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五、实验报告
1、结果记录：
将计数结果记录下表。A表示五个中方格中的总菌数。B稀释倍数为102。
注:1 mL菌液总数=A/5×25×104×B=5×107×A
五、实验报告
1、思ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ题：
（1）在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？ （2）根据你的体会，说明用血球计数板计数的误差 主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准 确？ （3）某单位要求知道一种干酵母粉的活菌存活率， 请设计1-2种可行的检测方法。
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的 具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简 便、快速、直观的方法。
三、实验材料
1. 酵母菌液 2. 显微镜、血球计数器 3. 盖玻片、毛细管等
Thoma血球计数板
A.正面图 B.纵切面图 1.血球计数板 2.盖玻片 3.计数室
探究：培养液中酵母菌种群数量的变化
目的要求 1、学习利用血球计数板进行微生物计数的方法 2、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化 3、注意样方法的应用 4、体会影响种群数量变化的因素
回顾思考:
1、酵母菌的繁殖方式主要是: 出芽生殖
2、酵母菌的呼吸方式是: 兼性厌氧(可进行有氧呼吸和无氧呼吸) 3、酵母菌的培养条件要注意那些问题? 比如要用适宜的温度培养,调节好PH值,溶氧 量的控制等。
探究：培养液中酵母菌种群数量的变化
例如：酵母菌的种群数量在营养条件有限 的情况下呈S型增长。
介绍:血球计数板的构造
1、血球计数板：是显微镜上的外挂物件,可用来测量 细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量, 如单位体积细胞的数量。血球计数板是由一块比普通 载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽, 构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽 隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液 自行渗入，计数室内不得有气泡。 3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每 个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最 后再换算到每mL菌液中的含菌数。
实验五
微生物数量的测定
一、目的要求
1．明确血细胞计数板计数的原理
2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的 方法。
二、基本原理
微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段，个体 生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作为微生物生 长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。 测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数法、光电比浊法 等。
16小格 × 25大格计数室
25小格 × 16大格计数室
计数室的两种刻度形式
四、实验内容
一.酵母菌数量的检测（显微镜直接计数法）
注意事项: A. 取样时先要摇匀菌液;加样时计数室不可有气泡产生。
B. 调节显微镜光线的强弱适当。
四、实验内容
1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。
四、实验内容
5. 计算方法：
酵母菌细胞数/mL= （X1+X2+X3+X4+X5） X 25（或16）X 10 X 1000 x 稀释倍数 5
6. 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上 的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同 等大，就按单个酵母计数。 7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸 干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
2、方格网的构成：
25×16
A D G
B E H
C F I
16×25
化
放大后的方格网计数室 方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为 计数室, 计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16 中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25 中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种 构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由 16×25=25×16=400个小方格组成。
课本中大方格的长和宽各为2mm,深度为0.1mm,其 体积为0.4mm3.换算为1mL为0.4/1000即 4/10000mL即4×10 -4mL 则：每1ml菌液中所含的酵母菌个数 计算公式（如长和宽各为2mm） ： (1)16格×25格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (100小格内酵母细胞个数/100)×400×稀释倍数 4×10-4 即(100小格内酵母细胞个数/100)×106×稀释倍数 (2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml= (80小格内酵母细胞个数/80)×400×稀释倍数 4×10-4 即(80小格内酵母细胞个数/80)×106×稀释倍数
7、
每1ml菌液中所含的酵母菌个数 计算公式（如长和宽各为1mm） ： (1)16格×25格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (100小格内酵母细胞个数/100)×400×稀释倍数 10-4 即(100小格内酵母细胞个数/100)× 4× 106×稀释倍数 (2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml= (80小格内酵母细胞个数/80)×400×稀释倍数 10-4 即(80小格内酵母细胞个数/80)× 4× 106×稀释倍数
6、如何计数呢？
如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角 线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数. 我们用规格为25格×16格的计数板,除了取其 4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即 80个小方格)的酵母菌数. （五点取样法） 出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时， 即可作为两个菌体计算。
3、使用方法:
将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用 的盖玻片.将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖 玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取, 稍待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.加盖盖玻片.
4、计数室的规格： 5、单位换算:大方格的长和 计数室有长×宽： 宽各为1mm,深度为0.1mm, 1mm×1mm为例, 其体积为0.1mm3.换算为 2mm×2mm, 1mL为0.1/1000即 3mm×3mm等 1/10000mL即10-4 mL 。 深度均为0.1mm。
