肠杆菌科鉴定(全)

肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。

1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。

1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。

1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。

1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。

血标本不要冷冻。

1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。

2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。

4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。

结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。

注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。

（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。

所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。

若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。

4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。

结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。

4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。

结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。

4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。

结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。

4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。

结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。

长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类革兰氏阴性菌，广泛存在于土壤、水体和动植物体内，包括一些重要的致病菌。

长春阴沟是一个具有特殊环境的地方，肠杆菌科的检测和鉴定成为了评估环境污染和食品安全的重要手段。

以下是长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法。

1. 样品采集与处理：从长春阴沟中采集水样、土壤样或者其他可能存在肠杆菌科的样品。

样品应当采集之后立即送往实验室进行处理，以避免结果的误差。

2. 培养基选择：选择适合肠杆菌科生长的培养基，例如大肠杆菌选择性琼脂培养基（MacConkey Agar）、肠球菌选择性琼脂培养基（Xylose Lysine Deoxycholate Agar）等。

3. 接种与培养：取样品进行接种，可以通过涂布法、点刺法或浸渍法进行。

接种后，将培养基置于适宜温度（通常为37摄氏度）下培养一定时间（通常为24-48小时）。

4. 形态观察：观察培养物的形态特征，肠杆菌科菌落常常呈现出光滑且圆形的形态。

5. 肽聚糖酶试验：常用的肠杆菌科鉴定方法之一是进行肽聚糖酶试验。

该试验通过检测菌落中的特定酶活性来判断是否属于肠杆菌科。

如甲基红-VP试验、氧化/发酵糖试验等。

6. 生化特性鉴定：可以通过测定菌株的生化特性，如产气性、产酸性、利用特定碳源等来鉴定肠杆菌科细菌。

常用方法包括三糖铁琼脂（TSI）培养基试验、尿素氨酶试验、甲基红-VP试验等。

7. 分子生物学方法：近年来，利用PCR、基因测序等分子生物学技术也被广泛应用于肠杆菌科的鉴定。

通过检测菌株的DNA序列可以更加准确地确认肠杆菌科的种类。

总之，通过样品的采集、培养、形态观察、生化特性鉴定和分子生物学方法，可以对长春阴沟中的肠杆菌科进行鉴定。

这些基本方法在评估环境污染和食品安全方面起到了重要作用。

实验三：肠杆菌科的检验一、接种细菌：MAC培养基接种大肠埃希菌和变形杆菌，SS培养基接种福氏志贺菌和乙型副伤寒沙门菌，采用分区划线法，放在35℃温箱中培养18—24h。

二、观察肠道杆菌在MAC和SS平板上的菌落形态。

1、SS平板：1）福氏志贺菌形成无色、半透明、光滑、湿润、突起、直径为1—2mm大小的菌落；2）乙型副伤寒沙门菌为中心带黑褐色，其余部分为半透明、光滑、湿润、突起的小菌落2、MAC平板：1）大肠埃希菌形成红色、圆形、凸起、边缘整齐、多数为光滑型的菌落。

中等大小。

2）变形杆菌为圆形、扁平、无色、半透明的菌落。

三、涂片、革兰染色将玻片分为四个区域，并分别标记，将四种肠道杆菌分别在四个区域内的生理盐水中研磨，待其自然干燥后固定，采用“改良快速法”进行染色，结果如图所示：福氏志贺菌乙型副伤寒沙门菌变形杆菌大肠埃希菌G-杆菌G-直杆菌，较细长G- 杆菌G-直短杆状显微镜检查特征为革兰阴性杆菌，肠杆菌科多数细菌的形态及染色性相似，根据形态及染色性难以相互鉴别。

四、生化试验：1、氧化酶试验（纸片法）：在滤纸条上滴一滴氧化酶试剂，用无菌接种环挑取待测菌落在滤纸条上滴了试剂的部位研磨，；滤纸变为红色则为阳性，不变色为阴性，结果表明，以上四种肠道杆菌的氧化酶试验均为阴性。

2、接种KIA、MIU上。

五、2、微量生化：六、沙门菌、志贺菌的血清学鉴定：1、在洁净载玻片上两端分别滴加一滴志贺菌四种多价血清和福氏四价血清，各取一环志贺菌在两种血清上研磨10S，观察两组结果均出现肉眼可见的凝集物，提示该菌为福氏志贺菌。

2、采用同上方法，在洁净玻片上分别在其两端滴加一滴沙门菌多价O（A—F）和Hd血清，各取一环待测菌与之混合，研磨10S，几分钟后观察两组结果，出现肉眼可见的颗粒状凝聚物表示该菌为乙型副伤寒沙门菌。

七、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。

糖发酵试验肠杆菌科鉴定的基本方法
糖发酵试验是一种常用的肠杆菌科鉴定方法，其基本步骤如下：
1. 首先准备含有对应糖类的培养基，如葡萄糖、乳糖、果糖、蔗糖等。

每种糖类分别制备一组。

2. 取不同菌落形态的待测菌涂于相应的糖类培养基表面。

同时在每种糖类培养基上均涂上一株阴性对照菌（如大肠杆菌）和一株阳性对照菌（如肠球菌）。

3. 培养板置于适宜的环境温度下进行培养。

4. 观察培养板上菌落的生长状况和糖类的发酵情况。

如果待测菌菌落周围出现黄色或者其他酸性产物，则表明该菌可以发酵对应的糖类。

5. 根据发酵结果，判定待测菌属于肠杆菌科。

6. 鉴定结果还可以进一步进行分子生物学检测，比如PCR扩增、序列检测等。

需要注意的是，糖发酵试验不是一种特异性非常高的鉴定方法，可能会存在一些假阳性结果。

因此，为了提高鉴定的准确性，还需要结合其他鉴定方法进行综合分析。