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实验九微生物菌体大小及菌群数量的测定生科15.2 周罡 201500181104【实验目的】1. 学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。
2. 学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。
【实验原理】（一）微生物菌体大小的测定微生物大小的测定，需借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。
镜台测微尺（图1）是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每一小格长度为0.01mm，即10μm。
刻线外有一直径为Φ3，线粗为0.1mm的圆，以便调焦时寻找线条。
刻线上还覆盖有厚度为0.17mm的盖玻片，可保护刻线久用而不损伤。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
图1 镜台测微尺图2 目镜测微尺目镜测微尺（图2）是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般优彼等分为50小格和100小格两种。
测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。
由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的长度。
然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。
（二）显微镜计数显微技术法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有特定容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接观察、计数的方法。
目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数，基本原理相同。
其中血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数，而后两种计数器较薄，可用油镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
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一、实训目的1. 掌握观察酵母菌和霉菌形态的基本方法；2. 观察酵母菌和霉菌的形态特征；3. 学习使用显微测微尺测量微生物大小；4. 熟悉霉菌酵母菌计数的实验流程和操作方法；5. 提高食品微生物学检验技能。
二、实训原理霉菌和酵母菌是广泛存在于自然界和食品中的微生物，它们对食品品质和人体健康具有重要影响。
霉菌和酵母菌计数是食品微生物学检验的重要指标之一，通过计数可以了解食品中霉菌和酵母菌的数量，为食品卫生质量控制提供依据。
本实训采用直接镜检计数法，利用显微镜观察霉菌和酵母菌的形态特征，并通过显微测微尺测量其大小，从而进行计数。
三、实训材料与仪器1. 实验材料：酵母菌、霉菌纯培养物，食品样品；2. 仪器设备：显微镜、显微测微尺、血球计数板、酒精灯、接种环、无菌培养皿等。
四、实训步骤1. 预备工作：a. 准备好实验所需的材料与仪器；b. 检查显微镜、显微测微尺等仪器的性能；c. 熟悉实验操作流程。
2. 观察酵母菌和霉菌形态：a. 将纯培养物接种于无菌培养皿中，培养至适宜生长状态；b. 取少量培养物，涂布于载玻片上；c. 将载玻片置于显微镜下，观察酵母菌和霉菌的形态特征，如菌丝、分生孢子、菌落等。
3. 使用显微测微尺测量微生物大小：a. 将显微测微尺放置于显微镜载物台上；b. 对准显微镜视野中的微生物，调整测微尺的刻度；c. 记录微生物的长度。
4. 霉菌酵母菌计数：a. 将纯培养物接种于血球计数板中，培养至适宜生长状态；b. 将血球计数板放置于显微镜下，观察菌落；c. 记录每个视野中菌落数量；d. 计算霉菌酵母菌总数。
5. 结果分析：a. 分析实验数据，得出霉菌酵母菌计数结果；b. 对比实验结果与理论值，分析误差原因。
五、实训结果与分析1. 观察酵母菌和霉菌形态：实验中观察到酵母菌为单细胞，呈圆形或椭圆形，细胞壁厚，具有芽生繁殖方式；霉菌为多细胞真菌，菌丝体发达，无较大的子实体，具有分枝、分生孢子等特征。
实验九酵母菌的计数一、实验目的1. 了解酵母菌计数的方法和步骤。
2. 练习从样品中筛选出有效的酵母。
3. 熟练掌握血球计数板的使用方法和计算准确菌落数的技巧。
二、实验原理酵母比细菌大，通常直径在3-5um左右。
因此，酵母计数需要使用高倍显微镜和血球计数板。
血球计数板具有网格状的结构，格子大小为1mm x 1mm，每个格子被分成16个小方格，靠着板子底部的深度为0.1mm。
在这样的板子上，可以计算出每个小方格中的数量，进而计算出酵母菌落数。
三、实验步骤1. 酵母菌培养液制备取一小瓶酵母菌液（1ml/瓶）和50ml的培养基置于培养瓶中，摇晃好进行稀释。
2. 稀释酵母菌液使用吸管和15ml的试管来进行酵母菌液的稀释。
取出大约0.5ml的酵母菌液放入试管中，使用吸管加入5ml的无菌蒸馏水，进行混合。
将10倍的稀释液取出0.5ml，进行第二次稀释。
3. 取样取出10ul的酵母稀释液，加入到血球计数板的中心宫格中。
重复三次。
4. 计数使用高倍显微镜（400×）观察血球计数板，并手动计算每个格子中的酵母菌数量。
计算方法：（每个小方格中酵母菌总数÷ 16） x 10^45. 数据分析计算出平均酵母菌浓度，将结果用来评估样品中酵母菌的含量。
四、实验注意事项1. 所有实验用品都需要在自然环境下进行消毒，并最好使用自动消毒器。
2. 使用高倍显微镜时，需要避免透过培养液的气泡和混沌，以获得清晰的图像。
3. 在计算酵母菌浓度时，需要始终保持准确的记录，并进行计算。
出现微小误差可能会有较大的影响。
4. 进行实验时需要着实考虑消除外因因素。
五、实验数据处理与分析在实验中，首先需要从样品中筛选出有效的酵母，并进行稀释。
稀释后的酵母菌液，需要使用吸管加入到试管中，并定期混合。
取10ul的酵母稀释液，加入到血球计数板的中心宫格中（使用不同液体的试管不同），所得数据如下表：| 每个小方格中的酵母菌数量 ||----------|--------------|| 1 | 9 || 2 | 12 || 3 | 15 || 4 | 13 || 5 | 11 || 6 | 16 || 7 | 12 || 8 | 14 || 9 | 10 || 10 | 12 || 11 | 10 || 12 | 11 || 13 | 9 || 14 | 8 || 15 | 16 || 16 | 18 ||----------|--------------|平均酵母菌浓度：（每个小方格中酵母菌总数÷ 16）X10^4 = (154÷16) X 10^4 = 9.63 X 10^4/ml。
