精子畸形试验

一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。

二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。

2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。

3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。

三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。

2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。

3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。

4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。

5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。

6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。

7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。

8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。

9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。

10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。

11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。

12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。

四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。

2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。

3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。

4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。

5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。

五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。

2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。

金诃牌雪益康胶囊急性毒性和遗传毒性试验研究作者：刘有菊马文俊袁发荣孙跃宁陈海莲来源：《食品界》2020年第07期摘要：目的：研究金诃牌雪益康胶囊的急性毒性和遗传毒性实验，评价其食用安全性。

方法：依据《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行急性毒性试验、遗传毒性试验（Ames 试验、骨髓细胞微核试验和精子畸形试验）。

结果：小鼠急性毒性试验经口最大耐受剂量（MTD）>30 g/kg·bw，属无毒级。

Ames 实验、骨髓细胞微核试验和精子畸形试验结果均为阴性，表明受试物无致突变作用。

结论：金诃牌雪益康胶囊急性毒理分级属无毒级，无遗传毒性，在本试验剂量范围内，金诃牌雪益康胶囊属于安全性保健食品。

关键词：金诃牌雪益康胶囊；急性毒性；遗传毒性；金诃牌雪益康胶囊产品配方精选海拔3000米左右高原特色草本植物唐古特白刺果、柴达木枸杞果、沙棘果等为主要原料制成的保健食品。

优越的地理环境，日照时间长，太阳辐射强，昼夜温差大，培育出高活性的高原物质。

以传统医学与现代养生理论为指导原则，六种植物科学配伍、合理配比，采用传统炮制与现代工艺相结合的技术手段，精制而成的一款高端产品，其主要保健功能是调节血糖。

为评价产品的安全性，根据《保健食品检验与评价技术规范》的要求，现进行金诃牌雪益康胶囊的急性毒性及遗传毒性试验。

1. 材料与方法1.1 材料1.1.1 受试样品金诃牌雪益康胶囊由金诃藏药股份有限公司提供。

样品推荐量为每日3次，每次3-4粒，0.3g/粒，总量为3.6g，相当于成人推荐量0.06g/kg·bw（以60kg计）。

1.1.2 实验动物和饲养环境 KM种小鼠，清洁级，体重18-22g，动物合格证号：青医动字第001号，由青海省实验动物中心提供；实验动物购进后首先于恒温恒湿的动物房环境中适应3天，单笼饲养。

1.1.3 菌株鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100 、TA102。

由上海市疾病预防控制中心提供。

精子形态评估报告单精子形态评估报告单是一种用于评估男性精子形态的常规检测方法。

通过对精子形态的评估，可以判断男性生殖系统是否存在异常，并进一步指导治疗方案的选择。

下面是针对精子形态评估报告单的详细解读：一、精子形态评估指标1. 精子头部形态：正常精子头部应呈椭圆形或倒卵形，头部大小和形状均匀一致。

2. 精子颈部形态：正常精子颈部应该呈细长的形状，与头部连接紧密，无异常变形。

3. 精子尾部形态：正常精子尾部应呈长而细的形状，具有较好的运动能力。

二、评价结果1. 正常精子：正常精子形态占总数的比例，一般应在15%以上。

2. 异常精子：头部变性、变形、颈部异常、尾部缺损等异常精子的数量。

一般来说，异常精子数量越少，说明精子形态越好。

三、临床意义通过精子形态评估报告单的分析，可以判断男性生殖系统是否存在异常，主要有以下几个方面的临床意义：1. 婚前检查：精子形态评估是婚前检查的一项重要内容，可以帮助双方了解是否存在生育障碍。

2. 不孕症筛查：精子形态评估可以作为不孕症筛查的指标之一，对不孕症的诊断和治疗提供重要依据。

3. 治疗指导：根据精子形态评估结果，可以指导选择适当的治疗方案，如助孕技术、生殖细胞治疗等。

四、改善措施对于精子形态评估不理想的男性，可以尝试以下改善措施：1. 保持良好的生活习惯：戒烟戒酒，保持正常的作息时间，避免长时间暴露在高温环境中。

2. 饮食调理：均衡饮食，补充富含维生素C、E等抗氧化物质的食物，如水果、蔬菜、坚果等。

3. 控制体重：过重或过轻都会对精子质量产生不利影响，保持适当的体重对精子形态有益。

4. 避免应激：长期的精神、情绪应激对精子质量会产生不良影响，保持良好的心态有利于精子形态的改善。

5. 避免接触有害物质：避免长时间接触有害物质，如重金属、辐射等，以免对精子产生不良影响。

总之，精子形态评估报告单是对男性生殖系统健康的一种重要评估手段。

理解评估结果，并采取相应的改善措施，可以提高男性生育能力，达到更好的生殖效果。

致谢本手册的出版由UNDP/UNFPA/WHO/世界银行人类生殖研究、发展和研究培训特别规划署及WHO人类生殖健康与研究部共同完成。

我们对所有参与本手册筹备、编辑和校订的人员表示诚挚的感谢。

另外感谢：Ms Cathy Treece, Ms Charlene Tollner和Jim Overstreet教授(University of California, Davis, CA, USA)提供形态学显微照片以及对媒体文件的校对；Dr Rune Eliasson (Sophiahemmet Hospital, Stockholm, Sweden) 帮助定义非精子细胞；Dr Gary N Clarke (The Royal Women´s Hospital, Carlton, Australia), Dr Roelof Menkveld (Tygerberg Academic Hospital and University of Stellenbosch, Tygerberg, South Africa)和Pieter Wranz 教授(University of Stellenbosch, Tygerberg, South Africa) 对本手册编译工作提供附注。

衷心感谢国际男科学会提供的经济支持。

这个版本的手册是为纪念已故前WHO男性生育调控方法学工作组负责人Geoffrey Waites (1928-2005)，他也是第二、第三和第四版实验室手册的共同编辑。

编辑委员会全身心投入工作的动力来自于对Geoff诚实、公平和关心疾苦人格的欣赏。

缩写词Ab antibody 抗体AI artificial insemination 人工授精AID artificial insemination with donor semen 供精人工授精AIH artificial insemination with husband’s semen 夫精人工授精ALH amplitude of lateral head displacement 头侧摆振幅ANOV A analysis of variance 变量分析APAAP alkaline phosphatase: anti-alkaline phosphatase complex 碱性磷酸酶: 抗碱性磷酸酶复合物AR acrosome-reacted 顶体反应ART assisted reproductive technology 辅助生殖技术ASA anti-sperm antibody 抗精子抗体BCF beat-cross frequency (Hz) 交打频率BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白BWW Biggers, Whitten and Whittingham试液CASA computer-aided sperm analysis 计算机辅助精子分析CASMA computer aided sperm morphometric assessment 计算机辅助精子形态评估CBA VD congenital bilateral absence of the vas deferens 先天性双侧输精管缺失CD compact disk 压缩盘CD cytoplasmic droplet 胞质小滴CD45 cluster of determination 45 (pan-leukocyte marker) 决定簇45 (全白细胞标记物)CD46 cluster of determination 46 (acrosomal antigen) 决定簇46 (顶体抗原)CI confidence interval 可信区间CL confidence limits 可信界限CO2 carbon dioxide 二氧化碳DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸DPBS Dulbecco’s phosphate-buffered saline Dulbecco’s磷酸缓冲盐溶液DVD digital versatile disc 数字多用盘EDTA ethylenediamine tetra-acetic acid 乙二胺四乙酸（依地酸）EQA external quality assurance 外质量保险EQC external quality control 外质量控制ERC excess residual cytoplasm 残余胞质FITC fuorescein isothiocyanateFMLP formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸GIFT gamete intrafallopian transfer输卵管内配子移植术GPC glycerophosphocholineH2O2hydrogen peroxide 过氧化氢HBSS Hanks’ balanced salt solution Hanks’平衡盐溶液HBV hepatitis B virus 乙肝病毒hCG human chorionic gonadotrophin 人绒毛膜促性腺激素HCV hepatitis C virus 丙肝病毒HIV human immunodefciency virus 人免疫缺陷病毒HOP hamster oocyte penetration 仓鼠卵穿透HOS hypo-osmotic swelling 低渗肿胀试验HPF high power field 高倍视野HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶HSA human serum albuminxiv 人血清白蛋白IVHTF human tubal fuid 人输卵管液IB immunobead 免疫珠IBT immunobead test免疫珠试验ICSI intracytoplasmic sperm injection 胞浆内精子注射Ig immunoglobulin 免疫球蛋白IM immotility 不动IQC internal quality control 内质量控制IU international unit 国际单位IUI intrauterine insemination 宫腔内人工授精IVF in vitro fertilization 体外受精KRM Krebs-Ringer Medium Krebs-Ringer培养液LIN linearity 线性LLQ lower limit of quantifcation 定量下限LPF low power field 低倍视野MAD mean angular displacement 平均角位移MAI multiple anomalies index 复合异常指数MAR mixed antiglobulin reaction 混合抗球蛋白反应NA numerical aperture数值孔径NP non-progressive (motility) 非前向的（活力）PBS phosphate-buffered saline 磷酸缓冲盐溶液PDCA plan, do, check, actPMA phorbol 12-myristate 13-acetate (12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐PMSG pregnant mare serum gonadotrophin 孕马血清PNPG p-nitrophenol glucopyranoside 对硝基苯酚吡喃葡萄糖苷PR progressive (motility) 前向的（活力）PSA Pisum sativum agglutinin 碗豆凝集素QA quality assurance质量保险QC quality control 质量控制RCF relative centrifugal force 相对离心力RI refractive index 屈光指数RNA ribonucleic acid 核糖核酸ROS reactive oxygen species 活性氧类物质rpm revolutions per minute 每分钟转速SD standard deviation 标准差SDI sperm deformity index 精子畸形指数SDS sodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠SE standard error 标准误SOP standard operating procedure 标准操作流程STR straightness (VSL/V AP) 直向TBS Tris-buffered saline Tris缓冲盐溶液TGG Tyrode’s glucose glycerolTZI teratozoospermia index 畸形精子症指数V AP average path velocity 平均轨道速率VCL curvilinear velocity 曲线速率VSL straight-line (rectilinear) velocity 直线速率WHO World Health Organization 世界卫生组织WOB wobble (V AP/VCL) 摆动第1章背景1.1 导言鉴于人类精液检查标准化需求的日益增加，世界卫生组织于1980年首次出版了《世界卫生组织人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》。

精子畸形率检测一、实验目的：精子畸形试验是检测受试化学毒物能否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方法。

通过该实验，学习和掌握小鼠精子畸形试验的原理和步骤。

1.熟悉精子畸形的概念及类型、精子畸形试验的实验设计、试验检测的遗传学终点。

2.学习和掌握小鼠精子畸形试验的基本方法步骤，正常精子及畸形精子的镜下观察。

3.了解精子畸形试验数据整理、分析方法及结果的评价。

二、实验原理：1.小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。

2.精子的畸形主要是指形态的异常，是决定精子形成的基因发生突变的结果。

因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。

三、实验器材及试剂：眼科剪、眼科镊、小平皿、显微镜、擦镜纸、带橡皮头吸管、载玻片、玻璃染缸1%伊红染液、9%生理盐水四、实验步骤：1.制片颈椎脱臼处死小鼠，取出双侧附睾，将附睾放入1ml磷酸盐缓冲液或生理盐水中。

用眼科剪将附睾纵向剪1~2下，静止3~5min，轻轻摇动。

吸取此精子悬液滴于清洁载玻片一端，均匀推片，待玻片晾干后用甲/乙醇固定5min以上，自然晾干。

用1%~2%伊红染色15min，用水轻冲，干燥。

2.阅片在低倍镜下找到背景清晰、精子重叠较少的区域，然后用油镜计数。

每只小鼠为一观察单位，计数1000条完整的精子中畸形精子数，计算各组小鼠精子畸变率。

其中有头无尾（轮廓不清）、头部与其他精子或碎片重叠及人为剪碎的精子均不计算。

精子畸形主要表现在头部，其次为尾部，可分为无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。

异常精子均应记录显微镜的坐标数，以备复查。

并分别记录异常类型，以便统计精子畸形率及精子类型的构成比。

判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。

五、注意事项：判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。