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HPLC法测定益⽓复脉⼝服液中⼈参皂苷Rg_1、Re、Rb_1的含量HPLC 法测定益⽓复脉⼝服液中⼈参皂苷Rg 1、Re 、Rb 1的含量沈志滨1,朱俊访1,李 博2(1.⼴东药学院中药化学与分析教研室,⼴东⼴州510006;2.哈尔滨商业⼤学,⿊龙江哈尔滨150076)摘要:⽬的对益⽓复脉⼝服液中的君药红参进⾏含量测定。
⽅法采⽤⾼效液相⾊谱法,⾊谱柱:Y M C ODS A 柱(150mm ×4.5mm ,5µm ),检测波长:203n m ,流动相:⼄腈-⽔(梯度洗脱),对复⽅中⼈参皂苷Rg 1、Re 、Rb 1的含量进⾏测定。
结果⼈参皂苷Rg 1、Re 、Rb 1三者含量之和平均值为0.802mg /m L ,线性回归⽅程分别为⼈参皂苷Rg 1:A =365654m +1568.2,r =0.9997;⼈参皂苷Re 为:A =309187m +1919,r =0.9997;⼈参皂苷Rb 1:A =332009m +8472.3,r =0.9998。
结论HPLC 法测定Rg 1、Re 、Rb 1可以作为益⽓复脉⼝服液的含量测定标准。
关键词:益⽓复脉⼝服液;⼈参皂苷;含量测定中图分类号:R 284 ⽂献标识码:A ⽂章编号:1006-8783(2006)03-0259-02作者简介:沈志滨,⼥,博⼠,副教授,主要从事中药药效物质基础研究及中药新药的研究与开发。
Deter m i n a tio n of g i n senosi d e Rg 1,R e and Rb 1i n Y i q ifu m ai oral so l u tion by HPLCS HEN Zhi -bing 1,ZHU Jun -fang 1,LI Bo 2(1.Sectio n of TCM Che m istry and Analysis ,Guangdong College of Phar macy ,Guangzhou 510006,Ch i na ;2.Har bin U ni versity of Co mmerce ,Harbi n 150076,Ch i na )Abstract :Objecti ve To estab lish a quantitati vem et hod of ginsenoside Rg 1,Re and Rb 1in Y i qif u m ai oral sol u tion .M ethods HPLC was used for t he con t ent deter m ination of t he ginsenosi des .The s eparati on was perf or med on a YMC ODS A colu mn (150mm ×4.5mm,5µm )by gradient el uti on w it h aceton itrile and w ater .The fl ow rate w as 1.0mL /m i n and detection w avelengt h 203n m.Res ults The average cont en t of gi nsenoside Rg 1,Re and Rb 1was 0.802m g /m L.The regressi on equationsw ere as follo w s :Rg 1,A=365654ρ+1568.2,r =0.9997;Re ,A =309187ρ+1919,r =0.9997;Rb 1,A =332009ρ+8472.3,r =0.9998.Concl usion This m et hod is si m p l e and sensitive f or qualit y control ofY iqifu m ai oral s ol u tion K ey words :Yiqifu m ai oral sol uti on ;gi nsenoside ;HPLC益⽓复脉⼝服液是在著名古⽅⽣脉散的基础上开发研究的制剂,适⽤于⽓阴两虚、⼼悸⽓短、脉微⾃汗、冠⼼病、⼼绞痛和衰⽼等症的药物。
HPLC法测中药“回阳液”中人参皂苷Rb1、Rg1、Re的含量研究作者：陈杰马世蓉刘汉儒张迎春曾忠良来源：《现代盐化工》2018年第02期摘要：文章通过建立可同时测定中药复方注射液回阳液中人参皂苷Rbl、Rgl、Re含量的高效液相色谱方法，以便为建立HYY的质量标准提供依据。
采用的方法是Agilent Zorbax SB-Cl8柱（4.6 mm×150 mm，5μm），以乙腈一水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 m L/min，柱温25℃，检测波长203 nm。
实验结果显示在本色谱条件下，人参皂苷Rbl、Rg1、Re分离度良好，系统适应性实验表明3种成分的检测其线性关系良好（R2Rg1=0.999 2；R2Rb.=0.999 1；R2Re=0.999 5）；其精密度、重复性、稳定性良好；人参皂苷Rb1、Re、Rg1的平均加样回收率分别为97.5g%，101.32%和98.87%（RSD值分别为2.12%，1.77%，2.2g%），符合要求。
实验结果表明，建立的HPLC分析检测方法可以用作复方中药HYY的质量控制。
关键词：回阳液；反相高效液相色谱；人参皂苷；多组分测定1 HYY概述中药复方回阳液（Huiyang Ye，HYY）是西南大学药学院中药教研室自制，由人参、麦冬、甘草等味中药组成。
该制剂是基于临床应用，源于参附汤基础上创制的主要用于临床急救的新药剂。
药效学实验确证该复方制剂HYY具有益气养阴，回阳救逆，复脉固脱的功效，可用于治疗因过劳、久泻、大失血、败血性感染疾病等表现的脉微欲绝、四肢厥逆、神志不清等症候，对临床表现的心衰、血压过低或休克病理过程也具有良好的急救疗效。
药物以其安全性、有效性、稳定性及质量可控性决定了药物本身的价值。
尽管中药，尤其是复方制剂的化学成分复杂，甚至有未知不确定性成分的存在，通常很难用质量检测手段对其质量进行全面检测。
但对其主要药效组成中药的标志性有效成分的质量控制及其标准的研究，不仅可规范药物制剂的生产管理，同时，也是保障药物有效性和安全性的基本保证。
高效液相色谱法测定人参补气胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量目的建立人参补气胶囊的含量测定方法。
方法采用安捷伦ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱（0～35 min，19%A；35～55 min，19%～29%A；55～70 min，29%A；70～100 min，29%～40%A），检测波长203 nm，流速1.0 mg/mL，柱温30 ℃，对制剂中的人参皂苷Rg1、Re、Rb1进行定量测定。
结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的线性范围分别为0.452～4.068 ?g（r2=0.999 6）、0.467 6～4.208 4 ?g（r=0.999 5）和1.083 2～9.748 8 ?g（r=0.999 8），平均回收率分别为99.96%（RSD=2.24%）、99.95%（RSD=2.14%）和99.06%（RSD=2.94%）。
结论本试验所建立的方法分离效果好、简便、快捷，重复性好，可用于该制剂的质量控制。
标签：人参补气胶囊；高效液相色谱法；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；人参皂苷Rb1D人参补气胶囊由人参、红参、红参须3味中药组成，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神的功效[1]。
临床多用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心原性休克等症。
方中3味中药均以人参皂苷为其主要活性成分[2]，原标准中含量测定是通过称量提取纯化制剂中的总皂苷的重量来测定，由于总皂苷的纯化方法复杂，重复性较差，试验结果误差较大，且有效成分不明确。
采用高效液相色谱法（HPLC）测定处方药材中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量研究则多有报道[3-8]，我们参考上述相关文献，同时参考2005年版《中华人民共和国药典》人参含量测定项下方法[9]，选取人参皂苷Rg1、Re、Rb1为含量测定的指标成分，采用HPLC建立人参补气胶囊有效成分含量测定的方法，以保证本制剂的质量1 仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪（G1311A QUATPUMP泵，G1314A VWD检测器，G1322 DEGASSER脱气机，TC-120柱温箱，上海市精密科学仪器有限公司），色谱软件系统Rev.A.10.02，KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
HPLC法测定化淤生骨胶囊中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量代恩松;田相静【摘要】目的建立化淤生骨胶囊中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量测定方法 .方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定.色谱柱为Kromasil-C18(5μm、4.6 mm×250 mm),乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长203 nm.结果人参皂苷Rg1浓度在0.0522 mg/ml～0.8220 mg/ml范围内与峰面积的线性关系良好(γ=0.9994);人参皂苷Rb1浓度在0.0583 mg/ml～07830 mg/ml范围内与峰面积的线性关系良好(γ=0.9990).结论所建方法准确,重复性好,可用于测定化淤生骨胶囊中的人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1.【期刊名称】《医学信息》【年(卷),期】2018(031)015【总页数】4页(P72-75)【关键词】化淤生骨胶囊;人参皂苷;HPLC;含量测定【作者】代恩松;田相静【作者单位】山东大学齐鲁医院药品调剂科山东济南 250012;山东大学齐鲁医院小儿内科山东济南 250012【正文语种】中文【中图分类】R286化淤生骨胶囊由三七、延胡索等7种中药制成，具有益肾健骨，祛瘀止痛之功效，临床主治骨蚀，腐骨疽（股骨头无菌缺血性坏死，骨髓炎）。
人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为三七的主要有效成分之一，可作为化淤生骨胶囊剂质量控制的指标成分。
参考有关文献[1-3]，建立了化淤生骨胶囊中三七含量测定的高效液相色谱方法。
本法准确、简便、快捷，适用于化淤生骨胶囊的质量控制。
1 资料与方法1.1 仪器与试剂岛津LC-高效液相液相色谱仪，SPD-20A型控制器；色谱柱：Kromasil-C18(5 μm、4.6 mm×250 mm)；FA2004万分之一电子分析天平（上海精科天美科学仪器有限公司）；AE240十万分之一电子分析天平（梅特勒公司提供）。
所用试剂均为分析纯或色谱纯。
Journal of China Prescription Drug Vol.18 No.9损伤丸是由三七、酒当归、土鳖虫、乳香、没药、酒大黄、酒赤芍、丹参、红花、川芎十味中药经前处理、粉碎、泛丸、干燥、选丸等步骤加工制成的水丸，具有行气活血，散瘀消肿，止痛之功效，在我院临床已运用三十余年，疗效确切，安全性高，为提高其质量的可控性，本实验组人员前期已对其显微色谱鉴别及薄层色谱鉴别方法开展研究[1]，现又采用高效液相色谱法对该制剂中的君药及贵细药——三七的指标成分三七皂苷R 1和人参皂苷Rg 1、Rb 1开展定量研究，以完善其新的质量标准，为损伤丸的质量控制提供参考。
1 实验部分1.1 仪器与试药Agilent1260高效液相色谱仪（四元泵、真空脱气器、二极管阵列检测器及化学工作站）；昆山超声仪器有限公司KQ-250B 型超声清洗机；瑞士梅特勒公司EL2401电子天平。
三七皂苷R 1和人参皂苷Rg 1、Rb 1对照品均购置于中国食品药品检定研究院；3批损伤丸样品及缺三七的阴性对照均由本院自制；乙腈为色谱纯；其他试剂为分析纯；水为重蒸馏水。
1.2 含量测定1.2.1 溶液制备取三七皂苷R 1和人参皂苷Rg 1、Rb 1对照品各适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml 含三七皂苷R 1 0.30 mg 、人参皂苷Rg 1 0.30 mg 、人参皂苷Rb 1 0.15 mg 的对照品溶液。
取损伤丸约1 g ，研细，过四号筛，精密称重，置具塞锥形瓶中，精密加入50 ml 70%甲醇，密塞，称重，超声（功率250 W ，频率50 kHz ）30 min ，放冷，再次称重，减失的重量以70%甲醇补足，摇匀，滤过，续滤液即为损伤丸样品供试液。
取不含三七的阴性样品约1 g ，自“研细，过四号筛”起，按样品供试液的制备方法制成阴性对照溶液。
1.2.2 色谱条件 采用Lichrospher C 18色谱柱（250 mm ×4.6 mm ，5 μm ）；流动相A 为乙腈，B 为水，梯度洗脱见表1；检测波长：203 nm ；柱温：30℃；流速：1 ml/min 。
HPLC测定竹节参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量目的建立同时测定竹节参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量的高效液相色谱方法。
方法用70%乙醇超声提取竹节参药材，采用Agilent Poroshell 120 C18色谱柱（4.6 mm×100 mm，2.7 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长203 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。
结果在该色谱条件下，人参皂苷Rg1、Re、Rb1达到基线分离，线性关系良好，加样回收率分别为99.5%、103.0%、100.5%。
结论该方法操作简便，重复性好，分析周期短，能准确测定竹节参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量，可为竹节参的质量控制提供参考依据。
Abstract：Objective To develop an HPLC method for simultaneous content determination of ginsenoside Rg1，Re and Rb1 in Panacis Japonici Rhizoma. Methods Chromatographic separation was carried out by using an Agilent Poroshell 120 C18 column （4.6 mm × 100 mm，2.7 μm）. The mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phosphoric acid with gradient elution at a flowrate of 1.0 mL/min，and the injection volume was 10 μL. The detection wave length and column temperature were 203 nm and 30 ℃respectively. Results Ginsenoside Rg1，Re and Rb1 had the baseline separation and were in good linear range. The recovery rates were 99.5%，103.0% and 100.5% respectively. Conclusion The approach is simple，accurate，with good repeatability and short analysis period，which can determine the contents of ginsenoside Rg1，Re and Rb1 correctly and provide references for quality control of Panacis Japonici Rhizoma.Key words：Panacis Japonici Rhizoma；ginsenoside；HPLC；content determination竹节参Panax Japonicus C.A.Mey.为五加科人参属植物，收载于1975年及以后历版《中华人民共和国药典》，但迄今为止尚未建立质量标准。
HPLC 同时测定生脉饮中人参皂苷Rb1、
Rg1 的含量
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摘要：目的：用高效液相色谱法同时测定生脉饮中人参皂苷Rb1、Rg1 的
含量。
方法：采用Diamonsil C18 柱（5 μm，250 mm×4.6 mm），乙腈－水
进行梯度洗脱，流速0.6ml·min-1，检测波长203nm，柱温25℃。
结果：对生
脉饮中人参皂苷Rg1 和人参皂苷Rb1 进行含量测定。
其线性范围分别为
0.050～1.000mg?ml-1(r=0.9994)和0.050～1.000mg?ml-1(r=0.9991)，平均回
收率分别为98.3%（RSD=4.3%）和96.5%（RSD=2.1%）。
结论：方法简便，可用
于生脉饮质量的评价。
关键词：HPLC；生脉饮；人参皂苷Rb1；人参皂苷Rg1
生脉饮由红参100g、麦冬200g、五味子100g 组成，为2005 版中国药典
一部“成方制剂和单味制剂”项下收载品种[1]，有益气生津、敛汉养阴、补虚
复脉、救厥固脱之功效，具有保护心肌，改善心功能，免疫调节、清除羟自由
基、促进生长发育和学习记忆的作用[2~4]。
但从药典项下对生脉饮质量控制标准来看，采用人参二醇、人参三醇和麦
冬对照药材为对照，对红参和麦冬进行了TLC 鉴别，红参作为方中君药，无含
量测定方法对其进行质量控制。
从文献资料报道来看，主要是增加了方中五味子的TLC 鉴别和用HPLC 法
测定人参皂苷和五味子乙素、五味子醇甲的含量[5~7]；如能对生脉饮中的人参
皂苷进行同时测定，将有助于更好地全面评价产品的质量。
本文提出了用HPLC
同时测定人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1成分含量的方法。
1. 实验部分1.1 仪器与试剂P680A 高效液相色谱仪，PDA－100 检测器
（美国戴安公司），Diamonsil C18 柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）（迪马公司），SZ-93 型自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣仪器厂），必能信超声波清洗
器（必能信超声有限公司），BP2110 电子天平（Sartorius 公司）。
人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1 对照品（均购自中国药品生物制品检定所）。
乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），其它试剂均为国产分析纯。
蒸馏水自制。
生脉饮，自制三批（Lot No. 0801,0802,0803）：取红参，麦冬，五味子
粗粉，分别为10g，20g，10g，渗漉提取，用65%乙醇做溶剂，浸渍24 小时后
渗漉，收集渗漉液450ml，减压浓缩至25ml，放冷，加水40ml 稀释，滤过，
滤液加水至100ml。
1.2 方法与结果1.
2.1 色谱条件：Diamonsil C18 分析柱（5 μm，250
mm×4.6 mm），流动相为A（乙腈）－B（水）梯度洗脱，0～12min（A：
5→8），12～17min（A：8→12），17～24min（A：12→20），24～80min（A：
20→50）；流速为0.6ml﹒min-1，柱温25℃，检测波长203nm，分析时间
80min。
分别用对照品、样品溶液在上述色谱条件下进样，得到的结果见图1。
1.2.2 对照品溶液的制备：分别精密称定人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1 约
2mg，用甲醇定容，分别配置成浓度为1.000mg?ml-1 的标准品溶液，再分别稀
释成浓度为0.100 mg?ml-1 的对照品溶液1.2.3 供试品溶液的制备：精密量取生脉饮10ml，加乙酸乙酯萃取 4 次，弃去乙酸乙酯层，再用正丁醇萃取 4 次，每次20ml。
取正丁醇部位蒸干，用3ml 蒸馏水溶解，上D141 大孔树脂（树脂
已预处理好），树脂用量20g，流速为0.5d/s，依次用水和95%乙醇萃取，水
和95%乙醇的用量均为5BV，收集乙醇部位，回收溶剂至干，用甲醇定溶至5ml，即得。
1.2.4 标准曲线与线性范围：精密量取各对照品溶液，制得3 个系列不同
浓度的对照品溶液，各取10ul 依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以对
照品峰面积y 为横坐标，浓度x（mg?ml-1）为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明人参皂苷Rg1 在0.050～1.000mg?ml-1 范围内线性关系良好，回归方程为：
y=0.0105x+0.028，r=0.9994，人参皂苷Rb1 在0.050～1.000mg?ml-1 范围内
线性关系良好，回归方程为：y=0.0502x-0.1123，r=0.9991。
1.2.5 精密度实验：精密吸取同一供试品溶液（Lot No. 0801）10ul，重
复进样6 次，计算人参皂苷Rg1 和人参皂苷Rb1 峰面积的RSD 分别为1.2%和4.1%。
1.2.6 稳定性实验：精密吸取同一供试品溶液（Lot No. 0801），分别于0，2，4，8，16，24h测定，结果表明：人参皂苷Rb1 和人参皂苷Rg1 在24h 内稳定，RSD 分别为1.3%和4.5%。
1.2.7 重复性实验：精密量取同一批次的生脉饮（Lot No. 0801）平行6 份，在上述色谱条件下分别进行HPLC 分析，计算人参皂苷Rg1 和人参皂苷
Rb1 峰面积的RSD 分别为1.3%和2.7%。
1.2.8 加样回收率实验：精密量取已测含量的生脉饮9 份，分别精密加入
一定量的人参皂苷Rg1 和人参皂苷Rb1 在上述条件下进行HPLC 分析，计算
Rb1 和Rg1 含量的RSD 值分别为4.3%和2.1%。
平均回收率见表1。
1.2.9 样品的含量测定：精密量取3 个批号的生脉饮，每批平行测定3 份，配制成供试品溶液，在上述色谱条件下进行测定，计算样品中人参皂苷Rb1 和Rg1 的含量，结果见表2。
2. 讨论2.1 流动相的选择：实验中曾采用甲醇－水、甲醇－磷酸作为流
动相，结果发现无法使人参皂苷达到基线分离。
改用乙腈－水体系后，人参皂
苷Rb1 和Rg1 能基本达到较好分离。
以上方法学指标显示其它杂质的干扰对人参皂苷Rb1 和Rg1 测定结果影响很小。
2.2 检测波长的确定：分别取适量的人参皂苷Rb1 和Rg1 对照品，用甲醇溶解配成溶液，采用二极管阵列检测器考察不同吸收波长图谱，重点考察
203nm、220 nm、230 nm、254 nm处的谱图特征，结果表明，203nm 处的谱图
特征性强，因此选择203nm 为检测波长。
2.3 供试品的制备方法：本研究曾采用正丁醇萃取，直接蒸干用甲醇定容
的方法来制备供试品溶液，结果表明，杂质较多，对所测成分有干扰，故采用
大孔树脂除杂。
分别比较了D101、D141、P2004－19 三个型号的大孔树脂，结
果表明，D141 最佳。
同时，对洗脱体积进行了考察，结果表明，洗脱量为5
倍柱体积为佳，在除去杂质的同时能将正丁醇部位所含成分全部洗脱下来。
2.4 实验中用中药材按相同比例制备了麦冬－五味子（缺红参）的样品溶液，以HPLC 按本方法分析，结果显示待测定的2 个组分均不存在明显干扰。
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