利用大蒜根尖制作植物细胞有丝分裂装片
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大蒜根尖分生组织细胞周期观察一、实验原理在植物体中,有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞。
高等植物细胞有丝分裂的过程,分为分裂问期和有丝分裂期的前期、中期、后期、末期。
可以用高倍镜观察植物细胞有丝分裂的过程,根据各个时期细胞内染色体或染色质的变化情况,识别该细胞处于有丝分裂的哪个时期。
细胞核内的染色体容易被碱性染料(如龙胆紫、醋酸洋红)溶液着色。
二、目的要求1.观察植物细胞有丝分裂的过程,识别有丝分裂的不同时期。
2.学会制作大蒜根尖有丝分裂装片的生物技术。
3.学会使用高倍镜和绘生物图的方法。
材料大蒜(可以用蒜、葱代替)。
三、材料用具显微镜,载玻片,盖玻片,玻璃皿3个,、剪刀,镊子,滴管。
药品质量分数为15%的盐酸,酒精的体积分数为95%的溶液,龙胆紫的质量浓度为0.01 g/mL的或0.02 g /mL的溶液(或醋酸洋红液)。
四、方法步骤(一)大蒜根尖的培养在上实验课之前的3d~4d,取大蒜一个,放在广口瓶上。
瓶内装满清水,让大蒜的底部接触到瓶内的水面。
把这个装置放在温暖的地方,注意经常换水,使大蒜的底部总是接触到水。
待根长5 cm时,可取生长健壮的根尖制片观察。
以上操作已由实验老师提前完成。
(二)装片的制作1.解离下午2时是大蒜有丝分裂的高峰期,可在此时剪取大蒜的根尖2 mm~3 mm,立即放入盛有氯化氢的质量分数为15%的溶液和酒精的体积分数为95%溶液的混合液(1:1)的玻璃皿中,在室温下解离3 min~5 min后取出根尖。
2.漂洗待根尖酥软后,用镊子取出,放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10 min. 3.染色把大蒜根尖放进盛有龙胆紫的质量浓度为0.01g/mL或0.02 g/mL的溶液(或醋酸洋红液)的玻璃皿中,染色3 min~5 min。
4.制片用镊子将这段大蒜根采取出来,放在载玻片上,加一滴清水,并且用镊子尖把大蒜根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片。
然后,用拇指轻轻地压盖玻片,这样可以使细胞分散开来。
观察植物根尖分生组织细胞的有丝分裂一.实验原理1.在高等植物体内,有丝分裂常见于根尖、牙尖等分生区细胞;2.由于各个细胞的分裂是独立进行的,因此在同一分生组织中可以看到处于不同分裂时期的细胞;3.在高倍显微镜下观察各时期内细胞染色体或染色质的存在情况,可以判断这些细胞处于有丝分裂的哪些时期,进而认识有丝分裂的完整过程;4.染色体容易被碱性染料染色,如龙胆紫溶液。
二、实验目的1、制作大蒜根尖细胞有丝分裂装片;2、观察植物细胞有丝分裂的过程,识别有丝分裂的不同时期,比较细胞周期不同时期的时间长短;3、绘制植物细胞有丝分裂简图。
三、实验用具、及材料材料:固定好的大蒜根尖,质量分数为15%的盐酸,质量浓度为0.01g/ml的龙胆紫溶,清水用具:显微镜,载玻片,盖玻片,培养皿,带橡皮头的铅笔,镊子,刀片,滴管,青霉素小瓶,擦镜纸、卫生纸观察植物根尖分生组织细胞的有丝分裂讲稿同学们,大家好!很高兴能为大家上这堂课。
下面我们一起来回忆一下,细胞增殖的主要方式是什么?生:有丝分裂同学们,大家好!很高兴能为大家上这堂课。
在理论课上我们已经学习过有丝分裂的相关知识,下面我们一起来简单的回忆一下。
师:有丝分裂可分为哪几个时期?生:间期,前期,中期,后期,末期师:很好,请同学们从小盒子里拿出植物细胞有丝分裂各个时期的模式图,贴在你们的小册子上,分别标出每幅图所处的时期并补充各个时期的特点。
师:我看到有的同学已经写好了,某某同学你来回答一下,有丝分裂分为哪几个时期,每个时期都有哪些特征?生:师:(仔细听学生的回答,并作适当修改和补充)很好,请坐。
大家再整体看一下有丝分裂各个时期的模式图,通过哪种物质的变化我们可以快速判断细胞所处的时期?生:染色体师:对,根据染色体形态和数目的变化,我们可以判断细胞所处的时期。
细胞进行有丝分裂具有周期性,那不同细胞的细胞周期具有哪些特点呢?下面我们一起来看看小黑板上不同细胞的细胞周期持续时间表。
大蒜根尖分生组织细胞周期观察一、实验原理在植物体中,有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞。
高等植物细胞有丝分裂的过程,分为分裂问期和有丝分裂期的前期、中期、后期、末期。
可以用高倍镜观察植物细胞有丝分裂的过程,根据各个时期细胞内染色体或染色质的变化情况,识别该细胞处于有丝分裂的哪个时期。
细胞核内的染色体容易被碱性染料(如龙胆紫、醋酸洋红)溶液着色。
二、目的要求1.观察植物细胞有丝分裂的过程,识别有丝分裂的不同时期。
2.学会制作大蒜根尖有丝分裂装片的生物技术。
3.学会使用高倍镜和绘生物图的方法。
材料大蒜(可以用蒜、葱代替)。
三、材料用具显微镜,载玻片,盖玻片,玻璃皿3个,、剪刀,镊子,滴管。
药品质量分数为15%的盐酸,酒精的体积分数为95%的溶液,龙胆紫的质量浓度为0.01 g/mL的或0.02 g /mL的溶液(或醋酸洋红液)。
四、方法步骤(一)大蒜根尖的培养在上实验课之前的3d~4d,取大蒜一个,放在广口瓶上。
瓶内装满清水,让大蒜的底部接触到瓶内的水面。
把这个装置放在温暖的地方,注意经常换水,使大蒜的底部总是接触到水。
待根长5 cm时,可取生长健壮的根尖制片观察。
以上操作已由实验老师提前完成。
(二)装片的制作1.解离下午2时是大蒜有丝分裂的高峰期,可在此时剪取大蒜的根尖2 mm~3 mm,立即放入盛有氯化氢的质量分数为15%的溶液和酒精的体积分数为95%溶液的混合液(1:1)的玻璃皿中,在室温下解离3 min~5 min后取出根尖。
2.漂洗待根尖酥软后,用镊子取出,放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10 min. 3.染色把大蒜根尖放进盛有龙胆紫的质量浓度为0.01g/mL或0.02 g/mL的溶液(或醋酸洋红液)的玻璃皿中,染色3 min~5 min。
4.制片用镊子将这段大蒜根采取出来,放在载玻片上,加一滴清水,并且用镊子尖把大蒜根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片。
然后,用拇指轻轻地压盖玻片,这样可以使细胞分散开来。
专题13 实验与探究2020年高考真题1.(2020·课标Ⅰ)为达到实验目的,需要选用合适的实验材料进行实验。
下列实验目的与实验材料的对应,不合理的是()【答案】A【解析】根尖分生区无成熟的大液泡,不能用于观察细胞的质壁分离与复原,A符合题意;蝗虫的精巢细胞可以发生减数分裂,可以用于观察细胞的减数分裂,B不符合题意;哺乳动物的红细胞吸水会膨胀,失水会皱缩,故可以用于观察细胞的吸水和失水,C不符合题意;人的口腔上皮细胞无色,且含有DNA和RNA,可以用于观察DNA、RNA在细胞中的分布,D不符合题意。
故选A。
2.(2020·课标Ⅱ)下列关于生物学实验的叙述,错误的是()A. 观察活细胞中的线粒体时,可以用健那绿染液进行染色B. 探究人体红细胞因失水而发生的形态变化时,可用肉眼直接观察C. 观察细胞中RNA和DNA的分布时,可用吡罗红甲基绿染色剂染色D. 用细胞融合的方法探究细胞膜流动性时,可用荧光染料标记膜蛋白【答案】B【解析】健那绿染液是将活细胞中线粒体染色的专一性染料,可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色,A正确;红细胞体积微小,观察其因失水而发生的形态变化需要利用显微镜,B错误;甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色,利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布,C正确;细胞膜主要由磷脂和蛋白质组成,用两种荧光染料分别标记两种细胞的膜蛋白分子,经过细胞融合后,两种颜色的荧光均匀分布,可以证明细胞膜具有流动性,D正确。
故选B。
3.(2020·山东卷)黑藻是一种叶片薄且叶绿体较大的水生植物,分布广泛、易于取材,可用作生物学实验材料。
下列说法错误..的是( )A.在高倍光学显微镜下,观察不到黑藻叶绿体的双层膜结构B.观察植物细胞的有丝分裂不宜选用黑藻成熟叶片C.质壁分离过程中,黑藻细胞绿色加深、吸水能力减小D.探究黑藻叶片中光合色素的种类时,可用无水乙醇作提取液【答案】C【解析】黑藻叶绿体的双层膜结构属于亚显微结构,需要用电子显微镜来观察,A正确;黑藻成熟叶片为高度分化的细胞,不具有分裂能力,故不能用来观察植物细胞的有丝分裂,B正确;质壁分离过程中,植物细胞失水,原生质层体积变小,绿色会加深,而随着不断失水,细胞液的浓度增大,吸水能力增强,C错误;叶绿体中的色素易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂,提取黑藻叶片中光合色素时,可用无水乙醇作提取液,D正确。
大蒜根尖染色体实验报告一、实验目的与实验要求1、掌握洋葱培养的方法,掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。
2、掌握洋葱根尖制片的方法,复习染色、压片的基本操作。
3、通过对于有丝分裂相的观察,统计洋葱染色体数目,加深对于细胞有丝分裂过程的理解。
4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖,理解四倍体与二倍体的区别,认识微核和植物细胞分裂期的各形态特征。
5、体验开放式实验教学,培养生物实验意识,提高学习的主动性、获取实验知识的能力和撰写实验报告水平。
二、实验方案1、实验仪器显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤纸等2、实验药品新鲜、健康的洋葱鳞茎一个;0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染液、卡诺氏固定液,碱性品红、乙酸,乙醇等。
3、实验原理(1)洋葱的根尖洋葱根尖的整体结构如右图,其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象,其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。
(2)多倍体的诱导多倍体的诱导使用秋水仙素,秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合,从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成,但是姐妹染色单体照常想成,只是没有被拉向两级,于是染色体数目加倍。
各步骤的作用:固定液可以迅速杀死细胞,保持细胞形态在有丝分裂相。
解离可以破坏细胞的胞间层(果胶),使细胞之间的联系变松散,有利于压片和染色。
漂洗可以洗去过量的盐酸,防止解离过度破坏细胞结构或影响染色效果(盐酸是酸性,而醋酸洋红是碱性染料)。
(3)有丝分裂完整的有丝分裂相包括G1期(合成前期)、S期(合成期)、G2期(合成后期)和M期(分裂期),其中G1期、S期和G2期合称间期,细胞完成DNA的复制以及有丝分裂的准备,而M期又可以分为前期、中期、后期和末期,为了形态观察的方便,本实验采用后一种分法。
如表一。
表一植物有丝分裂各时期特点4、实验步骤(1)将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中,加入清水,放进25℃恒温培养箱中2~3天,催化大蒜生根。
大蒜根尖的细胞分裂装片的制作技巧作者:安旺春来源:《文理导航》2011年第16期【摘要】装片制作能提高学生的探索兴趣和认识世界的能力,本文就大蒜根尖的培养、取材时机和固定保存、解离与漂洗、染色、压片等的一些技巧做了些经验上的总结,希望能给大家提供参考。
【关键词】培养温度;取材时机;分裂相;解离;染色一、制作大蒜根尖细胞分裂装片的意义1.实验在科学教学中的重要作用实验是科学教学的重要手段,广泛应用于物理、化学、生物等学科教学中。
它在激发学生探索兴趣、培养学生创新意识、创新精神等方面有重要作用,是科学研究启蒙教育的重要途径。
要开展实验,教师必须提高自身的实验能力,在教学活动中通过对学生的实验指导,培养学生的探究兴趣,逐步形成创新意识和创新能力。
因此,教师应该具备一些基本的实验技能。
2.装片制作能提高学生的探索兴趣和认识世界的能力初中科学教科书中,要求学生会做简单的装片。
如:口腔上皮细胞装片、洋葱表皮细胞装片等。
对于有爱好的同学,我们可以给以专门的指导。
细胞分裂装片的制作是老师需要掌握的,我们可以把这个实验教给兴趣小组,提高他们的学习兴趣和专业技能。
二、制作过程由于大蒜根尖分生区细胞分裂活跃,所以把大蒜根尖作为材料来观察细胞分裂,对我们学习和认识细胞分裂很有帮助。
现在我把大蒜根尖细胞分裂装片的制作的经验及基本过程介绍如下(一)大蒜根尖的培养1.实验材料:大蒜比洋葱实验效果更好选用洋葱和大蒜作为试验材料,在18 ℃左右的恒温箱中培养,发现洋葱非常容易坏,且生根量极少。
大蒜几乎不坏,且一个蒜瓣的生根量就相当于一个洋葱的生根量,因大蒜的蒜瓣之间有空隙,不易缺氧,避免因缺氧造成的腐烂现象。
另外大蒜的染色体数为16,在观察染色体时候也比较方便。
2.培养温度:2 ℃左右效果最好对大蒜的根尖分别作-2 ℃、0 ℃、2 ℃、4 ℃、6℃、8℃的24h 低温根尖培养。
在低温处理中,- 2 ℃或0 ℃处理后,镜检时发现几乎无细胞分裂现象, 2 ℃时,只有少数细胞处于分裂期,且分裂时期不明显,4 ℃时,不仅积累了很多前、中、后、末期的细胞,而且染色体比较粗短,典型的分裂相大增,在分生区内,平均每个视野中少则能观察到3~4 个分裂相,多则可见十几个分裂相,6 ℃时分裂期细胞数目减少,8℃时分裂期细胞数目比6 ℃时更少。
考点三(实验)制作和观察根尖细胞有丝分裂简易装片1.实验原理2.实验步骤(1)取材时为什么只能剪2~3 mm,而不能过长?提示若剪得过长会包括伸长区,伸长区无细胞分裂,增加了寻找观察细胞的难度。
(2)实验操作中漂洗和染色的顺序能不能互换?并说明原因。
提示不能。
漂洗的目的是洗去根尖组织细胞中的药液,有利于碱性染料的着色,若二者顺序颠倒,解离液中的盐酸会影响染色的效果。
(3)使细胞分散开的操作措施有哪三种?提示①解离;②镊子尖弄碎根尖;③拇指按压载玻片。
1.实验成功的关键点2.关注洋葱在实验中的“一材多用”结合观察植物细胞的有丝分裂,考查观察提问实验设计的能力1.(2014·全国卷Ⅰ,29)回答下列问题。
(1)在观察大蒜根尖细胞有丝分裂的实验中,常用盐酸酒精混合液处理根尖,用龙胆紫溶液染色。
实验中,盐酸酒精混合液的作用是____________________;龙胆紫溶液属于________性染料,能够使细胞中的________着色。
(2)用光学显微镜观察细胞,可以看到细胞核。
细胞核的功能可概括为:________ _____________________________________________________________________。
解析(1)盐酸酒精混合液是解离液,用于解离过程,解离的作用是使组织中的细胞相互分离开来。
龙胆紫溶液用于染色过程,为碱性染料,能使细胞核中的染色体(质)着色。
(2)对细胞核功能较为全面的阐述应该是:细胞核是细胞内遗传物质储存、复制和转录的主要场所,是细胞代谢和遗传的控制中心。
答案(1)使组织中的细胞相互分离开来碱染色体(2)细胞核是细胞内遗传物质储存、复制和转录的主要场所,是细胞代谢和遗传的控制中心2.(2019·福建泉州毕业班质检)微核是细胞在有丝分裂过程中因各种有害因素的损伤,使细胞核成分残留在核外而形成的微小染色质块。
当外界环境中存在一定浓度的致突变物时,会使具有微核的细胞增多。
观察植物细胞有丝分裂的好材料—大蒜肖桂芝(承德医学院,河北承德,067000)生物学通报,2001年第36卷第3期大蒜(A llium sa tivum L.),又名胡蒜,为百合科多年生草本植物,鳞茎呈扁球或短圆锥形,具一至十几瓣,外包灰白色或淡棕色干膜质鳞被。
大蒜不但具有抗菌、消炎、除脂、抗肿瘤、杀虫等广泛的药理作用,还是观察细胞有丝分裂的好材料,经6年多的教学应用,效果很好,现介绍如下。
1材料与方法1.1培根与固定选择无冻、无腐烂的新鲜大蒜,去皮,将蒜瓣串起放在装满自来水的小烧杯上,室温(19~21℃)培养48h,移入冰箱(4~8℃)培养24h,再入室温继续培养24h(注:每24h换自来水一次)。
在该温度下培养96h 左右,根长1.5~2cm,于上午8~9时将根尖剪入固定液(甲醇3份,冰醋酸1份)中固定2~24h,更换新鲜固定液,放入4℃冰箱中可保存1年之久。
1.2制片1.2.1解离将固定好的根尖放入解离液(95%乙醇∶浓盐酸=1∶1)中解离10~15min,取出,用自来水漂洗2~3次,移入自来水中。
经多次实验证明,解离后的根尖在短时间内(0~1h)压片细胞易分散,且细胞的分散程度随解离后时间的延长而变差。
1.2.2染色取1条根尖置载玻片上,用刀片或镊子截去伸长区部分,只留2~3mm长的分生区(根尖乳白色部分),用镊子将其压扁,加0.2%龙胆紫1滴和20%醋酸1滴,染色8~10min,加盖玻片,覆盖吸水纸,常规压片。
2结果与讨论显微镜下可见细胞铺展呈单层(如果细胞有重叠或太密集,可重新用带橡皮的铅笔敲打,直至呈单层为止),胞内的染色体基本处于1个清晰可见的平面上,胞核及染色体呈紫红色,胞质淡蓝色或无色。
在分生区内,平均每个视野(10×40)中少则能见到3~4个分裂相,多则可见10几个分裂相;在较好的标本上,1个视野中就能找全4个期的典型分裂相。
实践证明,用大蒜做实验材料,材料易得(市场上一年四季有售)且经济,因1个蒜瓣的生根量相当于一个洋葱头的生根量,特别是根尖经低温处理后,增加了前、中、后、末期的典型分裂相,学生在实验时只用很少的时间寻找分裂相,可将更多的时间用于观察、分析和绘图,实验效果明显提高。
第1篇一、实验目的1. 观察大蒜根尖细胞有丝分裂的过程。
2. 理解细胞周期中各阶段的特点。
3. 掌握制作临时装片和显微镜观察的基本技能。
二、实验原理细胞有丝分裂是生物体细胞增殖的重要方式,分为间期、前期、中期、后期和末期五个阶段。
本实验通过观察大蒜根尖细胞的有丝分裂,了解细胞周期的变化和各个阶段的特点。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜大蒜头、盐酸、酒精、碘液、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、显微镜、酒精灯、滴管等。
2. 仪器:光学显微镜、显微镜载物台、显微镜镜筒、显微镜目镜、显微镜物镜等。
四、实验步骤1. 准备根尖:取新鲜大蒜头,用解剖针切下根尖约2-3毫米,放入盛有盐酸的试管中,在室温下浸泡10-15分钟。
2. 漂洗:将浸泡后的根尖用蒸馏水冲洗干净,去除盐酸。
3. 解离:将冲洗干净的根尖放入盛有盐酸和酒精混合液(1:1)的试管中,在室温下解离10-15分钟。
4. 漂洗:将解离后的根尖用蒸馏水冲洗干净。
5. 压片:将冲洗干净的根尖放在载玻片上,用解剖针轻轻压扁,盖上盖玻片。
6. 染色:在盖玻片边缘滴加碘液,用吸水纸吸取多余的碘液。
7. 观察:将载玻片置于显微镜下,观察大蒜根尖细胞有丝分裂的不同阶段。
五、实验结果与分析1. 间期:细胞核内染色质细长,呈丝状,细胞质均匀,无明显变化。
2. 前期:细胞核内染色质逐渐凝缩成染色体,染色体呈细长条状,细胞质无明显变化。
3. 中期:染色体排列在细胞中央,呈放射状,细胞质无明显变化。
4. 后期:染色体逐渐缩短变粗,向细胞两端移动,细胞质开始分裂。
5. 末期:染色体到达细胞两端,细胞质分裂成两个子细胞。
六、实验结论通过观察大蒜根尖细胞有丝分裂的不同阶段,我们可以了解到细胞周期中各阶段的特点。
本实验成功观察到了大蒜根尖细胞有丝分裂的各个阶段,为后续生物学研究提供了基础。
七、实验讨论1. 实验过程中,根尖浸泡在盐酸中,有助于软化细胞壁,便于观察。
2. 解离过程中,盐酸和酒精混合液的作用是使细胞分离,便于观察。
毕业论文学生姓名吴婷学号191101029 院(系) 生命科学学院专业生物科学(师范)题目中学生物实验“植物细胞有丝分裂观察”的改进与条件优化Improvements and Optimization of Condition for Observing Plant Cell Mitosis in Middle Normal School Biology Experiment指导教师杨文杰博士(姓名)(专业技术职称/学位)(姓名)(专业技术职称/学位)2015 年 5 月摘要:植物根尖细胞有丝分裂实验是中学生物教学的一个基础实验,但是笔者在实习期间发现不同教材提供的实验方法存在一些异同,而且按照教材(人教版)中介绍的实验方法步骤去操作,成功率很低。
本文结合生物学实验教学,通过改变解离液盐酸的使用浓度和解离时间、用希夫试剂代替龙胆紫或醋酸杨红溶液等技术,以大蒜根尖为试验材料,采用正交试验对实验方法进行优化,使有丝分裂实验的程序简化、时间缩短、成本降低、效果提高。
其中,当解离液盐酸浓度为5mol/L,解离时间为5min,染色时间为5min时,根尖细胞有丝分裂的观察效果最好。
关键词:有丝分裂,解离,染色,优化Abstract:The plant tip cell mitosis experiment is a basic experiment in middle normal school teaching. But I found that there are some similarities and differences between different teaching materials in the experimental methods. And if in accordance with the teaching material(PEP) experimental method step introduced to operate the experiment, the success rate is very low. In this paper, combined with biology experiment teaching. By changing the concentration of hydrochloric acid and the dissociation time, using Schiff's reagent instead of gentian violet or acetic acid magenta, taking the garlic root tip as experimental materials and optimizing the experimental methods with orthogonal experimental. It can simplify the programs, shorten the time, reduce the cost and raise the effect in this mitosis experiment. And when the concertration of hydrochloric is 5mol/L, the dissociation time is 5min and the dyeing time is 5min. We will get the best effect of the plant tip cell mitosis observed.Key words:mitosis, dissociate, dye, optimization目录1 前言 (4)1.1 中学实验教学中的细胞有丝分裂实验 (4)1.2 细胞观察 (4)2 材料与方法 (6)2.1 材料、试剂与仪器 (6)2.2 试验方法 (6)3 结果与分析 (8)结论 (10)参考文献 (11)致谢 (12)1 前言1.1 中学实验教学中的细胞有丝分裂实验观察植物细胞有丝分裂实验是新课程改革下高中阶段生物科学一个重要的实验。
利用大蒜根尖制作植物细胞有丝分裂装片
付小艳,四川省德阳中学校(618000)
中学生物教学,1999年第2期
在教学实践中作者曾选用过许多材料(洋葱、水稻、葱、大蒜等)做“植物细胞有丝分裂”实验,通过大量实验证明大蒜是作为该实验研究的好材料。
利用自己动手制作的“大蒜根尖纵切片”永久切片,让学生观察植物细胞有丝分裂效果很好。
实验具体操作如下:
1.材料大蒜根尖。
2.用具显微镜、解剖盘、草纸、载玻片、盖玻片、刀片或切片机。
3.药品离析液、醋酸洋红或醋酸地衣红、铁苏木精甲液(媒染剂)、酒精、桑弗利斯固定液。
4.方法步骤
(1)幼根培养。
选取新鲜饱满的蒜瓣,剥去膜质鳞被,用细竹签将蒜瓣穿成串,放在盛有水的解剖盘内,使蒜瓣的基部与吸透水的草纸接触,并用1层~2层吸水纸盖上,置于温暖处(24℃~25℃)或培养箱中,保持一定的水分,3天~5天后在蒜瓣基部则可长出洁白的幼根。
(2)掌握取材时间。
待根生长到1cm~1.5cm时,切取3个~5个根尖,放入浓盐酸与95%的酒精等量混合液中,离析5min~6min后,用蒸馏水清洗数次,置于干净的载玻片上,用刀片切去根冠和伸长区,留下分生组织,将其纵切成数片,用1滴~2滴醋酸洋红(或醋酸地衣红)染色5min,盖上盖玻片,用拇指腹部对准盖玻片下的材料轻压,使其分散成粉状,置于显微镜下观察。
经过反复实验,认为在室温24℃时,中午11时~13时取材较好,尤其在11时与12时之间分裂期细胞最多。
(3)材料的处理与固定。
在根尖细胞分裂旺盛期将培养的大蒜根尖全部切下,投入蒸馏水内稍加摇动使其下沉并放入0℃~5℃的冰箱内低温处理30min后,用桑弗利斯固定液固定4h~6h,经流水冲洗6h~12h,以清除材料中的固定液。
(4)脱水与透明。
将材料经30%、50%、70%、85%、95%的各级酒精逐级脱水30min至1h(视材料在固定液中时间长短而定),转入100%的1号、100%的2号酒精各脱水15min,再经过纯酒精与二甲苯等量混合液和纯二甲苯1号、2号各30min处理直至透明为止。
(5)包埋切片。
将透明的根尖材料,从纯二甲苯中取出,入二甲苯饱和石蜡中浸30min,经熔点为52℃~54℃、54℃~56℃、56℃~58℃的石蜡各30min包埋后用切片机切成5μm~6μm的石蜡切片,再进行展片、贴片、烘片。
(6)脱蜡入水。
将烘干的切片放入盛有二甲苯1号、2号中各脱蜡10min,转入纯酒精与二甲苯混和液3min~5min,再经100%、95%、85%、70%、50%、30%的各级酒精1min~2min,最后入蒸馏水4min~5min进行脱蜡入水。
(7)染色。
将入水后的切片,在新鲜铁苏木精甲液中先媒染30min,经蒸馏水分色到镜检胞核清晰为止。
最后再经蒸馏水过一次。
(8)脱水。
把染色的切片入30%、50%、70%(可在此浓度酒精中再次镜检效果)、85%、95%的各级酒精中进行脱水各2min~3min,100%1号、2号酒精中各脱水10min(100%1号、2号酒精塞要更换干燥的,以免有水分渗入)。
(9)透明后封藏。
将脱水后的切片入纯酒精与二甲苯的等量混合液5min,纯二甲苯1号、2号各透明10min,最后用鸡蛋清封藏切片。
5.优点
(1)取材最佳时间的确定,能确保切片的成功,在一张切片中能清晰地观察到植物细胞有丝分裂各时期的特点。
(2)用铁苏木精染色,有利于增大反差,便于观察。
(3)低温处理用蒸馏水而不用秋水仙素等贵重药品,这样既能节约资金,又利于身体健康。
同样能取得
良好效果。
(4)通常封片用的中性树胶粘合剂,在普遍中学实验室里不易找到,市面上也不易买到。
我在实验中用鸡蛋清替代中性树胶粘贴盖片效果较好。
因为鸡蛋清与中性树胶成分大致一样,都是蛋白质胶体,稀薄透明细腻。
(5)大蒜材料易得,加之染色体数目少而形大,易于观察,制片过程容易掌握,在常规切片方法的基础上将材料的处理方法加以改进,即能获得大量的植物细胞有丝分裂的清晰图像,使实验效果更佳。
该实验过程中还必须注意脱水这一关键步骤。
脱水的目的是使组织中的水分完全除去,并使组织变硬,各种材料经固定与冲洗后,组织中就含有大量水分,而材料又逐渐变软,不能直接投入石蜡中包埋。
因为水和石蜡是不能溶合的。
一定要将水分脱净才能进入包埋阶段;若脱水不干净,就会影响效果,甚至完全失败。