浅析高效液相色谱在药物分析中的应用_论文
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高效液相色谱技术在药物分析中的应用本科生毕业论文论文题目: 高效液相色谱技术在药物分析中的应用学生姓名:孙琮莘学号:20XX0000学院:药学院专业方向:中药学班级:20XX级03班指导教师:李*论文完成日期:20XX年4月毕业论文(设计)诚信声明书本人声明:本人孙琮莘(学号:20XX0000)所提交的毕业论文《高效液相色谱技术在药物分析中的应用》是本人在指导教师李*老师指导下独立研究、写作的成果,论文中所引用他人的无论以何种方式发布的文字、研究成果,均在论文中加以说明;有关教师、同学和其他人员对本文的写作、修订提出过并为我在论文中加以采纳的意见、建议,均已在我的致谢辞中加以说明并深致谢意。
论文作者:(签字) 时间: 20XX年 6 月日指导教师已阅:(签字) 时间: 20XX年 6 月日毕业论文(设计)版权使用授权书本毕业论文《高效液相色谱技术在药物分析中的应用》是本人孙琮莘(学号:20XX0000)在校期间所完成学业的组成部分,是在指导教师李*老师的指导下独立完成的。
因此,本人特授权山东中医药大学药学院可将本毕业论文的全部或部分内容编入《山东中医药大学药学院本科生优秀毕业论文集》(非正式出版)。
论文作者: (签字) 时间: 20XX年 6 月日指导教师已阅: (签字) 时间: 20XX年 6 月日高效液相色谱技术在药物分析中的应用孙琮莘(20XX级中药学专业03班学号:20XX0000)[摘要]本文着重阐述了高效液相色谱技术在药物分析中的应用,主要包括对于天然药物、抗生素、手性药物、毒性药物、违禁药物、体内药物的分析及杂质检查,并对高效液相色谱技术的应用进行了展望。
[关键词]高效液相色谱技术;药物分析;应用The application of high performance liquid chromatography inpharmaceutical analysis[Abstract] This paper focuses on the the application of high performance liquid chromatography inpharmaceuticalanalysis. It mainly includes the analysis of natural drugs, antibiotics, chiral drugs, toxic drugs, illegal drugs, internal medicine and impurity test. The application of high performance liquid chromatography was prospected.[Key words]high performance liquidchromatography;Pharmaceuticalanalysis; application1 高效液相色谱技术高效液相色谱技术(High performance liquid chromatography)也称高效液相色谱,是色谱法的一个重要分支,是在经典液相色谱法的基础上于逐渐发展起来的[1-2]。
高效液相色谱 -质谱联用技术在药物分析中的应用摘要:近些年,诞生了诸多新型的药物分析方式,比如说高效液相色谱-质谱联用技术,其在药物分析中的应用比较广泛,其先进性极高。
为此,文章阐明了高效液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用的研究背景,深入分析了高效液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的具体应用,希望能为相关同行业者提供有价值的参考。
关键词:高效液相色谱-质谱联用技术;药物分析;具体应用前言:色谱法的一个重要分支是高效液相色谱技术,其在具体运用中流动相为液体,相较于单独的任何一种色谱检测技术,高效液相色谱技术的优势在准确、快速。
目前,质谱分析方法也与其进行了高效结合,即高效液相色谱-质谱联用技术,也就是此次研究的主要方式,该种技术被广泛应用于有机化学领域中,为药物分析工作奠定了坚实可靠的基础。
1研究背景药物分析是将药物应用到临床实践过程中的必要环节,因此一种有效地药物分析方法是十分重要的。
色谱技术的主要作用是分离分析复杂的化合物,而质谱法则能够在一次分析中体现出较为完整的结构信息。
高效液相色谱—质谱联用是分离化学检验的一次突破,其将色谱技术和质谱技术检测的优点进行了充分的结合,能够应对药物分析的检测需要。
高效液相色谱技术是以经典液相色谱技术为基础,同时融入了气相色谱技术而发展起来的一项检测技术。
其在应用过程中,能够快速的完成分析过程,同时在最大程度上保持检验的质量。
质谱分析方法的主要作用是对离子荷质比的测量,给结构定性提供较为全面的信息。
液相色谱—质谱联用是有机质谱仪的重要种类,具有很高的灵敏度,促进色谱和质谱的匹配程度,更大程度上提高离子化效率。
二者联用,能够最大程度上发挥出互补优势,给药物分析工作带来极大的便利。
2高效液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用2.1在复杂成分筛选中的应用目前,仍有一些成分较为复杂的药物,其具体的成分组成、药效机制、活性成分和代谢途径仍未得到精准确定,使得这些药物的推广应用受到很大阻碍。
高效液相色谱法应用论文【摘要】目的:探究高效液相色谱法在药物分析中的实际应用。
方法:研究高效液相色谱法在药物分析中的特点及其在药物成分中的测定。
结果:高效液相色谱法在药物分析中的应用范围较广泛,取得了良好的效果。
结论:高效液相色谱法拥有灵敏度高、专属性强等优势特征,在药物分析领域内具有广阔的应用发展前景。
【关键词】高效液相色谱法;药物分析;应用;分离;药物成分高效液相色谱法是一种发展于上世纪70年代的快速、高效分析分离技术【1】。
该方法通常以液体溶剂充当流动相,并密切结合气相色谱法和液相色谱法分析分离的基本原理,具有见效快、高灵敏度、速度快等优势特征。
相较于气相色谱法,液相色谱法仅试剂制作成溶液即可,而忽略了气化过程,所以,并不受到试剂挥发作用的影响和制约。
该方法也用作分析分离沸点高、热稳定性能低、相对分子质量较大的有机物。
本文主要研究高效液相色谱法在药物分析中的特点及其在药物成分中的测定。
1高效液相色谱法在药物分析中的应用1.1抗生素分析抗生素通常是由微生物及其他办法所产生的一种化学物质,在高度稀释的条件下依然具备抑制及消灭微生物的基本功能。
对抗生素进行分析、分离及定量检测是药物分析中难度较大的领域,较普遍用到的办法为化学方法、分光光度法及微生物法等,然而,这三类方法的弊端在于耗费时间较长、专一性欠佳【2】。
目前运用在临床中的一类酯类抗生素——阿奇霉素具备较广泛的抗菌谱,有助于抑制流感嗜血杆菌、黏膜炎莫拉菌及肺炎链球菌等。
在酸性条件下,阿奇霉素的平稳性仍然较高,具备生物应用程度高、半衰期长及吸收性优良的特征。
据科学检测,PH值对分离阿奇霉素的影响较大,在PH11左右的环境中拥有较显著的分离效果。
高效液相色谱法具有分析时长较少、流动相耗费少及质谱联用的特征,在阿奇霉素的检测领域有着可靠的应用优势,通常所选的检测波长为215nm,在<5min 的时间段内即可使阿奇霉素完成基线分离,有效地节省了分析时间。
高效液相色谱法在药物分析中的应用与发展摘要:色谱分析作为重要的分离分析技术,已成为药物研制开发、生产单位、药品检验部门及医院临床检验等各个领域中药物质量控制必不可少的方法和技术。
高效液相色谱法是20世纪60年代末70年代初出现的分析速度快、分离效率高、操作自动化的新型色谱分析方法。
它已逐渐成为药物分析领域中重要的分析手段及主要制备方式之一。
关键词:高效液相色谱法药物分析1.前言高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography , HPLC),又称“高压液相色谱法”或“高速液相色谱法”,是20世纪60年代末,在经典液相色谱的基础上引入气相色谱的理论与实验方法,并加以改进而发展起来的一种重要分离分析方法。
HPLC采用了高压输液泵,高效固定相和高灵敏度在线检测器等技术,具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组容易收集、适用范围广和安全等优点,特别适合挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物的分离分析测试,广泛应用于医学、药学、化学、生化、工业、农业、环保、商检和法检等科学领域错误!未找到引用源。
近年来,高效液相色谱法在药物分析中发挥着越来越重要的作用,主要是鉴别相关物质、检查药物中有关物质的含量限度以及测定有效成分或主要成分含量,世界各国已将该法收载于药典。
本文就高效液相色谱法在药物分析研究中的应用和发展综述如下。
2.高效液相色谱法在药物分析中的应用2.1高效液相色谱法在药物鉴别中的应用在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别。
如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。
头孢拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。
王维剑[7]王维剑,张军仁,庞华.替莫唑胺含量测定方法的研究[J].药物分析杂志,2003 ,23 (5) :344.等以ODS柱,甲醇-0.5%乙酸(1:9)为流动相,DVD检测器,波长329 nm测定了一种新型抗肿瘤药替莫唑胺(temzolo-mide),为申报新药提供了数据。
高效液相色谱技术在药物分析中的应用随着现代医学的发展,药物研发得到了大幅度提升。
在药物研发与生产中,药物分析是非常关键的环节。
药物分析的目的是确定药物的成分、组成以及质量,保证药物品质符合国家相关标准。
而高效液相色谱技术,作为药物分析的重要手段之一,能够高效、准确地分析复杂药物体系中的成分,得到越来越广泛的应用。
1. 高效液相色谱技术的基本原理高效液相色谱是一种利用液相作为移动相,利用在固体表面上固定的较细小的粒子作为固定相,将化学样品分离的技术。
具体原理是将混合物通过高效液相色谱仪的色谱柱,各成分分别被不同类型的固定相吸附,发生不同程度的速度差异从而实现分离。
2. 高效液相色谱在药物分析中的应用(1) 成分分析:通过高效液相色谱技术可以快速、准确地鉴定药物成分。
目前,许多药物的成分具有多强制的性质,因此利用高效液相色谱技术可以大大提高鉴定的准确性。
(2) 药物代谢物分析:在药物代谢的过程中,药物会被分解成不同的代谢产物。
通过高效液相色谱技术可以对不同的药物代谢产物进行分离和检测,从而更好地掌握药物的代谢过程。
(3) 药物稳定性分析:药物在制备、贮存、使用过程中,可能会遇到各种不同的环境改变,例如温度、湿度等。
由于不同的药物成分和环境条件所致,药物会出现降解和分解,并且会对药物的质量和稳定性产生不良影响。
高效液相色谱技术可以对药物稳定性进行分析,找出影响药物稳定性的因素,并针对性地采取措施进行保护和稳定。
(4) 药品质量控制:药品质量控制是保证药品质量的关键手段。
通过高效液相色谱技术对药物样品进行检测,可以依据检测结果对药品的质量进行监控,及时排除不合格的药品,从而保证药物的稳定性和有效性。
3. 高效液相色谱技术在药物分析中的优势高效液相色谱技术在药物分析中具有许多优势,主要有以下几点:(1) 高分辨率:高效液相色谱技术具有出色的分离能力,因此能够准确地检测药物中微小成分的变化。
(2) 高效性:高效液相色谱技术具有快速的分析速度和高度的自动化程度,因此可以实现高效的分析。
高效液相色谱在药物分析中的应用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是分析化学中一种非常重要的手段。
在药物分析中,HPLC广泛应用于药物含量测定、杂质分析、药代动力学、药物失效机理分析、药物交互作用等方面。
因为其高灵敏度、高分离度、高准确性、高重现性等优点,被誉为现代化学分析的“铁路”。
HPLC分析原理简介HPLC的分离原理是根据样品分子在固定相和流动相之间的互相作用力不同,利用固定相呈现出的分子选择性吸附作用来实现分离。
在HPLC分析过程中,固定配合物和悬浮在流动相中溶质之间通过相互作用,使流动相中的溶质与固定相结合并阻止经过的过程成分的运动而实现分离。
高效液相色谱在药物分析中的应用1.药物含量及其杂质检测药物含量及其杂质是药物分析的重要内容。
通过HPLC可以对药物及其杂质进行可靠、灵敏、准确的检测。
例如,HPLC可以用于测定药物的纯度、杂质、活性成分、含量等。
例如,按照中国药典2015年版的规定,通过HPLC分析测定头孢曲松钠药品中的含量,结果表明该药品中含有98.4%的头孢曲松钠。
2.药物代谢动力学分析药代动力学研究是药物研发过程中必要的环节,可以分析药物在体内代谢和排泄的情况。
药物代谢动力学研究是药物治疗效果和合理用药的依据。
因此,HPLC 非常适合进行药物代谢动力学研究。
例如,使用HPLC测定维生素B2代谢动力学的过程中,首先通过内标法选取L-色氨酸等内标物,然后用HPLC分离并测定维生素B2及其代谢产物蒽醌,结果表明HPLC是非常适合于测定维生素B2代谢动力学的方法。
3.药物失效机理分析药物的失效机理是因为药物有可能产生不希望的肝毒性或其他副作用,使得药物失效。
HPLC分析可以用于药物失效机理的分析。
例如,HPLC可以用于分析站立喹啉失效的原因,结果表明站立喹啉受热环境下会分解,并产生过氧化物,导致药物失效。
4.药物交互作用分析药物与药物之间的相互作用可能会使药物的疗效大为降低或增强。
高效液相色谱技术在药物分析中的应用研究摘要:高效液相色谱(HPLC)技术是一种广泛应用于药物分析领域的分离和检测技术。
随着药物的快速研发和市场需求的不断增长,药物的质量控制和分析要求越来越高。
本文将重点探讨高效液相色谱技术在药物分析中的应用,包括药物的分离、纯化和检测等方面。
引言:药物分析是指对药物原料、中间体、制剂及其代谢产物等进行分离、纯化和定量的过程,是药物研发、生产和质量控制的重要环节。
高效液相色谱技术以其高分离效果、快速和灵敏的检测特点,成为现代药物分析领域的主要分析方法之一。
本文将以具体的实例来阐述高效液相色谱技术在药物分析中的应用研究。
一、药物的分离与纯化:高效液相色谱技术在药物分离与纯化方面具有很大的优势。
以某种具有药理活性的天然产物为例,通过高效液相色谱技术可以对其进行有效的分离和纯化。
首先,通过样品的前处理,如提取、萃取等,得到药物中的目标成分。
然后,选择合适的色谱柱和流动相,根据上样体积、流速等参数进行条件优化,以实现对复杂样品的高效分离。
最后,通过检测器对分离出的药物成分进行定性和定量分析。
高效液相色谱技术可以快速准确地分离出含有药理活性成分的纯品,并为后续的生物学活性研究提供可靠的样品。
二、药物的质量控制:高效液相色谱技术在药物质量控制方面发挥着重要作用。
药物的质量控制包括对原料药和制剂的纯度分析、含量测定和杂质检测等方面。
通过高效液相色谱技术可以对药物的成分及其相对含量进行快速准确的分析。
例如,对于某种含有多个成分的制剂,可以通过高效液相色谱技术对每个成分进行定量分析,并计算出其相对含量。
同时,高效液相色谱技术还可以用于药物杂质的检测,如有毒杂质、掺假成分等,确保药品的质量和安全性。
三、药物代谢产物的分析:药物代谢产物的分析是药物研发和临床应用中重要的环节之一。
通过分析药物代谢产物可以了解药物在人体内的代谢途径和药效学特性。
高效液相色谱技术在药物代谢产物的分析方面具有较高的灵敏度和选择性。
高效液相色谱在药物分析中的应用1. 引言高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一种常用的分析技术,在药物分析中具有广泛的应用。
本文将重点讨论HPLC在药物分析中的应用。
2. HPLC原理HPLC是一种基于液相色谱理论的分析方法。
它通过将待测样品溶解于流动相中,然后经过色谱柱进行分离。
在流动相的作用下,不同组分在色谱柱中的分配系数不同从而分离出来。
最后,通过检测器对溶液中各成分进行检测和定量。
3. HPLC在药物质量控制中的应用药物质量控制是药物研究的重要环节,也是保证药物质量安全和有效的关键。
HPLC作为一种高效的分析方法,广泛应用于药物质量控制中。
3.1 药物纯度分析HPLC可以对药物的纯度进行准确、灵敏的分析。
通过对药物样品进行分离和检测,可以确定药物中的各组分含量及其相对含量。
这对于判断药物的纯度和品质非常重要。
3.2 趋近分析在药物制剂中,常常需要确定目标化合物的含量。
HPLC可以通过与外部标准品对照,从而定量分析出样品中目标化合物的含量,以评估药物制剂的质量。
3.3 配方的优化HPLC可以通过分析各成分的保留时间和峰面积,来优化药物制剂的配方。
比如,可以通过调整溶剂体系、流速等参数,对药物的各组分进行优化,从而提高药物的质量和效果。
4. HPLC在药代动力学中的应用药代动力学是研究药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄等过程的学科。
HPLC在药代动力学中的应用主要包括:4.1 药物吸收动力学研究HPLC可以通过测量药物在生物体内的浓度改变,研究药物的吸收动力学过程。
比如,通过分析血浆或尿液中的药物浓度变化,可以评估药物在体内的吸收速度和吸收率。
4.2 药物代谢动力学研究HPLC可以通过测量药物在生物体内的代谢产物,研究药物的代谢动力学过程。
通过分析血浆、尿液或其他生物样品中的代谢产物,可以评估药物的代谢速率和代谢途径。
5. HPLC在药物质量控制和研究中的挑战与发展方向虽然HPLC在药物分析中有广泛的应用,但仍然存在一些挑战和问题。
高效液相色谱分析技术在药物研究中的应用高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析技术,广泛应用于药物研究领域。
本文将介绍HPLC技术在药物研究中的应用,包括质量控制、新药研发和药代动力学等方面。
一、质量控制中的HPLC应用在药品生产过程中,质量控制是必不可少的环节。
而HPLC技术的高灵敏度和选择性使其成为药物质量控制的重要手段之一。
首先,HPLC可以用于药物含量的测定。
药物的含量决定了药品的疗效和安全性。
HPLC通过分离和检测药物中的成分,可以准确地确定药物中有效成分的含量,从而保证药品的质量。
其次,HPLC可以用于药物残留的检测。
在药物生产过程中,可能会存在未完全反应的原料或辅料残留。
这些残留物可能对人体健康造成潜在的风险。
通过HPLC技术,可以对药品中的残留物进行分离和定量分析,确保药品的安全性。
二、新药研发中的HPLC应用HPLC技术在新药研发过程中扮演着重要的角色。
在药物的研发过程中,需要对药物的结构和性质进行全面的分析和评价,而HPLC提供了一个高效、准确的工具。
首先,HPLC可用于药物代谢产物的分离和检测。
在药物代谢过程中,药物会被转化为不同的代谢产物。
这些代谢产物可能对药物的药效和安全性产生影响。
通过HPLC技术,可以将药物代谢产物与其他物质进行分离,从而进行详细的分析和鉴定。
其次,HPLC可用于活性成分的分离和纯化。
在新药研发过程中,需要从大量的化合物中筛选出具有药理活性的成分。
HPLC可以通过分离和纯化目标成分,从而提供纯净的化合物用于进一步的药效评价。
三、药代动力学中的HPLC应用药代动力学研究关注药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄等过程。
HPLC在药代动力学研究中的应用,有助于了解药物在体内的行为和代谢途径。
首先,HPLC可以用于血浆药物浓度的测定。
血药浓度是了解药物在体内的吸收和代谢过程的重要指标。
通过HPLC技术,可以对血浆中的药物进行分离并进行定量分析,进而推断药物在体内的代谢速率和消除速率等关键参数。
高效液相色谱技术在药物分析中的应用第一章:引言高效液相色谱技术(HPLC)是一种目前常用的分离和分析药物的技术。
药物分析是药学领域一个重要的研究方向,药物的治疗作用和副作用是药物研究的重要内容。
因此,对药物分析技术的研究是药学研究的重要组成部分。
在本文中,我们将介绍HPLC技术在药物分析中的应用。
第二章:HPLC技术的原理HPLC技术是一种高效的分离和分析技术,其原理是将样品通过高压力泵加入进样口,然后经过固定相柱,移动相将不同成分分离出来,最终通过检测器检测分离出的成分。
HPLC技术相比传统的分离技术,具有分离速度快、分离效率高、灵敏度高等优点。
第三章:HPLC技术在药物分析中的应用3.1 药物成分的分离使用HPLC技术可以很好地分离药物中不同的成分。
药物常常含有多种成分,这些成分之间的分离十分复杂。
HPLC技术可以通过对移动相和固定相的优化,将药物中的不同成分分离出来。
这对于了解药物的成分组成和副作用很重要。
3.2 药物代谢产物的检测HPLC技术可以检测到药物代谢产物,这对于了解药物的代谢过程和药物在体内的作用也很重要。
药物代谢产物是药物在体内代谢后的物质,有时会比药物本身更具有生物活性。
因此,药物代谢产物的检测对药物研究有着重要的意义。
3.3 药物含量的测定使用HPLC技术可以准确地测定药物中活性成分的含量,这对于药物的质量控制和药物治疗效果的评估都很重要。
HPLC技术可以通过对移动相、固定相等操作的优化,准确地测量药物中活性成分的含量。
3.4 药物安全性评估药物的安全性评估是药物研究中的重要内容,使用HPLC技术可以对药物的代谢产物、副作用产物等进行检测和分析,对药物在体内的安全性进行评估。
这是药物研究中不可或缺的环节。
第四章:总结本文简要介绍了HPLC技术在药物分析中的应用。
HPLC技术在药物分析中具有分离速度快、分离效率高、灵敏度高等优点。
使用HPLC技术可以对药物成分分离、代谢产物检测、药物含量测定、药物安全性评估等进行检测和分析,对药物研究有着重要的意义。
浅析高效液相色谱在药物分析中的应用班级10级生物技术学号110122801252 姓名冯越越摘要高效液相色谱技术是现在检测防腐剂的常用技术,通过此技术同时检测多种防腐剂,不仅省时而且省力。
本实验的难点就是确定流动相的组成、配比、流速以及检测波长,以求同时检测出以上四种防腐剂。
确定方案之后,本实验的重点就是样品的前处理,样品的检测,检测方法的稳定性与准确性。
本论文的目的旨在准确测定防腐剂的含量,并希望引起广大消费者的关注。
关键词液相色谱;气相色谱;药物分析引言 HPLC近年来在食品分析检测上应用后,扩大了分析检测范围,提高了分析水平,尤其对食品中残留的微量,痕量有毒有害物质,能快速,准确的分析出来,进一步提高了食品卫生质量,保障了食品安全和人民身体健康,促进了食品出口。
HPLC法在食品分析检测中有广泛的应用前景。
1高效液相色谱的简介高效液相色谱简称HPLC,又称高速或高压液相色谱。
该法吸收了普通液相层析和气相色谱的优点,经过适当改进发展起来的,既有普通液相层析的功能,又有气相色谱的特点(即高压,高速,高分辨和高灵敏度)。
HPLC是近年来迅速发展起来的一项新颖的分离技术,不仅适用于很多不易挥发,难热分解物质(如蛋白质,肽类,氨基酸及其衍生物等)的定性定量分析,而且也适用于上述物质的制备和分离。
HPLC法由于兼备液相和气相两种色谱分析方法的优点,近年来在食品检测和分析上应用并飞速发展。
1.1HPLC与气相柱色谱法(GC)相比较,主要有以下几点优势:(1) GC的分析对象仅限于蒸汽压低、沸点低的样品(仅占有机物总数的20%),不适于分析高沸点有机物、高分子化合物、热稳定性差的有机物及生物活性物质。
而HPLC不受此限制,能对80%的有机物进行分离与分析。
(2)GC流动相为惰性气体,不能与待测组分发生作用。
HPLC流动相选择余地大,可与待测组分发生作用,而且通过改变流动相的组成,可改善分离的选择性(相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数)。
(3)GC通常在高温下进行,HPLC可以室温下进行分离与分析。
(4)非破坏性检测器在HPLC中的使用,可使样品回收(特别是少量珍贵样品)或样品的纯化制备成为可能。
1.2HPLC的特点(1)分离效能高。
由于高效微粒固定相的使用,使理论塔板数可达到103~104块/m,远远高于GC的103左右(填充柱)。
(2)选择性高。
因为流动相可与样品组分发生相互作用,所以,通过改变流动相的组成,可以达到控制和改善分离过程选择性的目的。
因此,HPLC不仅可以分析不同类型的有机物及其同分异构体,而且已在合成药物和生化药物的生产与控制分析中发挥了重要作用。
(3)检测灵敏度高。
HPLC中应用的检测器大多数都有较高的灵敏度。
高压输液泵的使用,使HPLC分析一个样品仅需几分钟至几十分钟。
[2]1.3HPLC的局限性(1)在HPLC中,所用流动相不止一种(多种),因此其分析成本高,且易起环境污染;当进行“梯度洗脱”操作时(相当于GC中的程序升温技术),比GC的程度升温操作要复杂的多;(2)HPLC目前还缺少像GC中的通用型检测器(如TCD、FID);(3)HPLC不能替代GC。
当要求柱效高达10万块理论塔板数以上时,只能用GC中的毛细管色谱柱;(4)在200kPa~1Mpa柱压下易分解、变性的生物活性的生化样品,不易用HPLC分析。
1.4高效液相色谱仪HPLC仪器的工作过程为:高压泵将贮液器(或槽、罐)中的流动相溶剂经进样器送入色谱柱,然后从控制器的出口流出(通常要回收)。
当注入待测样品时,流经进样器的流动相将样品各组分带入色谱柱中进行分离,分离后的各组分依一定的顺序进入检测器,检测器产生的信号由记录仪记录下来,最后形成液相色谱图。
1.4.1高压输液泵这是HPLC仪器中的着急部件之一。
它一般由贮液器、高压输液泵、过滤器等组成。
高压输液泵应该具备密封性好、输出流量恒定、压力平稳、可调范围宽、便于更换溶剂及耐腐蚀等条件。
常用的输液泵有恒流泵和恒压泵两种,而恒流泵用的较多(因为它的输出流量能始终保持恒定,与色谱柱引起的阻力大小无关),而恒压泵用的较少。
恒流泵又分为机械注射泵和机械往复泵,后者用的最多。
1.4.2进样系统由于HPLC色谱柱比GC色谱柱短的多(约5~30cm),所以,引起色谱峰峰形变宽的因素以柱外因素为主(即:进样系统、连接管道及检测器中存在的死体积)。
而柱外展宽(色谱柱外因素引起的峰形变宽)又分柱前和柱后展宽,以进样系统所引起的柱前展宽为主要因素1.4.3分离系统色谱柱是其核心部件之一。
通常用φ4~5mm,5~30cm长度的不锈钢管作高压色谱柱,内装5~10μm的全多孔型高效微粒固定相。
[2]1.4.4检测系统用于HPLC仪的检测器有两类,一类是溶质型检测器,它仅对被测组分的物理或化学特性有响应,属于此类的有:紫外、荧光及电化学检测器等。
另一类是总体检测器,它是对试样及洗脱液总的物理或化学性质有响应,属于此类的有:示差折光、电导等检测器。
[3]在实际工作中, 应根据具体情况来选择适宜的检测器。
而在HPLC仪器的常规分析中,紫外检测器用的最多。
除了这四大部分之外,还有一些附属的(有的甚至是不可缺少的)部件,如:脱气、梯度淋洗、自动进样、恒温、馏分收集及数据处理等装置。
2. 高效液相色谱在药物分析中的应用高效液相色谱在药物分析中的应用范围越来越广,高效液相色谱由于具有高选择性、高灵敏度,并可同时用于有关物质检查与含量测定的特点,已成为医药研究的有力工具。
如在中草药有效成分的分离和纯度测定、人工合成药物成分的定性和定量测定、新型高效手性药物中手性对映体含量的测定以及药物代谢物的测定等方面都需要用到HPLC的不同测定方法予以解决。
而目前高效液相色谱的蒸发光散射检测器的应用更体现了它在药物分析中的重要地位。
2.1 天然药物分析天然药物的来源有动物、植物和矿物之分,其中以植物类为主。
由于天然药物的化学成分复杂,其有效成分,可能有一个,也可以有多个,这对于控制药品质量,建立质量标准来说比较困难,HPLC可通过对天然药物的有效成分进行分离鉴定,再测定有效成分的含量;通过指纹图谱建立识别模式,可以判定药材的质量高低。
2.2 天然药物及复方成药分析复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。
增免扶正片系由当归、党参、黄芪等十几味天然药物精制而成,具有益气生津、活血养血、滋补肝肾、健脾开胃之功效,主要用于抗缺氧、抗疲劳、抗衰老,长期服用可扶正祛邪,提高机体免疫功能,健身强体,益寿延年。
该药对心、肝、脾、肾虚、纳差、心脑血管疾病、神经衰弱、慢性肝炎、脂肪肝等都有较好的防治作用。
由于化学药品的开发费用昂贵,而且毒副作用大,近年来人们已把目光转向自然、民族传统医药、草药、植物药等天然药物,据世界卫生组织统计,当前全世界60多亿人口中80%的人使用过天然医药。
在全世界药品市场中,天然物质制成的药品已占30%,国际上植物药市场份额已达300亿美元,且每年以20%以上的速度增长。
HPLC分析必定能为我国传统中医药实现现代化,走向世界提供强有力的技术支持。
2.3 抗生素分析抗生素是由微生物或其他方法产生的化学物质,在高度稀释的情况下仍具有抑制或杀灭其他微生物的性能。
抗生素的分离、分析和定量测定是药物分析中较困难的领域。
采用较多的方法是微生物法、分光光度法和化学方法,但所需时间较长、专一性较差。
HPLC分析技术近年来在抗生素的质量控制中已广泛应用。
对结构、组分等较清楚的药物,HPLC分析将逐步取代传统的生物测定。
目前,各国药典中应用HPLC技术对抗生素进行质量控制的项目包括鉴别、组分分析、含量测定和相关物质测定等。
2.4 手性药物分析在生物体内,几乎所有具有重要生理意义的有机生物分子都有手性(chirality),绝大多数都是旋光性物质。
两种化学组成、分子式完全相同的化合物,但因组成化合物的原子在空间取向不同,而成为镜像的化合物,称为手性化合物。
由于对映体的物理、化学性质相同,实现它们的分离就比较困难,如大多数氨基酸都有右旋体和左旋体,但往往只能获得右旋体和左旋体的混合物。
手性药物往往呈现一种对映体具有强的生物活性和药效,而另一种却无效。
近年来,对手性药物的拆分定量分析进行了广泛深入的研究。
其中,对生物体液中药物对映体的分离分析,有利于了解各种对映体的药代动力学、体内代谢过程和生物利用度。
因此对手性药物对映体的拆分也是HPLC分析的热点。
手性HPLC拆分法是以现代HPLC技术为基础引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异而进行分离。
HPLC法拆分手性药物对映体可分为直接法和间接法。
前者是将不对称中心引入分子间,可分为手性流动相添加剂(CMP)法和手性固定相(CSP)法;后者又称为手性试剂衍生化(CDR)法,它是将不对称中心引入分子内。
手性试剂衍生化法是将对映体经手性试剂衍生,生成非对映异构体后,利用常规HPLC方法进行分离和测定。
适用于不宜直接拆分测定的化合物如手性脂肪胺类、醇类等。
该法分离效果好,分离条件简便,但对手性衍生试剂的要求较高,操作比较麻烦,多在其它方法无法实现时才采用。
对生物样品中对映体拆分过程中,由于内源性物质及代谢产物的干扰,单用HPLC分析,易造成谱峰重叠,不能直接分析体内手性药物。
目前,使用多柱偶联技术已成功解决了该类问题。
目前,HPLC是在手性药物拆分中应用最多的方法之一,可以预见,该方法因其具有快速、方便、精确的特点,在未来的手性药物研究中,将得到更广泛的应用。
2.5 在药物鉴别中的应用在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别.2.6 在杂质检查中的应用HPLC分离效能高,灵敏,在药物的杂质检查中应用广泛.主要用于药物中有关物质的检查.“有关物质”是指药物中存在的合成原料,中间体,副产物,降解产物等物质,这些物质的结构和性质与药物相似,含量很低,只有采用色谱的方法才能将其分离并检测.若杂质是已知的,又有杂质的对照品,可用杂质对照品做对照进行检查.若杂质是未知的,可以采用主成分自身对照法或峰面积归一化法进行检查.2.7 在含量测定中的应用用高效液相色谱法侧定含量可以消除药物中的杂质,制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰.中药材及其制剂组成复杂,基中不少有效成分的含量测定也越来越多地采用了高效液相色谱法.2.8 在体内药物分析中的应用HPLC由于测定迅速准确,流动相选择范围广,灵敏度高(10-12 g/mL以上),填充柱种类多,且可供选择的检测器也多。