液相色谱检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇前处理过程的优化

ICS65.020B 40 DB13 河北省地方标准DB 13/T 2954—2019畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定高效液相色谱法2019-03-25发布2019-04-25实施前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。

本标准由衡水市质量技术监督局提出。

本标准起草单位：河北美创检测科技有限公司、衡水市食品药品检验检测中心、衡水市农业农村局。

本标准主要起草人：耿春辉、崔婧、梁勃、段培姿、王晖、王哲、王权、路明、高晶、刘志祥、陈宁。

畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定高效液相色谱法警告―使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。

本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1 范围本标准规定了畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇高效液相色谱测定方法的原理、试剂、仪器和设备、检测步骤、结果计算、准确度和精密度。

本标准适用于饲料原料、配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。

本标准的方法检出限为10μg/kg，定量限为20μg/kg。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1 饲料采样GB/T 20195 动物饲料试样的制备3 原理试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水和乙腈的混合溶液提取,经层析柱净化,浓缩、定容和过滤后用高效液相色谱-紫外检测器测定,外标法定量。

4 试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇(CH3OH，CAS号：67-56-1)，色谱纯。

4.2 乙腈(CH3CN，CAS号：75-05-8)，色谱纯。

4.3 正己烷(C6H14，CAS号：110-54-3)，色谱纯。

4.4 活性炭，120～400目。

高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇郭健;王郑平;曹阳;尚艳娥;唐雪;李月琪【摘要】本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A快速测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法.玉米样品经磨碎后用水匀浆提取,提取液经过免疫亲和柱净化,超高效液相色谱LC-30A紫外检测器检测.试验结果表明:线性范围0.05～10.00 μg/mL,相关系数大于0.999 9;标准样品的仪器检出限为0.016 μg/mL,仪器定量限为0.05 μg/mL;3个浓度标样的保留时间和峰面积相对标准偏差分别在0.041％～0.043％和0.11％～1.57％之间;玉米样品3个浓度加标回收率在81.2％～90.0％之间.该方法简便快速,且易操作.【期刊名称】《粮食与食品工业》【年(卷),期】2014(021)006【总页数】4页(P87-89,93)【关键词】脱氧雪腐镰刀菌烯醇;粮食;超高效液相色谱【作者】郭健;王郑平;曹阳;尚艳娥;唐雪;李月琪【作者单位】国家粮油质量监督检验中心北京 100162;国家粮油质量监督检验中心北京 100162;国家粮油质量监督检验中心北京 100162;国家粮油质量监督检验中心北京 100162;岛津企业管理(中国)有限公司分析仪器事业部分析中心北京100020;岛津企业管理(中国)有限公司分析仪器事业部分析中心北京 100020【正文语种】中文【中图分类】TS210.7脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），又名呕吐毒素，属于单端孢霉烯族毒素，主要由某些镰刀菌产生［1］。

在自然界中广泛存在，主要污染玉米、小麦等谷类作物，也是食品中常见的真菌毒素［2］。

人和牲畜摄入了被脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的谷物以后可产生广泛的毒性效应，不仅引起厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡［3］。

欧盟分类标准脱氧雪腐镰刀菌烯醇为三级致癌物，要求其含量应小于1.0mg／kg［4－5］。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱介绍脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱是一种用于分离和富集脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DAE）的柱子。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇是一种具有抗菌和抗肿瘤活性的天然产物，由脱氧雪腐镰刀菌（strain XCC5085）产生。

该化合物对多种细菌和肿瘤细胞具有明显的生物活性，因此成为药物研发领域的热门研究对象。

原理脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱基于免疫亲和层析技术，利用特异性抗体与脱氧雪腐镰刀菌烯醇结合的原理，实现对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的分离和富集。

主要包括以下步骤：1.样品预处理：将待分离的样品进行预处理，如固态提取、液液分配等方法，以获得待测物的纯化样品。

2.列柱：将经过预处理后的样品加载到脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱中，保留待测物，去除杂质。

3.柱洗脱：通过洗脱缓冲液，去除非特异结合的样品成分，进一步提高分离纯度。

4.洗脱：以适量洗脱溶液洗脱目标物质，收集目标物质。

优势脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱作为一种分离和富集脱氧雪腐镰刀菌烯醇的工具，在药物研发和其他相关领域具有以下优势：1.高选择性：通过使用特异性抗体，可以选择性地富集目标物质，提高检测灵敏度。

2.高效性：利用免疫亲和层析技术，可以在较短时间内完成样品的富集和分离。

3.可逆性：柱子可以多次使用，减少实验成本。

4.广泛适用性：脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱可以应用于不同样品类型的分离和富集，如生物组织、血清、尿液等。

应用脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱在药物研发和生命科学研究中有广泛的应用，包括但不限于以下领域：1. 新药研发•利用脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱，可以富集和分离脱氧雪腐镰刀菌烯醇，用于新药研发的初步筛选和评价。

•结合质谱等分析方法，可以进一步分析脱氧雪腐镰刀菌烯醇的结构、性质等，为新药研发提供有力的支持。

2. 生物样品分析•脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱可以用于生物样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的富集和分离，如血清、组织标本。

•结合其他分析方法，可以对样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行定量检测和分析，为临床和生物研究提供数据支持。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的制备与鉴定郭文博;韩铮;杨俊花;韩薇;陈慧英;孙真真;赵志辉【摘要】将禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)接种至大米培养基28℃培养4周,通过乙腈-水(84∶16)提取培养基.提取物先经自制净化小柱粗净化除去色素、鞣质等杂质后,以甲醇-水(30∶70)为流动相、Pursuit XRs C18(10 mm ×250 mm,5μm)制备色谱柱进行分离,分离组分再以甲醇-水(5∶95)为流动相经Semipreparative SB-CN(9.4 mm ×250 mm,5μm)制备色谱柱进一步纯化.所得脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)经液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)定性,在正、负离子模式下,质谱图中母离子分别为m/z 319.1[M+Na]+,297.1[M+H]+,355.2[M+CH3 COO]-,341.2[M+HCOO]-,295.1[M-H]-,子离子碎片分别为m/z175,231,235,249,179,233,237,265,证明该化合物为DON;经外标法测得DON纯度为(99.18±0.11)％.本研究建立的DON分离纯化方法简便易行,分离效果及稳定性好,成本低.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2015(034)008【总页数】6页(P928-933)【关键词】脱氧雪腐镰刀菌烯醇;禾谷镰刀菌;中压制备液相色谱法;鉴定【作者】郭文博;韩铮;杨俊花;韩薇;陈慧英;孙真真;赵志辉【作者单位】上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海海洋大学食品学院,上海201306;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海海洋大学食品学院,上海201306;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海海洋大学食品学院,上海201306;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403【正文语种】中文【中图分类】O657.72;S852.44脱氧雪腐镰刀菌烯醇的制备与鉴定郭文博1，2，韩铮1，杨俊花1，韩薇1，陈慧英1，2，孙真真1，2，赵志辉1*(1.上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所，上海201403; 2.上海海洋大学食品学院，上海201306)摘要:将禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)接种至大米培养基28℃培养4周，通过乙腈-水(84∶16)提取培养基。

玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质在农产品中，玉米粉是一种常见的食品原料，而在玉米粉中可能存在着脱氧雪腐镰刀菌烯醇这样的标准物质。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇是一种有毒物质，对人体健康有潜在危害，因此对于玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质的研究与监测显得尤为重要。

1. 玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质的定义脱氧雪腐镰刀菌烯醇是一种由镰刀菌属菌株产生的次生代谢产物，存在于玉米粉中。

它在食品加工过程中可能导致毒素产生，对人体健康造成威胁。

2. 玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质的来源玉米粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇来自玉米自身，在玉米的生长、贮藏和加工过程中可能受到镰刀菌的感染。

在生产过程中，严格监控玉米的质量和防止镰刀菌的侵染就显得至关重要。

3. 对玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质的检测与监测为了保障食品安全，对玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测与监测至关重要。

通过建立起完善的检测方法和标准，可以及时发现并控制玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，保障食品的安全。

4. 玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质的风险评估针对玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的风险评估，需要考虑脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性、玉米粉中的含量以及人群的接触情况等因素，通过风险评估可以科学地制定相关的监管和控制措施。

5. 个人观点与总结玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质的研究和监测对于食品安全至关重要。

从监管角度来看，应该加强对玉米生产、加工与贮藏过程的监控，最大限度地减少脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染几率，确保食品的安全性。

科研人员也需加强对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究，探索新的检测和控制方法，尽可能降低其对人体的潜在危害。

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Key words: deoxynivalenol; degradation; Devosia sp.; biodetoxification
0 引言
【研究意义】脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON，3，7， 15 三羟基 12，13 环氧单端孢霉-9 烯-8 酮）是由禾谷 镰刀菌（Fusarium graminearum）产生的重要真菌毒 素[1-2]，该毒素不仅能加重赤霉病的病情，影响谷物的
关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇；降解；徳沃斯氏菌；生物解毒
Isolation and Identification of Deoxynivalenol Degradation Strains
XU Jian-hong, JI Fang, WANG Hong-jie, WANG Jian-wei，LIN Fan-yun, SHI Jian-rong
shiji@
中国农业科学
43 卷
物中毒素的含量。由于微生物资源丰富，自然界中总 能找到能够去除和降解毒素的微生物。和其它方法相 比，采用微生物方法去除毒素条件相对温和，不会影 响谷物的品质和营养。因此，开发利用新的微生物资 源来进行 DON 毒素的生物脱毒具有重要的意义和前 景[10-12]。【前人研究进展】Fuchs 等[13]从牛瘤胃的富 集培养物中分离到一株厌氧优杆菌属细菌 （Eubacterium BBSH797），该菌可以在 24—48 h 转 化 DON 和其它单端孢霉烯族毒素，从而部分地减轻 饲料中毒素的毒性；Shima 等[14]从土壤中分离到一株 属于土壤杆菌——根瘤菌属的细菌，该菌能够把 DON 转化为 3-酮基-DON，从而减少 DON 在免疫抑制方面 的毒性；He 等[15]分离到一株能够氧化 DON 毒素的塔 宾曲霉（Aspergillus tubingensis）NJA-1。【本研究切 入点】DON 对人、畜具有很高的毒性，目前有多种方 法处理真菌毒素，包括物理去除法、理化吸附法、化 学分解法等，但是这些方法不仅效率不高，费时费力， 且会造成营养成分的损失[16-17]。【拟解决的关键问题】 笔者尝试分离筛选出能够降解 DON 毒素的降解菌株， 对其进行生物学鉴定，并研究降解菌株的降解特性， 为利用该菌株去除 DON 毒素奠定基础。

关键词：小麦；脱氧雪腐镰刀菌烯醇；高效液相色谱法
小麦是全球三大谷物之一，易受到真菌毒素的污染。脱 氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）又名呕吐毒素， 属单端孢霉烯族化合物，由 YOSSHIZAWA 等于 20 世纪 70 年代在被镰刀菌污染的小麦等禾谷类食物中发现并鉴定，是 小麦中最常见的一类污染性霉菌毒素，严重影响小麦的品质 和安全 [1-2]。研究表明，DON 具有较强的毒性，易对人体健 康造成较大的威胁，已被联合国粮农组织和世界卫生组织定 为最危险的自然发生的食品污染物，也已被国际癌症研究机 构公布为三类致癌物之一 [3-5]。因此，本文以脱氧雪腐镰刀 菌烯醇为检测对象，采用高效液相色谱法进行检测，探究其 检测限、灵敏度和准确度，为食品监管体系中脱氧雪腐镰刀 菌烯醇筛查工作提供相关技术支撑。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂
标准溶液（100 μg/mL）：称取脱氧雪腐镰刀菌烯醇 1 mg （准确至 0.01 mg），用乙腈溶解并定容至 10 mL，将溶液转 移至试剂瓶中，-20 ℃下避光保存。
1.2 样品前处理 取小麦样品充分粉碎，置于 100 mL 三角瓶中，4 ℃保存。
1.3 实验步骤 称取 25 g 粉碎的小麦试样和 5 g 聚乙二醇，加水至 100 mL，
图 1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的色谱图
作者简介：吴基杰（1996—），男，安徽马鞍山人，本科，助理工程师。研究方向：毒素及微生物检测。 通信作者：闫超（1993—），男，安徽合肥人，博士，工程师。研究方向：食品分析检测。E-mail:yanchao19930215@ 。
110 食品安全C导o刊p2y02r1年i7月ght©博看网 . All Rights Reserved.
混 匀 后 置 于 超 声 波 中 超 声 20 min。 然 后 6 000 r/min 转 速 下离心 10 min，收集滤液 A 于干净的容器中。移取上述 滤 液 A 2.0 mL， 以 1 滴 /s 的 流 速 通 过 免 疫 亲 和 柱， 并 用 10 mL 水淋洗免疫亲和柱，流速约为 1 ～ 2 滴 /s，弃去全部 流出液，抽干小柱。最后加入 2 mL 甲醇洗脱亲和柱，控制

热处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素的去除作用邹忠义;黄斐;孙建利;冯志;石瑞婷;李洪军【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)013【摘要】研究热处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和T-2毒素的去除作用.测试不同温度、不同加热时间、不同pH值条件下热处理对DON和T-2毒素影响,采用高效液相色谱-质谱测定毒素及其衍生物,采用外标法定量.DON在中酸性条件下,121℃加热60 min,DON浓度保持稳定,碱性条件能促进DON的热降解.T-2毒素在中酸性条件下,105℃加热30 min开始降解,121℃处理pH值为7的1.0μg/mL T-2毒素溶液60min,T-2毒素去除率分别为(51.98±3.37)%,碱性条件能促进T-2毒素的热降解.在一定条件下,热处理对DON、T-2毒素具去除作用.【总页数】5页(P6-10)【作者】邹忠义;黄斐;孙建利;冯志;石瑞婷;李洪军【作者单位】公安海警学院后勤管理系,浙江宁波315801;公安海警学院后勤管理系,浙江宁波315801;公安海警学院后勤管理系,浙江宁波315801;公安海警学院后勤管理系,浙江宁波315801;公安海警学院后勤管理系,浙江宁波315801;西南大学食品科学学院,重庆400716【正文语种】中文【相关文献】1.紫外光辐照对脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素的去除作用 [J], 邹忠义;黄斐;李洪军2.畜禽产品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素残留分析 [J], 邹忠义;贺稚非;李洪军;韩鹏飞;孟晓;周芳;罗理勇3.毛细管柱-气相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇含量 [J], 唐吉旺;周丛;林源;陈鹏飞;钟文涛;吴海智4.基于LTQ-Orbitrap检测粮食及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇 [J], 黎永乐;李苑雯5.猪肉和鸡肉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素酶联免疫吸附检测方法的建立 [J], 宋晓丽;刘梅轩;罗湘蜀;李成龙;杨术鹏;王战辉;张素霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Ｚ Ｂ Ｂ— Ｃ ８柱 （ 捷 伦 公 司 ） 氮 气 吹 干 仪 ＯＲ ＡＸ Ｓ １ 安 ；
ｋ 。啤酒 大麦 是 啤 酒 酿 造 的 主要 原 料 ， 容 易 感 染 ｇ 很
Ｄ ＯＮ， 麦过 程 中 ， Ｎ 会 影 响大 麦发 芽 ， 啤酒 大 制 ＤＯ 使 麦 的发 芽率 低 于 ９ Ｌ ， 致 产 生 的 酶 和 浸 出 物 减 ５ ２ 导 ］ 少 。Ｄ ｏＮ 还 可能导 致 啤 酒 的喷 涌 ， 酒 色 泽 的改 变 啤
害性列 入 国际控பைடு நூலகம்制 研 究 的优 先 地位 。欧 盟 委 员会 规
１ 材 料 与方 法
１ １ 实 验 材 料 ．
甲醇 ： Ｌ ＨＰ Ｃ级 色 谱纯 ； Ｎ 标 准 品 ： 国 ＳＧ－ Ｄ０ 美 Ｉ
ＭＡ公 司 ， 度 ９ ； 纯 ９ 聚乙二 醇 （ Ｅ ： 子 量 ８ ０ 。 Ｐ Ｇ） 分 ０ ０
１ ３ 实 验 方 法 ．
１３ １ 采 ． ． 样
或产 生 臭味等 ＿ 。 ３ ］ 目前 主要 的检测方 法 有薄层 色 谱法 （ Ｃ 、 ＴＬ ） 酶联 免疫 法 （ ｕ ｓ 、 相 色 谱 法 （ Ｅ Ａ） 气 ＧＣ） 液 相 色 谱 法 、 （ Ｃ 等 。Ｔ Ｃ是最早 建 立 的一 种 检 测 方法 ， Ｌ ） Ｌ 具有 简
准确 测定 啤 酒 大 麦 中的 ＤＯＮ 含 量 决 定 于多 个
因素 ， 正确采 样 是 首 先 应 解 决 的 问题 。Ｄ ＯＮ 在 大 麦
中分布 非常 不均 匀 ， １个 麦粒 Ｄ 如 ＯＮ 的污 染可 达 到
运 用 免疫 亲 和柱 和 高 效 液相 色谱 （ Ｌ 检 测 啤酒 ＨＰ Ｃ） 大 麦 中的脱 氧 雪腐 镰 刀 菌 烯醇
王 志 萍 ， 德 良 冯 作 山 杨 静 王 晓 娟 陈 旭 王 ， ， ， ，

谱联用法 （Ｃ Ｍ ）等 。这 些方法 对 于同 时检测 几 种混合 毒 Ｃ ．Ｓ ， 索均有其优缺 点。其 中，最灵 敏的方法 是 Ｇ ・ Ｓ ，最 简便 ＣＭ 法 的方法是 Ｔ Ｃ ， Ｌ 法 实验室最常用的方法是 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法 。
样 品 Ｄ Ｎ毒索 （ Ｏ 层析 纯 ） ，自制 。Ｄ Ｎ标 准品毒 索 （ Ｏ 纯
Ｙ Ｎ Ｊ ｎ，ＺＨＡＮＧ Ｈｏ ｇｙｎ ，Ｚ Ｉ ｕ ｎ －ｉｇ ＨＡＮＧ Ｈａ－ｉ ｌｂｎ‘，ＨＥ Ｃ ｅ ｇ ｈ ａ ｈｎ －ｕ
（ ｏｌ ｅｏ ｅ ｒ ａ ｄ ｉｅ ａｊ ｇＡ ｒ ｕｔｒｌ ｎｖｒｔ， ａｊ ｇ２０９ ， ｈｎ ） Ｃ ｌｇ ｆ ｔ ｉ ｒ Ｍｅｉｎ ，Ｎ ｎｉ ｇｉ ｌ ａ Ｕ ｉ ｓｙ Ｎ ｎｉ １０ ５ Ｃ ｉ ｅ Ｖ ｅｎ ｙ ｃ ｎ ｃ ｕ ｅｉ ｎ ａ
Ａｂ ｔａ ｔ ｈ ｙｒ ｈｏ ａ ｇａｈ ｔｏ （ Ｌ ，ｈｇ－ｅ ｏｍ ｎｅｌ ｕ ｈｏ ａｏｒ ｈ Ｈ Ｌ ｓｒ ｃ ：Ｔ ｉ ｌ ｅ ｒｍ ｔ ｒｐｙｍｅ ｄ Ｔ Ｃ） ｉ ｐｒ ｒ ａｃ ｉ ｉ ｃｒｍ ｔｇ ｐ ｙ（ Ｐ Ｃ）ａ ｄｇｓｃｒｍ ｔ ｒｐｙｍ ， ｎａ ｃ ｏ ｈ ｈ ｆ ｑｄ ａ ｎ ａ ｈ ａ ｇａｈ－ ｓｓ ｏ ｏ ￥
醇 （ Ｏ ）毒索，结合现有的标准检测法 ，我们建立并 比 ＤＮ ｊ
较 了 ， Ｃ、Ｈ Ｌ ｒ Ｌ Ｐ Ｃ、Ｇ ＣＭＳ等方法 。
对 Ｄ Ｎ的迁移值 （ Ｏ 附）的报道，说法不一 ，差别很大。 本试验结合 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ方法 ，确定了展开剂氯仿：甲醇 （０ １） ９ ：０
展开 Ｄ Ｎ毒索 的 附 值 。这样可 以大大方便通过薄层层 析进一 Ｏ
关键词 ：脱氧雷腐镰刀菌烯醇；检测； Ｌ ；Ｈ Ｌ ；Ｇ － Ｓ Ｔ Ｃ Ｐ Ｃ ＣＭ 中豳分类号 ：￥１ ８６ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：０ ２ ￣１ ０ ２ ０ ）０ ＯＯ －３ ５ ９ ３ （ ０６ １－Ｏ ６０

免疫亲和柱净化-高效液相色谱法同时检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物王培;徐广超;尹丽梅;黎睿;谢刚【摘要】建立脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）及其衍生物3－乙酰基—脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3－A－DON）和15－乙酰基—脱氧雪腐镰刀菌烯醇（15－A－DON）的免疫亲和柱净化—高效液相色谱同时检测方法。

小麦样品经超纯水提取、免疫亲和柱净化、吹干、定容后，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行DON、3－A－DON和15－A－DON三种毒素的同时检测，并与液相色谱质谱法比对。

结果表明：该方法检出限，DON、3－A－DON和15－A－DON均为100μg／kg，样品加标回收率范围86．6％～96．5％，变异系数小于10％，具有较好的准确性和精密度。

该方法简单、快速、灵敏度高、选择性好，适用于小麦中DON、3－A－DON和15－A－DON的同时检测。

%The method to determine deoxynivalenol (DON),3-acetyl- deoxynivalenol (3-A-DON) and 15-acetyl-deoxynivalenol (15 -A -DON )in wheat simultaneously by immune affinity column clean-up and high performance liquid chromatography was established. The wheat samples were extrac-ted by ultrapure water,cleared up with the immuno-affinity column (IAC). After drying and constant volume,three toxins,DON、3-A-DON and15-A-DON,were detected simultaneously by high per-formance liquid chromatograph with UV detector,and compared with that by Liquid chromatography mass spectrometry. The result showed that the detection limit of method was 100μg/kg for DON,3-A-DON and 15-A-DON respectively. Recovery rates in wheat spiked with DON,3-A-DON,and 15-A-DON,ranged from 86. 6% to96. 5%. The variation coefficient was less than 10%. This method was suitable for determination of DON,3 -A-DON,and 15 -A-DON in wheat,with the advantages of simplicity,rapidness,sensitivity and goodselectivity,veracity and precision.【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2015(023)001【总页数】4页(P63-66)【关键词】免疫亲和柱;脱氧雪腐镰刀菌烯醇;3-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇;15-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇;高效液相色谱【作者】王培;徐广超;尹丽梅;黎睿;谢刚【作者单位】山东省粮油检测中心，山东济南253303;国家粮食局标准质量中心，北京 100037;北京华安麦科生物技术有限公司，北京 102002;国家粮食局科学研究院，北京 100037;国家粮食局科学研究院，北京 100037【正文语种】中文【中图分类】R155.5脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，俗称呕吐毒素(vomitoxin)，是一种由镰刀菌属等产生的毒性代谢产物，属于单端孢霉烯族化合物[1]，3-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3- acetyl- deoxynivalenol ,3-A-DON)和15-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-acetyl-deoxynivalenol , 15-A-DON)是其衍生物[2]。

猪胃组织中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的液质联用检测卢培成，剡海阔1，曾振灵1，贺利民1，梁梓森1，范小龙1，邓衔柏1，邹新华2（1.华南农业大学兽医学院，广东广州510642；2.八维生物科技有限公司，江西赣州341200）摘要：以脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素（Deoxynivalenol，DON）为检测对象，建立了一种检测猪胃组织中DON的液质联用分析方法。

样品经乙腈∶水(80∶20，V/V)提取，varian Bond Elut Mycotoxin净化柱净化后，收集提取液并于45℃水浴氮气吹干，乙腈∶水(20∶80，V/V)溶解，经0.22μm微孔滤膜过滤后，以反相C18柱为色谱柱，甲醇、纯水溶液梯度洗脱为流动相，电离离子源电离后质谱检测。

结果显示，DON在2～100ng/mL范围内线性关系良好(r2>0.99)；检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为2μg/g和5μg/g；低、中、高浓度（5、20、50μg/g）的回收率分别为71.8%、89.5%、87.4%，RSD分别为6.75%、9.82%、6.39%。

表明该方法操作简单，灵敏度高，适用于猪胃组织中DON的检测。

关键词：液相色谱-质谱联用；猪；胃组织；脱氧雪腐镰刀菌烯醇中图分类号：S852.6文献标识码：A文章编号：1004-874X(2011)09-0114-03Detection of deoxynivalenol in gastric tissueof pig by LC-MS/MS methodLU Pei-cheng1,YAN Hai-kuo1,ZENG Zhen-ling1,HE Li-min1,LIANG Zi-sen1,FAN Xiao-long1,DENG Xian-bo1,ZHOU Xin-hua2(1.College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou510642,China;2.Ba-wei Biotechnology company,Ganzhou341200,China)Abstract:The appropriate method of liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS/MS)was built for detecting deoxynivalenol (DON)in gastric tissue of pig.The DON was extracted by the solution that acetonitrile∶H2O(80∶20,V/V)cleaned up by varian Bond Elut Mycotoxin clean-up column,evaporated to dryness at45℃water bath by nitrogen,dissolved by acetonitrile∶water(20∶80,V/V)solution and filtrated through0.22μm micromembrane.After that,the deoxynivalenol mycotoxin were separated in a Reversed-phase C18 chromatographic column with mobile phase of methanol and ultra-pure water and ionized by the chemical ionization.The signals of the mycotoxins were detected by mass spectrometry to qualification and quantization.The results showed that good linear correlations between the peak area and toxin concentration were found;the linear range for DON was2～100ng/mL(r2>0.99);limit of detection(LOD)was2μg/ mL and limit of quantitation(LOQ)was5μg/mL;the recoveries of low,medium and high concentration:5μg/g,20μg/g and50μg/g were 71.8%,89.5%and87.4%,respectively;RSD were6.75%,9.82%,6.39%,respectively.The results indicated that this method was not only quantitatively accurate,but also high sensitive and convenient for operation,and suitable for detection of gastric tissue deoxynivalenol.of pig.Key words：LC-MS/MS;pig;gastric tissue;doxynivalenol镰刀菌毒素是一类非蛋白的萜烯及甾类化合物，由分布极为广泛的镰刀菌代谢生成，主要污染玉米、小麦、燕麦等农作物及动物饲料。

液相色谱检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇前处理过程的优化季一顺;胡斌;周红梅;汪桃花;吴云;马艳;王新文【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(032)003【摘要】在利用液相色谱检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的过程中,前处理过程尤为重要,对液相色谱检测结果影响很大.在GB/T 23503-2009前处理方法的基础上,通过对称量定容,均质仪器的选择、洗脱之后氮吹与否、氮吹之后定容比例等关键点的调整优化,消除了由于称样方式和均质方法造成的测定误差.所得的测定结果与通过酶联免疫得到的DON含量相比较,由偏离很大回归到正常的误差范围以内.研究发现,在消除前处理造成的影响的同时,利用浓缩定容DON,使得DON液相响应值提高.【总页数】3页(P56-58)【作者】季一顺;胡斌;周红梅;汪桃花;吴云;马艳;王新文【作者单位】安徽省粮油产品质量监督检测站,安徽合肥230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,安徽合肥230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,安徽合肥230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,安徽合肥230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,安徽合肥230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,安徽合肥230031;安徽省粮油产品质量监督检测站,安徽合肥230031【正文语种】中文【中图分类】TS207【相关文献】1.多功能柱净化-高效液相色谱法同时检测小麦中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇 [J], 隋凯;李军;卫锋2.小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的液相色谱检测与胶体金试纸法分析比较 [J], 栾振祥3.小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的液相色谱检测与胶体金试纸法分析比较 [J], 栾振祥;4.高效液相色谱法用于小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测与去除的研究 [J], 关嘉成;苗力;卢杰;徐雅晴;于纯纯;徐胜伟5.液相色谱法和液质联用法检测玉米中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的比较 [J], 姚霞;聂立;兰瑞容;彭章明;崔小亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

ρ1--试样溶液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的浓度，（ng/mL）；
ρ0--空白试样溶液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的浓度，（ng/mL）V--样品洗脱液最终定容体积，（mL）；
f--样液稀释因子; m--样品的质量，（g）.
计算结果保留三位有效数字。
质控
（自控）
情况
样品总数
平行样个数
质控样个数
仪器使用情况使用前：使用后：
高效液相色谱法分析（脱氧雪腐镰刀菌烯醇）原始记录
受理号：第1页，共页
检测项目
脱氧雪腐镰刀菌烯醇
检测开始时间
年月日
检测依据
GB 5009.111-2016第二法
检测结束时间
年月日
检测方法
免疫亲和层析净化高效液相色谱法
温度及相对湿度
℃ %
仪器名称及型号
Waters高效液相色谱仪
仪器编号
××/××-
FA2004电子天平
检验人：复核人：审核人：
高效液相色谱法分析（脱氧雪腐镰刀菌号
试样质量
(g)
定容体积
（mL）
峰面积
（A）
浓度
（ng/mL）
结果
（ug/kg）
平均值
（ug/kg）
相对偏差
（%）
备注
试验允差要求：≤23%
仪器使用情况使用前：使用后：检验人：复核人：审核人：
××/××-074
样品处理情况
按照GB 5009.111--2016对样品进行处理。
标准使用液
脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准使用液:100μg/mL
仪器
检测条件
检测器：PDA检测器
色谱柱：C18反相柱
波长：218 nm
柱温：35 ℃