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浙科版生物选修1知识点归纳实验1大肠杆菌的培养和分离1•微生物是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物,包括病毒、原核牛•物、原牛•牛•物和某些真菌。
细菌是单细胞的原核半物，侑细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，有些细菌还有芽胞、荚膜、鞭毛等特殊结构。
无成型的细胞核,貝有一环状DNA分了（拟核）, 细胞质中有核糖体、质粒（小型的环状DNA分子,上面可能含有控制细菌的抗药性、固氮、抗生素生成等性状的基因）。
以分裂（二分裂）的方式繁殖,分裂速度很快。
用革兰氏染色法将细菌分为节兰氏阳性菌（节兰氏染液染色后,再脱色处理,细菌仍保留染色液的颜色）和节工氏阴性菌两人类，区别在细胞壁的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。
2.细菌的分离方法有两种:划线分离法和涂布分离法。
单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达最菌株的最简便方法之一。
划线分离就是用接种环蘸菌液后存含有固体培养基的培养皿平板上划线,在第一次划线后都从上次划线末端开始,目的是获得山单个细菌形成的菌落。
用接种环从单菌落屮挑取菌种，在斜血上划线,则每个斜血的菌群就是由…个细菌产生的麻代。
用于基因工程的人肠杆菌的工程菌，可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株。
由于工程菌的质粒中通常有抗性基因（如抗氨千青霉素基因）,非工程菌的英他杂菌都没有抗性基因，如果在培养基中加入•定最的氨茉肓霉素,在划线后只有-存在抗性基I大1的工程菌能生存下来（该培养基从功能分类上属于选择培养基,从形态分类上属于固体培养基）。
涂布分离时，需要先将培养的菌液稀释,通常'稀释到10%〜ICT之间，然后取0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布木培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。
通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最合适。
将每个菌落分別接种在斜面上扩增培养后,再做功能性实验。
高中生物知识点总结选修1一、细胞的分子基础1. 细胞的概念与结构- 细胞是生命的基本单位，具有自主代谢和遗传信息传递的能力。
- 细胞的主要结构包括细胞膜、细胞质和细胞核。
2. 生物大分子- 蛋白质：由氨基酸组成，是生命活动的主要承担者。
- 核酸：包括DNA和RNA，是遗传信息的载体。
- 糖类：由单糖组成，主要提供能量。
- 脂类：包括甘油和脂肪酸，构成细胞膜的主要成分。
3. 酶的作用- 酶是生物体内的生物催化剂，能够加速化学反应的速率。
- 酶的特性：高效性、专一性、作用条件温和。
4. 细胞呼吸- 有氧呼吸：在氧气存在的条件下，有机物彻底氧化分解，释放大量能量。
- 无氧呼吸：在缺氧条件下，有机物不完全氧化，释放较少能量。
5. 光合作用- 光依赖反应：在光照下，水分子分解，产生氧气和ATP。
- 光合磷酸化：ATP的生成过程。
- 光合暗反应：固定二氧化碳，合成有机物。
二、遗传与进化1. 遗传的分子基础- DNA的复制：半保留复制原理。
- RNA的转录：DNA信息转录成mRNA。
- 蛋白质的翻译：mRNA指导蛋白质的合成。
2. 基因的结构与功能- 基因是遗传信息的基本单位，控制生物体的性状。
- 基因的结构包括启动子、编码区和终止子。
3. 基因突变- 突变的类型：基因突变、染色体变异。
- 突变的影响：有益、中性、有害。
4. 生物的进化- 进化的证据：化石记录、比较解剖学、分子生物学。
- 进化的机制：自然选择、遗传漂变、基因流、突变。
5. 分子系统发育- 通过比较DNA序列的差异，推断物种间的亲缘关系。
- 分子钟假说：物种分化的时间可以通过DNA序列的变异速率来估计。
三、生态环境与生物多样性1. 生态系统的组成- 生产者：通过光合作用制造有机物的生物。
- 消费者：直接或间接依赖生产者制造的有机物的生物。
- 分解者：分解有机物，释放营养物质的生物。
2. 生态系统的功能- 物质循环：生态系统中物质的循环利用。
- 能量流动：生态系统中能量的传递和转化。
高中生物选修一生物技术实践知识点总结一、知识归纳1、几种常用发酵菌种的比较菌种项目酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物学分类真核生物原核生物真核生物原核生物代谢类型异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养厌氧繁殖方式适宜条件下出芽生殖二分裂生殖孢子生殖二分裂生殖生产应用酿酒酿醋制作腐乳制作泡菜发酵条件前期需氧，后期不需氧一直需氧一直需氧不需氧2、果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌种及控制条件的比较制作内容比较项目果酒果醋腐乳泡菜所用菌种酵母菌醋酸菌主要是为霉乳酸菌控制条件O2的有无无氧有氧有氧无氧最适温度18℃～25℃30℃～35℃15℃～18℃常温时间控制10～12天7～8天腌制8天左右腌制10天左右其他条件封闭充气口适时充气控制盐酒用量控制盐水比例3、果酒、果醋、腐乳和泡菜制作过程的比较及亚硝酸盐含量的检测比较项目果酒和果醋制作腐乳的制作制作泡菜并检测亚硝酸盐含量制作原理果酒：无氧呼吸果醋：有氧呼吸多种微生物发酵泡菜制作：乳酸菌无氧呼吸亚硝酸盐检测：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料实验流程图挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵↓↓果酒果醋让豆腐上长也毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制操作提示材料的选择与处理；防止发酵液被污染；控制好发酵条件。
控制好材料的用量；防止杂菌污染。
泡菜坛的选择；腌制的条件；测定亚硝酸盐含量的操作。
一、果酒和果醋的制作1、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
C6H12O6＋6H2O＋ 6O2→6CO2＋12H2O2、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C6H12O6→2C2H5OH＋2CO23、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
选修一知识点填空实验1 大肠杆菌的培养和分离1、微生物指的是_______________________的单细胞、多细胞或______________的低等生物。
如：__________________________等。
绝大多数微生物与传染病________（有关/无关），90%以上的微生物是对人类___________（有利/有害）。
2、大肠杆菌是革兰氏______性菌，新陈代谢类型是______________。
从细胞结构上看，它属于_______生物。
在肠道中一般对人体无害，也有少数菌株对人体_____，可以侵袭_______并产生______。
但是，任何大肠杆菌如果进入人的___________，都会对人体产生危害。
大肠杆菌是_____工程中被广泛采用的工具。
如重组的人粒细胞-巨噬细胞___________（rhGM-CSF）就是用大肠杆菌工程菌生产的。
这种刺激因子是一种________，只要用_____级的量即可提高人的白细胞的数量，目前是放疗和化疗过程中的必用辅助药物。
大肠杆菌细胞壁的主要成分是_____________，细胞质中含有的细胞器是_________，控制细菌遗传性状的DNA主要分布在___________，此外，细胞质中也有小型的环状DNA称为____________。
3、革兰氏染色法是一种用于__________的染色法。
此法将细菌分为两大类，即革兰氏阳性菌和_______________。
4、各类生物细胞壁的成分：植物_________________ 细菌_______________ 真菌_______________5、细菌通常以_________方式繁殖，________________在固体培养基上大量繁殖形成的________________的细胞群统称为单菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。
单菌落的分离是_______________的通用方法，也是用于_________________________________________________。
高中生物选修一的知识点
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生命的基础——细胞与遗传
生命是由生命分子组成的，生命分子由生命基元细胞组成。
细胞是所有生物的基本单位，常见的细胞有原核细胞和真核细胞。
遗传是生命的基石，遗传物质是DNA，包括基因、染色体、基因组等概念。
人类遗传的方式包括常染色体性遗传和性染色体性遗传两种。
细胞、组织与器官
细胞是生物体的基本单位，组织是由相同或类似细胞构成的，器官是由不同的组织构成的具有特定功能的结构。
常见的组织包括上皮组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织等。
人体的各个系统
人体是由多个系统组成的，包括消化系统、循环系统、呼吸系统、泌尿系统、内分泌系统、免疫系统、神经系统和感觉系统等。
生物的生长与发育
生长是指细胞体积和数量的增加，发育是指个体从受精卵到成熟所经历的一系列变化。
生长和发育的过程受到激素、营养物质等因素的影响。
生物的调节与适应
生物体内的各种生理过程需要通过调节来保持稳定，调节机制包括神经调节和内分泌调节两种。
同时，生物体还具有适应性，能够适应环境的变化以生存下去。
生物的进化
生物进化是指物种在漫长的时间中通过自然选择、基因变异等因素逐步演化而来的过程。
生物进化理论是生物学的核心，对于人类的生活和健康具有重要意义。
选修一生物知识点内容总结（完整版）选修一生物知识点内容总结一、传统发酵技术1.果酒制作：1)原理：酵母菌的无氧呼吸反应式：C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+能量。
2)菌种来源：附着在葡萄皮上的野生酵母菌或人工培养的酵母菌。
3)条件：18-25℃，密封，每隔一段时间放气(CO2)4)检测：在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色。
2、果醋制作：1)原理：醋酸菌的有氧呼吸。
O2，糖源充足时，将糖分解成醋酸O2充足，缺少糖源时，将乙醇变为乙醛，再变为醋酸。
C2H5OH+O2CH3COOH+H2O2)条件：30-35℃，适时通入无菌空气。
3、腐乳制作：1)菌种：青霉、酵母、曲霉、毛霉等，主要是毛霉(都是真菌)。
2)原理：毛霉产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和aa;脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
3)条件：15-18℃，保持一定的湿度。
4)菌种来源：空气中的毛霉孢子或优良毛霉菌种直接接种。
5)加盐腌制时要逐层加盐，随层数加高而增加盐量，盐能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质。
4、泡菜制作：1)原理：乳酸菌的无氧呼吸，反应式：C6H12O62C3H6O3+能量2)制作过程：①将清水与盐按质量比4：1配制成盐水，将盐水煮沸冷却。
煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响。
②将新鲜蔬菜放入盐水中后，盖好坛盖。
向坛盖边沿的水槽中注满水，以保证乳酸菌发酵的无氧环境。
3)亚硝酸盐含量的测定：①方法：比色法;②原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
二、微生物的培养与应用1、培养基的种类：按物理性质分为固体培养基和液体培养基，按化学成分分为合成培养基和天然培养基，按用途分为选择培养基和鉴别培养基。
2、培养基的成分一般都含有水、碳源、氮源、无机盐P143、微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
千里之行，始于足下。
202X年高中生物选修一知识点大全书本知识浙科版202X年高中生物选修一知识点大全书本知识浙科版第一章细胞的结构与功能1. 细胞的组成和形态特征2. 细胞的基本结构：细胞膜、细胞质、细胞核3. 细胞器官的结构和功能：核糖体、内质网、高尔基体、线粒体、溶酶体等4. 细胞的生物膜：结构和功能5. 细胞的生物能量：ATP的合成和利用第二章细胞膜的功能与传递1. 细胞膜的结构和功能2. 细胞膜的通透性：渗透性和选择性渗透性3. 膜蛋白的结构和功能4. 细胞膜的运输过程：主动运输和被动运输5. 膜通道的特点和功能第三章酶与代谢1. 酶的结构和功能2. 酶的特性：酶的活性、酶的底物特异性和酶的pH值与温度变化对酶活性的影响3. 酶促反应的速率方程4. 酶促反应的调节：环境因素和激素的调节5. 代谢过程：光合作用和细胞呼吸第1页/共3页锲而不舍，金石可镂。
第四章动物的生命活动1. 细胞分裂和细胞增殖2. 组织器官与体液3. 动物的呼吸和运动4. 动物的感觉和神经调节5. 动物的生殖与发育第五章植物的生命活动1. 植物的营养和物质的运输2. 植物的生长和发育3. 植物的繁殖和适应环境4. 植物的保护和生态环境5. 植物的分类和进化第六章生物多样性与演化1. 生物多样性的意义和分类2. 生物进化和演化理论3. 人类的起源和进化4. 物种的形成和灭绝5. 生物多样性保护与利用第七章遗传与遗传变异1. 遗传的分子基础：DNA的结构和功能、RNA的类型和作用2. 遗传的模式：孟德尔定律、合子的形成和遗传度的计算3. 核酸修复和基因突变4. 遗传信息的转录和翻译5. 基因工程技术的原理和应用第八章生态系统1. 生态学的基本概念和研究方法千里之行，始于足下。
2. 生态系统的结构和功能3. 生态系统的能量流和物质循环4. 生态与环境的关系5. 生态系统的保护与恢复第九章生物技术与生物工程1. 生物技术的基础知识：DNA技术和细胞技术2. 生物工程的原理和应用3. 生物制药和农业生物技术4. 生物工程与社会发展5. 生物工程与伦理、法律和安全这是一个大致的概览，这本书将详细介绍每个知识点，包括相关的实例和实验。
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培养基按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂(是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂)后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源;糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。
生物选修1基础知识整理实验1 大肠杆菌的培养和分离1.大肠杆菌是革兰氏性（异化作用类型）的肠道杆菌，其细胞壁由组成。
2.大肠杆菌在肠道中一般对人害，有些菌株可以侵袭肠粘膜并产生，但任何大肠杆菌进入人的，都会对人体产生危害。
3.大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的是最常用的运载体，它也是基因工程中常用的。
4.细菌的扩大培养使用培养基；分离使用培养基。
5.涂布分离需要先将培养的菌液稀释，通常稀释倍。
6.划线分离使用的器具是；涂布分离使用的是。
两者操作简单的是，分离效果好的是。
7.培养基配好之后要先调节PH，细菌通常在环境生长，霉菌要求在环境生长。
培养基加入氯化钠目的是。
8.各种器皿、培养基一般用法灭菌，但培养基若含葡萄糖则需适当，含尿素则需用。
如何可知培养基灭菌是否充分？9.实验器具灭菌后放入60℃-80℃的烘箱烘干去除水分，目的是；实验用棉花不能是脱脂棉，原因是。
10.将大肠杆菌接种到液体培养基后，将三角瓶在37℃振荡培养12h。
11.划线后的培养皿需倒置，原因是。
12.培养后如何判断是否有杂菌污染？。
13.培养后，将单菌落用接种环取出，再用划线的方法接种到上，37℃培养24h，放在保存。
1.若要扩大培养酵母菌，需用LB液体培养基。
2.划线法和涂布法即可用于微生物接种，也可用于微生物纯化。
3.为保证无菌操作，倒平板和划线分离等过程都在酒精灯火焰旁进行，且实验者要站在紫外灯照射的环境中进行操作。
4.倒平板的意思是将配置的固体培养基倒过来放置。
5.为保证无菌操作，实验者的双手、试验台等都需要灭菌。
6.真菌喜荤，细菌喜素。
7．灭菌锅气压务必内外相等时再开锅，目的是防止容器中的液体暴沸。
8.培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上，否则容易污染。
9.取菌种前，灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物，灼烧后为防止污染要立刻取菌种。
10.除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种。
《高中生物选修一知识点总结》一、细胞的分子基础1. 细胞的基本概念：细胞是生命的基本单位，具有自主代谢和遗传信息传递的能力。
2. 细胞的结构与功能：- 细胞膜：主要由磷脂双层构成，具有选择性通透性，控制物质进出。
- 细胞核：包含DNA，是遗传信息的中心。
- 核糖体：负责蛋白质的合成。
- 内质网：参与蛋白质和脂质的合成。
- 高尔基体：对蛋白质进行加工、修饰和运输。
- 线粒体：细胞的能量工厂，负责ATP的生成。
- 叶绿体：在植物细胞中进行光合作用。
3. 生物大分子：- 蛋白质：由氨基酸组成，具有多种功能，如催化生化反应、传递信号等。
- 核酸：包括DNA和RNA，是遗传信息的载体。
- 糖类：主要提供能量，也参与细胞结构的形成。
- 脂类：构成细胞膜的主要成分，也是能量的储存形式。
二、生物的遗传与进化1. 遗传的分子基础：- DNA的结构与复制：DNA双螺旋结构，通过碱基配对进行复制。
- RNA的转录：DNA信息转录成mRNA。
- 蛋白质的翻译：mRNA指导蛋白质的合成。
- 基因突变：DNA序列的改变，可能导致遗传病或物种的进化。
2. 遗传的规律：- 孟德尔遗传定律：分离定律和组合定律。
- 连锁与重组：基因位于同一染色体上，可发生交换重组。
3. 进化论：- 物种的起源与演化：物种通过自然选择和遗传变异逐渐演化。
- 进化树：描述物种间的亲缘关系。
- 人类起源：从古猿到智人的进化过程。
三、生态环境与人体健康1. 生态系统：- 生态系统的结构：包括生产者、消费者和分解者。
- 物质循环与能量流动：生态系统中的物质和能量的转换与流动。
- 生物多样性：生物种类的多样性对生态系统的重要性。
2. 人体健康与疾病：- 营养与健康：营养素的分类与功能，合理膳食的重要性。
- 传染病：病原体的类型，传播途径，预防措施。
- 非传染性疾病：如心血管疾病、糖尿病等，与生活方式的关系。
3. 环境保护：- 环境污染：水污染、空气污染、土壤污染等。
选修1《生物技术实践》知识点归纳实验1 大肠杆菌的培养和分离 1.微生物是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。
细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核,只有一环状DMA分子(拟核)。
以分裂(二分裂)的方式繁殖,分裂速度很快。
用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌(革兰氏染液染色后,再脱色处理,细菌仍保留染色液的颜色)和革兰氏阴性菌两大类,区别在细胞壁的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏阴性(细胞壁薄,有荚膜)、兼性厌氧的肠道杆菌。
2.细菌的分离方法有两种:划线分离法和涂布分离法。
是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线,在划线的过程中菌液逐渐减少,细菌也逐渐减少,。
划线最后,可使细菌间的距离加大。
将接种后的固体培养基培养10~20小时后,一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞,形成菌落,不会重叠。
在斜面上划线,则每个斜面的菌群就是有一个细菌产生的后代。
用于基因工程的大肠杆菌的工程菌,可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株。
由于工程菌的质粒中通常有抗性基因(如抗氨苄青霉素基因),如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素,由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因,所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。
涂布分离时,需要先将培养的菌液稀释,通常稀释10-5~10-7倍之间,然后取0.1mL不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养,在适当的稀释度下,可产生相互分开的菌落，每个培养基里有20个以内的单菌落为最合适。
优点：划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂。
在培养微生物时,必须进行无菌操作。
其首要条件是各种器皿必须是无菌的,各种培养基也必须是无菌的,转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌(防止杂菌污染)。
进行恒温培养时,要将培养皿倒置,是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发,倒放培养皿会使水蒸气凝结成水滴后,落入培养基的表面并且扩散,菌落中的细菌也会随水扩散,菌落相互影响,很难再分成单菌落,达不到分离的目的。
4.细菌扩大培养要用LB液体培养基(通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业),划线分离要用LB固体培养基(常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存)。
我们在利用微生物时,常常要求所利用的微生物不被其他微生物污染。
因此,在培养微生物时必须进行无菌操作无菌操作的首要条件是各种器皿必须是无菌的,如各种大小的培养皿、试管、三角瓶、取样器的头(或称“枪头”、“tip”)、移液管、三角刮刀、接种环、镊子等等。
这些用具通常用高压蒸汽灭菌法前各种用品均需用牛皮纸或报纸包好。
培养皿可几个包在一起;试管加棉花塞或塑料盖后也是几个包在一起;三角瓶可用封口膜(市售产品,既通气又不使菌进入)或6层纱布封口,再用牛皮纸或报纸封口;移液管上端用镊子放入少量棉花,再用牛皮纸包上(现在多不用移液管而用取样器);取样器的“枪头”放在可灭菌的专用塑料盒中,也可放在上口用牛皮纸包好的烧杯中……在121℃(1kg/cm2压力)下灭菌15min。
值得注意的是,实验中所需的棉花不能用脱脂棉,因脱脂棉易吸水,吸水后容易引起污染。
灭菌后,通常将实验用具放入60~80℃的烘箱中烘干,以除去灭菌时的水分。
在进行实验操作前,将需要使用的用具从烘箱中取出,放到超净台上(没有超净台时,可制作一个双手在内操作、又可在外观看、并有紫外灯灭菌的箱子),然后打开紫外灯和过滤风,灭菌30min。
除了实验用具必须无菌外,各种培养基也必须是无菌的。
培养基是微生物生存的环境和营养物质。
“细菌喜荤,霉菌喜素”,通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制,还要加入一定量的氯化钠,以维持一定的渗透压;霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
此外,细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长,霉菌要求在中性偏酸的环境中生长,因此,在制备培养基时需调节培养基的酸碱度。
加入培养基的三角瓶、试管也要在121℃下灭菌15min,如果培养基中有葡萄糖,为防止葡萄糖分解碳化,要用500g/cm2压力(90℃以上)灭菌30min。
有些不能加热灭菌的化合物,如尿素(加热会分解等,只能用G6玻璃砂漏斗过滤,但玻璃砂漏斗使用前也要在121℃下用纸包好灭菌。
玻璃砂漏斗有6种,即G1~G6,G6孔径最小,细菌不能滤过。
玻璃砂漏斗用后需用1molL的HCL浸泡,并抽滤去酸再用蒸馏水洗至洗出液呈中性,干燥后保存。
在将培养基加到三角瓶、试管和培养皿中时,三角瓶口、试管口、培养皿壁上不能沾有培养基,否则容易发生污染。
因此,在将培养基转移到三角瓶和试管中时必须用三角漏斗;向培养皿中转移已灭菌的培养基时,也不要沾在壁上。
用棉花制作三角瓶和试管的塞子时,通常将棉花摊成一圆片,再裹到一适当直径的木头(或筷子)上。
放入三角瓶或试管口中后,周围没有皱褶和缝隙容易拔出,但用手提着棉塞时,三角瓶或试管又不能落下。
塞子制作的好坏是控制污染发生的关键。
如果有条件,可以用封口膜代替棉塞。
干热灭菌:160℃~170℃。
尽管培养基的配方各不相同,但其基本成分都一样(五类)。
人及动物的营养物质:水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类；微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及生长因子等五类。
4.无菌技术（1）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。
要注意以下几个方面:①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
(2)消毒与灭菌的区别消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。
消毒方法常用煮沸消毒法,还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、红外线消毒。
灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。
灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌法。
5.培养基(1)培养基可分为液体培养基和固体培养基(按照物理性质)。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂后制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
（2)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种营养物质。
满足微生物生长还需要适宜的pH、氧气的要求(根据微生物的需求提供有氧或无氧环境)、特殊营养物质等碳源:能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、 NaHCO3等无机碳源;糖类、蛋白质、脂肪等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
氮源:能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO2、蛋白质、氨基酸等。
只有固氮微生物才能利用N2。
（3）培养基配制的原则:目的要明确、pH值要适宜、营养要协调和要经济节约。
该实验步骤1.培养基的配置与灭菌：在两个250mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB固体培养基(刚配好,尚未凝固),加上封口膜。
将培养皿用牛皮纸包好,放入灭菌锅内,1kg压力灭菌15min。
如使用高压锅灭菌,则有压力后开始计时灭菌15min。
2.倒平板：灭菌后，待高压锅或灭菌锅压力与大气压相同时（即没有压力了）打开锅盖。
将有培养基的三角瓶和培养皿放到超净台上,打开超净台的紫外灯和过滤风(注意:打开紫外灯后人必须离开),待固体培养基冷却到60℃时(手放上还有些热的时候),关闭紫外灯,点燃酒精灯,用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面,并用酒精棉球擦手。
在酒精灯火焰旁,以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜,右手其他 3个手指拿着三角瓶;左手拿着培养皿并打开上盖的一边,将三角瓶中的培养基(10~12mL)倒在培养皿里。
将培养基分别倒至4个培养皿中，每倒入一个培养皿后立即将培养皿置于水平位置上,并轻轻晃动,使培养基铺满底部,待凝固后即形成平面。
3.大肠杆菌的扩大培养：将大肠杆菌斜面和有液体培养基的三角瓶放在左手中,靠近酒精灯火焰；右手拿着接种环,并用右手无名指和小指夹住斜面的棉塞和三角瓶封口膜。
将接种环在火焰上烧红再深入到斜面。
接种前,应先使接种环接触培养基以达到冷却的目的,然后再取菌体。
将菌体放入三角瓶的液体培养基中,将三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原。
三角瓶在37℃,每分钟200转的摇床上振荡培养12h。
4.划线分离。
在酒精灯火焰上灼烧接种环，在摇床上培养了12h的菌液(由教师代做)打开,接种环部分深入到菌液中。
然后,在固体培养基的平板上连续划线,接种环只在菌液中蘸菌液一次,划线后盖好培养皿。
最后,将培养皿倒置(盖在下面),在37℃恒温培养箱中培养12~24h后,可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落,表明菌已被分离。
5.培养保存：在无菌操作下将单菌落用接种环取出,再用划线法接种在斜面上, 37℃培养24h后,置于4℃冰箱中保存。
实验二分离以尿素为氮源的微生物一、实验原理(NH2)2C=O+H2O 2NH3+ CO2二.实验目的1.使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶)2.通过指示剂(酚红)颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应)三、材料1.在100mL烧杯中装入50mL70%酒精,将玻璃刮刀浸泡在其中。
2.在100mL三角瓶中配制好25mL全营养LB固体培养基(0.25g蛋白胨,0.12g酵母提取物,0.25 g NaCL和0.5g琼脂糖,水25mL),加上封口膜后灭菌待用。
3.在100mL三角瓶中配制好25mL尿素固体培养基(0.025g葡萄糖,0.12gNaCL,0.12g K2HPO4,0.25mg酚红和0.5g琼脂糖,水15mL),加上封口膜后灭菌，待冷却至60℃时,加入通过G6玻璃漏斗过滤(使之无菌)的10mL尿素溶液(内含2g脲),摇动,混合均匀后待用。
4.将盛有4.5mL蒸馏水的5支有塞试管灭菌后待用。
5.在250mL三角瓶中装入99mL蒸馏水,用封口膜盖上,灭菌后待用。
6.土样1g(从有哺乳动物排泄物的地方取得)。
四、实验步骤1.制备无菌的LB固体培养基和尿素固体培养基:在60℃左右时,将两只三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基,在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中,在水平的超净台上摇匀,平放至凝固。
2.倒平板3.制备一定浓度梯度的细菌悬液；在无菌条件下，1g土样+99m1无菌水,振荡10min,为10-2稀释液,依次制备10-3、10-4、10-5的土壤稀释液。
