B族链球菌检测试剂

B族链球菌核酸检测试剂盒（PCR荧光探针法）B族链球菌（GBS）核酸检测试剂盒样本要求1.样本采集：采用藻酸钙、普通棉拭子或涤纶拭子采集生殖道或直肠等部位带上皮细胞的分泌物标本。

2．标本存放：待测样本在2-8℃保存不应超过24小时；-18℃以下保存不超过4天。

样品冻融6次以内无影响，但应尽量避免反复冻融。

3．标本的运输条件：冷冻4天内无影响，冷藏2天内无影响。

4.含血样本无法正常检测应避免。

5.研究显示，常用栓剂药物会对试剂检测盒造成较大影响，因此取样前应避免该药物的使用。

检验方法1.DNA提取（在样品处理区操作）（1）妊娠34―37周孕妇生殖道或直肠分泌物：取含有分泌物的生理盐水1ml，13000rpm离心10min，弃上清液，沉淀，加无菌生理盐水1ml混匀，13000rpm离心5min，弃上清。

沉淀加入50μlDNA提取液充分混匀，99℃―100℃加热处理10min，13000rpm离心10min，吸取上清至1.5ml离心管中保存，DNA提取完毕。

（2） GBS阳性对照品提取：取50μl GBS阳性对照品加入1.5ml离心管中，13000rpm离心10min，沉淀加入50μlDNA提取液充分混匀，99℃―100℃加热处理10min，13000rpm离心10min，吸取上清至1.5ml离心管中保存，DNA提取完毕。

（3）空白对照品提取：同GBS阳性对照品提取。

2.GBS PCR反应液配制（在试剂准备区进行）解冻试剂，在打开盖子之前振荡并短暂离心个试剂管。

按标本数量分装GBS PCR反应液。

按每管35μl分装至0.2mlPCR反应管中，转入样品处理区。

3.加样（在样品处理区进行）分装好的各反应管加入处理好的DNA样本5μl，阳性对照品5μl及阴性对照品5μl，短暂离心使所有试剂集中到反应管底部，确定盖好管盖或封膜后，立即进行PCR扩增反应。

4.PCR扩增（在PCR检测区进行）（1）UNG反应：50℃2min （2）预变性：95℃5min（3）PCR：45个循环；60℃时分别检测FAM和HEX通道荧光信号，选择反应体系40μl. 5.阈值测定阈值设定在空白对照正常扩增区线下方，基线设定可选择3-5个循环，一般选择5.00，若是最高浓度Ct值小于5.00，则在3-5之间按照低于最高浓度Ct值设定；这类标本应稀释后再进行检测。

B族链球菌（GBS）介绍一、简介B族链球菌（group B streptococcus，GBS）是革兰阳性球菌，也称无乳链球菌（S. agalactiae），常定植于成人下生殖道及胃肠道，同时也可定植于婴幼儿上呼吸道，是新生儿感染和死亡的主要原因。

GBS是围产期严重感染性疾病的主要致病菌之一，大约25%～40%孕妇的产道携带这种细菌，其中40%～70%在分娩过程中会传递给新生儿，大约有1%～3%的新生儿会出现早期侵入性感染，其中有5%会导致死亡。

二、适用人群：1．对所有孕妇于妊娠35～37周进行GBS筛查a)中华医学会妇产科学分会产科学组在《孕前和孕期保健指南（第1版）》中已将妊娠35～37周GBS筛查作为一个备查项目b)美国疾病预防控制中心在《围产期GBS预防指南》中已将GBS筛查定为普查项目2．对出现以下情况的新生儿进行GBS检测a)新生儿出现类似早发型GBS感染症状，如呼吸困难、发热等败血症迹象b)母亲在产前未做过GBS筛查的新生儿c)母亲在产前GBS筛查结果阳性的新生儿三、如何采样1.采样工具：一次性无菌拭子2.采样步骤1）在抗生素使用前取样①孕妇采样：a)生殖道分泌物采样：先拭去阴道过多的分泌物，用一支无菌拭子插入阴道至内1/3处，沿阴道壁轻轻旋转取得分泌物；b)直肠分泌物采样：用另一支无菌拭子插入肛门，在肛门括约肌以上约2.5cm处，沿肠壁轻轻旋转取得标本；c)将两支无菌拭子分别放入无菌套管中，密闭送检；（注意：“保妇康栓”等栓剂药物会对检测造成较大影响，因此建议避免在用药期采样，如无法避免，则仅单独采直肠分泌物样本送检即可）。

②新生儿取材：可在鼻孔、腋下、腹股沟和脐周等处随机采样，用一支无菌拭子旋转1周，放入无菌套管中，密闭送检。

2）无菌管标识：在相应的无菌管管壁上填写样本采集位置（孕妇生殖道/孕妇直肠/新生儿）、采样时间等。

3.样本运输：2-8℃冷藏运输，3天内送达。

四、结果解读（需要让赵翠写个专业的）1．B族链球菌核酸检测为“阴性”或测定值<1.0E+3 copies/ml：说明本次送检样品带菌量低于本试剂盒的检测限值，不需治疗，随时观察。

B族链球菌（GBS）介绍一、简介B族链球菌（group B streptococcus，GBS）是革兰阳性球菌，也称无乳链球菌（S. agalactiae），常定植于成人下生殖道及胃肠道，同时也可定植于婴幼儿上呼吸道，是新生儿感染和死亡的主要原因。

GBS是围产期严重感染性疾病的主要致病菌之一，大约25%～40%孕妇的产道携带这种细菌，其中40%～70%在分娩过程中会传递给新生儿，大约有1%～3%的新生儿会出现早期侵入性感染，其中有5%会导致死亡。

二、适用人群：1．对所有孕妇于妊娠35～37周进行GBS筛查a)中华医学会妇产科学分会产科学组在《孕前和孕期保健指南（第1版）》中已将妊娠35～37周GBS筛查作为一个备查项目b)美国疾病预防控制中心在《围产期GBS预防指南》中已将GBS筛查定为普查项目2．对出现以下情况的新生儿进行GBS检测a)新生儿出现类似早发型GBS感染症状，如呼吸困难、发热等败血症迹象b)母亲在产前未做过GBS筛查的新生儿c)母亲在产前GBS筛查结果阳性的新生儿三、如何采样1.采样工具：一次性无菌拭子2.采样步骤1）在抗生素使用前取样①孕妇采样：a)生殖道分泌物采样：先拭去阴道过多的分泌物，用一支无菌拭子插入阴道至内1/3处，沿阴道壁轻轻旋转取得分泌物；b)直肠分泌物采样：用另一支无菌拭子插入肛门，在肛门括约肌以上约2.5cm处，沿肠壁轻轻旋转取得标本；c)将两支无菌拭子分别放入无菌套管中，密闭送检；（注意：“保妇康栓”等栓剂药物会对检测造成较大影响，因此建议避免在用药期采样，如无法避免，则仅单独采直肠分泌物样本送检即可）。

②新生儿取材：可在鼻孔、腋下、腹股沟和脐周等处随机采样，用一支无菌拭子旋转1周，放入无菌套管中，密闭送检。

2）无菌管标识：在相应的无菌管管壁上填写样本采集位置（孕妇生殖道/孕妇直肠/新生儿）、采样时间等。

3.样本运输：2-8℃冷藏运输，3天内送达。

四、结果解读（需要让赵翠写个专业的）1．B族链球菌核酸检测为“阴性”或测定值<1.0E+3 copies/ml：说明本次送检样品带菌量低于本试剂盒的检测限值，不需治疗，随时观察。

GBS-DNA试剂准备标准操作规程
1.目的
规范B族链球菌核酸DNA定性检测的试剂准备操作。

2.范围
GBS-DNA 定性检测实验的PCR 反应液配制。

3.操作人员
PCR室在岗工作人员。

4. 操作步骤
4.1 GBS—DNA试剂准备
4.1.1 试剂复融：从冰箱中取出B族链球菌核酸检测试剂盒，从试剂盒中取出GBS- PCR 反应液、酶混合物、UNG，提取固形物、浓缩清洗液。

GBS - PCR 反应液置于室温复融，复融后把试剂震荡混匀并放于掌式离心机上离心5 秒。

酶混合液不需复融，震荡混匀后放于掌式离心机上离心5 秒，立即放回4 ℃冰箱。

4.1.2 排PCR 管：在PCR 管盒上排列n 个PCR 管（n ＝标本数＋阴性对照＋阳性对照)，并盖上PCR 盒盖。

4.1.3 配液：取出GBS-PCR反应液，将n×44.3μL GBS-PCR反应液，n×0.5μL Taq DNA Polymerase，n×0.2μL UNG加入一个离心管并振荡混匀，瞬时离心后，分装至n个PCR反应管，每管45μL，盖上管盖后转移到样本处理区的传递窗内。

4.1.4 清洗液制备：取出10×浓缩清洗液与灭菌纯化水按1:9进行稀释。

4.1.5 配液结束后立即把PCR 主反应液、酶混合物、UNG置于一20 ℃冰箱，将提取固形物、清洗液及阳性对照、阴性对照、内参照转移到样品处理区的传递窗内。

b族链球菌显色鉴定培养基说明书一、引言B族链球菌是一类常见的细菌，它们广泛存在于自然界中，包括土壤、水体、动植物体内等。

B族链球菌对人类和动物的健康有着重要的影响，因此对其进行准确的鉴定和检测具有重要意义。

本说明书旨在介绍一种新型的B族链球菌显色鉴定培养基，以帮助实验室进行准确的鉴定工作。

二、材料与方法1. 培养基配方：- 蛋白胨：10克- 葡萄糖：5克- 氯化钠：5克- 磷酸二氢钾：2克- 氯化钾：0.2克- 溴酚红：0.02克- 纯化水：1000毫升2. 培养基制备：a. 将蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、氯化钾溶解于纯化水中，加热至沸腾，搅拌均匀。

b. 将溴酚红溶解于适量的纯化水中，加入到培养基中，搅拌均匀。

c. 调整pH值至7.2-7.4。

d. 用适当容器装入培养基，高压灭菌。

三、结果与讨论B族链球菌显色鉴定培养基是一种基于显色反应的鉴定方法。

该培养基中的溴酚红能够与B族链球菌产生的酸性代谢产物发生反应，使培养基呈现红色。

通过观察培养基的颜色变化，可以初步判断是否存在B族链球菌。

在实际应用中，我们可以将待测样品接种于B族链球菌显色鉴定培养基上，然后进行培养。

如果培养基在24小时内呈现红色，说明存在B族链球菌。

如果培养基保持黄色，说明不存在B族链球菌。

需要注意的是，B族链球菌显色鉴定培养基只能初步判断是否存在B族链球菌，不能确定具体的菌种。

因此，在鉴定结果为阳性的情况下，还需要进行进一步的鉴定工作，如形态学观察、生化试验等。

四、结论B族链球菌显色鉴定培养基是一种简单、快速的鉴定方法，能够初步判断是否存在B族链球菌。

该培养基的制备方法简单，成本低廉，适用于实验室中的常规鉴定工作。

然而，需要注意的是，该培养基只能初步判断是否存在B族链球菌，不能确定具体的菌种，因此在实际应用中还需要结合其他鉴定方法进行综合分析。

通过本说明书的介绍，相信读者对B族链球菌显色鉴定培养基有了更深入的了解。

希望这种新型培养基能够在实验室中得到广泛应用，为B族链球菌的鉴定工作提供便利和准确性。

Y YT B族链球菌核酸检测试剂(荧光PCR法)1. 前言Y YT B族链球菌核酸检测试剂是一种基于荧光PCR法的检测试剂，用于检测人体内是否存在B族链球菌感染。

本文档将详细介绍该检测试剂的原理、操作步骤以及结果解读。

2. 原理Y YT B族链球菌核酸检测试剂采用荧光PCR法，利用特定引物和荧光探针共同作用，将目标DNA序列扩增并定量检测。

具体原理如下：1.样本预处理：将人体组织或体液中的B族链球菌核酸提取和纯化，获得含有目标DNA序列的模板。

2.PCR扩增：设计特异性的引物和荧光探针，与目标DNA序列特异结合。

在PCR反应中，引物与DNA模板结合并扩增，形成大量目标DNA。

3.荧光信号检测：在PCR反应中，荧光探针与目标DNA结合生成荧光信号。

通过荧光定量PCR仪读取信号强度并转化为DNA含量。

4.数据分析：根据荧光信号强度和DNA标准曲线，计算出样品中B族链球菌核酸的相对含量或绝对数量。

3. 操作步骤下面是使用Y YT B族链球菌核酸检测试剂的操作步骤：3.1 样本处理1.收集人体组织或体液样本，如咽拭子、尿液等。

2.根据检测要求，使用合适的方法提取和纯化样本中的DNA。

3.2 PCR扩增1.准备PCR反应液，包括引物、荧光探针、核酸酶、聚合酶等。

2.将提取的DNA样本加入PCR管中。

3.加入PCR反应液至PCR管中。

4.将PCR管放入热循环仪中，按照设定的程序进行PCR扩增。

3.3 荧光信号检测1.将PCR扩增后的反应体系加入荧光定量PCR仪中。

2.设置荧光信号检测条件，包括激发波长、发射波长等。

3.读取荧光信号强度，并将数据保存。

3.4 数据分析1.利用荧光信号强度和DNA标准曲线进行数据转化。

2.计算样品中B族链球菌核酸的相对含量或绝对数量。

4. 结果解读根据数据分析的结果，可以判断样品中是否存在B族链球菌感染。

一般情况下，若相对含量或绝对数量超过设定的阈值，则可以判断为阳性；否则，判断为阴性。

ICS11.100C 44YY 中华人民共和国医药行业标准YY/T XXXX—XXXXB族链球菌核酸检测试剂(荧光PCR法) Group B Streptococcus DNA detection kit (fluorescent PCR)（征求意见稿）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施目次前言.................................................................................................................................................................... I I 1范围.. (1)2规范性引用文件 (1)3要求 (1)4试验方法 (2)5 标签和说明书 (2)6 包装、运输、贮存 (3)附录A（资料性附录） (4)参考文献 (5)前言本标准按照GB/T1.1-2009 《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由国家食品药品监督管理总局提出。

本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会(SAC/TC 136)归口。

本标准起草单位：本标准主要起草人：B族链球菌核酸检测试剂（荧光PCR法）1 范围本标准规定了B族链球菌核酸检测试剂盒的要求、实验方法、标识、标签、使用说明书、包装、运输和贮存。

本标准适用于通过荧光PCR法原理，定性检测新生儿特定部位或女性阴道、直肠分泌物及其培养物中的B族链球菌，以快速检出B族链球菌核酸的诊断试剂盒。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T191 包装储运图示标志（ISO 780）YY/T 0466.1医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分：通用要求（ISO 15223-1）GB/T 29791.1 体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第1部分：术语、定义和通用要求3 要求3.1 外观外包装应符合制造商的要求。

B族链球菌核酸检测试剂的性能评价张睿; 徐英春; 吴洁; 窦亚玲; 伊洁; 叶阿里; 孔令君; 杨启文【期刊名称】《《中国医学装备》》【年(卷),期】2019(016)009【总页数】4页(P46-49)【关键词】B族链球菌; 细菌培养; 性能验证; 荧光定量PCR【作者】张睿; 徐英春; 吴洁; 窦亚玲; 伊洁; 叶阿里; 孔令君; 杨启文【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科北京市重点实验室北京 100730【正文语种】中文【中图分类】R197.39B族链球菌(group B streptococci,GBS),学名无乳链球菌(streptococcus agalactiae)是一种条件致病革兰阳性菌,正常健康人感染GBS并不致病,但近代临床观察发现其在引起孕妇感染、胎儿早产、发育不良、胎膜早破及晚期流产等[1]方面的影响越来越明显.新生儿GBS感染的临床表现有肺炎、脓毒血症、脑膜炎及菌血症等[2-3].近年来,荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术因其具有很好的特异性和敏感性而在临床广泛使用,应用该技术检测GBS能够缩短临床诊断时间,为进一步的治疗和预防提供方法和手段,极大提高检测效率,是孕妇产前筛查GBS感染的理想方法.本研究旨在验证荧光定量PCR技术对GBS检测的准确性和适用性,以及临床应用的可行性.1 材料与方法1.1 实验样本MALDI-TOF鉴定后的临床GBS菌株10株(108 CFU/ml),阴道-直肠分泌物拭子56例;干扰菌株包括A族链球菌(编号:16W06622)、肺炎链球菌(编号:16E06041)、草绿色链球菌(编号:16W06258)、粪肠球菌(编号:18BW06368)以及大肠埃希菌(编号:18FW02400)各一株(108 CFU/ml),-20 ℃保存.1.2 仪器与试剂采用ABI 7900型荧光PCR仪(美国赛默飞公司),使用ABI 7900 SDS Software2.4软件进行数据分析.GBS核酸检测试剂盒(上海之江/江苏硕世生物科技股份有限公司);PCR-荧光探针法的A和B试剂盒.1.3 操作步骤严格按照A和B试剂盒说明书,对同一样本进行核酸提取、PCR反应试剂配制和加样;分别计算A和B试剂盒检测的阴性、阳性个数.(1)A试剂的提取方法:样本试管中加入1 ml无菌生理盐水,充分震荡摇匀,吸取液体转至1.5 ml离心管中,13000 r/min离心5 min.沉淀加无菌生理盐水1 ml混匀,13000 r/min离心5 min,重复洗涤一次.沉淀直接加入100 μl核酸提取液充分混匀,同时加入内标1 L,99 ℃干浴或水浴10 min,13000 r/min离心10 min,取上清4 μl作为PCR反应模板.(2)B试剂的提取方法:取1 ml无菌生理盐水悬浮样本于1.5 ml离心管中,充分震荡后13000 r/min离心5 min.弃去上清,在洗涤后的标本中加入1管固态提取物(0.06 g玻璃珠),取50 μl DNA提取液加于1.5 ml离心管中,同时加入2 μl内部对照,高速涡旋震荡2 min,99 ℃干浴2 min,立即冰浴3 min,然后13000 r/min离心1 min,取上清5 μl可直接用于下游PCR加样扩增.1.4 实验方法及判定标准1.4.1 准确性实验(1)鉴定后的不同GBS菌株用生理盐水稀释成浓度为105 CFU/ml的10例,104 CFU/ml的10例,103 CFU/ml的1例,102 CFU/ml的1例,10 CFU/ml的1例;无菌生理盐水制成的阴性样本5例;阴道-直肠分泌物拭子56例,分别用两家试剂盒进行检测.(2)判定标准:总符合率、阳性符合率及阴性符合率应≥95%.1.4.2 重复性实验(1)将已知三份阳性标本(105 CFU/ml、104 CFU/ml及103 CFU/ml各1例)和一份阴性样本,重复测定5次,测定2 d,计算每个标本的重复性.通过循环阈值(cycle threshold,Ct)计算变异系数CV%.(2)判定标准:Ct值的变异系数≤5%.1.4.3 检测下限测定(1)鉴定后的临床GBS菌株:将上述临床GBS菌株一株稀释为104 CFU/ml、103 CFU/ml、102 CFU/ml及10 CFU/ml,每个稀释测试5次,计算标本检出率,选取其前稀释的值,确定该试剂的检测下限.(2)判定标准:若A和B试剂盒103 CFU/ml稀释品检出率均为100%,比较102 CFU/ml和10 CFU/ml检出率,以检出率更高者为优.1.4.4 携带污染测定(1)选取GBS阳性样本(105 CFU/ml3例,104 CFU/ml2例)5例,每个阳性样本后紧跟着无菌生理盐水制成的阴性标本,同时提取、扩增,重复进行4次.(2)判定标准:无菌生理盐水制成的阴性标本检测为阴性,即无携带污染.表1 A和B试剂与测序结果总符合率、阳性符合率和阴性符合率比较(%)检测试剂样本数(例) 阳性(例) 阴性(例) 阳性符合率阴性符合率总符合率A试剂 56 13 476.47 100 92.86 B试剂 56 17 0 100 100 1001.4.5 干扰和特异性试验(1)检测标本:对GBS(105 CFU/ml)中分别加入等体积5例生殖道可分离的A族链球菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、粪肠球菌及大肠埃希菌(105 CFU/ml)的检测,以保证试剂验证GBS的准确无误.(2)判定标准:加入GBS(105 CFU/ml)的5个样本检测为阳性,而未加入GBS的5个样本检测GBS为阴性.1.5 统计学方法采用Excel2007及SPSS17.0统计软件,进行总符合率、阳性符合率和阴性符合率比较.2 结果2.1 准确性验证(1)临床菌株准确性验证结果:A和B试剂盒检测GBS菌株(105 CFU/ml菌株和104 CFU/ml各10例),阴性样本5例与金标准(菌株鉴定)总符合率、阳性符合率和阴性符合率均为100%.(2)临床拭子标本准确性验证结果:样本经过测序所得序列经Blast比对,A试剂总符合率为92.86%,阳性符合率为76.47%,阴性符合率为100%>95%;B试剂总符合率、阳性符合率和阴性符合率均为100%,B试剂符合准确性验证要求,见表1.2.2 重复性和可报告范围性能验证A和B试剂检测GBS样本(105 CFU/ml、104 CFU/ml及103 CFU/ml)Ct值的CV均≤5%,3种含量标本的变异系数为B试剂较A试剂高.验证结果见表2.表2 A和B试剂Ct 值变异系数CV比较(%)检测试剂样本数 GBS菌株105CFU/ml 104 CFU/ml 103 CFU/ml A试剂 56 2.81 2.61 1.98 B试剂 56 3.703.104.042.3 携带污染和可报告范围验证每个阳性样本携带1个生理盐水制成的阴性样本重复检测4次,阴性对照实验结果均为阴性,表明生理盐水阴性对照为阴性,无携带污染,A和B试剂盒都符合要求. 可报告范围验证结论:含量为105 CFU/ml和104 CFU/ml样本判断为阳性;生理盐水制成的阴性样本判断为阴性,A和B试剂盒都符合要求.2.4 最低检测下限验证A和B试剂盒在样本含量为104 CFU/ml和103 CFU/ml检出率均为100%;在样本含量为102 CFU/ml检出率均为20%,10 CFU/ml检出率为0,因此A和B试剂盒最低检测下限均为103 CFU/ml.验证结果见表3.表3 A和B试剂检出率比较(%)检测试剂样本数 GBS菌株浓度104 CFU/ml 103 CFU/ml 102 CFU/ml 10 CFU/ml A试剂 56 100 100 20 0 B试剂 56 100 100 20 02.5 特异性和抗干扰能力验证加入GBS含量为105 CFU/ml的A族链球菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、粪肠球菌及大肠埃希菌5个样本检测GBS为阳性,而未加入GBS的5个样本检测GBS 为阴性.A和B试剂盒都符合特异性和抗干扰实验要求.3 讨论GBS是西方国家新生儿围生期感染的首要致病菌,也是引起早产和死胎的三大致病菌之一,美国疾病预防和控制中心于1996年、2002年和2010年制定修正了围生期GBS感染筛查及防治指南.我国对于GBS产前筛查未全面普及,孕产妇未常规行GBS筛查,北京地区孕产妇GBS阳性筛查率为7.1%,深圳为18.4%,台湾地区为20.0%[4-5].由于GBS近年来感染呈上升趋势,在新生儿感染方面引起了严重后果,所以能够快速准确的检测GBS成为临床确诊的关键前提[6-8].GBS的常规检测为细菌培养法,检测时间较长,而荧光定量PCR法具备其敏感性强,准确性高[9-10]等特点在临床实验室检测中作用日益突出.在对试剂进行多角度评估过程中,准确性的验证尤为重要,这是关系到实验结果是否可靠的前提;一个试剂是否能达到说明书的要求,正确的检测出靶基因并将其通过荧光信号的形式反映出来是关键所在.本研究实验从总符合率,阳性符合率(分析敏感性),阴性符合率(分析特异性)3方面对试剂进行准确性的评估.A试剂因总符合率(92.86%)和阳性符合率(76.47%)均<95%,不符合验证要求.重复性验证反映的是试剂稳定的指标,因为在同一时间,同一操作人员用同一批次和不同批次试剂重复加样,最终用Ct值的CV大小来量化.虽然A和B试剂在重复性验证过程中,CV值均≤5%,符合验证要求,但在含量为105 CFU/ml、104 CFU/ml及103 CFU/ml的3种含量的测定过程中,B试剂的CV值比A试剂高,这也反应出A试剂实际上在实验操作过程中较B试剂稳定.在携带污染的检测过程中,只要操作人员遵守分子生物学实验室的操作规定和试剂说明书要求,一般都会避免此类现象的发生.最低检测下线反映的是试剂能够检测到的菌液最小浓度的能力,将菌液从108 CFU/ml稀释到104 CFU/ml、103 CFU/ml、102 CFU/ml和10 CFU/ml的4种含量梯度进行重复检测,以检出率作为判定标准,A和B试剂在最低检测下线的验证中均相同(为103 CFU/ml).特异性和抗干扰能力反映的是试剂是否能够在样本中混杂有其他物质(干扰细菌)时还能够准确的捕捉靶基因的能力,因此本研究实验选取了阴道-直肠内常见的几种细菌,最终A和B试剂也都符合验证要求.A和B试剂在重复性、携带污染、最低检测下线、特异性和抗干扰能力验证方面均符合要求,但由于A试剂总符合率和阳性符合率均<95%,不符合验证要求,最终,B 试剂在性能验证过程中脱颖而出.本研究实验从多方面对试剂进行评估,确保试剂在应用于临床前的安全性和有效性. 参考文献【相关文献】[1]杨宇奇,张晓青,张峰,等.妊娠晚期孕妇B族链球菌筛查结果分析[J].现代医药卫生,2014,30(22):3370-3371.[2]黄薇,林广柳,国胜韦,等.新生儿B族链球菌脓毒症30例临床分析[J].中华实用儿科临床杂志,2017,32(22):1721-1724.[3]Suffolk R,Agertoft L,Johansen M,et teonset group B streptococcus infections and severe bronchopulmonary dysplasia in an extremely preterm born infant[J].BMJ Case Rep,2019,12(7)pii:e229255.[4]Lu B,Li D,Cui Y,et al.Epidemidogyof group B streptococcus isolatedfrom pregnantwomen in Beijing,China[J].Clin Microbiol Infect,2014,20(6):370-373.[5]Zhang J,Zhao R,Dong Y,et al.Invasive group B streptococcal infectionin infants in Shenzhen,China[J].Int J Clin Exp Med,2015,8(2):2939-2943.[6]Guan X,Mu X,Ji W,et a1.Epidemiology of invasive group B streptococcal disease in infants from urban area of South China,2011-2014[J].BMC Infect Dis,2018,18(1):14. [7]Brown AP,Denison FC.Selective or universal screening for GBS inpregnancy(review)[J].Early Hum Dev,2018,126:18-22.[8]Chang LY.Maternal colonization and neonatal group B streptococcal infection:time to universal screening and intrapartum chemoprophylaxis in Taiwan?[J].Pediatr Neonatol,2011,52(4):181-182.[9]Ferreira MB,de-Paris F,Paiva RM,et al.Assessment of conventional PCR and real-time PCR compared to the gold standard method for screening Streptococcus agalactiae in pregnant women[J].Braz J Infect Dis,2018,22(6):449-454.[10]Cools P,Melin P.Group B Streptococcus and perinatal mortality[J].ResMicrobiol,2017,168(9-10):793-801.。

国内围产期GBS 感染的预防工作可以借鉴美国CDC2010年发布的GBS 预防指南，对于怀孕35-37周的孕妇进行阴道和直肠的GBS 筛检，这样能够提高预防效率，节省资源，同时能够大量减少不必要的抗生素使用。

泰普GBS筛检方案4GBS 的现代分子生物学检测GBS 筛检方法对比实时荧光PCR 技术实时荧光PCR 一般流程：快捷的操作流程：3小时实时荧光PCR 技术，是指在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR 进程，最后通过扩增曲线对模板进行分析的方法。

随着实时荧光PCR 技术与相关PCR 仪的出现，彻底改变了以往利用末端法对基因进行检测的方法。

这种实时荧光PCR 技术较传统的方法有如下的优势：1）缩短实验时间，不需要进行PCR 后的电泳跑胶鉴定；2）由于数据的采集与分析都由仪器完成，不再依靠肉眼观察电泳的结果，所以检测的灵敏度与重复性大大提高；3）由于实时荧光PCR后无需开盖，所以可以非常好地防止污染的发生。

国外研究也显示，实时荧光PCR检测方法与标准的细菌培养方法在GBS检测的敏感性和特异性方面均达90%以上，达到筛检标准，已经得到美国食品和药品管理局（FDA）的批准并应用于临床。

因此，在国内采用实时荧光PCR技术进行GBS筛检是最快速、可靠的方法。

5泰普生物GBS核酸检测试剂盒产品预期用途本试剂盒基于实时荧光PCR技术平台，采用分子信标（Molecular Beacons）探针技术和特异引物技术，适用于临床样品中GBS的快速检测，可用于GBS感染的辅助诊断及疗效监控。

产品特点国内独家、技术领先；自主研发、专利技术；灵敏性高、特异性强；简便快捷、重复性好；闭管操作、避免污染。

GBS感染的防治预防GBS感染主要集中于从母婴双方消除GBS带菌状态(药物预防)着手或给新生儿保护性免疫(主/被动）。

药物预防及治疗青霉素一直以来作为预防治疗GBS感染的首选药物，目前最常用的预防及治疗方法是用青霉素G首剂500万单位静脉注射，每4—6小时250万单位；或氨苄青霉素首剂2g静脉注射，每4—6小时1g，直至分娩。

不同培养基及 B 族链球菌增菌肉汤检测 B族链球菌效果评价陆庭嫣;沈俐;唐振华【摘要】目的：通过分析B族链球菌（ GBS）检测的阳性检出率和平板选择性能来评价GBS筛查培养基、哥伦比亚血琼脂培养基和GBS增菌肉汤检测结果的可靠性和临床应用的可行性。

方法收集妊娠晚期35～37周孕妇阴道下端及肛周样本242例、中段尿样本15例，同时直接接种及经GBS增菌肉汤增菌后接种哥伦比亚血平板和GBS筛查平板，观察各培养基上GBS的生长情况。

结果直接接种后分别培养24 h和48 h，哥伦比亚血琼脂培养基GBS的检出率均为7．39％（19／257）；而GBS筛查培养基的检出率为24 h 5．45％（14／257）、48 h 7．39％（19／257）。

经GBS增菌肉汤增菌后，无论培养时间是24 h还是48 h，哥伦比亚血琼脂培养基GBS的检出率均为9．73％（25／257）；GBS筛查培养基的检出率均为8．95％（23／257）。

与直接接种相比，选择性增菌后GBS的检出率明显升高；2种培养基GBS的检出率差异无统计学意义（P＞0．05）。

结论临床样本先经GBS增菌肉汤18～24 h增菌后再接种至GBS筛查培养基或哥伦比亚血琼脂培养基，24 h即可观察生长结果，GBS 菌落易于辨认且提高了阳性检出率。

%Objective To evaluate the reliability of Group B Streptococcus ( GBS ) screening medium, Colombia blood agar medium and GBS enrichment broth detection results and investigate the viability of clinical applicationby analyzing the positive rate of GBS and the performance of selective plates.Methods A total of 242 samples from distal vaginal segment and around crissum and 15 midstream urine samples were collected among35-37-week pregnant women. The samples were inoculated directly and with one more step of GBS enrichment broth on Colombia blood agar andGBS screening media, respectively, and the growth of GBS in the 2 kinds of media was observed.Results As for inoculating directly, the detection rates of GBS in Colombia blood agar medium for 24 h and 48 h were7.39%(19/257) , and the 24 h and 48 h detection rates of GBS in GBS screening medium were 5.45%( 14/257 ) and 7.39%( 19/257 ) , respectively.As for inoculating with one more step of GBS enrichment broth, for neither 24 h nor 48 h, the detection rate of GBS in Colombia blood agar medium was 9.73%(25/257), and the detection rate in GBS screening medium was 8.95%(23/257), both of which had an evident increasing comparing with the former one.There was no statistical significance for the detection rate between the 2 kinds of media(P>0.05).Conclusions By enriching 18 h-24 h in GBS enrichment broth, followed by inoculating in GBS screening medium or Colombia blood agar medium, the growth of GBS from clinical samples in media could be observed just after 24 h, and this method has simple recognition ability for GBS and can improve GBS positive detection rate.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】4页(P890-893)【关键词】B族链球菌;B族链球菌筛查培养基;哥伦比亚血琼脂培养基;B族链球菌增菌肉汤;阳性检出率【作者】陆庭嫣;沈俐;唐振华【作者单位】上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院，上海200030;上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院，上海200030;上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院，上海200030【正文语种】中文【中图分类】R378.1B群链球菌(Group B Streptococcus，GBS)又称无乳链球菌(Steptococcus agalactiae)，是一种条件致病菌，是新生儿和孕妇围产期感染的重要病原菌，可造成孕妇菌血症、无症状菌尿症、羊膜炎和伤口感染等，造成新生儿败血症、肺炎和脑膜炎等［1-3］。