分离以尿素为氮源的微生物学案-浙科版高中生物选修1实验

实验2 分离以尿素为氮源的微生物1．实验原理 脲或称尿素，是 降解产物，有一些细菌含脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。

在尿素固体培养基中加入 指示剂，如有含脲酶的细菌存在，这些细菌会向外分泌脲酶，使培养基中的尿素分解产生氨，导致培养基pH 升高，颜色变 。

可用______________固体培养基作为对照。

2．实验步骤3．实验结果4．讨论分析·题组训练1．下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是（ ）A ．葡萄糖、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水B ．蛋白胨、酵母提取液、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水C ．葡萄糖、NaCl 、K 2HPO 4、酚红、琼脂糖、水、尿素D ．蛋白胨、酵母提取液、NaCl 、K 2HPO 4、水、尿素2．幽门螺杆菌（Hp ）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。

在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。

实验基本步骤如下：(NH 2)2C=O+H 2O 脲酶 2NH 3+CO 2请回答：（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现色环带。

（2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。

A．高压蒸汽 B．紫外灯照射 C．70％酒精浸泡 D．过滤（3）步骤X表示。

在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液到培养基平面上。

菌液稀释的目的是为了获得菌落。

（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在中。

若不倒置培养，将导致。

（5）临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_________分解为NH3和14CO2。

现从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如下图所示：3．（1）欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布个平板，通常以每个培养皿中有个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。

（2）接种后的培养皿于37 ℃的恒温箱中培养。

高中生物-分离以尿素为氮源的微生物1.菌种特点含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。

2.培养基用以尿素为唯一氮源的培养基培养，以3.实验原理(1)筛选以尿素为氮源的微生物，可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。

(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成氨气3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。

4.实验步骤5.反应的鉴定在配制培养基时，加入指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解并产生碱性的氨，使培养基上菌(1)分离以尿素为氮源的微生物时，配制的培养基中加入酚红作为酸碱指示剂，加入琼脂作为凝固剂(❌)(2)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类(错误)(3)从物理性状的角度看，选择培养基多属于固体培养基(正确)(4)对细菌进行计数只能采用涂布分离法，而不能用划线分离法(❌)精确——涂布(5)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源(正确)(6)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低(错误)如图为分离以尿素为氮源的微生物的实验，思考回答下列问题：(1)实验目的是使用含有尿素的培养基分离能产生脲酶的细菌，使用酚红指示剂作为指示剂。

(2)有脲酶的细菌菌落周围出现有色环带的原因是什么？细菌分泌脲酶，可以将尿素分解为氨气改变酸碱度，使酚红指示剂变红(3)制备尿素固体培养基的过程中采用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法、G6玻璃砂漏斗过滤法。

(4)从上图所示实验过程中可判断出细菌悬液C的稀释度为10^-4 。

1.幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。

在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。

实验基本步骤如下：配制培养基→灭菌、倒平板→X→培养→观察请回答下列问题：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有___脲酶_____，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现___红___色环带。

(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是______D____灭菌。

第一部分微生物的利用实验2 分离以尿素为氮源的微生物1本实验中的尿素培养基属于( ) A．选择培养基 B．鉴别培养基C．半固体培养基 D．无氮培养基2涂布分离细菌时使用的玻璃刮刀应保存在70%酒精中，取出后又要放在酒精灯火焰上灼烧，这2步分别属于什么技术( )A．灭菌、灭菌 B．消毒、消毒C．灭菌、消毒 D．消毒、灭菌3尿素又称脲，它是什么有机物降解的产物…()A．核酸 B．蛋白质C．淀粉 D．脂肪4本实验的土样最好取自( )A．有大量植物生长的地方取B．临水的地方取C．有哺乳动物排泄物的地方取D．干燥、空旷的地方取5分离以尿素为氮源的微生物所采用的分离方法是( )A．涂布分离法 B．划线分离法C．稀释分离法 D．选择分离法6脲酶的化学本质是( )A．脲 B．蛋白质C．尿素 D．核酸7下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是…()A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂糖、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂糖、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂糖、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水8有脲酶的细菌菌落周围出现着色环带的原因是( )A．外泌的脲酶将尿素水解成氨，氨为碱性，使酚红变为红色B．外泌的脲酶呈碱性使酚红变为红色C．外泌的脲酶将酚红分解成呈红色的物质D．酚红与脲酶反应后生成了呈红色的物质9将下列的实验步骤按正确的顺序排列( )①将培养皿倒置于恒温箱中培养24～48 h ②土壤取样③观察菌落数④样品稀释制备细菌悬液⑤将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上A．②④①⑤③ B．②①④⑤③C．⑤①④②③ D．②④⑤①③10分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O 、葡萄糖、尿素、琼脂糖。

实验二分别以尿素为氮源的微生物1.有一些细菌含有脲酶，它们能够经过降解尿素作为其生长的氮源。

利用以尿素作为唯一氮源的培养基即可分别出此类微生物。

2．在微生物学中，将赞同特定种类的微生物生长，同时控制或阻拦其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

3．以尿素为氮源的微生物能分解尿素产生氨，氨为碱性，酚红指示剂在碱性下为红色，红色地域大小代表脲酶活性强弱和含量的多少。

1．尿素又称脲，是蛋白质降解的产物。

在人和其他哺乳动物如牲口的尿中都含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。

2．以尿素为氮源的微生物的特点含有脲酶，经过降解尿素作为其生长的氮源。

其利用尿素的反应式为：(NH2) 2C＝ O＋ H2O脲酶 ,2NH3＋ CO2。

3．分别以尿素为氮源的微生物(1)实验原理：①在以尿素为唯一氮源的选择培养基上生计的微生物能以尿素为氮源。

②细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使 pH 高升，使酚红指示剂变红。

(2)培养基的比较：制备 LB 全营养培养基和尿素为唯一氮源的培养基，分别培养土壤中的微生物，并对菌落观察并计数。

(3)实验步骤：1．分别以尿素为氮源的微生物所采用的分别方法是()A．涂布分别法B．划线分别法C．稀释分别法D．选择分别法解析：选A微生物的分别方法多种多样，本实验使用了涂布分别法。

2．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数量，其结果与本质值对照()A．比本质值高B．比本质值低C．和本质值一致D．比本质值可能高也可能低解析：选B培养基上的一个菌落也可能由相连的两个或多个菌体生殖而来，并且该方法测得的是活菌的菌落数量，未包括死菌数，因此统计的活菌数要少于菌体本质值。

3．以下有关表达，错误的选项是()A．在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会致使培养基呈酸性B．地表土壤中含有必然量的脲C．以尿素为氮源的细菌含有脲酶D．脲是一种有机化合物，含有氮元素脲酶解析：选 A22232依照反应式： (NH ) C＝ O＋H O――→2NH＋ CO，在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会产生NH3，从而致使培养基呈碱性。

课时跟踪检测（二）分离以尿素为氮源的微生物1．从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示：(1)图中物质A为________________，若要统计每克土壤样品中以尿素为氮源的细菌的活菌数目，宜采用________________法接种到尿素培养基上，对照组配制的培养基为____________培养基，若用同浓度的土壤稀释液接种，实验组培养皿中菌落数____________(填“大于”“等于”或“小于”)对照组。

在能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现的原因是_______________________________________________。

(2)下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是( )A．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水B．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、尿素C．NaCl、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素D．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物(3)欲将分离得到的以尿素为氮源的细菌进行扩大培养，应使用________培养基。

答案：(1)无菌水涂布分离LB全营养小于能利用尿素的细菌产生的脲酶，将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂呈红色(2)B (3)LB液体2．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。

某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。

请回答下列问题：(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入______作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________(填“影响”或“不影响”)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用____________________法。

(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于__________________________________；使用________________________________法可以在⑥上获得单菌落。

第2课时 分别以尿素为氮源的微生物[学习目标] 1.进行微生物分别。

运用含有尿素的培育基，采纳涂布分别法，分别有脲酶的细菌。

2.运用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。

3.说明分别以尿素为氮源的细菌的试验原理。

4.举例说明本试验分别出来的细菌不肯定都是以尿素为氮源的细菌。

一、试验原理1.脲和脲酶(1)脲：又称尿素，是蛋白质降解的产物。

人和其他哺乳动物的尿中都含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。

(2)脲酶：降解尿素的酶。

(3)以尿素为氮源的微生物的特点：含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。

其利用尿素的反应式为：(NH 2)2C==O ＋H 2O ――→脲酶2NH 3＋CO 2。

2.试验目的(1)运用专一的培育基(含有尿素)分别专一的细菌(有脲酶的细菌)。

(2)利用指示剂颜色的变更检知酶(脲酶)所催化的反应。

3.试验原理(1)不同微生物利用的氮源种类不同，有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。

(2)尿素在脲酶的作用下降解产生NH 3，使培育基的pH 上升，培育基中的酚红指示剂变成红色。

4.两种培育基的比较 项目全养分LB 固体培育基 尿素固体培育基 培育基组成 0.25g 蛋白胨，0.12g 酵母提取物，0.25gNaCl ，0.5g 琼脂糖，25mL 水 0.025g 葡萄糖，0.12gNaCl ，0.12gK 2HPO 4，0.25mg 酚红，0.5g 琼脂糖，15mL 水，10mL 尿素溶液灭菌 方法高压蒸汽灭菌 10mL 尿素溶液采纳G6玻璃砂漏斗过滤灭菌，其余用高压蒸汽灭菌，60℃时两者混合 上述属于选择培育基的是尿素固体培育基。

用琼脂糖代替琼脂配制固体培育基的缘由是：琼脂中含有少量含氮化合物，用琼脂糖代替琼脂作为微生物培育基的固化剂，是为了尽可能使培育基中只含尿素一种含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被不能以尿素为氮源的细菌利用，有利于对以尿素为氮源的细菌的筛选。

第2课时 分离以尿素为氮源的微生物一、实验目的、原理1．实验目的(1)使用专一的培养基(含有尿素)分离专一的细菌(有脲酶的细菌)。

(2)利用指示剂颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的反应。

2．实验原理 (1)不同微生物利用的氮源种类不同，有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。

(2)尿素在脲酶的作用下降解产生NH 3，使培养基的pH 升高，于是培养基中的酚红指示剂变成红色。

思考 能在选择培养基上生长的肯定是所筛选的细菌吗？答案 原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的过程。

有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长和繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需要进一步验证。

探究1——注重方法1. 酚红指示剂的选择本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色的pH 范围是6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色。

以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的NH 3使培养基的pH 升高变成碱性，于是培养基中的酚红指示剂变成红色，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。

2．培养基的配制与灭菌上述是选择培养基的是尿素固体培养基。

用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因是：琼脂中含有少量含氮化合物，用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂，是为了尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被不能以尿素为氮源的细菌利用，有利于对以尿素为氮源的细菌的筛选。

思维拓展 常见选择培养基的用途不同(1)加高浓度食盐：用于筛选获得金黄色葡萄球菌。

(2)加青霉素：用于筛选获得真菌(酵母菌和霉菌)，原理是青霉素能破坏原核生物的细胞壁，杀死原核生物。

(3)缺少氮源的培养基：用于筛选得到自生固氮菌。

(4)缺少碳源的培养基：筛选自养型微生物。

3．分离原理尿素固体培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素为氮源；缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能正常生长繁殖，所以，用尿素固体培养基能够筛选出分解尿素的微生物。

实验2 分离以尿素为氮源的微生物【学习目标】1.使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。

2.利用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。

【教学重点】对土样的选取和选择培养基的配置【教学难点】选择培养基的配置【教学过程】（一）引入新课上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。

下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

（二）进行新课1.基础知识1.1 尿素是一种重要的氮肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2，这是因为细菌能合成脲酶。

1.2 科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。

所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。

〖思考2〗该培养基对微生物具有选择作用。

如果具有，其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。

1.3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。

除此之外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。

【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。

公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量1.4 采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是：（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数。

〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是：恰当的稀释度。

实验2 分离以尿素为氮源的微生物【学习目标】1.使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。

2.利用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。

【教学重点】对土样的选取和选择培养基的配置【教学难点】选择培养基的配置【知识链接】1.培养基一般都含有、、、四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。

2.培养基的分类：按照物理性质可以分为、、；按照化学性质分为和；按照用途分为和。

3.尿素可以为农作物提供肥，但是只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。

4.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：（1）；（2）。

【导学过程】（一）筛选菌株1.原理：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

2.方法：选择培养基定义：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

配制的依据：①在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，加入可以分离出酵母菌和霉菌。

加入高浓度的食盐可得到。

这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。

②培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。

如培养基中缺乏源时，可以分离固氮微生物。

③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。

④改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在环境中培养只能得到耐高温的微生物。

讨论1：怎样寻找耐高温的酶呢？讨论2.如何找到能够分解石油的细菌？（二）设置对照设置对照的主要目的对照试验的定义：（三）实验设计实验设计包括，所需、、用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。

（1）土壤取样从富含有机物、潮湿、pH≈ 的土壤中取样。

铲去，在距地表约cm 的土壤层取样。

（2）制备培养基准备牛肉膏蛋白胨培养基和用作为氮源的选择培养基。

牛肉膏蛋白胨培养基作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

（3）微生物的培养与观察将土样以1、10-1、10-2……依次等比稀释至10-7稀释度，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，（是否）更换移液管。

实验2 分离以尿素为氮源的微生物一、选择题1.土壤中有些微生物能利用尿素是因为( )A．其体内含有脲酶B．其体内含有氨(NH3)酶C．它能将CO2合成为有机物D．它们不需要氮源解析：选A。

能利用尿素的微生物就是因为体内含有脲酶，可降解尿素为其生长繁殖提供氮源。

2.从土壤中分离以尿素为氮源的微生物时，所用的LB培养基由以下哪一组成分构成( )A．蛋白胨、NaCl、水、酵母提取物、琼脂B．蛋白胨、NaCl、水、琼脂糖C．蛋白胨、NaCl、水、酵母提取物、琼脂糖D．葡萄糖、NaCl、水、酵母提取物、琼脂解析：选C。

LB培养基必须含五大营养元素：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子。

由于是固体培养基还必须有凝固剂，为与尿素培养基作对比，所用凝固剂不能带来氮源干扰，因此只能选择相对更为纯净的琼脂糖了。

3.用10－4稀释度的细菌悬液分别涂布于LB、尿素培养基上，培养后的结果，以下叙述正确的是( )A．LB培养基上未出现任何菌落B．尿素培养基上出现的菌落数量和种类都多于LB培养基上的C．尿素培养基上出现的菌落数量和种类都少于LB培养基上的D．尿素培养基上是不可能出现菌落的解析：选C。

LB培养基为完全培养基，会出现大量菌落。

尿素培养基上只有能以尿素做氮源的微生物能存活，因此其上的菌落数量和种类都将会减少。

尿素培养基上出现的菌落就是能利用尿素的那些微生物菌落。

4.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。

A同学的结果产生原因可能有( )①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④解析：选A。

该同学可能取的土样不同，可取其他同学的土样进行培养，同时将未接种的培养基同时培养，如果结果不是大约50个菌落，可能是培养基污染或操作有误；如果结果和其他同学数据相同，且未接种的培养基没有菌落生成，说明是土样不同。

实验2 分离以尿素为氮源的微生物[学考报告]知识内容考试属性 考情解读分离以尿素为氮源的微生物 加试 1.进行微生物分离。

使用含有尿素的培养基，采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。

2.使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。

3.说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。

4.举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌一、以尿素为氮源的微生物1.尿素又称脲，是蛋白质降解的产物。

在人和其他哺乳动物如家畜的尿中都含有尿素，植物不能直接吸收尿素，因此大量尿素的存在将对环境造成污染。

2.以尿素为氮源的微生物这些细菌可以尿素为氮源，是因为其含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。

其利用尿素的反应式为：(NH 2)2C ＝O ＋H 2O ――→脲酶2NH 3＋CO 2。

3.分离以尿素为氮源的微生物所依据的原理在氮源只有尿素时，这些微生物能利用尿素获得氮源而存活；而其他微生物却不能利用尿素，最终因为缺乏氮源而死亡。

二、从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物实验1.实验目的(1)使用以尿素为唯一氮源的培养基分离含有脲酶的细菌。

(2)通过指示剂颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的化学反应(培养基pH 的变化)。

(3)统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量。

2.实验原理(1)用选择培养基(培养基类型)可分离出以尿素为氮源的微生物。

(2)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌产生的脲酶将培养基中的尿素分解成氨，使培养基变碱，pH 升高，酚红指示剂变红。

(3)根据培养基中的菌落数，可统计土壤样品中含有的这种微生物的数量。

3.实验步骤(1)倒平板：在60 ℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固。

(2)制备细菌悬浮液将土样1 g，在无菌条件下加到有99 mL无菌水的三角瓶中，振荡10 min，制成10－2稀释液；从该稀释液中取0.5 mL悬液加到4.5 mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10－3稀释液；再从10－3稀释液中取0.5 mL悬液加到4.5 mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10－4稀释液；依此法可依次制备出10－5、10－6……土壤稀释液。