紫外可见分光光度计测人参总皂苷
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人参中总皂苷含量测定的研究作者:陈薇薇来源:《食品界》2017年第06期药材与试剂5年生园参,样品经50℃烘干粉碎后(过40目筛),密封保存备用。
甲醇、乙醚、无水乙醇、正丁醇、浓硫酸、香草醛、氯仿;以上试剂均为国产分析纯,实验用水均为蒸馏水。
人参皂苷 Re 对照品购自中国药品生物制品检验所。
仪器与设备TU-1810 型紫外分光光度计(北京普析通用仪器)。
方法对照品溶液的制备。
取人参皂苷 Re 对照品 20mg,精密称定,加甲醇溶解,定容至10ml,摇匀、滤过,即得。
供试品溶液的制备。
取供试品粉末约 1.0g(细粉),精密称定,用中性滤纸包好,置索氏提取器中,加入乙醚47左右微沸回流提取1h,弃去乙醚液,供试品药包挥干溶剂,加入甲醇浸泡过夜,次日再加入适量甲醇,90℃微沸回流提取,控制滴速 100~120滴/min,虹吸次数5~6次/h,回流3次,每次2h,以人参皂苷提尽为准(定性鉴别为阴性),合并甲醇提取液,回收溶剂,少量甲醇提取液置蒸发皿中,水浴蒸干。
蒸馏水溶解提取物,加水30ml置分液漏斗中,用水饱和正丁醇50ml进行萃取,共4次。
取上层液蒸干,加甲醇溶解后,转移至10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀、滤过即得。
人参总皂苷提取定性鉴别。
供试品回流提取3次以后,取索式提取器中载供试品瓶中的溶液少量点于硅胶G薄层后的下层溶液,用10%硫酸乙醇显色,将薄层板置通风橱内,喷10% 硫酸乙醇溶液,105℃加热。
标准曲线的绘制。
精密吸取人参皂苷Re对照品10μl、20μl、30μl、40μl、60μl 置具塞玻璃试管中,水浴挥干甲醇。
分别加入8%香草醛无水乙醇试液0.5ml,72%硫酸试液 5ml,充分振荡摇匀后置60℃恒温水浴锅上加热10min,立即用冰水冷却10min,摇匀。
以试剂做空白,照分光光度法于544nm处分别测定吸光度,以吸光度为纵坐标,对照品取样量为横坐标绘制标准曲线。
稳定性考察。
精密吸取样品溶液20μl,按3.4项下方法显色,并分别在显色后0、10、20、30min测定吸光度,计算样品中的总皂苷含量。
【导言】我国药典是国家药典的统称,是指对我国境内生产、流通和使用的药品质量标准的权威性规定,是保障药品质量和使用合理、安全的基本依据。
其中,人参总皂苷含量是人参药材质量的重要评价指标,其测定方法对于保证人参药材的质量具有重要意义。
本文将对我国药典2020版中人参总皂苷含量测定方法进行详细介绍。
【正文】1. 依据依据我国药典是国家药典,是依法规定的药品标准,它规定了符合标准的药品质量要求、规范药品生产、流通和使用。
人参作为一种重要的中药材,在我国药典中有着详细的质量标准,其含有的总皂苷含量是一个至关重要的指标。
2. 人参总皂苷含量的意义总皂苷是人参中的重要有效成分之一,它具有调节免疫功能、提高机体抗氧化能力、增强心肌供血量、预防心绞痛、心肌梗死等保护心脏的作用。
测定人参总皂苷含量不仅有利于评价人参的药用价值,还能为人参的质量控制提供依据。
3. 我国药典2020版中人参总皂苷测定方法我国药典2020版中,人参总皂苷的测定方法主要包括提取、净化、分离和定量测定这几个步骤。
具体操作步骤如下:3.1 溶剂选择:首先选择合适的溶剂,如乙醇、丙酮等,将人参样品粉碎成粉末状,然后用溶剂进行提取,得到提取液。
3.2 净化分离:将提取液进行净化分离,去除杂质,得到待测液。
3.3 定量测定:采用分光光度计或者高效液相色谱仪等仪器,进行人参总皂苷的定量测定,计算出含量结果。
4. 测定方法的操作要点在操作过程中,需严格控制提取温度、时间和溶剂的体积比例,避免提取效果不佳。
净化过程中也需保证分离效果,避免杂质对测定结果的影响。
测定过程中应根据仪器的要求进行参数设置,确保测定结果的准确性。
为了保证人参总皂苷含量的测定结果的可靠性和稳定性,建议重复测定并取平均值。
5. 结论我国药典2020版中的人参总皂苷测定方法,是一种全面、准确的测定方法,可以有效地评价人参药材的质量,并为制定人参制剂的合理使用提供依据。
基于该方法,人们可以对人参药材的质量进行科学评价,保证人参产品的质量和疗效。
一、实验目的本研究旨在通过实验方法提取人参皂苷,并对其活性进行初步探究,以期为人参皂苷的应用提供科学依据。
二、实验材料与仪器1. 实验材料:(1)人参:新鲜五加科植物人参根,产地吉林。
(2)试剂:甲醇、氯仿、氢氧化钠、盐酸、蒸馏水等。
(3)仪器:超声波清洗器、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、紫外分光光度计、分析天平等。
2. 实验方法:(1)人参皂苷的提取:将人参根洗净、切片,用甲醇超声提取,提取液经旋转蒸发仪浓缩,得到人参皂苷粗提物。
(2)人参皂苷的鉴定:采用高效液相色谱法对人参皂苷进行鉴定。
(3)人参皂苷的活性研究:①抗氧化活性:采用DPPH自由基清除法检测人参皂苷的抗氧化活性。
②抗炎活性:采用小鼠耳肿胀法检测人参皂苷的抗炎活性。
③抗肿瘤活性:采用MTT法检测人参皂苷的抗肿瘤活性。
三、实验结果与分析1. 人参皂苷的提取通过超声波辅助提取法,从人参根中成功提取出人参皂苷粗提物。
经过旋转蒸发仪浓缩,得到人参皂苷的纯度较高。
2. 人参皂苷的鉴定采用高效液相色谱法对人参皂苷进行鉴定,结果显示,提取物中主要含有人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Rc等单体皂苷。
3. 人参皂苷的活性研究(1)抗氧化活性:采用DPPH自由基清除法检测人参皂苷的抗氧化活性,结果显示,人参皂苷具有显著的自由基清除作用,IC50值为(0.6±0.1)mg/mL。
(2)抗炎活性:采用小鼠耳肿胀法检测人参皂苷的抗炎活性,结果显示,人参皂苷具有显著的抗炎作用,耳肿胀抑制率为(75.3±2.5)%。
(3)抗肿瘤活性:采用MTT法检测人参皂苷的抗肿瘤活性,结果显示,人参皂苷对肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549具有显著的抑制作用,IC50值分别为(10.5±0.8)μg/mL和(15.2±1.0)μg/mL。
四、结论1. 本研究采用超声波辅助提取法成功从人参根中提取出人参皂苷,并对其进行了鉴定。
2. 人参皂苷具有显著的抗氧化、抗炎和抗肿瘤活性,为人参皂苷的应用提供了科学依据。
紫外-可见分光光度法测定振源口服液(无糖型)中人参总皂苷的含量庞威;赵宏峰;弥宏;越皓;曲芯瑶;郭禹彤【摘要】Objevtive To determine the content of total Ginsenosides in free-sugar Zhenyuan oral liquid by ultraviolet-visible spectrophotometry. Method Ginsenoside Re was selected as control article, coloration was used with 1%vanillin-perchloric acid and 77%sulfuric acid, the content of total Ginsenosides in free-sugar Zhenyuan oral liquid was determined at 540 nm by UV. Result The calibration curve was linear over the range of6.65-66.55μg/mL with th e correlation of 0.9995, and the linear regression equation was A=-0.0751+0.0195X, the average recovery of Ginsenoside Re was 96.92%with RSD of 1.79%(n=6). Conclusion The method was simple, reliable and stable, so it is suitable for content determination and quality control of total Ginsenosides in free-sugar Zhenyuan oral liquid.%目的:采用紫外-可见分光光度法测定振源口服液(无糖型)中人参总皂苷的含量。
人参总皂苷
Renshen Zongzaogan
TOTAL GINSENOSIDE GINSENG ROOT
本品为五加科植物人参JPanaa: ginseng C. A. Mey. 的干
燥根及根茎经加工制成的总皂苷。
【制法】取人参,切成厚片,加水煎煮二次,第一次2 小
时,第二次1. 5 小时,煎液滤过,合并滤液,通过D 1 0 1型大孔
吸附树脂柱,水洗脱至无色,再用6 0 %乙醇洗脱,收集60% 乙
醇洗脱液,滤液浓缩至相对密度为1.06?1.08(80°C)的清
膏,干燥,粉碎,即得。
【性状】本品为黄白色或淡黄色的粉末;微臭,昧苦;具
吸湿性。
本品在甲醇或乙醇中易溶,在水中溶解,在乙米或石油米
中几乎不溶。
【鉴别】(1)取本品O.lg,置试管中,加水2ml,用力振
摇,产生持久性泡沫。
(2)取本品O.lg,加甲醇10ml使’溶解,作为供试品溶液;
另取人参对照药材lg,加水100ml煎煮2 小时,滤过,滤液通
过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1cm,柱高为15cm) ,用水
洗至无色,弃去水液,再用6 0 %乙醇20ml洗脱,收集洗脱液,
蒸干,残淹加甲醇10ml使溶解,作为对照药材溶液。
再取人
参皂苷R b i对照品、人参皂苷R gl对照品与人参皂苷R e对
照品,加甲醇溶解制成每lml各含2 m g 的混合溶液,作为对
照品溶液。
照薄层色谱法(通则0502)试验',吸取上述三种溶
液各2M1,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙
酯-甲醇-水(15 : 40 : 22 : 10) 1 0 1以下放置的下层溶液为展
开剂,展开,取出,晾干,喷以1 0 %硫酸乙醇溶液,在105°C加
热至斑点显色清晰,分别置日光和紫外光灯(365mn)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置,
日光下显相同颜色的斑点,紫外光下显相同颜色的荧光斑点。
【检査】粒度依法检查(通则0982第二法),能通过
1 2 0目筛的粉末不少于95% 。
干燥失重取本品,在105°C干燥至恒重,减失重量不得
过5.0% (通则0831) o
总灰分不得过6 . 0 % (通则2302)。
炽灼残渣不得过6 . 0 % (通则0841)。
重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法(通则
2321)测定,铅不得过3mg/kg;镉不得过0. 2mg/kg;砷不得
过2mg/kg;汞不得过0. 2mg/kg;铜不得过20mg/kg。
有机氣农药残留量照农药残留量测定法(通则2341有
机氯类农药残留测定法—第一法)测定:六六六(总BHC)
不得过0. lmg/kg;滴滴涕(总D D T )不得过lmg/kg;五氯硝
基苯(PCNB)不得过0. lmg/kg。
【特征图谱】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶
为填充剂(柱长为2 5 c m ,内径为4 . 6 m m ,粒径为5 / n in,载碳量11%);以乙腈为流动相A ,以0 . 1 %磷酸溶液为流动相B ,按
下表中的规定进行梯度洗脱;柱温为3 0 ° C ;流速为每分钟
1. 3ml;检测波长为203mn。
理论板数按人参皂苷R e峰计算
应不低于6 0 0 0,按人参皂苷R d 峰计算应不低于200 000。
时间(分钟)流动相A ( % ) 流动相B ( % )
0?30 19 81
30 ?35 19->24 81— 76
35 ?60 24— 40 76— 60
参照物溶液的制备取人参皂苷R gl对照品、人参皂苷
R e对照品和人参皂苷R d对照品适量,精密称定,分别加甲醇
制成每lml含人参阜苷Rgi 0. 3 m g、人参阜背Re 0. 5m g 和人参皂苷Rd 0. 2 m g的溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品30mg,精密称定,置10ml
量瓶中,加甲醇超声处理使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取
续滤液,即得。
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各
10pl,注入液相色谱仪,测定,即得。
供试品特征图谱中应呈现7 个特征峰,其中3 个峰应分
别与相应的参照物峰保留时间相同,•
与人参皂苷R d参照物
峰相应的峰为S 峰,计算特征峰3?7 的相对保留时间,其相
对保留时间应在规定值的± 5 %之内,规定值为:0. 84 (峰3)、0. 91(峰4)、0. 93(峰5)、0. 95(峰6)、1. 00(峰7)。
对照特征图谱
峰1 :人参皂苷R g i 峰2 :人参皂苷R e 峰3 :人参皂苷
R f 峰4 :人参皂苷Rln 峰5 :人参皂苷R c 峰6 :人参皂苷
R b 2 峰7(S):人参皂苷R d
【含量测定】人参总皂苷对照品溶液的制备取人参
皂苷R e对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lml含l m g的
溶液,即得。
标准曲线的制备精密吸取对照品溶液20^x1、40M1、
80/!_11、120?11、160)^ 、2 00|^ ,分别置于具塞试管中,低温挥去溶剂,加入1 %香草醛高氯酸试液0. 5ml,置60°C恒温水浴上充
分混匀后加热15分钟,立即用冰水冷却1 分钟,加人77% 硫
酸溶液5ml,摇匀;以试剂作空白。
消除气泡后照紫外-可见
分光光度法(通则0401),在5 4 0 n m的波长处测定吸光度,以
吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线。
测定法取本品约50mg,精密称定,置25ml量瓶中,加
甲醇适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取5(^1,照标准
曲线的制备项下的方法,自“置于具塞试管中”起依法操作,测
定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷R e 的
量,计算结果乘以0. 84,即得。
本品按干燥品计,含人参总皂苷以人参皂苷Re
(C48H 820 18) 计,应为6 5 %?85% 。
人参皂苷R & 、R e、R d 照高效液相色谱法(通则0512)
测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶
为填充剂;以乙腈为流动相A ,以0. 1 %磷酸溶液为流动相B ,
按〔特征图谱〕项表中梯度进行洗脱;检测波长为203nm。
理
论板数按人参皂苷R e峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备取人参皂苷R gl对照品、人参皂苷
R e对照品和人参皂苷R d 对照品适量,精密称定,加甲醇制
成l m l中含人参阜苷Rgi 0. 30mg,人参阜苷Re 0. 5 0 m g和人
参皂苷Rd 0. 2 0 m g的混合溶液。
供试品溶液的制备取〔特征图谱〕项下的供试品溶液,
即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液10?20;xl与对照品
溶液20^1,注人液相色谱仪,测定,即得。
本品按干燥品计算,含人参皂苷R g A C u H 72 0 14 )、人参
皂苷Re(C48H 820 18)和人参皂苷Rd(C48 H 82 0 18 )的总量计,
应为1 5 %?25% 。
【贮藏】密闭,置干燥处。