
式中 c A 为待测物的浓度； A A 为待测物的峰面积或峰髙；c B 为参比物质的浓度；A B 为参比物质的峰面积或峰髙。
也可精密称（量）取主成分对照品和杂质对照品各适量，分别配制成不同浓度的溶液，进 样，记录色谱图，绘制主成分浓度和杂质浓度对其峰面积的回归曲线，以主成分回归直线 斜率与杂质回归直线斜率的比计算校正因子。
校正因子可直接载入各品种项下，用于校正杂质的实测峰面积。
需作校正计算的杂质，通 常以主成分为参比，采用相对保留时间定位，其数值一并载入各品种项下。
测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度，将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的 溶液，作为对照溶液；进样，记录色谱图，必要时，调节纵坐标围（以噪声水平可接受为 限） 使对照溶液的主成分色谱峰的峰高约达满量程的 10%? 25%。
除另有规定外， 通常含量低于 0.5%的杂质，峰面积的相对标准偏差（ RSD ）应小于 10%；含量在 0.5%? 2%的杂质，峰面 积的 RSD 应小于 5%；含量大于 2%的杂质， 峰面积的 RSD 应小于 2%。
然后，取供试品溶液和 对照溶液适量，分别进样，除另有规定外，供试品溶液的记录时间，应为主成分色谱峰保 留时间的 2 倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与 对照溶液主成分的峰面积比较，计算各杂质含量。
