NGF和BME对小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用_英文_陈霞平

骨髓间充质干细胞和成纤维细胞的蛋白质组学比较word格式论文骨髓间充质干细胞和成纤维细胞的蛋白质组学比较作者,赵亮,魏旭峰,孙阳,陈瑜,易定华【摘要】目的,采用蛋白质组学方法研究人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)和成纤维细胞中的蛋白表达差异.方法,对hBMSCs和成纤维细胞的蛋白样本进行双向凝胶电泳分离,通过比较两种细胞的蛋白组学图谱,确定差异表达的蛋白点,而后对差异点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析和蛋白数据库信息检索,最后选取其中的5种蛋白进行WesternBlot实验验证蛋白质组学的研究结果.结果,在hBMSCs和成纤维细胞中鉴定出29种差异表达蛋白,其中有17种蛋白在两种细胞中有显著差别地表达,另外12种蛋白在两种细胞中有相同丰度地表达.WesternBlot 的实验结果进一步验证了蛋白质组学分析的结果.结论,hBMSCs与成纤维细胞中蛋白的差异表达体现了两种细胞在细胞形态、结构和功能上的异同性,这对于研究hBMSCs向成纤维细胞分化以及应用 hBMSCs构建组织工程瓣膜具有重要意义.【关键词】骨髓间充质干细胞成纤维细胞蛋白质组学【Abstract】AIM:TofindoutthedifferencesandsimilaritiesontheprotEinexpressionsbetween humanbonemarrowmesenchymalstemcells(hBMSCs)andhumanfibroblasts,word格式论文whichhavedifferentcellcharacteristicsandsimilarcellmorphology.METHODS: TheprotEInextractswereobtainedfromhBMSCsandfibroblasts,andseparatedbytw o-dimensionalgelelectrophoresis(2-DE).Andthenthedifferentialproteinspotswereidentifiedbymatrix-assistedlaserdesorptionionization-timeofflight-massspectrometry(MALDI-TOF-MS).TheresultsfromsimultaneousproteomicprofilingwerefurthervalidatedbyWe sternBlotofselectedproteins.RESULTS:Twenty-ninedifferentialproteinsweresuccessfullyidentifiedinhBMSCsandfibroblasts .Amongthem,17proteinswereexpressedsignificantlydifferentlyinhBMSCsfromth atinfibroblasts,andanother12proteinsequallyexpressedinthe2typesofcells.C ONCLUSION:ThedifferentialproteinexpressionsbetweenhBMSCsandfibroblastspr ovideanewinsightintothedifferentialcellstructuresandfunctionsbetweenthe2 typesofcells,whichmightbevaluableforfurtherstudyoffibroblastsdifferentia tionfromhBMSCsandtheapplicationofhBMSCsforcreatingtissueengineeredheartv alvesinthefuture.【Keywords】bonemarrowmesenchymalstemcells,fibroblasts,proteomics0引言骨髓间充质干细胞,BMSCs,是目前理想的组织工程瓣膜间质细胞的种子细胞,相对于血管来源的种子细胞,MSCs具有获取方便、多向分化潜能, 以及独特的免疫特性,能够在同种异体微环境中组织中产生免疫耐受的优点,1-2,.该研究拟全面比较hBMSCs和成纤维细胞中蛋白表达的差异,进一步word格式论文在蛋白水平理解两种在细胞结构和功能差异.这对今后研究hBMSCs在体外向成纤维细胞的分化诱导,以及应用hBMSCs构建组织工程瓣膜是非常必要的.1材料和方法1.1材料人骨髓来源于本院骨髓穿刺室,经过骨髓细胞学检查排除了血液系统的恶性疾病.人成纤维细胞,HDF,是购自CellApplications公司,/index.htm,.细胞分离、培养的主要试剂,Percoll 淋巴细胞分离液(密度为1.073g/mL),DMEM/F12,低糖,,磷酸盐缓冲液(PBS),硫酸链霉素、青霉素,均自Gibco,USA,,胎牛血清,CD34,CD44,CD29和CD105抗体,Sigma,USA,.双向凝胶电泳的主要试剂,尿素、硫脲和甘油,均自Sigma,USA,,CHAPS(美国Merck),两性电解液、IPG预制胶条(pH3,10,130mm)和碘乙酰胺,均自Bio,Rad,USA,,Bradford蛋白质检测试剂盒(上海申能博彩生物科技有限公司).WesternBlot实验所用抗体,Sigma,USA,.1.2方法(1)细胞培养和hBMSCs的鉴定:骨髓经肝素钠生理盐水(1200U/mL)肝素化后,PBS液洗涤、离心,弃掉骨髓中的脂滴等杂质,而后采用Percall淋巴细胞分离液进行密度梯度离心,获得的单核细胞静置培养于DMEM/F12培养液,含100mL/L 的胎牛血清,2mmol/L谷氨酰胺(Bio-Whittaker)和50U/mL青霉素,50mg/mL庆大霉素.原代细胞在2,3d可见少量贴壁细胞,细胞形态多样、不均一,继续培养,细胞多呈梭形,漩涡样或放射状平行排列,形成较多的细胞集落.10,14d后细胞即达80%,90%融合,传代后细胞集落消失,细胞均匀分布,平行排列,较紧密,3,4d即可传1代.当hBMSCs扩增至第3代时,采用流式细胞术分析hBMSCs的表面分子.细胞不表达造血标志CD34,CD45,而强表达CD29,CD105,阳性率分别为99.4%和99.5%,3-4,.同时,在培养的第word格式论文3代细胞体系中加入成骨细胞和脂肪细胞诱导剂,可成功地诱导向成骨细胞和脂肪细胞分化,5,.这表明分离培养的细胞为具有多向分化能力的hBMSCs.成纤维细胞在上述细胞培养液中进行常规培养和扩增.,2,hBMSCs和成纤维细胞的双向凝胶电泳,2-DE,,将hBMSCs和成纤维细胞细胞分别悬于裂解液(8mol/L尿素,40mL/L的CHAPS,40mmol/LTris,适量PMSF)中,混匀后用液氮反复冻融,再加入适量RNA酶和DNA酶,冰浴20min.4?离心(14000g,30min),收集上清液.用Bradford法测定蛋白含量,其余蛋白样品在-80?中保存.双向凝胶电泳,2,DE,分离细胞蛋白提取物,第一向固相PH梯度等电聚焦(IEF),取适量蛋白样品与水化上样缓冲液(8mol/L尿素+40g/L的CHAPS+20mmol/LDTT+5μL/LIPG缓冲液+痕量溴酚蓝)混合,银染检测时蛋白质的上样量为100,200μg,考染检测时的上样量为800,1500μg,上样总体积350μL.按程序等电聚焦结束后,将胶条在平衡液?(6mol/L尿素+375mmol/LTris+20g/L的甘油+20g/L的SDS+20g/L的DTT)中平衡10min,清洗后再置入平衡液?(6mol/L尿素+375mmol/LTris+200g/L的甘油+20g/L的SDS+100mmol/L碘乙酰胺)中平衡10min.第二向垂直平板电泳,SDS2PAGE,,将胶条移至130mL/L的丙烯酰胺胶上分离.参照文献 ,6,的方法对凝胶进行银染并扫描成像,.3,图像分析,凝胶用AGFADuoScanT1200凝胶图像扫描仪扫描,比较分析hBMSCs和成纤维细胞全蛋白凝胶数字化图像,比对分析采用ImagingMaster2DElite5.0软件完成.确定有显著性差别的蛋白表达丰度比值标准为n,2或n,0.5.,4,质谱分析及数据库检索,对选取的蛋白点进行胶内酶切,提取多肽混合物,纯化后,取1μL溶液和等体积饱和基质溶液混合,加至不锈钢靶上,室温干燥,采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析法,MALDI-TOF-MS,检测蛋白多肽.通过两种检索引擎Aldente(SCs和成纤维细word格式论文胞蛋白质组学研究的可靠性,从中选取5种差异表达的蛋白,α-smoothmuscleactin,α-SMA,,enolase1,vimentin,60SacidicribosomalproteinP0andcofilin-1,进行蛋白质印迹(WesternBlot)分析.各取两种细胞进行蛋白质组学分析的蛋白样品于100?变性5min.在具有10道双垂直电泳槽内每孔内加入60μg蛋白质,120ml/LSDS-PAGE电泳,转膜,50ml/L脱脂牛奶封闭2h,杂交一抗,4?过夜.PBST洗膜3次,每次10min.杂交二抗,室温摇床上1h,PBST洗膜3次,每次10min,DAB试剂盒显色.运用BandScanV5.0软件对免疫反应条带进行定量分析.统计学处理,资料用SPSSV10.0数据处理软件包进行统计学处理.计量资料以x?s表示,P0.05为有统计学意义.2结果2.1hBMSCs和成纤维细胞蛋白的差异表达hBMSCs和成纤维细胞全蛋白提取后,进行双向凝胶电泳分析,共进行3次实验得到银染结果,两张电泳图谱的蛋白斑点分布模式有相似性,图1,.1,17,两种细胞中不同表达丰度的蛋白;18,29,两种细胞有相同表达丰度的蛋白.图1hBMSCs(A)和人成纤维细胞(B)的双向凝胶电泳图,略,3次重复实验结果经ImagingMaster2DElite510软件分析,发现hBMSCs可以检测到782?65个点,成纤维细胞可以检测到760?57个点,这些蛋白质等电点和相对分子质量分布范围较广,但大多数集中于pH4,8,相对分子质word格式论文量15,100ku区域.对其中29个稳定表达的差异蛋白质斑点进行切割,用胰蛋白酶消化后进行MALDI-TOF-MS分析,通过UniProtKB/Swiss-PROT和NCBInonredundantproteindatabases蛋白数据库搜索,成功地鉴定出29种差异表达的蛋白,其中1,17种蛋白为两种细胞中有显著差别表达的蛋白点,18,29种蛋白为两种细胞中有相同丰度表达的蛋白点,表1,.表1hBMSCs和成纤维细胞中表达的29种蛋白,略,a,9.1,b,2.0,c,2.2,在hMBSCs中表达高出倍数,,d,10.5,在成纤维细胞中的表达高于的倍数,.2.2WesternBlot结果为验证双向电泳分析的准确性,选取其中的5种蛋白,α-平滑肌肌动蛋白,enolase1,vimentin,60SacidicribosomalprotEinP0andcofilin-1作进一步的蛋白质印迹分析,5种蛋白表达量比较与双向凝胶电泳蛋白表达丰度的比较结果一致,图2,.图2hBMSCs和人成纤维细胞中5种蛋白的WesternBlot结果,略,3讨论hBMSCs是目前理想的组织工程瓣膜的间质种子细胞,成纤维细胞较肌成纤维细胞对于维持正常心脏瓣膜的结构和功能具有更重要的意义,7-10,.但尚不清楚hBMSCs向成纤维细胞进行分化的机制, 应用 hBMSCs构建的组织工程瓣膜均需移植入动物体内后一段时间才能完成组织工程瓣膜的成纤维细胞表型和基质的最后重塑.但是,有研究表明组织工程产品在体内复杂的生物word格式论文环境中重塑会存在个体差异性,11,,可能会导致组织工程瓣膜不能被很好的重塑而导致再次衰败.因此,通过比较hBMSCs和成纤维细胞中的蛋白表达差异,从细胞的蛋白水平理解两种细胞的结构和功能上的差异,对于研究在体外诱导hBMSCs向成纤维细胞分化,以及应用hBMSCs构建TEHV是非常必要的.hBMSCs最初被定义为骨髓中在体外能够粘附生长、增殖和具有自我更新和多向分化能力的“成纤维细胞”样细胞,5,,它们在形态上和成纤维细胞非常的相似.免疫细胞化学分析显示hBMSCs具有肌成纤维细胞样的表型特点,7-8,.通过流式细胞分析技术研究,一系列的表面分子在hBMSCs中被发现,3-4,,然而,有研究发现那些细胞表面分子在成纤维细胞表面有同样的表达.此后,进一步通过基因组学的方法研究发现,在两种细胞中确实存在一些差异基因.蛋白质组,作为细胞基因组的最后表达,能够更详尽、更直接地描述细胞的结构和功能特点,12,.我们第一次采用比较蛋白质组学的方法研究了hBMSCs和人成纤维细胞的蛋白表达差异.采用2-DE分离细胞蛋白样本,银染凝胶,而后挖取蛋白点进行质谱分析仍是目前有效的蛋白质组学研究方法.在这项研究中,通过比较hBMSCs和成纤维细胞蛋白的2-DE图谱,对其中29个稳定表达的差异蛋白质斑点进行了质谱分析、鉴定,相应蛋白数据库信息检索和功能分析.在hBMSCs和成细胞中具有等量高丰度的表达.这种蛋白在两种细胞中的相同表达显示了两种细胞在形态和组织来源上相似性.为了验证蛋白组结果的可靠性,我们进行鉴定、分析的29种差异蛋白中,选出5种蛋白进行了word格式论文WesternBlot实验.两种实验得出了相同的结果,进一步证实采用蛋白质组学方法在蛋白水平研究细胞的形态、结构和功能的可靠性,13,.实验通过分析hBMSCs和成纤维细胞中的蛋白差异表达清楚看到了两种细胞性质不同的hBMSCs和成纤维细胞在形态、结构和功能上异同性.这些结果对于我们今后研究hBMSCs向成纤维细胞分化和应用hBMSCs构建TEHV 是非常有意义的.【参考文献】,1,ProckopDJ.Marrowstromalcellsasstemcellsfornonhematopoietictissues,J, .Science,1997,276:71-74.,2,LiechtyKW,MackenzieTC,ShaabanAF,etal.Humanmesenchymalstemcellsengraf tanddemonstratesite-specificdifferentiationafterinuterotransplantationinsheep,J,.NatMed,2000 ,6:1282-1286.,3,BrentonS,Nathalie,B,TeresaOS,etal.MesenchymalStemCells,J,.ArchMed Res,2003,34:565-571.,4,HaynesworthSE,BaberMA,CaplanAI.Cellsurfaceantigensonhumanmarrow-deri word格式论文vedmesenchymalcellsaredetectedbymonoclonalantibodies,J,.Bone,1992,13:69-80.,5,FriedenstEInAJ,ChailakhyanRK,LalykinaKS. The developmentoffibroblastcoloniesinmonolayerculturesofguineapigbonemarrowa ndspleencells,J,.CellTissueKinet,1970,3:393-402.,6,CandianoG,BruschiM,MusanteL,etal.Bluesilver:avery-sensitivecolloidalCoomassieG-250stainingforproteomeanalysis ,J,.Electrophoresis,2004,25:1327-1333.,7,HoerstrupSP,KadnerA,MelnitchoukS,etal.Tissueengineeringoffunctionalt rileafletheartvalvesfromhumanmarrowstromalcells,J,.Circulation,2002,106:1143-1150.,8,AlexanderK,SimonPH,GregorZ,etal.Anewsourceforcardiovasculartissueeng ineering:humanbonemarrowstromalcells,J,.EurJCardiothoracSurg,2002,21:1055-1160.word格式论文,9,ReyesM,LundT,LenvikT,etal.Purificationandexvivoexpansionofpostnatalh umanmarrowmesodermalprogenitorcells,J,.Blood,2001,98:2615-2625.,10,PittengerMF,MackayAM,BeckSC,etal.Multilineagepotentialofadultmesench ymalstemcells,J,.Science,1999,284:143-147.,11,McBreartyBA,ClarkLD,ZhangXM,etal.Geneticanalysisofamammalianwound-healingtrait,J,.ProcNatlAcadSciUSA,1998,95:11792-11797.,12,BlackstockWP,WeirMP.Proteomics:quantitativeandphysicalmappingofcellu larproteins,J,.TrendsBiotechnol,1999,17:121-127.,13,PanepucciRA,SiufiJL,SilvaWAJr,parisonofgeneexpressionofumbil icalcordveinandbonemarrow-derivedmesenchymalstemcells,J,.StemCells,2004,22:1263-1278.。

神经生长因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的效果观察及相关蛋白网络分析苏立宁;宋小青;魏会平【摘要】目的：观察神经生长因子（NGF）诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向神经细胞分化的效果，并分析相关蛋白网络。

方法将4周龄健康SD大鼠4只，脱臼处死取股骨分离BMSCs并传代。

取第5代BMSCs制备细胞爬片，分为观察组和对照组两组，观察组加入3％ DMSO、60 ng／mL NGF 、DMEM／F12预诱导液预诱导2 h，预诱导完成后加入100 ng／mL NGF、DMEM／F12诱导液诱导48 h。

对照组不加任何药物。

诱导完成后倒置显微镜观察两组细胞形态变化，用免疫组化法检测两组BMSCs中的神经元特异性烯醇酶（NSE）蛋白，用实时荧光定量PCR法检测BMSCs中的NSE mRNA。

采用生物信息学软件STRING10．0分析NGF在诱导BMSCs向神经细胞分化中参与的蛋白网络，并对网络系统中编码蛋白的基因进行功能富集分析。

结果镜下可见观察组细胞体积增大，细胞核固缩，核质比降低，细长突起明显，部分细胞间以网络状连接。

对照组细胞密度较均匀，形态以长梭形为主。

诱导完成第1、2、4天，观察组NSE mRNA相对表达量分别为1．34±0．06、2．23±0．23、1．56±0．09，两组比较，P均＜0．05。

观察组诱导完成第1、2天时NSE蛋白阳性细胞数分别为（35±8）、（133±6）个，对照组未检测到NSE蛋白阳性细胞，两组比较，P均＜0．05。

以NGF为种子节点得到与NGF直接发生作用的105个蛋白节点，共3个中心节点，分别为N GF、神经生长因子受体和泛素C。

对网络中的各个节点进行GO功能富集分析，结果富集在神经分化、神经发育及调控神经凋亡等生物学过程。

NGF与Ras蛋白特定鸟嘌呤核苷酸释放因子1、脑衍生神经营养因子、生长抑制蛋白、NGF、NGFR、神经营养受体酪氨酸激酶1、神经营养受体酪氨酸激酶2、神经营养因子3、极微小蛋白激酶C、GTP结合蛋白RAC、核糖体蛋白S27A、信号传导子及转录激活子3、酪氨酸羟化酶、泛素A-52、泛素B和UBC等蛋白相互作用调控神经分化过程。

骨髓间充质干细胞向神经外胚层转分化的能力及其对神经干细胞分化的影响的开题报告研究背景：骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）是一种广泛存在于多种组织和器官的多功能细胞，具有自我复制和多向分化能力，包括成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞，具有潜力用于组织工程和干细胞治疗。

BM-MSCs 拓展了研究人员对干细胞在神经系统修复中的潜力的认识。

BM-MSCs 在转分化为神经细胞后，能够在神经系统损伤修复、神经退行性疾病治疗中发挥关键的作用，与神经干细胞 (NSCs) 相比，BM-MSCs 的来源更加丰富，更易于获取。

研究内容：本研究将探讨 BM-MSCs 从间充质干细胞向神经外胚层分化的能力，以及转分化后附着于神经元上时，是否有助于神经干细胞的分化和成熟。

研究目的：1. 确定 BM-MSCs 向神经外胚层的转分化潜力。

2. 分析 BM-MSCs 对神经干细胞分化和成熟的影响。

3. 探索 BM-MSCs 在神经系统修复中的潜力。

研究方法：1. 体外培养 BM-MSCs 并诱导其向神经外胚层转分化。

2. 通过分子生物学和免疫细胞化学方法，检测 BM-MSCs 转分化为神经外胚层细胞的表型及分子标记的变化。

3. 将 BM-MSCs 转分化后加入神经干细胞培养基，研究其对神经干细胞分化和成熟的影响。

4. 借助动物模型，验证 BM-MSCs 在神经系统修复中的作用。

预期结果：研究结果有望确认 BM-MSCs 能够向神经外胚层分化，找到并分离神经外胚层细胞，将 BM-MSCs 转分化后易于附着于神经元，在其表面释放出有助于神经干细胞分化和成熟的信号分子，提供一种新的细胞疗法策略。

该项研究可以拓展我们对 BM-MSCs 在神经系统修复中的潜力的认识。

一些神经营养因子对神经干细胞的增殖和分化的影响谷平;陈付学;文铁桥【期刊名称】《上海大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2001(007)002【摘要】A certain number of neural stem cells that exist in the embryonic and adult mammalian brain can potentially differentiate into neurons or neuroglia. Those stem cells isolated from adult and embryonic brain are regulated by a series of growth factors, such as fibroblast growth factor (FGF), epidermal growth factor (EGF), etc. However, the effects of growth factors on the proliferation and differentiation of neural stem cells showed difference under different culture conditions.%胚胎和成年哺乳动物脑内存在能分化为神经元和神经胶质细胞的神经干细胞,从成年脑和胚脑分离的神经干细胞能在体外分裂并进一步分化成神经元和胶质细胞,许多生长因子,如成纤维细胞生长因子和表皮生长因子等都参与了这一分裂、分化过程,对神经干细胞的增殖及分化产生一定的影响.但在不同的情况下,它们对增殖及分化的作用不同.【总页数】5页(P147-150,153)【作者】谷平;陈付学;文铁桥【作者单位】上海大学生命科学学院,;上海大学生命科学学院,;上海大学生命科学学院,【正文语种】中文【中图分类】Q42【相关文献】1.脑源性神经营养因子对神经干细胞增殖和分化的影响 [J], 赵昱;赵文杰;赵静;陈炜;李莉;李陈莉2.脑源性神经营养因子对神经干细胞增殖分化的影响 [J], 胡泳菊3.神经营养因子与神经干细胞的增殖与分化：基于汤森路透Web of Science数据库文献检索 [J], 姜振4.神经营养因子与神经干细胞的增殖与分化:基于汤森路透Web of Science数据库文献检索 [J], 姜振5.脑源性神经营养因子对神经干细胞增殖与分化的影响 [J], 赵昱; 赵文杰; 李莉; 赵静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鼠神经生长因子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究陈再丰;许信龙;魏晓捷;傅小君;潘红松;谢青松【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2012(17)2【摘要】目的:观察鼠神经生长因子(mNGF)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化的影响。

方法:4周龄健康SD大鼠60只,按随机数字表法分为治疗组(n=30)和正常对照组(n=30)。

治疗组在常规培养的基础上加入浓度为0.1μg/mL mNGF作为诱导液。

将培养的第3代BMSCs制成单细胞悬液,诱导后3d,观察细胞形态变化,行神经元特异性烯醇酶(NSE)免疫荧光检测,计算阳性率。

结果:正常对照组细胞仅有少量NSE的表达,治疗组细胞表达NSE阳性率较对照组细胞显著增加(P<0.01)。

结论:mNGF可诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化。

【总页数】4页(P137-140)【关键词】鼠神经生长因子;骨髓间充质干细胞;细胞分化【作者】陈再丰;许信龙;魏晓捷;傅小君;潘红松;谢青松【作者单位】浙江省慈溪市人民医院神经外科【正文语种】中文【中图分类】R965.2【相关文献】1.大鼠脊髓匀浆上清诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究 [J], 吴金生;李鑫;王晓萃;付文玉;丁洁;魏德全2.天然脑活素定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究 [J], 李映红;吴正治;吴伟康;李明;王济国;杨敏;陈蔓茵3.大鼠骨髓间充质干细胞的培养及其向神经元样细胞诱导分化的实验研究 [J], 宋杰;王丽;冯宁;何涛4.体外诱导树鼩骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究 [J], 苗雨润;李娜;匡德宣;宋庆凯;袁圆;王璇;张志成;陆彩霞5.三磷酸胞苷二钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究 [J], 王宇;魏书艳;史小琴;王燕;张明艳;陈玉敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

专业辨析神经生长因子（NGF）的神话命基111 陈俊青10111115摘要：神经生长因子（NGF）是神经营养因子中最早被发现，目前研究最为透彻的，具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。

但是神经生长因子在临床应用上尚未成熟，它的诸多作用还是理论上的推测。

关键词：神经生长因子（NGF）、神经营养因子、神经细胞、神经生长因子的中国神话正文：1.概念[3]神经生长因子nerve growth factor 略称NGF。

在将小鼠肉瘤180移植于3日龄鸡胚体壁时，与移植片连接的脊髓感觉神经节及交感神经节增大20%—40%，基于比克尔（E.D.Bueker，1948）的这一发现，科恩（S.Cohen，1954）等从小鼠肉瘤180和37中成功地分离出具有同一活性的核蛋白质，以后从蛇毒中分离出具有千倍活性（Cohen，R.Levi-Montalcini，1956）和从小鼠颚下腺分离出具有万倍活性的蛋白质（Cohen，1960），这种蛋白质被称为神经生长因子。

NGF含于马、猪的颚下腺和小鼠肉瘤、小鼠胚胎及成体的交感神经细胞、小鼠尿和唾液、鸡胚的多种器官和一切哺乳类的血清中。

神经生长因子（NGF）是神经营养因子中最早被发现，目前研究最为透彻的，具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。

NGF包含α、β、γ三个亚单位，活性区是β亚单位，由两个118个氨基酸组成的单链通过非共价键结合而成的二聚体，与人体NGF的结构具有高度的同源性，生物效应也无明显的种间特异性。

2．发现人与研究历程[2]、[6]2.1 1953年意大利生物学家丽塔·莱维-蒙塔尔奇尼(Rita Levi-Montalcini)和美国生化学家斯坦利·科恩（Stanley·Cohen）发现并分离提纯出神经生长因子（NGF）。

脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞初步观察刘谦虚;谢鼎华;陈观贵【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》【年(卷),期】2009(17)3【摘要】目的探讨骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)转染人脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因后在体外分化为神经元样细胞的功能.方法克隆人BDNF基因并构建其真核表达载体;分离培养5只豚鼠BMSCs,观测其形态并用流式细胞仪鉴定;将人BDNF基因电穿孔法转染BMSCs,G418筛选后用维甲酸诱导分化,免疫细胞化学法对分化细胞进行鉴定.结果分离培养的细胞具有典型的BMSCs形态和标志,转染诱导后的细胞表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白,并能分泌BDNF.结论 BDNF基因转染的BMSCs在体外能分化为神经元样细胞,电穿孔法能提高转染率,RA有促诱导作用.%Objective To investigate the function of bone-marrow mesenehymal stem eells(BMSCs) differ-entiating into neuron-like cells in vitro after transfected by human brain-derived neurotrophie factor (BDNF) gene. Methods Human BDNF genes were cloned and recombinant pcDNA3. 1(-)-BDNF plasmids were construc-ted. BMSCs from five guinea pigs were isolated and cultured while their morphologies were observed by microscope. The surface antigen was detected by flowcytometry. BDNF genes were transfected into BMSCs with electroporation, and the transfected BMSCs were induced by ratinoieacid(RA)after bolted by Geneticin-418 (G418), then the dif-ferentiated BMSCs were identified by immunocytochemistry. Results The culture ceils demonstroted the typical mor-phology and surface antigen of BMSCs. The transfected cells expressed neuron- specific enolase(NSE), Nestin and glial fi-brillary acid protein(GFAP) also secreted BDNF. Conclusion BMSCs transfected by BDNF genes can differentiate into neu-ron- like cells in vitro, electroporation can enhame the transfection efficiency, RA can promote cell induction.【总页数】4页(P252-255)【作者】刘谦虚;谢鼎华;陈观贵【作者单位】中南大学耳科研究所、湘雅二医院耳鼻咽喉头颈外科,长沙410011;中南大学耳科研究所、湘雅二医院耳鼻咽喉头颈外科,长沙410011;中南大学耳科研究所、湘雅二医院耳鼻咽喉头颈外科,长沙410011【正文语种】中文【中图分类】R339.16【相关文献】1.脑源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 [J], 黄文;张成;陈松林;张为西;姚晓黎;曾缨;黄慧;冯善伟;柳太云2.红景天苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 [J], 张全伟;赵兴绪;赵红斌;张明;杨银书;葛宝丰3.红景天苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 [J], 张全伟;赵兴绪;赵红斌;张明;杨银书;葛宝丰4.川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究 [J], 刘云云;赵兴绪;赵红斌;葛宝丰;刘兴炎;陈克明5.人参总皂苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 [J], 郑国庆;王小同;邬伟;陈伟;宋秋英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

NGF对小鼠骨髓诱导的树突状细胞成熟分化及功能
的影响的开题报告
NGF是神经生长因子（nerve growth factor）的缩写，它在神经元
的发育和修复中起到了非常重要的作用。

除此之外，NGF对于免疫系统
的细胞也具有影响，并能够促进细胞分化和成熟。

在骨髓中，树突状细
胞是一类重要的免疫细胞，它们在机体的免疫应答中发挥着关键的作用。

本研究旨在探究NGF对小鼠骨髓诱导的树突状细胞成熟分化和功能
的影响。

研究将使用小鼠骨髓细胞进行原代培养，将细胞分化成树突状
细胞，并分别设置NGF处理组和对照组。

在处理组中，将加入不同浓度
的NGF，观察细胞形态、表面标记物的表达、细胞功能、细胞周期等指
标的变化情况，验证NGF对树突状细胞成熟分化及功能的影响。

同时，
研究还将通过Western blot和RT-PCR等技术手段，探究NGF对树突状
细胞关键蛋白和基因的表达变化情况。

本研究意义重大。

首先，对通过探究NGF对树突状细胞功能的影响，有助于深入理解NGF在免疫系统中的作用以及细胞与细胞间的交互作用。

其次，本研究为深入挖掘NGF在免疫系统中的作用奠定了实验基础，有
望为治疗和预防某些免疫性疾病提供新的治疗方案。

骨髓间充质干细胞表达神经营养因子及对神经干细胞的保护作用吴永超;郑启新;胡东;郝杰;王运涛;刘晓帆【期刊名称】《中国康复理论与实践》【年(卷),期】2006(012)009【摘要】目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)表达脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)以及BMSC条件培养液对神经干细胞的保护作用.方法取大鼠骨髓培养BMSC,用CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色进行鉴定.提取BMSC mRNA,RT-PCR检测BDNF和NGF表达,ELISA检测BMSC培养液中BDNF和NGF的含量.原代取材培养新生大鼠皮质神经干细胞,nestin染色鉴定.用不同比例的BMSC条件培养液培养神经干细胞24 h后,热休克诱导凋亡,流式细胞仪检测凋亡细胞比率.结果 BMSC贴壁生长,免疫细胞化学染色CD44和CD71阳性表达,CD45阴性表达.BMSC表达BDNF和NGF mRNA,BMSC培养液中含有BDNF和NGF;随培养时间的延长,培养液中BDNF和NGF的浓度增加.BMSC条件培养液可以减少热休克诱导的神经干细胞凋亡比率,并且BMSC条件培养液浓度高者有更好的保护作用.结论 BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF,对神经干细胞凋亡有保护作用.【总页数】4页(P780-782,封三)【作者】吴永超;郑启新;胡东;郝杰;王运涛;刘晓帆【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北武汉市,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北武汉市,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,湖北省干细胞中心,湖北武汉市,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北武汉市,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北武汉市,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,湖北武汉市,430022【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.骨髓间充质干细胞神经营养因子的表达及对脊髓神经元的保护作用 [J], 吴永超;郑启新;胡东;郝杰;王运涛;刘晓帆2.脑源性神经营养因子对缺氧神经干细胞的保护作用 [J], 吕扬;苏心;秦进喜;张文治3.脑源性神经营养因子对β淀粉样蛋白诱导神经干细胞损伤的保护作用 [J], 苏心;张文治;王新平4.S100A4促进脑源性神经营养因子表达影响神经干细胞的分化 [J], 杜晓文; 林大鹏; 屠冠军5.S100A4促进脑源性神经营养因子表达影响神经干细胞的分化 [J], 杜晓文; 林大鹏; 屠冠军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

骨髓基质细胞对共培养条件下的脊髓源性神经干细胞分化为胆碱能神经元的诱导李鹏飞;王春芳【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2006(029)006【摘要】目的:研究骨髓基质细胞对共培养条件下脊髓源性神经干细胞分化为胆碱能神经元的情况.方法:从孕龄13 d的胚胎大鼠脊髓组织中分离神经干细胞,采用含EGF及bFGF的无血清限定性培养基培养,并通过与骨髓基质细胞进行共培养,观察脊髓源神经干细胞向胆碱能神经元分化的情况,用细胞免疫荧光染色鉴定分化结果.结果:从胚胎脊髓中分离得到大量的神经干细胞,通过限定性培养基培养可获得干细胞球,与骨髓基质细胞共培养可被诱导分化,用细胞免疫荧光染色鉴定,可见有胆碱能神经元生成.结论:胚胎大鼠脊髓源神经干细胞在添加EGF与bFGF的限定性培养基中可以增殖并保持稳定的性状,在与骨髓基质细胞共培养时,可以被诱导分化为胆碱能神经元.【总页数】4页(P744-746,封3)【作者】李鹏飞;王春芳【作者单位】山西医科大学医学实验中心分子生物学实验室,太原,030001;山西医科大学医学实验中心分子生物学实验室,太原,030001【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.脊髓源神经干细胞向胆碱能神经元诱导分化的研究 [J], 郑金平;李鹏飞;索耀君;王春芳2.胶质细胞源性神经营养因子与转化生长因子β1联合诱导大鼠脊髓源性神经干细胞的分化特点 [J], 李振宇;高明勇;闫洪印;白润涛;韩漫夫;余铮3.脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1表达的研究[J], 刘彩玉;王春芳;李鹏飞;蔚洪恩;龙志晶;邓春圣4.新生大鼠海马源性神经干细胞的分离培养及其向胆碱能神经元定向诱导分化研究(英文) [J], 罗湘颖;杨志敏;宋晓斌;刘苏;赵匡彦;冯忠堂;王廷华5.兔骨髓基质细胞源性神经干细胞诱导分化及移植修复脊髓损伤实验研究 [J], 刘德虎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

神经节苷脂对人骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞生长状态的影响张丽芳;杨晓苏;肖波;胡益民;陈冰;彭晶晶【期刊名称】《脑与神经疾病杂志》【年(卷),期】2009(017)001【摘要】目的探讨神经节苷脂对人骨髓间充质干细胞(hMSCs) 诱导分化为神经元样细胞后生长状态的影响.方法 MSCs 由成年人骨髓经密度梯度离心加贴壁培养法获得,取第4～6代MSCs以10ng/ml bFGF预诱导24h后,用丁羟基茴醚(BHA) 、二甲基亚砜(DMSO) 和不同浓度神经节苷脂(25mmol/L、50mmol/L、75 mmol/L)诱导分化,采用免疫细胞化学法鉴定神经细胞特异性抗原标记神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2 (MAP2)和神经胶质相关蛋白(GFAP)的表达.唑盐比色实验(MTT法)检测不同浓度神经节苷脂对诱导后5h、24h、2d、3d 细胞生长情况的影响.结果成功分离培养人MSCs ,诱导分化后大部分MSCs变成神经元样细胞并表达NSE和MP2.中等浓度(50mmol /L)神经节苷脂组诱导后的细胞生长活力较低浓度和高浓度组好(P＜0.05).结论中等浓度神经节苷脂能使诱导后的细胞保持较好的生长状态.【总页数】4页(P13-16)【作者】张丽芳;杨晓苏;肖波;胡益民;陈冰;彭晶晶【作者单位】长治医学院附属和平医院;410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科;410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科;410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科;410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科;410008,长沙,中南大学湘雅医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R741.02【相关文献】1.八肽胆囊收缩素对骨髓间充质干细胞诱导分化后神经元样细胞生长状态的影响[J], 王丽;何涛;于海清;李娟;段承刚2.三七总皂苷对人骨髓间充质干细胞诱导分化后神经元样细胞生长状态的影响 [J], 刘瑞玲;李光来;陈文超3.依达拉奉对骨髓间充质干细胞诱导分化后神经元样细胞生长状态的影响 [J], 连霞;李光来4.人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为神经元样细胞 [J], 王莹;赵洪昌;赵文静;叶冬霞;李晶;罗速5.人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化 [J], 徐隋意;李光来因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞迁移能力变化的研究龚黎民;李士勇;刘容容;王晔【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(28)8【摘要】Aim To study the methods of bone marrow mesenchymal stem cells ( BMSCs) differentiation into the neural-like cells and investigate the mechanism of the migration capacity changes of neuron-like cells derived from BMSCs. Methods BMSCs were cultured with 1 mmol · L-1 β-mercaptoethanol (BME) for 12 h or 24 h to induce the differentiation into neuron like cells in vitro. After 12 h or 24 h, differentiation was observed under phase contrast microscope. Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction ( RT-PCR) techniques was used to detect the expression of mRNA of specificity enolase of neuron ( NSE) , neurofilament and glial fibrillary acidic protein ( GFAP) , β-tubulin Ⅲ. Weste rn-blot was applied to detect expression of CXCR4. Cell migration was measured using a modified Boyden chamber assay. Results Partly cytoplasm of differentiated BMSCs contracted with protruding after induction. RT-PCR demonstrated that the mRNA expression of NSE, neurofilament, β-tubulin Ⅲ of neuron-like cells induced from BMSCs was markedly enhanced. Western blot showed that the expression level of CXCR4 of neuron-like cells was obviously increased. SDF-1 significantly increased the migration of the differentiated BMSCs in a Boyden chamber assay. When the cells were treated with a specificantagonist for CXCR4, AMD3100,cell migration was significantly inhibited. Conclusion BME is an effective inducer for the differentiation of BMSCs into neuron-like cells in vitro, and it can increase the differentiated BMSCs migration via up-regulating SDF1/CXCR4 axis.%目的研究体外定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的方法,探讨其分化后迁移能力变化的分子机制.方法体外培养BMSCs,以β-巯基乙醇(BME)1 mmol·L-1诱导分化,于诱导后12 h、24 h分别观察细胞形态变化,RT-PCR鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE) 、神经丝蛋白(Neurofilament) 、胶质纤维酸性蛋白(β-tubulin Ⅲ) mRNA 的变化.Western blot检测CXCR4表达变化,细胞迁移实验检测BMSCs诱导前后迁移能力的变化.结果诱导后,BMSCs胞体收缩,突起伸出;RT-PCR发现诱导出的神经元样细胞的NSE、Neurofilament 、β-tubulin Ⅲ mRNA明显增加;Western blot结果表明神经元样细胞表面CXCR4的表达明显增加,细胞迁移实验发现神经元样细胞向SDF-1α的迁移能力明显增加.用CXCR4特异的抑制剂AMD3100处理后细胞迁移被明显抑制.结论在体外骨髓基质干细胞以BME为诱导剂可定向分化为神经元样细胞,且发现其迁移能力明显增加,其机制可能与其表面CXCR4表达上调有关.【总页数】4页(P1092-1095)【作者】龚黎民;李士勇;刘容容;王晔【作者单位】南昌大学第二附属医院神经内科,江西,南昌,330006;南昌大学第二附属医院分子医学中心,江西,南昌,330006;南昌大学第二附属医院神经内科,江西,南昌,330006;南昌大学第二附属医院神经内科,江西,南昌,330006【正文语种】中文【中图分类】R322.8;R329.24【相关文献】1.神经节苷脂体外诱导骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞 [J], 杨键;洪毅;董浩;张宪娣;姜树东2.雪旺细胞促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的效应研究 [J], 智晓东;吕刚3.依达拉奉体外诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的电生理研究 [J], 曾荣;胡资兵;郭伟韬;林颢;孙欣;魏劲松;吴少科4.三磷酸胞苷二钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究 [J], 王宇;魏书艳;史小琴;王燕;张明艳;陈玉敏5.川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究 [J], 刘云云;赵兴绪;赵红斌;葛宝丰;刘兴炎;陈克明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

过表达NGF的间充质干细胞对神经元损伤的修复作用研究李慧勇;彭余江;何玺君;邵波;段虹宇;陈慧慧;杨帆;杨鹏翔;曾煜【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2018(040)019【摘要】目的探讨间充质干细胞(MSC)过表达神经生长因子(NGF)对神经元缺糖缺氧(OGD)模型中神经元损伤的修复作用机制.方法分离和培养大鼠MSC并过表达NGF,收取MSC蛋白,Western blot法检测NGF的过表达效果;同时分离培养大鼠原代神经元,制备大鼠神经元OGD模型,然后将MSC培养上清液加入大鼠神经元OGD模型中,TUNEL染色法检测神经元凋亡情况,Western blot法检测保护性信号通路磷酸化Akt(p-Akt)表达情况.结果 AdNGF腺病毒感染的MSC培养上清液可明显上调原代神经元p-Akt表达水平,过表达NGF后的MSC培养上清液可以进一步修复原代神经元损伤,抑制原代神经元凋亡.结论过表达NGF的MSC可修复神经元损伤,NGF联合MSC移植治疗神经元损伤或为临床一种新思路.【总页数】4页(P2126-2129)【作者】李慧勇;彭余江;何玺君;邵波;段虹宇;陈慧慧;杨帆;杨鹏翔;曾煜【作者单位】317500 温岭市第一人民医院神经外科;317500 温岭市第一人民医院神经外科;317500 温岭市第一人民医院神经外科;317500 温岭市第一人民医院神经外科;317500 温岭市第一人民医院神经外科;317500 温岭市第一人民医院神经外科;317500 温岭市第一人民医院神经外科;317500 温岭市第一人民医院神经外科;317500 温岭市第一人民医院神经外科【正文语种】中文【相关文献】1.骨髓间充质干细胞对酒精诱导海马神经元损伤的作用研究 [J], 杨海玉;吴晓牧;刘勇;曾玉娥2.DPN大鼠坐骨神经NGF的动态表达及胰岛素和人NGF的干预作用 [J], 张云云;王坚;蒋雨平;任惠民3.NGF过表达脐带间充质干细胞治疗大鼠脑出血的实验研究 [J], 邵锦根; 李旭升; 陶红苗; 何忠平; 刘晓玲; 周向平4.神经生长因子过表达的人脐带血间充质干细胞来源外泌体修复大鼠坐骨神经慢性压迫损伤的效果及作用机制研究 [J], 郑良良;张弛5.神经生长因子（NGF）对基底前脑NGF－受体阳性神经元损伤后的保护作用 [J], 龙大宏;姚志彬;何蕴韶;顾耀铭;陈以慈;邝国壁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

bFGF促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经胶质样细胞转分化陈莉;买霞;扎拉嘎胡;陈小义;徐瑞成【期刊名称】《解剖科学进展》【年(卷),期】2008(14)3【摘要】目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)在体外诱导为神经源性细胞的可行性,并探讨其作用机制。

方法从Wistar大鼠骨髓中获得rMSCs,纯化培养传代后用不同浓度的bFGF诱导,经MTT法检测bFGF对rMSCs生长的影响;用倒置光显微镜、透射电镜、免疫组化和RT-PCR等方法鉴定诱导后细胞行为改变与snail mRNA表达。

结果bFGF对rMSCs具有促增殖作用,在倒置光显微镜和透射电镜下可见到有神经胶质样细胞形成,免疫组化证明GFAP 的表达较对照组显著增高(P<0.01)。

RT-PCR结果表明,诱导组细胞snail mRNA 明显表达。

结论bFGF促进rMSCs转分化为GFAP阳性的神经胶质样细胞,转录因子Snail可能与转化过程有关。

【总页数】4页(P233-236)【关键词】骨髓间充质干细胞;碱性成纤维细胞生长因子;细胞分化;Snail;大鼠【作者】陈莉;买霞;扎拉嘎胡;陈小义;徐瑞成【作者单位】中国人民武装警察部队医学院细胞生物学教研室【正文语种】中文【中图分类】Q257;R392.21【相关文献】1.bFGF和EGF诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成神经样细胞 [J], 何丁文;殷嫦嫦;顾玉荣;陈伟才;矢庆明;殷明2.尼克酰胺联合Exendin-4促进大鼠骨髓间充质干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞团的研究 [J], 武晓泓;刘翠萍;茅晓东;徐宽枫;崔岱;朱剑;张梅;刘超3.视网膜细胞联合bFGF体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化 [J], 李群秀;刘学政;张克俭;侯阳4.视网膜细胞联合bFGF体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化 [J], 李群秀;刘学政;张克俭;侯阳5.bFGF促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经元转化及机制 [J], 江和碧;卓本慧;代英;瞿平;李廷玉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

多效生长因子在骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中的表达变化连霞;李光来;李东芳;薛国芳;裴宇恒【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2017(015)011【摘要】目的探讨多效生长因子(PTN)在体外诱导成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经元样细胞分化中过程不同时间的表达变化,了解多效生长因子是否参与BMSCs向神经元样细胞分化的机制.方法以密度梯度离心加贴壁培养法分离成人BMSCs,进行原代和传代培养,以流式细胞仪鉴定纯度.对照组和实验组对传代第6代的BMSCs进行诱导分化,诱导后30 min至3 d,观察细胞形态并计数.将分化后细胞采用免疫细胞化学法测定神经细胞特异性表面标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.对诱导前和诱导后3 h、6 h、12 h、24 h、3 d细胞以RT-PCR法测定PTN mRNA表达.结果BMSCs在接种1 d后黏附贴壁,呈椭圆形或圆形,3 d~5 d后呈梭状细胞成簇生长,7 d~12 d融合.传代至第5代~6代可见较为均一的成纤维细胞样形态.流式细胞仪检测结果显示:细胞表达CD44、CD105,不表达造血干细胞的特异标记CD45,证实其纯度.诱导后细胞胞体开始向细胞胞核收缩,出现双极或多极细胞.12 h变形细胞增多,细长突起相互连接.24 h后细胞变化不明显.诱导后细胞经免疫化学染色显示:多数表达NSE(64.79±0.06)%、MAP-2(60.05±0.09)%,而未检测到GFAP.实验组诱导后细胞不同时间点PTN mRNA的表达不同(P<0.01). 诱导后12 h~24 h PTN mRNA表达最高.结论建立成人BMSCs培养增殖体系基础上诱导BMSCs向神经元样细胞分化,诱导过程细胞有外观形态变化,同时表达神经细胞特异性标志物NSE和MAP-2.诱导后BMSCs与形态改变相似,向神经元样细胞分化的不同时间点,有PTN mRNA表达变化,提示PTN可能参与BMSCs向神经元样细胞的分化.%Objective To study the expression of pleiotrophin (PTN) mRNA in the differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) into neuron-like cells in vitro,and investigate the mechanism.Methods Human BMSCs were isolated primarily from bone marrow of adult volunteers' iliac and purified sterilely with gradient centrifugation.The low-density cells including BMSCs were cultivated and purified by passage control.We observed the growth status of BMSCs,and identity the immunological characteristic phenotype of CD45,CD44 and CD105 by using FACS.The 6th passage of BMSCs were planted into plastic culture flask and induced.The control group did not receive any induced treatment.We observed the morphology change of BMSCs,after the induction 6 hours,neuron-specific enolase (NSE),microtubule-associated protein-2(MAP-2) and glial fibrillary acidic protein (GFAP),which were neuron marker were detected by using immunocytochemistry method.The express of PTN mRNA was detected by RT-PCR before induction and at 3 h,6 h,12 h,24 h,3 d after induction.Results The BMSCs were cultivated primarily and following passaged successfully.The living behavior of BMSCs from passage four to passage six were stable.Flow cytometry analysis showed that the cells were positive for CD44 and CD105 receptor,in contrast,negative for CD45 receptor,which demonstrated the purity of BMSCs.The treatment protocols induced BMSCs to differentiate into neuron-like cells,Which expressed NSE and MAP-2 (the express ratewere 64.79%±0.06% and 60.05%±0.09%),but did not express GFAP.PTN mRNA was detected to expresse after induction,and from 12 to 24 hours after induction,the expression were highest.After three days,the expression was difficult to be detected.Conclusion The marrow mesenchymal stem cells could be obtained and purified in vitro,and the amplification was stable in our experimental conditions.After being induced,BMSCs could differentiate into neural like cells with the transformation of morphology and the expression of NSE and MAP-2,the same characters which the true neuron cells have.The expression of PTN mRNA had the same change with morphology after the induction,which indicated PTN maybe take a part of the induction.【总页数】5页(P1325-1329)【作者】连霞;李光来;李东芳;薛国芳;裴宇恒【作者单位】山西医科大学第二医院太原 030001;山西医科大学第二医院太原030001;山西医科大学第二医院太原 030001;山西医科大学第二医院太原030001;山西医科大学第二医院太原 030001【正文语种】中文【中图分类】R329.2;R289.9【相关文献】1.多效生长因子诱导人脐血间充质干细胞向多巴胺能神经元样细胞分化 [J], 薛丹丹;孙海梅;季凤清;周德山2.骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中褪黑素受体和多效蛋白的表达 [J], 连霞;李丽;李光来;李东芳;王荔;薛国芳3.依达拉奉联合表皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化中端粒酶活性的变化 [J], 胡资兵;曾荣;魏劲松;郑鸿;林颢;孙欣;吴少科4.碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入丹参酮ⅡA体外定向培养骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化 [J], 李玉美;余德立;刘来兵;余资江5.碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入丹参酮ⅡA体外定向培养骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化 [J], 李玉美;余德立;刘来兵;余资江因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

神经生长因子对骨髓基质细胞成骨活性的影响
马小涵;廖庆庆;曾剑玉;张敏
【期刊名称】《北京口腔医学》
【年(卷),期】2013(021)005
【摘要】目的探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对骨髓基质细胞成骨活性的影响.方法原代培养SD大鼠四肢骨骨髓源性骨髓基质细胞.通过检测细胞增殖、定量检测碱性磷酸酶的表达及茜素红矿化结节染色,观察NGF对骨髓基质细胞增殖及成骨活性的影响.结果实验组与对照组细胞增殖无统计学差异,NGF对骨髓基质细胞增殖无促进作用.第3天时,实验组细胞分化及碱性磷酸酶的表达高于对照组(P＜0.05).钙结节茜素红染色及钙结节量实验组大于对照组.结论 NGF可直接促进骨髓基质细胞的成骨向转化及矿化作用,对细胞增殖无促进作用.
【总页数】4页(P245-248)
【作者】马小涵;廖庆庆;曾剑玉;张敏
【作者单位】航天中心医院口腔科;南苑医院口腔科;100050北京首都医科大学口腔医学院修复科;首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R318.04
【相关文献】
1.低氧对大鼠骨髓基质细胞分泌神经生长因子的影响 [J], 于红;席焕久;邓成国;杨虹
2.神经生长因子对大鼠骨髓基质细胞成骨向分化的影响 [J], 崔国胜;曾剑玉;汤晓飞;李群
3.神经生长因子在高糖环境下对骨髓基质细胞成骨活性的影响 [J], 马小涵;廖庆庆;曾剑玉;张敏
4.神经生长因子对大鼠骨髓基质细胞增殖和向成骨分化的影响 [J], 路晓淼;张凯;高廷益;刘亮;杨东昆
5.碱性成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞增殖与成骨活性的影响 [J], 武和明;邢树忠;张晓;李宏卫
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骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中相关基因DNA甲基化状态的研究的开题报告一、研究背景骨髓间充质干细胞 (BM-MSCs) 作为来源广泛、体外增殖潜力强、具备成纤维细胞等外胚层分化双向分化潜能、安全性高等特点，已经被广泛应用于临床和基础研究领域。

而神经退行性疾病的高发和治疗方法的局限性，为干细胞向神经细胞分化提供了新的研究方向和治疗手段。

DNA甲基化是维持基因表达稳定性的重要机制之一，而其在干细胞分化中的调控机制仍不明确。

因此，本项目旨在探究 BM-MSCs 向神经细胞分化过程中相关基因的 DNA 甲基化状态，并为进一步揭示干细胞分化机制提供依据。

二、研究目的与内容1. 研究目的探究 BM-MSCs 向神经细胞分化中相关基因的 DNA 甲基化状态，为深入了解干细胞分化机制提供依据。

2. 研究内容(1) 提取 BM-MSCs 并进行培养和鉴定。

(2) 鉴定及纯化神经前体细胞并构建神经细胞培养体系。

(3) 针对神经细胞分化相关基因，通过 MeDIP-seq 和 Bisulfite sequencing 对其进行 DNA 甲基化测序。

(4) 结合 bioinformatics 分析，研究 BM-MSCs 向神经细胞分化相关基因的 DNA 甲基化调控机制。

三、预期结果及意义1. 预期结果本研究将鉴定并纯化出神经前体细胞，并构建神经细胞培养体系。

通过 DNA 甲基化测序对 BM-MSCs 向神经细胞分化过程中相关基因的 DNA 甲基化状态进行测定，并结合 bioinformatics 分析揭示 BM-MSCs 向神经细胞分化的调控机制。

2. 意义干细胞向神经细胞分化是一项具有广泛应用前景的研究，本研究将有助于深入了解干细胞分化机制和神经细胞发育调控机制。

对于神经退行性疾病的治疗将提供新的思路和方法。

同时，本研究也将为干细胞的临床应用提供更全面的基础研究和理论支持。