酵母菌计数实验

酵母菌大小的测定及计数实验流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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实验一：酵母菌大小测定一、实验器材1、菌种：酵母菌液体培养物2、仪器和其他物品目镜测微尺，镜台测微尺，普通光学显微镜，擦镜纸，载玻片，滴管等。

二、实验目的及要求1、学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。

2、掌握对不同形态细菌大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。

三、基本原理微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。

微生物大小测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺，两者配合使用。

镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每个小格10μm。

镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格地相对长度。

目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。

因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞实际大小。

四、操作步骤1、装目镜测微尺(换目镜)把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝上放在目镜镜筒内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。

※双目显微镜的左目镜通常配有屈光度调节环，不能被取下，因此使用双目显微镜时目镜测微尺一般都安装在右目镜中。

2、校正目镜测微尺（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。

（2）校正先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。

实验九酵母菌的计数一、实验目的1. 了解酵母菌计数的方法和步骤。

2. 练习从样品中筛选出有效的酵母。

3. 熟练掌握血球计数板的使用方法和计算准确菌落数的技巧。

二、实验原理酵母比细菌大，通常直径在3-5um左右。

因此，酵母计数需要使用高倍显微镜和血球计数板。

血球计数板具有网格状的结构，格子大小为1mm x 1mm，每个格子被分成16个小方格，靠着板子底部的深度为0.1mm。

在这样的板子上，可以计算出每个小方格中的数量，进而计算出酵母菌落数。

三、实验步骤1. 酵母菌培养液制备取一小瓶酵母菌液（1ml/瓶）和50ml的培养基置于培养瓶中，摇晃好进行稀释。

2. 稀释酵母菌液使用吸管和15ml的试管来进行酵母菌液的稀释。

取出大约0.5ml的酵母菌液放入试管中，使用吸管加入5ml的无菌蒸馏水，进行混合。

将10倍的稀释液取出0.5ml，进行第二次稀释。

3. 取样取出10ul的酵母稀释液，加入到血球计数板的中心宫格中。

重复三次。

4. 计数使用高倍显微镜（400×）观察血球计数板，并手动计算每个格子中的酵母菌数量。

计算方法：（每个小方格中酵母菌总数÷ 16） x 10^45. 数据分析计算出平均酵母菌浓度，将结果用来评估样品中酵母菌的含量。

四、实验注意事项1. 所有实验用品都需要在自然环境下进行消毒，并最好使用自动消毒器。

2. 使用高倍显微镜时，需要避免透过培养液的气泡和混沌，以获得清晰的图像。

3. 在计算酵母菌浓度时，需要始终保持准确的记录，并进行计算。

出现微小误差可能会有较大的影响。

4. 进行实验时需要着实考虑消除外因因素。

五、实验数据处理与分析在实验中，首先需要从样品中筛选出有效的酵母，并进行稀释。

稀释后的酵母菌液，需要使用吸管加入到试管中，并定期混合。

取10ul的酵母稀释液，加入到血球计数板的中心宫格中（使用不同液体的试管不同），所得数据如下表：| 每个小方格中的酵母菌数量 ||----------|--------------|| 1 | 9 || 2 | 12 || 3 | 15 || 4 | 13 || 5 | 11 || 6 | 16 || 7 | 12 || 8 | 14 || 9 | 10 || 10 | 12 || 11 | 10 || 12 | 11 || 13 | 9 || 14 | 8 || 15 | 16 || 16 | 18 ||----------|--------------|平均酵母菌浓度：（每个小方格中酵母菌总数÷ 16）X10^4 = (154÷16) X 10^4 = 9.63 X 10^4/ml。

探究培养液中酵母菌种群数量的变化1、实验原理：1．在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。

2．养分、空间、温度和有毒排泄物等是影响种群数量持续增长的限制因素。

3．酵母菌计数方法：抽样检测法。

先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。

多余培养液用滤纸吸去。

稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。

注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。

仪器介绍：血细胞计数板血细胞计数板的构造血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。

玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。

这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。

血细胞计数板的使用以计数酵母菌为例(1)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(3)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.(4)计数；五点取样法3.计算公式酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目×400×104×稀释倍数注释：培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。

2．方法步骤：提出问题→作出假设→讨论探究思路→制定计划→实施计划→按计划中确定的工作流程认真操作，做好实验记录→分析结果，得出结论→将记录的数据用曲线图表示出来。