脱氧雪腐镰刀菌烯醇( DON) ELISA 快速检测试剂盒操作 …
- 格式：pdf
- 大小：224.22 KB
- 文档页数：5
文档推荐
-
脱氧雪腐镰刀菌烯醇DON的研究进展页数:13
-
脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性研究进展页数:5
下载文档原格式
合集下载
ELISA检测试剂盒操作流程
ELISA检测试剂盒操作流程1.准备实验材料和试剂-检验样本：例如血清、尿液、细胞上清液等。
-ELISA试板：根据样本数量选择96孔或384孔的板。
- 试剂盒：包括标准品、washes缓冲液、检测抗体、底物等。
2.样本处理-对于血清等生物液体样本，可用离心将固体物质沉淀并分离下清液。
-样本需储存或运输途中应避免反复冻融。
3.实验板的板液处理-将实验板从包装中取出，将不需要的孔进行盖膜封闭。
- 根据试剂盒说明书，添加适量的板液（Coating Buffer）到每个孔中，使其充分覆盖孔内壁。
-封闭板液的孔，将实验板在2-8℃下放置静置一夜或在37℃下1-2小时孵育。
4.样本添加-倒掉盘液，用PBS或TBST洗板3次，去除残留物。
-将样本加到每个孔中，根据需要添加正样本、负样本和待测样本。
-注意每个样本的剂量和添加的体积，通过试剂盒说明书和实验设计标准控制。
5.抗体添加-清洗步骤同上，将洗板缓冲液加到孔中，重复3次。
-加入检测抗体，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-要确保抗体的浓度和添加的体积适宜。
6.洗涤-洗涤步骤同上，用洗涤缓冲液洗板，重复3次。
-每次洗涤时，将洗液完全加满孔，静置1分钟，然后倒出洗液。
-注意洗涤时间和洗涤次数的准确控制，以将非特异性结合物质彻底清除。
7.底物添加-清洗步骤同上，将洗液加到孔中，重复3次。
-加入底物，根据试剂盒说明书的建议将其添加到孔中。
-底物液体应完全覆盖孔底，防止反应过程中氧化。
8.反应停止-根据试剂盒说明书，将反应停止液加入到孔中，停止底物的反应。
-注意反应停止液的体积和浓度，以保证反应的准确停止。
9.色谱分析-用ELISA板读板仪读取各个孔的OD值。
-根据试剂盒说明书和实验设计的标准曲线确定样本中目标物质的含量。
-注意设置适当的控制组和标准曲线来保证测量结果的准确性。
总结：ELISA检测试剂盒的操作流程主要包括实验板处理、样本添加、抗体添加、洗涤、底物添加、反应停止和色谱分析。
简述使用elisa试剂盒的操作流程
简述使用elisa试剂盒的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!ELISA试剂盒操作流程简述ELISA，全称为酶联免疫吸附测定，是一种广泛用于定量检测样本中特定蛋白质或抗原的生物分析技术。
酶联免疫吸附法快速检测谷物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇2011-01—18
１ ． 抗原 抗体反 应 ．２ ５
１ 仪器与设备 ． １ 酶标仪 ，上海纤检仪器有限公司提供 ；恒温培 养 箱 （～ ０ ℃） ０６ 、微 量 移 液 器 、分 析 天 平 、微 量 振 荡器 。 １２ 试 剂 ． 脱 氧 雪 腐 镰 刀 菌烯 醇 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 ，无 锡 市艾 ＬＳ 赛生物技术有限公司提供 ；甲醇 （ 分析纯） Ｂ 缓 、Ｐ Ｓ 冲溶 液 （Ｈ值 ７ ） ｐ ． 。 ４ １ Ｄ Ｎ标准溶液的制备 ． Ｏ ３ １ 样 品处 理 ． ４ 准确称取 ５ 粉碎均匀的样品于三角瓶中，加入 ．ｇ ０ ２ Ｌ体积分数为 １％甲醇水提取液 ，振荡 １ ｉ， ５ ｍ Ｏ ５ｍｎ
１． 。 ７４％
关键词 ：脱氧雪腐镰刀菌烯醇 ；Ｅ ＩＡ；检测 ＬＳ 中图分类 号：￥ １ 文献标 志码 ：Ａ ５５ ｄ ｉ ０３ ６ ／ｓｎ１７ ～ ６ ６ Ｘ） ０ １ ５０ ８ ｏ：１．９ ９ ｉ ． １ ９ （ ． １ ． ． ｊｓ ６ ４ ２ ０ ２
Ｅ ｔ ｉ ｍ ｎ ｎｙ ｅＬｎ ｅ ｍ ｎｓｒｅｔ ｓａ （ＬＳ ）ｆ ｓ ｂｓ ｅｔ ｆ ｚｍ ｉ ｄＩ ｕ ｏｏｂｎ ｓｙ Ｅ ＩＡ ｏ ａ ｈ ｏＥ ｋ ｍ Ａ ｒ Ｄ ｏｙ ｉ ｌ ｏ Ｄ Ｎ ｎＣ ｒ ｅｘｎ ａ ｎｌ（ Ｏ ）ｉ ｏ ｖｅ ｎ
１ 材 料 与方 法
从冰箱中取 出脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫试剂盒 ， 平 衡 至 室温 ，用 ２０ｍＬ抗 体 稀 释缓 冲液 ，将 １支抗 ． Ｄ Ｎ单克隆抗体溶解 ；用 ４ Ｌ抗体稀释缓冲液将 Ｏ ．ｍ ０ １ 支酶标二抗浓缩液溶解 ，充分摇匀 ；取 ３ Ｌ ． ｍ 浓 ０ 缩洗涤液加 ５ Ｌ ７ 蒸馏水稀释 ，备用 。 ｍ
酶联免疫 吸附法快速检测 谷物 中的 脱 氧 雪腐 镰 刀 菌烯 醇
１ 仪器与设备 ． １ 酶标仪 ，上海纤检仪器有限公司提供 ；恒温培 养 箱 （～ ０ ℃） ０６ 、微 量 移 液 器 、分 析 天 平 、微 量 振 荡器 。 １２ 试 剂 ． 脱 氧 雪 腐 镰 刀 菌烯 醇 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 ，无 锡 市艾 ＬＳ 赛生物技术有限公司提供 ；甲醇 （ 分析纯） Ｂ 缓 、Ｐ Ｓ 冲溶 液 （Ｈ值 ７ ） ｐ ． 。 ４ １ Ｄ Ｎ标准溶液的制备 ． Ｏ ３ １ 样 品处 理 ． ４ 准确称取 ５ 粉碎均匀的样品于三角瓶中，加入 ．ｇ ０ ２ Ｌ体积分数为 １％甲醇水提取液 ，振荡 １ ｉ， ５ ｍ Ｏ ５ｍｎ
１． 。 ７４％
关键词 ：脱氧雪腐镰刀菌烯醇 ；Ｅ ＩＡ；检测 ＬＳ 中图分类 号：￥ １ 文献标 志码 ：Ａ ５５ ｄ ｉ ０３ ６ ／ｓｎ１７ ～ ６ ６ Ｘ） ０ １ ５０ ８ ｏ：１．９ ９ ｉ ． １ ９ （ ． １ ． ． ｊｓ ６ ４ ２ ０ ２
Ｅ ｔ ｉ ｍ ｎ ｎｙ ｅＬｎ ｅ ｍ ｎｓｒｅｔ ｓａ （ＬＳ ）ｆ ｓ ｂｓ ｅｔ ｆ ｚｍ ｉ ｄＩ ｕ ｏｏｂｎ ｓｙ Ｅ ＩＡ ｏ ａ ｈ ｏＥ ｋ ｍ Ａ ｒ Ｄ ｏｙ ｉ ｌ ｏ Ｄ Ｎ ｎＣ ｒ ｅｘｎ ａ ｎｌ（ Ｏ ）ｉ ｏ ｖｅ ｎ
１ 材 料 与方 法
从冰箱中取 出脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫试剂盒 ， 平 衡 至 室温 ，用 ２０ｍＬ抗 体 稀 释缓 冲液 ，将 １支抗 ． Ｄ Ｎ单克隆抗体溶解 ；用 ４ Ｌ抗体稀释缓冲液将 Ｏ ．ｍ ０ １ 支酶标二抗浓缩液溶解 ，充分摇匀 ；取 ３ Ｌ ． ｍ 浓 ０ 缩洗涤液加 ５ Ｌ ７ 蒸馏水稀释 ，备用 。 ｍ
酶联免疫 吸附法快速检测 谷物 中的 脱 氧 雪腐 镰 刀 菌烯 醇
ELISA试剂盒操作方法
ELISA试剂盒操作方法ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学试验技术，用于检测体内或体外的蛋白质、抗体、抗原等物质。
ELISA试剂盒是用于进行ELISA实验的一种常见装置。
下面将为您介绍ELISA试剂盒的操作方法。
1.准备工作a.预热-将试剂盒中的所有试剂预热到适当的温度，通常为室温至37°C之间。
b.样品处理-准备好待测样品，可以是血清、细胞上清液、组织提取物等。
如果样品中含有大量的蛋白质或杂质，可以进行样品处理，如稀释、蛋白质去除等。
c.标准品准备-试剂盒通常包含一系列浓度已知的标准品，用于制作标准曲线。
按照说明书的要求，用缓冲液或适当的稀释液将标准品稀释为不同浓度的工作液。
2.涂膜板的处理a.涂膜板选择-根据实验需求选择合适的涂膜板，通常有96孔、384孔等。
b.板钉定位-使用板钉或其他适当的方法将涂膜板固定在适当的工作台上。
c.预涂底物溶液加入-将试剂盒提供的预涂底物溶液加入涂膜板的孔中，注意保持各孔液面平整。
3.样品与试剂添加a.标准品和样品加入-按照实验设计的需要，将标准品和待测样品分别加入涂膜板的孔中。
b.阳性对照和阴性对照加入-根据试剂盒的要求，加入阳性对照和阴性对照。
c.洗涤液加入-在每次试剂或样品加入后，使用专用的洗涤液将孔洗涤，以清除无关物质。
4.反应与显色a.结合抗体加入-按照试剂盒说明书要求，加入适当的结合抗体，用于与待测物质结合形成复合物。
b.二抗加入-加入带有底物标记的二抗，与结合抗体结合形成复合物。
c.显色底物加入-加入含有适当底物的显色底物试剂，使底物与酶结合并发出信号。
5.反应停止与测量a.反应停止液加入-在适当的时间点，根据试剂盒的说明，加入反应停止液，停止底物的酶反应。
b.光密封膜或保护板加盖-加盖光密封膜或保护板，防止溶液蒸发或污染。
6.读取和数据处理a.读取吸光度-使用ELISA读板仪读取各孔的吸光度值。
一、概要 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol)又称呕吐
一、概要
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol）又称呕吐毒素（Vomitoxin）属于霉菌的单端孢菌素族，由某些镰刀霉真菌属产生。
呕吐毒素多分布于小麦、大麦、玉米等谷物籽实中，含量通常是mg/kg(μg/mL，ppm)级的，由于其具有高的细胞毒素及免疫抑制性质，对人类及动物构成了健康威胁。
本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被呕吐毒素抗原，样本中的呕吐毒素和微孔条上预包被的抗原竞争抗呕吐毒素抗体（抗试剂），同时抗呕吐毒素抗体与酶标二抗（酶标物）相结合，，经TMB底物显色，样本吸光度值与其所含呕吐毒素量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中呕吐毒素的含量。
三、适用范围
可定性、定量检测，本试剂盒适用于饲料样本中呕吐毒素的含量检测。
四、交叉反应率
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）…………………………100%
3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (1)
五、检测步骤
1、将所需试剂从冷藏环境中取出
2、取出需要数量的微孔板
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号
5、加标准品/样本
6、洗板
7、显色
8、测定
六、检测方法灵敏度、准确度、精密度
样本最低检测限：
饲料……………………………………………………150µg/kg
回收率：
饲料……………………………………………………95±15%
七、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。
脱氧雪腐镰刀菌烯醇DON的研究进展
DON的结构
DON毒素的概况
DON的产生 DON主要由镰刀菌属真菌产生，其中禾谷镰刀菌占绝对 优势。镰刀菌产毒能力随着培养时间的推移逐步增强， 高峰一般出现在第4周左右，并一直维持至第8周。
DON毒素的概况
DON的污染及危害
DON是污染粮食和动物饲料的最为广泛的天然毒素之一， 在农作物病害的病原菌的致病过程中也具有重要作用。 许多粮谷(如小麦、黑麦、大麦、燕麦等)及其制品(如麦 芽、啤酒和面包等)受DON污染严重。 DON具有很强的细胞毒性，对原核细胞、真核细胞均具 有明显的毒性作用。国内外对DON的致突变、致畸、致 癌作用的研究结果表明，DON具有胚胎毒性和致畸作用。 流行病学研究发现，DON的含量与食管癌的发生呈正相 关。
小麦赤霉病及其与DON的关系
赤霉病是温暖多雨和气候湿润地区小麦和其他麦类的重 要流行性病害，小麦赤霉菌侵入寄主后，不仅造成产量 损失和品质下降，同时还会引起严重的毒素污染。禾谷 镰刀菌是我国绝大部分地区小麦赤霉病的主要致病类型。
禾谷镰刀菌能产生多种真菌毒素，DON是其产生的最主 要的一种单端孢霉烯族化合物。
ON污染最为严 重，DON对小麦种子的萌发、胚根与胚芽鞘的伸长及幼 苗的生长均有显著的抑制作用，可导致小麦叶片损伤， 叶片细胞膜结构破坏。DON对小麦的毒害作用与小麦品 种对赤霉病的抗性直接相关，有研究表明，麦粒DON含 量与小麦赤霉病田间发病程度之间存在有非常显著的相 关性。
免疫学检测包括：放射免疫法(Radioimmunoassay，RI A)、荧光极性免疫分析(Fluorescence polarization imm unoassay)、酶联免疫分析(Enzyme-linked immunosorb ent assay，ELISA)等，应用最为普遍的是ELISA。
DON毒素的概况
DON的产生 DON主要由镰刀菌属真菌产生，其中禾谷镰刀菌占绝对 优势。镰刀菌产毒能力随着培养时间的推移逐步增强， 高峰一般出现在第4周左右，并一直维持至第8周。
DON毒素的概况
DON的污染及危害
DON是污染粮食和动物饲料的最为广泛的天然毒素之一， 在农作物病害的病原菌的致病过程中也具有重要作用。 许多粮谷(如小麦、黑麦、大麦、燕麦等)及其制品(如麦 芽、啤酒和面包等)受DON污染严重。 DON具有很强的细胞毒性，对原核细胞、真核细胞均具 有明显的毒性作用。国内外对DON的致突变、致畸、致 癌作用的研究结果表明，DON具有胚胎毒性和致畸作用。 流行病学研究发现，DON的含量与食管癌的发生呈正相 关。
小麦赤霉病及其与DON的关系
赤霉病是温暖多雨和气候湿润地区小麦和其他麦类的重 要流行性病害，小麦赤霉菌侵入寄主后，不仅造成产量 损失和品质下降，同时还会引起严重的毒素污染。禾谷 镰刀菌是我国绝大部分地区小麦赤霉病的主要致病类型。
禾谷镰刀菌能产生多种真菌毒素，DON是其产生的最主 要的一种单端孢霉烯族化合物。
ON污染最为严 重，DON对小麦种子的萌发、胚根与胚芽鞘的伸长及幼 苗的生长均有显著的抑制作用，可导致小麦叶片损伤， 叶片细胞膜结构破坏。DON对小麦的毒害作用与小麦品 种对赤霉病的抗性直接相关，有研究表明，麦粒DON含 量与小麦赤霉病田间发病程度之间存在有非常显著的相 关性。
免疫学检测包括：放射免疫法(Radioimmunoassay，RI A)、荧光极性免疫分析(Fluorescence polarization imm unoassay)、酶联免疫分析(Enzyme-linked immunosorb ent assay，ELISA)等，应用最为普遍的是ELISA。
四种毒素试剂盒操作流程
PDF 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
江苏省苏微微生物研究有限公司
黄曲霉毒素 M1 操作简述 操作准备:
1.板条洗涤液 将试剂盒中的浓缩洗涤液用蒸馏水进行 20 倍稀释待用!例如做一个 24 孔板条,则最少取 3ml 浓缩洗涤液+57ml 蒸馏水,混匀后做洗涤液备用. 2.酶标抗原溶液 取出试剂盒中的酶标抗原,酶标抗原稀释液,每瓶酶标抗原准确加入 1.5ml 酶标抗原稀释液 进行稀释,充分混匀后备用.24 孔需配制 1 瓶酶标抗原,48 孔需配制 2 瓶酶标抗原. 3.样品处理 3.1 牛奶 将含脂肪牛奶降温至 10℃以下,3500r/min,用吸管弃去上层脂肪,上层牛奶液即为待测样 液.脱脂牛奶直接测定. 3.2 奶粉 称取 5g 奶粉于 100ml 三角瓶中,加入 40ml 蒸馏水,振摇 5 分钟,使其完全溶解.以下步 骤同 3.1 牛奶处理方法.
操作流程:
1. 取出试剂盒中板条,洗涤两次.每孔中 加入 250μl 洗涤液或滴管加洗涤液超出板 条 2/3 以上. 2. 标准品孔分别加入不同浓度的标准品 溶液(由低到高) ,样品孔加入相应的样品 稀释液, 每孔各加入 50μl 酶标抗原稀释液, 混匀后放入 37℃培养箱进行 30 分钟温育. 3. 温育结束后,拍干孔中液体,用洗涤液 进行洗板,进行 5 次洗板 4. 洗板结束后,先后分别加入 50μl 底物 a,b,混匀后放入 37℃培养箱进行 15 分钟 温育. 5. 温育结束后,反应孔呈蓝色.加入终止 液后,反应孔变成黄色,上酶标仪读数! 注:标准品的蓝色应为梯度的蓝色,即颜色 由深到浅的标准品浓度的顺序应为:0>0.1 >0.25>0.5>1>2(吸光度由大到小) . 联系人:张先生 QQ:75500519 电话:0510-85514690 1348504431 文件使用 "pdfFactory Pro" 试用版本创建
谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法
谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法1 主题内容与适用范围本标准规定了谷物及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的薄层色谱测定法及免疫测定法(ELISA)的基本要求。
本标准适用于谷物(小米、玉米、大麦等)及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。
第一法的最低检出浓度为0.1mg/kg。
第二法的最低检出浓度为0.1ng/kg。
第一篇薄层色谱测定法2 原理谷物及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经提取、净化、浓缩和硅胶G薄层展开后，加热薄层板。
由于在制备薄层板时加入了三氯化铝，使脱氧雪腐镰刀菌烯醇在365nm紫外光灯下显蓝色荧光，与标准比较。
3 试剂以下试剂除特殊规定外均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度的水。
3.1 三氯甲烷。
3.2 无水乙醇。
3.3 甲醇。
3.4 石油醚(60～90℃或的30～60℃)。
3.5 乙酸乙酯。
3.6 乙腈。
3.7 丙酮。
3.8 异丙醇。
3.9 乙醚。
3.10 无水乙醚。
3.11 氯化铝(AlCl3·6H2O)：化学纯。
3.12 中性氧化铝：层析用，经300℃活化4h，置干燥器中备用。
3.13 活性炭：20g活性炭，用3mol/L盐酸溶液浸泡过夜、抽滤后，用热蒸馏水洗至无氯离子，在120℃烘干备用。
3.14 硅胶G：薄层层析用。
3.15 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(以下简称DON)标准溶液，精密称取5.0mg DON，加乙酸乙酯－甲醇(19∶1)溶解。
转入10m 容量瓶中，用乙酸乙酯－甲醇(19∶1)稀释至刻度，此标准溶液含DON0.5mg/mL。
吸取此标准溶液0.5mL，用乙酸乙酯－甲醇(19∶1)稀释至10mL，此溶液每毫升含DON25?g。
4 仪器4.1 小型粉碎机。
4.2 电动振荡器。
4.3 75mL玻璃蒸发皿。
4.4 层析柱：内径2cm，长10cm，不具活塞。
4.5 10mL具塞浓缩瓶：底部具0.2mL刻度尾管。
4.6 玻璃板：5×20cm。
脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的分离和鉴定
Key words: deoxynivalenol; degradation; Devosia sp.; biodetoxification
0 引言
【研究意义】脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON，3，7， 15 三羟基 12，13 环氧单端孢霉-9 烯-8 酮）是由禾谷 镰刀菌（Fusarium graminearum）产生的重要真菌毒 素[1-2]，该毒素不仅能加重赤霉病的病情，影响谷物的
关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇；降解；徳沃斯氏菌；生物解毒
Isolation and Identification of Deoxynivalenol Degradation Strains
XU Jian-hong, JI Fang, WANG Hong-jie, WANG Jian-wei，LIN Fan-yun, SHI Jian-rong
shiji@
中国农业科学
43 卷
物中毒素的含量。由于微生物资源丰富，自然界中总 能找到能够去除和降解毒素的微生物。和其它方法相 比，采用微生物方法去除毒素条件相对温和，不会影 响谷物的品质和营养。因此，开发利用新的微生物资 源来进行 DON 毒素的生物脱毒具有重要的意义和前 景[10-12]。【前人研究进展】Fuchs 等[13]从牛瘤胃的富 集培养物中分离到一株厌氧优杆菌属细菌 （Eubacterium BBSH797），该菌可以在 24—48 h 转 化 DON 和其它单端孢霉烯族毒素，从而部分地减轻 饲料中毒素的毒性；Shima 等[14]从土壤中分离到一株 属于土壤杆菌——根瘤菌属的细菌，该菌能够把 DON 转化为 3-酮基-DON，从而减少 DON 在免疫抑制方面 的毒性；He 等[15]分离到一株能够氧化 DON 毒素的塔 宾曲霉（Aspergillus tubingensis）NJA-1。【本研究切 入点】DON 对人、畜具有很高的毒性，目前有多种方 法处理真菌毒素，包括物理去除法、理化吸附法、化 学分解法等，但是这些方法不仅效率不高，费时费力， 且会造成营养成分的损失[16-17]。【拟解决的关键问题】 笔者尝试分离筛选出能够降解 DON 毒素的降解菌株， 对其进行生物学鉴定，并研究降解菌株的降解特性， 为利用该菌株去除 DON 毒素奠定基础。
0 引言
【研究意义】脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON，3，7， 15 三羟基 12，13 环氧单端孢霉-9 烯-8 酮）是由禾谷 镰刀菌（Fusarium graminearum）产生的重要真菌毒 素[1-2]，该毒素不仅能加重赤霉病的病情，影响谷物的
关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇；降解；徳沃斯氏菌；生物解毒
Isolation and Identification of Deoxynivalenol Degradation Strains
XU Jian-hong, JI Fang, WANG Hong-jie, WANG Jian-wei，LIN Fan-yun, SHI Jian-rong
shiji@
中国农业科学
43 卷
物中毒素的含量。由于微生物资源丰富，自然界中总 能找到能够去除和降解毒素的微生物。和其它方法相 比，采用微生物方法去除毒素条件相对温和，不会影 响谷物的品质和营养。因此，开发利用新的微生物资 源来进行 DON 毒素的生物脱毒具有重要的意义和前 景[10-12]。【前人研究进展】Fuchs 等[13]从牛瘤胃的富 集培养物中分离到一株厌氧优杆菌属细菌 （Eubacterium BBSH797），该菌可以在 24—48 h 转 化 DON 和其它单端孢霉烯族毒素，从而部分地减轻 饲料中毒素的毒性；Shima 等[14]从土壤中分离到一株 属于土壤杆菌——根瘤菌属的细菌，该菌能够把 DON 转化为 3-酮基-DON，从而减少 DON 在免疫抑制方面 的毒性；He 等[15]分离到一株能够氧化 DON 毒素的塔 宾曲霉（Aspergillus tubingensis）NJA-1。【本研究切 入点】DON 对人、畜具有很高的毒性，目前有多种方 法处理真菌毒素，包括物理去除法、理化吸附法、化 学分解法等，但是这些方法不仅效率不高，费时费力， 且会造成营养成分的损失[16-17]。【拟解决的关键问题】 笔者尝试分离筛选出能够降解 DON 毒素的降解菌株， 对其进行生物学鉴定，并研究降解菌株的降解特性， 为利用该菌株去除 DON 毒素奠定基础。
呕吐毒素检测卡说明书(完整版)
呕吐毒素快速检测试纸条使用说明书【产品简介】脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol）又称呕吐毒素（Vomitoxin），本产品为呕吐毒素胶体金快速检测卡，用于定性检测谷物样品中呕吐残留，整个检测过程只需要5分钟，检测卡灵敏度为250ng/ml（2 50ppb）。
谷物样品的检测限为1μg/ml（1ppm）。
【检测原理】基于竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中如果含有呕吐毒素，其浓度又高于检测试纸的灵敏度，则会与试纸卡上的抗体结合形成复合物，使应该在试纸上出现的红色T线不显色，结果判为阳性。
反之为阴性。
【适用范围】快速筛查粮食或饲料中呕吐毒素是否超标以及食物中毒发生后快速筛查中毒因子是否为呕吐毒素。
【包装组成】●呕吐毒素胶体金法检测卡（40份）●一次性塑料滴管（40支）●塑料一次性手套（5只）●使用说明书（1份）【样品处理】1.取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15 ml离心管中。
2．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。
3．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液，然后用0.3ml体积稀释液复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液.4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
【结果判断】阴性（－）：C、T线均显色。
表示样品中不含有待检测物质或其浓度低于检测限。
阳性（＋）：检测T线不显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。
无效：质控C线未显色，表明操作过程不正确或试纸条已失效。
【贮存条件及有效期】2-30℃，密封干燥，检测卡保存时间18个月，乙酸乙酯为易挥发性有机溶剂，保存为12个月。
真菌毒素胶体金检测试纸基于抗原抗体的免疫原理，利用纳米胶体金层析技术，在真菌毒素的现场检测时具有以下优势：1) 单个样品即可检测，无需仪器设备，特别适合现场检测；2) 灵敏度高: 免疫层析法可检出量可达ng级，ELISA法最低检出量可达pg级，并可定量测定。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
F. 终止液: 3/6/12 ml
1 瓶 (黄盖)
G. DON 标准品: 1 ml/瓶 （0、500、1000、2000、4000ppb）
各1瓶
H．操作说明书
1份
注意：标准品含有 DON、终止液含 2NH2SO4，须小心取用。请勿在有限期外使用本试剂盒 或不同批次的试剂混用。DON 标准品的实际浓度为 0、50、100、200 和 400ng/ml。
5.2 反应：空白孔加入 100 µl 洗涤液(不加 DON 抗体)。DON 标准品孔和样品孔相应地加入 标准品③(1.0ppm)和待检样品提取液各 50 µl/孔，再加入 DON 抗体(50 µl /孔)，此时 各孔中溶液体积为 100 µl。将酶标板在水平桌面上轻微振荡（注意避免液体溅出），使 之混匀。放入湿盒内（在有盖容器内放置一块平整湿纱布），37℃温育 30 分钟。 注意：此操作步骤要快，尽量保持前后孔温育时间一致，每次加样须更换新的吸头。
水，避免注入板孔中的液体接触到移液器管
2． 洗板机洗板步骤失败，洗
尖而将孔中物质带回到洗涤液中
板次数不够及注水量不够 2． 洗板机洗板的注水量为 400µL，注水后的液
3
3． 洗板后未立即进行下一步
面应该接近板平面并且洗涤四次以上
操作，中间间隔过长
3． 洗板后立即进行下一步操作，不要中断轻轻
4． 孔中含有两种以上的试剂
请即时检测。 2）若样品待检液不立即检测，请将其存储于棕色玻璃瓶内，2-8℃避光保存。 3）试剂盒在使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室温（20-25℃）进行温度平衡 试剂用完后立即将其放置回2-8℃冰箱内保存。 4）在每个步骤操作时，速度要快，不要使板孔暴露在空气中时间过久，避免酶标板 变干。未用完的酶标板需密闭于自封袋内，防止受潮且避光保存于2-8℃冰箱内。 5）在温育时，避免光照，建议将酶标板置于湿盒内 (在有盖容器内放置一块平整湿 纱布)进行温育。 6）若样品数量超过20份，请用多通道加样器操作。
2． 由于重复使用吸头导致抗 2． 不要重复使用吸头
体污染了酶标记物
3． 控制室温至 20-25℃并确保试剂回室温
1
3． 室温过低或试剂未回室温 4． 使洗涤水回升至室温
4． 洗涤水未回升到室温
5． 更换新批号的试剂盒
5． 试剂过有效期
6． 与我公司联系
6． 试剂失效
整 行 或 整 列 板 孔 1． 手工洗板时相对应的吸头 1． 洗板前检查吸头是否牢固，是否高矮一致且
孔调零，在 450 nm 处测量吸光值 A（在加入终止液 5 分钟内读取吸光值）。 4.8 结果判定：以 DON 标准品浓度 0.5ppm、1.0ppm、2.0ppm、4.0ppm 的常用对数值（1gC）
为横坐标，各浓度标准品相应的吸光值 A 与 0ppb 的标准品 A 值的比值(B/B0%)为纵坐标 [B/B0%=标准品（或样品）的吸光值/0ppb 标准品的吸光值×100%]，绘制标准曲线。根 据样品孔的吸光值计算样品的 B/B0%值，查标准曲线，可得到相应样品中 DON 的含量 (已考虑样品提取的稀释倍数，结果无需换算 )。(或可直接用 RADEWIN 等专用 ELISA 分析软件对数据进行分析得出结果)。如果检测结果高于检测上限，请将待测样品提取 液用超纯水或蒸馏水稀释后再检测，测定结果乘以相应的稀释倍数。
4.5 洗板：重复步骤 4.3 的操作； 4.6 显色：将洗好的酶标板平放，加入显色液 100 µl /孔，将酶标板置于湿盒内，放入温箱
内 37℃显色 5 分钟(若显色较浅，可适当延长，但不宜超过 10 分钟)。 4.7 终止及测定：将显色完毕的板条取出，加入终止液 50 µl/孔，轻微震荡混匀，以空白
1
A
空白
B
标准品①
C
标准品②
D
标准品③
E
标准品④
F
标准品⑤
G
样品
H
样品
2 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
3...12
4.2 加样：空白孔加入100 μL 洗涤液(不加DON抗体)。DON标准品孔和样品孔相应地加入 标准品(①②③④⑤)和样品待检液50 μL/孔（如上表所示加入），再加入DON抗体(50 μL /孔)，此时各孔中溶液体积为100μL。将酶标板在水平桌面上轻微振荡（注意避免液体溅 出）使之混匀，放入湿盒内(在有盖容器内放置一块平整湿纱布)，37℃温育30分钟。
山西德丰信成生物科技有限公司
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON) ELISA 快速检测试剂盒操作说明书
目录 一、简介............................................................................................. 2 二、试剂盒组成.................................................................................2 三、贮存条件、规格及有效期.........................................................2 四、定量检测程序.............................................................................2 五、限量（定性）检测程序.............................................................3 六、样品处理程序.............................................................................3 七、自备仪器及试剂.........................................................................4 八、国家标准..................................................................................... 4 九、常见故障分析.............................................................................4
八、 国家标准
标准名称 食品中脱氧雪腐 镰刀菌烯醇允许量 标准 饲料卫生标准
标准号 GB2761-2011
GB13078-2001
实施日期 2011-10-20
2001-10-1
适用范围
指标(μg/kg)
谷物及其制品
玉米、玉米面（渣、片）；
≤1000
大麦、小麦、麦片、小麦粉； ≤1000
猪配合饲料、犊牛配合饲料、泌
二、 试剂盒组成
A. 24/48/96 孔 DON 酶标板:
3/6/12 条×8 孔
B. 20×浓缩洗涤液：25ml (用蒸馏水稀释 20 倍使用)
1瓶
C. DON 抗体: 2/4/6ml
1 瓶 (红盖)
D. 酶标二抗： 3/6/12 ml
1 瓶 (绿盖)
E. 显色液： 3/6/12 ml
1 瓶 (蓝盖)
5.3 洗板：参照 4.3 5.4 加酶标二抗：参照 4.4 5.5 洗板：参照 4.3； 5.6 显色：参照 4.6 5.7 终止及测定：参照 4.7（目测法不加终止液） 5.8 结果判定：目测法(未加终止液前目测)：比较样品孔与标准品参照孔的颜色，若显
色比标准品参照浅者，则为阳性，样品中 DON 的含量超出限量标准；若深者，则为 阴性；若颜色接近，则需用酶标仪测吸光值比较。仪器法：酶标仪检测在 450nm 波 长处各孔的吸光值 A，若样品的 A 值<标准参照的 A 值，为阳性，表示样品中 DON 的 含量超出限量标准；若样品 A 值≥标准参照 A 值，为阴性。
七、 自备仪器及试剂
1. 酶标仪（内置 450nm 滤光片）或黄曲霉专用测定仪。 2. 20-200ul 微量移液器及配套吸头 3. 恒温培养箱（0℃-50℃）、冰箱、感量 0.01g 的天平、小型粉碎机或碾钵 4. 玻璃器皿：三角瓶、烧杯、分液漏斗、蒸发皿、量筒、具塞试管、滴管、移液管等 5. 其他：甲醇、滤纸、吸水纸等
最终反应颜色异
与移液器接触不严，导致
在一条直线上
常
2
空吸或吸液量不够
2． 检查管路是否阻塞，检查注水量是否充分
2． 洗板机洗板时相对应的管
路阻塞，导致未注入洗涤
用水或水量不够
标 准 曲 线 不 成 良 1． 手工洗板步骤失败，洗涤 1． 在微孔板上板面上方约 0.5cm 处打出洗涤
好的 S 型
液被板孔中洗涤物污染
贮存：2-8℃贮存，忌 0℃以下冻存，有效期 10 个月。 生产批号：见外包装盒
1
山西德丰信成生物科技有限公司
一、 简介
本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附 ELISA 原理快速定量检测小麦、玉米和饲料等样品 中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalen,DON）。
小麦、玉米、饲料前处理包括：提取、过滤、稀释，处理时间大约为 20-40 分钟。 本试剂盒的检测限：0.2ppm；小麦、玉米、饲料中 DON 的回收率 ≥80%， 批内、批间变 异系数<15%。
乳期动物配合饲料；
≤1000
牛配合饲料、家禽配合饲料； ≤5000
4
山西德丰信成生物科技有限公司
九、 常见故障分析
问题及现象
原因
解决办法
整 块 板 反 应 未 产 1． 被检测物污染了处理样品 1． 注意妥用的容器。
纯品试剂，不要与样品瓶同水槽洗涤
光度值偏低
注意：此操作步骤要快，尽量保持前后孔温育时间一致，每次加样须更换新的吸头。